CXCR4在胶质瘤血管内皮细胞和ECV304细胞中的表达及其意义

目的检测人胶质瘤血管内皮细胞以及体外培养的血管内皮样细胞系ECV304趋化因子受体CXCR4的表达,观察其配体SDF-1对血管内皮样细胞迁移的影响,以探讨趋化因子受体CXCR4在肿瘤血管生成中的可能作用及其机制.方法通过免疫组化方法检测人胶质瘤血管内皮细胞CXCR4蛋白的表达,采用RT-PCR、免疫细胞化学方法检测血管内皮样细胞系ECV304上CXCR4 mRNA和CXCR4蛋白的表达,并采用48孔趋化板观察SDF-1诱导体外培养血管内皮样细胞的迁移作用.结果在胶质瘤血管内皮细胞和血管内皮样细胞系ECV304上均检测到趋化因子受体CXCR4的表达,体外实验显示SDF-1能诱导血管内皮样细胞发生明显的迁移.在30、50 ng/ml的实验浓度范围内,诱导血管内皮样细胞的迁移作用呈明显量效关系.结论胶质瘤血管内皮细胞和血管内皮样细胞系ECV304上存在CXCR4表达,CXCR4激活能诱导内皮细胞的迁移.     

下调CXCR4表达对胶质瘤干细胞侵袭能力和VEGF分泌量的影响

目的 观察下调胶质瘤干细胞CXCR4表达后对其侵袭能力和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌量的影响.方法 采用间接免疫荧光标记观测U87细胞及其颅内移植瘤标本中胶质瘤干细胞标记物CD133和CXCR4共表达情况;分别从稳定转染CXCR4小干扰RNA质粒的U87细胞和稳定转染阴性对照质粒的U87细胞中培养出胶质瘤干细胞球,并对其进行鉴定,观察两者CXCR4的表达情况;通过Transwell小室比较两者的侵袭能力;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测两者细胞培养上清内VEGF的含量.结果 U87细胞及其移植瘤中均可检测到CXCR4与CD133共表达,下调胶质瘤干细胞CXCR4表达后,胶质瘤干细胞的体外侵袭能力明显下降[干扰组:(17.0±5.8),对照组:(71.5±8.7),P＜0.05],VEGF分泌明显减少[干扰组:24 h(690±24)pg/ml,48 h(1 504±53)pg/ml;对照组:24 h(850±25)pg/ml,48 h(2 001±150)pg/ml,P＜0.05].结论 胶质瘤干细胞表达CXCR4,下调其表达可抑制胶质瘤干细胞的侵袭和促血管生成能力,提示CXCR4可能成为针对胶质瘤干细胞进行治疗的靶点.     

星形细胞肿瘤SDF-1和CXCR4的表达及其与血管生成的关系

目的 观测趋化因子间质细胞衍生因子-1(SDF-1)和CXCR4肿瘤中的分布特点及其与血管生成的关系.方法 间接免疫荧光双标记胶质瘤组织中的SDF-1、CXCR4、CD34蛋白,应用激光共聚焦扫描显微术观测30例不同病理分级的星形细胞肿瘤.结果 SDF-1和CXCR4表达随着肿瘤级别的增高而增强.主要分布于血管内皮细胞、肿瘤间质,在血管周围的表达量最强.结论 SDF-1、CXCR4的表达强度与肿瘤分级相关.肿瘤血管周围荧光最强,表明其在肿瘤血管生成中起重要作用.     

大鼠胶质瘤细胞系C6趋化因子受体CXCR4和甲酰肽受体FPR的表达

目的观测大鼠源性胶质瘤细胞系C6趋化细胞因子受体CXCR4和甲酰化肽受体(formyl peptide receptor,FPR)的表达水平并探讨其与瘤细胞分化和血管生成的关系.方法传代培养大鼠源性胶质瘤细胞系C6,采用免疫细胞化学方法检测CXCR4和FPR表达,并对细胞分化标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(vimentin)以及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平进行检测.结果C6细胞呈长梭形,突起细长,GFAP表达较强,vimentin呈强表达.该细胞高表达CXCR4和FPR,并呈VEGF强阳性.结论C6细胞分化程度低,其高表达的趋化因子受体CXCR4和FPR可能与胶质瘤血管生成有密切关系.     

聚焦超声对斑马鱼神经胶质瘤模型的治疗研究

目的:通过研究聚焦超声对斑马鱼神经胶质瘤模型治疗后肿瘤组织和肿瘤血管的变化,探讨其对神经胶质瘤及肿瘤血管的影响。方法:将72只转基因斑马鱼(fli:GFP)随机分为3组,每组24只,分别是对照组(Fli组)、肿瘤组(U87组)、治疗组(U87+HIFU组)。在受精2 d后,对肿瘤组和治疗组注射神经胶质瘤细胞(U87-RFP),注射1 d后对治疗组进行聚焦超声治疗。在治疗后连续2 d用荧光显微镜观察3组斑马鱼的肿瘤大小及肿瘤血管增生情况,q PCR法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)Aa和血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)2的m RNA的表达情况。结果:U87组斑马鱼卵黄内有大量神经胶质瘤细胞且肿瘤血管明显增生,VEGF Aa和VEGFR2的m RNA表达升高(VEGF Aa:Fli:1.01±0.13 vs.U87:1.45±0.10,P=0.002;VEGFR2:Fli:1.01±0.12 vs.U87:1.41±0.07,P=0.001);经聚焦超声治疗后,斑马鱼卵黄内的神经胶质瘤细胞显著减少,血管增生不明显,VEGF Aa和VEGFR2的m RNA表达也较U87组降低(VEGF Aa:U87+HIFU:1.14±0.05 vs.U87:1.45±0.10,P=0.009;VEGFR2:U87+HIFU:1.16±0.06 vs.U87:1.41±0.07,P=0.012)。结论:聚焦超声能有效杀灭神经胶质瘤细胞,并且能减少肿瘤血管的生成,对治疗神经胶质瘤具有积极作用。     

SDF-1/CXCR4在恶性胶质瘤细胞体外增殖、迁移及侵袭中的作用

目的探讨趋化因子SDF-1及受体CXCR4在恶性胶质瘤细胞中的增殖、迁移及侵袭的作用,为临床治疗提供依据.方法免疫组化法检测CXCR4在恶性胶质瘤C6细胞中的表达;用MTT法分别检测不同浓度的趋化因子SDF-1促恶性胶质瘤C6细胞体外增殖,并应用CXCR4受体抑制剂AMD3100与SDF-1共培养细胞观察增殖情况及抗CXCR4单克隆抗体在恶性胶质瘤中上述指标的变化.通过细胞迁移实验和细胞侵袭实验评价不同处理组C6细胞的迁移和侵袭能力.结果 CXCR4在恶性胶质瘤C6细胞系表达呈阳性.SDF-1可以促进恶性胶质瘤C6细胞的体外增殖、迁移和侵袭,而抗CXCR4单克隆抗体可以有效抑制其增殖、迁移和侵袭,并呈浓度依赖性.AMD3100可以抑制SDF-1的诱导作用.结论 SDF-1/CXCR4轴在恶性胶质瘤细胞株的体外增殖、迁移及侵袭中的作用,可能与恶性胶质瘤的侵袭和转移有关,为治疗恶性胶质瘤提供新的治疗策略.     

激活人胶质瘤细胞CXCR4受体对血管内皮生长因子表达的影响

近年的研究发现,趋化因子基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor1,SDF1)受体CXCR4在胶质瘤细胞中有表达,但其具体作用和机制及其治疗学意义尚不清楚。本研究旨在通过检测3种胶质瘤细胞系的CXCR4表达及其介导的胶质瘤细胞趋化运动、胞内游离Ca^2 流动和调节血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达,从而探讨CXCR4的功能活性及其在血管生成中的作用。     

在人恶性胶质瘤原代培养细胞甲酰化肽受体FPR的表达和功能意义

目的 观测甲酰化肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤原代培养瘤细胞的表达和功能活性.方法 组织块培养和胰酶消化法分离、培养人恶性胶质瘤细胞并进行鉴定,分别采用间接免疫荧光染色结合激光共聚焦扫描、台盼蓝排染实验结合细胞计数、酶联免疫夹心吸附分析(ELISA)等方法观测培养细胞FPR的表达和定位、FPR配体fMLF活化FPR后细胞增殖以及分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的变化.结果 部分胶质瘤原代培养细胞可见FPR表达,主要呈线性荧光信号定位于细胞膜;FPR阳性细胞对fMLF的刺激具有反应性,表现为细胞增殖速率加快,VEGF分泌量显著增加.结论 部分人恶性胶质瘤细胞存在功能性FPR表达,并可促进瘤细胞增殖和VEGF的产生,在胶质瘤发展及血管生成过程中可能起重要作用.     

CXCR4/SDF-1反应轴与VEGF在强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中的表达及其相关性分析

［摘要］ 目的：探讨CXC趋化因子受体4/基质细胞衍生因子-1(CXCR4/SDF-1)反应轴与血管内皮细胞生长因子（VEGF）在强直性脊柱炎（AS）发病中的作用及其作用机制,阐明VEGF作为AS活动期和监测预后指标的可行性。方法：采用流式细胞术（FCM）检测30例AS患者及20例健康对照者外周血单个核细胞（PBMCs）CXCR4的表达情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测2组研究对象血清中的VEGF及SDF-1的表达水平;对CXCR4、SDF-1和VEGF三者间及其与疾病活动性指标血沉（ESR）和C反应蛋白（CRP）相关性进行分析。结果：AS组患者CXCR4表达阳性率显著高于健康对照组（P<0.05）;AS组患者VEGF及SDF-1的表达水平较健康对照组均明显增高（P<0.05）;CXCR4、SDF-1和VEGF三者间呈正相关关系,其相关系数(r)分别为0.828、0.638和0.723（P<0.05）;VEGF与ESR和CRP呈明显正相关关系,r分别为0.584和0.772（P<0.05）;CXCR4及SDF-1与ESR和CRP未见明显相关关系（P> 0.05）。结论：CXCR4/SDF-1反应轴与VEGF对AS发病、病情进展、严重程度及预后判断具有重要的作用;VEGF可作为活动期和监测预后的可靠指标,三者可能成为AS靶向治疗的主要靶点。     

CXCR4在卵巢癌组织中的表达及意义

目的:探讨趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1在上皮性卵巢癌中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学方法检测CXCR4/SDF-1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达情况.结果:在上皮性卵巢癌组织中CXCR4/SDF-1均呈阳性表达,分别与对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05).结论:CXCR4及其配体SDF-1系统可能在卵巢癌的发生与转移过程中起重要作用.     

SDF-1和CXCR4在脑胶质瘤中的表达及关系的研究

目的检测基质细胞衍生因子-1（SDF-1）和趋化生长因子受体-4（CXCR4）在胶质瘤中的表达,探讨二者在胶质瘤中表达的关系。方法以98例胶质瘤标本作为观察组,50例正常脑组织作为 对照组,采用免疫组织化学技术,分别检测SDF-1和CXCR4的表达及在不同分级胶质瘤中表达的关系。结果胶质瘤中SDF-1和CXCR4表达的阳性率明显于正常脑组织,SDF-1和CXCR4的表达与胶质瘤的分级密切相关,且肿瘤中SDF-1和CXCR4的表达呈正相关。结论 SDF-1和CXCR4在胶质瘤发生发展中可能具有协同作用,在肿瘤进展中可能有一定促进作用,联合检测SDF-1和CXCR4可能有助于判断胶质瘤的恶性程度。     

诺帝对人恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体表达及其活化后促增殖和血管生成因子产生的影响

目的观测自行研制的脂氧化酶抑制剂诺帝（Nordy）对人恶性胶质瘤细胞系U87中甲酰化肽受体（FPR）的表达和激活后功能活性的影响。方法采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测诺帝对U87系人恶性胶质瘤细胞FPR表达的影响;FPR激动剂N-甲酰化的甲硫酰-亮氨酸-苯丙氨酰胺（fMLF）激活FPR后加入诺帝,实验分为以下3组：①对照组,②fMLF刺激组,③诺帝处理组,分别采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）和双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测诺帝对FPR活化后引起的细胞增殖及细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）和白细胞介素8（IL-8）的作用。结果诺帝（100μmol／L）明显抑制U87细胞FPR受体的表达,同时对FPR激动剂fMLF（100nmol／L）诱导的U87细胞增殖和血管生成因子VEGF、IL-8 mRNA表达和蛋白的分泌具有明显的抑制作用。对照组U87细胞分泌一定量的VEGF和IL-8,分别为（4．14±0．28）ng／ml和（4．03±0．59）ng／ml;fMLF作用于U87细胞36h后,VEGF和IL-8蛋白水平均显著高于对照组（P〈0．05）,分别为（6．46±0．33）ng／ml和（7．54±0．73）ng／ml;诺帝作用于U87细胞12h后加入fMLF共同处理36h后,VEGF和IL-8蛋白水平分别为（3．59±0．33）ng／ml和（3．13±0．48）ng／ml,均显著低于对照组（P〈0．05）。结论诺帝对人恶性胶质瘤细胞的FPR表达和该受体活化后的促瘤细胞增殖及促血管生成因子VEGF、IL-8 mRNA表达和蛋白的分泌具有抑制作用,提示诺帝具有抑制肿瘤生长和抗血管生成的作用。     

VEGF通过影响CXCR4的表达调节卵巢癌细胞侵袭性的研究

目的 初步探讨卵巢癌细胞中血管内皮生长因子（VEGF）是否通过影响趋化因子受体CXCR4的表达,从而调节癌细胞的侵袭性.方法 以卵巢癌Caov-3细胞系为研究对象,运用RT-PCR和流式细胞术检测VEGF因子对卵巢癌Caov-3细胞系中CXCR4 mRNA及其蛋白质表达水平的影响,同时采用Boyden侵袭小室检测VEGF因子刺激后Caov-3细胞侵袭性的变化;并应用免疫组化技术检测VEGF与CXCR4在卵巢癌组织中的表达情况.结果 PCR产物凝胶电泳结果 显示,VEGF因子可显著增加Caov-3细胞中CXCR4 mRNA的表达：流式细胞仪检测发现,VEGF因子刺激细胞24h后,细胞平均荧光强度为26.20±1.45,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;VEGF刺激细胞后癌细胞的侵袭性显著增强,加入中和抗体后,癌细胞的侵袭性呈剂量依赖式下降.免疫组化检测结果 提示：卵巢癌中VEGF表达水平在不同转移状况和腹水量间的差异均有统计学意义（均P〈0.01）;CXCR4的表达水平在不同临床分期和转移状况间的差异均有统计学意义（均P〈0.05或0.01）;卵巢癌组织中VEGF蛋白与CXCR4蛋白的表达呈正相关（Spearman相关系数为0.575,P〈0.01）.结论 VEGF因子可通过影响卵巢癌细胞中CXCR4分子的表达,从而增强肿瘤细胞的侵袭性,CXCR4中和抗体则可抑制这一效应;卵巢癌组织中,VEGF与CXCR4的表达均与转移有关,且两者的表达呈正相关.     

RNA干扰瞬时受体电位阳离子通道1表达抑制缺氧诱导的胶质瘤血管内皮生长因子上调的实验研究

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道1（TRPCI）是否参与缺氧诱导的胶质瘤细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法通过RT-PCR和钙图检测技术观察U87细胞上表达的TRPC亚型;采用RNAi技术、real-timeRT-PCR、免疫印迹和ELISA方法,在基因和外分泌蛋白水平观察TRPCI对缺氧U87细胞VEGF表达的影响。结果U87胶质瘤细胞表达TRPCI,TRPC3,TRPC4和TRPC5亚型。TRPC通道激动剂OAG增加了胞内Ca^2＋浓度,而TRPC通道阻断剂2-APB可抑制激动剂诱导的胞内Ca^2＋浓度增加。化学合成的siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3分别减少TRPCI mRNA到64％,39％和36％（P〈0．01）;分别减少TRPCI蛋白到48％。29％和33％（P〈0．01）。siRNA-2和siRNA-3显著抑制了缺氧诱导的VEGF基因上调（P〈0．01）。同时缺氧U87细胞VEGF蛋白的分泌亦受到抑制（P〈0．01）。结论U87胶质瘤细胞表达功能性的TRPC通道,TRPCI参与缺氧诱导的胶质瘤VEGF表达。     

鸦胆子油乳对胶质瘤U251细胞血管内皮生长因子表达水平的影响

目的:研究鸦胆子油乳对胶质瘤U251细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的抑制情况.方法:体外培养人脑胶质瘤U251细胞,设置对照组和3个药物组(鸦胆子油乳终质量浓度分别为5 g/L、25 g/L和1.25 g/L),利用酶联免疫吸附法测定培养细胞上清液中VEGF含量;应用免疫细胞化学法检测胶质瘤U251细胞中VEGF的变化.结果:酶联免疫吸附法测定培养细胞上清中VEGF含量显示,随着药物浓度的增加U251细胞分泌的VEGF均较对照组明显减少(P<0.01).免疫组织化学显示,随着鸦胆子油乳注射液作用剂量的增加,VEGF蛋白的表达逐渐减少.结论:鸦胆子油乳注射液能抑制胶质瘤细胞中VEGF的表达.     

CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U251体外增殖和侵袭能力的影响,为CXCR4 shRNA治疗胶质瘤提供实验依据. 方法 用脂质体LipofectimineTM2000将CXCR4-shRNA转染U251细胞,MTT实验检测转染细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力. 结果 与转染非特异的pGPU6/GFP/NC组和未转染组比较,转染CXCR4-shRNA载体pGPU6/GFP/Rac 1-421组的U251细胞CXCR4 mRNA显著降低(P＜0.05),并且细胞体外增殖能力减弱(P＜0.05),侵袭到滤膜底面的细胞数为36.67±9.76,分别低于对应的pGPU6/GFP/NC组和未转染组(P＜0.05). 结论 CXCR4 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-421可下调U251细胞CXCR4的表达,抑制U251细胞的增殖和迁移侵袭能力,提示CXCR4在胶质瘤发展过程中具有重要作用.     

LRRC4通过SDF-1α/CXCR4生物学轴抑制脑胶质瘤细胞侵袭迁移能力

目的:探讨LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)通过SDF-1 α/CXCR4(stromal cell-derived factor-1 α/CXC receptor 4)对脑胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响.方法:将LRRC4基因转入脑胶质母细胞瘤U251细胞,分别通过RT-PCR实验、黏附实验、侵袭实验、细胞运动试验、划痕标记荧光染料示踪实验,研究SDF-1α干预前后LRRC4对U251细胞迁移能力的影响.结果:将LRRC4基因转入脑胶质瘤细胞U251,通过RT-PCR实验发现CXCR4的表达下调.用CXCR4的特异配体SDF-1α干预后,肿瘤黏附内皮实验、侵袭实验、细胞迁移实验、划痕标记染料示踪实验表明脑胶质瘤细胞迁移能力增强,LRRC4可以抑制细胞的这种侵袭迁移能力.SDF-1 α能够改善细胞间的通讯能力,LRRC4可以进一步增强这种通讯能力.结论:SDF-1 α/CXCR4的相互作用可以增强脑胶质瘤细胞U251的运动迁移能力,LRRC4基因可以通过调控SDF-1α/CXCR4生物学轴有效地抑制肿瘤细胞的侵袭迁移能力.     

CXCR7在SDF-1介导内皮细胞参与血管形成中的作用

目的探讨CXCR7在SDF-1诱导内皮细胞参与血管生成中的作用。方法用Western blot和流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中CXCR7和CXCR4的表达;利用小分子拮抗剂分别阻断CXCR4或CXCR7,然后通过MTT、Transwell小室法及三维基质胶血管样结构形成实验分别考察CXCR7和CXCR4对SDF-1诱导HUVECs增殖、迁移及管样结构形成能力的影响。结果 HUVECs细胞中同时高表达CXCR4和CXCR7;CXCR7的拮抗剂显著抑制SDF-1诱导HUVECs的增殖(P<0.01);而SDF-1诱导HUVECs迁移却被CXCR4的拮抗剂阻止(P<0.01);CXCR7和CXCR4的拮抗剂均显著阻止SDF-1诱导HUVECs形成血管样结构(P<0.01)。结论 CXCR7和CXCR4在SDF-1诱导HUVECs参与血管生成的过程中均起着不可或缺却又不尽一致的作用,SDF-1诱导HUVECs的增殖主要通过CXCR7发挥作用,而CXCR4主要参与SDF-1诱导HUVECs的迁移,两者共同参与SDF-1诱导HUVECs形成管样结构的调节。     

骨髓基质细胞衍生因子1及其受体在骨髓增生异常综合征患者中的表达

目的 探讨基质细胞衍生因子1(SDF-1)与其受体趋化因子受体CXCR4在骨髓增生异常综合征(MDS)发病中的可能作用,为MDS的治疗寻找有意义的靶点.方法 收集2006年10月至2010年6月59例MDS病例,根据国际预后积分系统(IPSS)分为低危和高危两组,分别为33例和26例,以10份正常的骨髓标本作为对照.采集骨髓标本,检测骨髓血浆中SDF-1的含量、CD34+细胞CXCR4的表达率、CD34+细胞的凋亡率及血管内皮生长因子(VEGF)在骨髓血浆中的表达.结果 SDF-1在低危组和高危组患者骨髓血浆中的含量[(2301±413)、(1173 ±501)ng/L]显著高于对照组[(689±190)ng/L,P＜0.05],低危组显著高于高危组(P＜0.05).CD34+细胞CXCR4的表达在高危组(68.1％±18.8％)显著高于低危组(21.0％±9.7％)和对照组(19.4％±5.3％)(P＜0.05),在后两组的表达率差异无统计学意义(P＞0.05).CD34+细胞的凋亡率在低危组、高危组和对照组分别为54.8％±10.2％,24.3％±7.9％,l8.5％±8.7％,前组显著高于后两组(P＜0.05).骨髓血浆中VEGF的含量在低危组、高危组、对照组分别为(286±97)、(407±168)、(157±46)ng/L,差异有统计学意义(P＜0.05).相关分析显示:低危组CD34+细胞的凋亡率与骨髓血浆SDF-1的含量呈正相关(r =0.805,P＜0.05);高危组血浆VEGF的含量与CD34+细胞CXCR4的表达呈正相关(r=0.683,P＜0.05).结论 SDF-1/CXCR4在MDS中存在异常表达,且与骨髓细胞的凋亡和血管新成具有相关性,针对该生物轴的干预可为该病的治疗提供新的靶点.