整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其表达调节的研究

目的 研究整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其的影响.方法 将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组(Sham,n=20)、UUO组(UUO,n=28)和尿激酶治疗组(uPA,n=28),分别于术后1、3、7和14 d处死小鼠.Masson染色观察肾间质纤维化.免疫荧光和Western印迹检测小鼠肾组织ILK的分布及表达.免疫组化检测肾组织上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)的表达.RT-PCR检测ILK、E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达.结果 与Sham组相比,UUO组术后1dILKmRNA及蛋白表达均增高,7d达到高峰:E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,α-SMA mRNA表达显著上调.与UUO组同时间点相比,uPA治疗组ILK、α-SMA表达均被显著抑制(P<0.05);E-cadherin表达则增高(P<0.05).结论 ILK通过介导肾小管上皮细胞转分化而参与肾间质纤维化的发生发展.uPA能减轻肾小管间质纤维化,这可能与其抑制肾小管细胞ILK表达有关.     

pax2基因在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 探讨pax2基因在大鼠慢性肾小管间质纤维化过程中的表达及其对肾小管上皮细胞转分化的可能作用.方法 大鼠5/6肾切除造模,分别于术后2、4、6、8、10、12周取左肾皮质,采用逆转录(RT)-PCR及免疫组织化学的方法检测模型组和正常对照组的pax2和α-SMA的表达.结果 病变组织见系膜细胞和基质增生,间质炎症细胞浸润,基底膜变厚.5/6肾切除模型组大鼠在术后第2周出现pax2 mRNA的强表达,第4周达高峰,与正常对照组比较P＜0.05,此后下降至痕量表达;α-SMA mRNA也在术后第2周表达逐渐增强,第8周达高峰,与正常对照组比较P＜0.05,此后逐渐下降.免疫组织化学染色显示,5/6肾切除模型组pax2蛋白的表达、肾小管上皮细胞中α-SMA的表达与pax2 mRNA、α-SMA mRNA的表达趋势相同.结论 在大鼠慢性肾间质纤维化的过程中,受损的肾小管上皮细胞可向肌成纤维细胞转分化,肾小管发育胚胎基因pax2在此过程中的一过性表达可能起到重要的作用.     

肾小管上皮细胞转分化在糖尿病肾病发生中的作用

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的主要微血管并发症,是终末期肾病(ESRD)的最常见病因,也是一类以进行性肾脏纤维化为特征的疾病.     

中药单体及复方抗肾小管上皮细胞转分化的研究进展

<正>慢性肾脏病(chronic kidney disease, CKD)是一个不可逆的疾病进展过程,最终会发展为肾衰竭,进入终末期肾病。目前,CKD患者数量逐年增多,全球CKD患者达8%～16%,故CKD已成为全球公共健康问题,严重威胁人类健康^[1]。肾间质纤维化(rental interstitial fibrosis, RIF)是各种肾脏疾病发展过程中关键的病理基础,     

肾小管上皮细胞转分化在肾间质纤维化中的研究进展

肾小管一间质纤维化(renal interstitial filbrosis,RIF)是各种慢性肾脏病发展到终末期的共同病理改变.其特征为细胞外基质(extracellur msrtrix,ECM)在肾间质积聚及肾间质成纤维细胞增生.已证实肾小管下皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)为RIF发生的重要机制,并成为当前研究的热点,现就EMT在肾间质纤维化形成中的作用机制研究进展作一综述.     

肾小管上皮细胞转分化与肾小管间质纤维化

肾小管上皮细胞转分化在肾间质纤维化发生中起到重要作用，其转化条件和机制已成为当今学者研究的热点。该文就肾小管上皮细胞转分化过程及可能的发生机制进行综述。     

肾小管上皮细胞转分化的信号转导途径

肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾功能衰竭的共同途径.近年来研究发现,肾小管上皮细胞转分化(tubular epithelial to mesenchymal transdifferentiation,TEMT)是肾小管间质纤维化发生和进展的重要机制.     

EGCG对梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化的干预作用及机制

目的 探讨表没食子儿荼素没食子酸酯(EGCG)对大鼠肾问质纤维化和肾小管上皮细胞转分化的作用及其机制.方法 雄性Wistar大鼠56只随机分为正常对照组(n=8)、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组(n=24,以单侧输尿管结扎制作肾间质纤维化模型)和EGCG治疗组(n=24,单侧输尿管结扎术后每日给予腹腔注射EGCG 5 ...     

丹参酮ⅡA磺酸钠对肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对TGF-1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响,为防治肾间质纤维化提供有效的途径。方法人近曲小管上皮细胞株（HKC-8）,予TGF-1（2ug/mL）刺激48或72h,同时给予丹参酮ⅡA磺酸钠（终浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0mg/mL）进行干预,采用real time PCR、western blot及间接免疫荧光等方法检测平滑肌激动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、ZO-1（zonulaocclundents protein-1）、结缔组织生长因子（CTGF）的表达。结果与对照组比较,TGF-1明显上调α-SMA、FN、CTGF的表达,抑制ZO-1的表达（P〈0.01）,丹参酮ⅡA磺酸钠以浓度依赖方式抑制TGF-1介导的α-SMA、FN、CTGF上调,恢复ZO-1的表达（P〈0.05）。结论丹参酮ⅡA磺酸钠能逆转TGF-1诱导的人肾小管上皮细胞转分化,因而具有防治肾间质纤维化的作用。     

柴胡皂苷D对人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的探讨柴胡皂苷D(SSD)对人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。 方法将人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为对照组、空白溶剂对照组、肾间质纤维化(RIF)组(5 μg/L TGF-β1)、阳性对照组(5 μg/L TGF-β1+10 μmol/L贝那普利)、SSD组(5 μg/L TGF-β1+10.00 μmol/L SSD)、SSD+DKK-1组(5 μg/L TGF-β1+10.00 μmol/L SSD+100 μg/L DKK-1)。光学显微镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光检测细胞E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Western blotting检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达,qRT-PCR检测细胞胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)相对表达量。 结果对照组、空白溶剂对照组细胞有序、紧密排列,RIF组细胞呈现出长梭形且细胞排列分散;阳性对照组、SSD组和SSD+DKK-1组中长梭形细胞较RIF组减少且细胞分散程度降低。RIF组E-cadherin荧光斑低于对照组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量高于对照组(P＜0.05)。阳性对照组、SSD组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于RIF组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量低于RIF组(P＜0.05)。SSD+DKK-1组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于SSD组(P＜0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、Collagen Ⅰ基因相对表达量低于SSD组(P＜0.05)。 结论SSD可抑制人肾小管上皮细胞转分化,可能与抑制Wnt/β-catenin途径活化有关。     

黄芪注射液对KKA~y小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨黄芪注射液治疗肾间质纤维化的作用机制,为临床中药治疗糖尿病肾间质纤维化提供实验依据。方法将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组和黄芪注射液治疗组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组,治疗组小鼠14周龄开始腹腔注射黄芪注射液。于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、钙依赖性跨膜糖蛋白和转化生长因子β1的表达。结果可见模型组发生明显的纤维化改变,而经黄芪注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达较模型组减少,钙依赖性跨膜糖蛋白的表达增多。结论黄芪注射液可在一定程度上减少α-平滑肌肌动蛋白的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中转化生长因子β1表达,上调钙依赖性跨膜糖蛋白的表达水平,阻断并逆转肾小管上皮-间质转化的过程,延缓肾小管上皮细胞转分化的发生发展进程。     

直接肾素抑制剂阿利吉仑对肾纤维化小鼠上皮-间质转化的调节作用

目的：探讨直接肾素抑制剂阿利吉仑对单侧输尿管结扎引起的小鼠肾纤维化中上皮-间质转化（EMT）的调节作用,阐明阿利吉仑抗肾纤维化的作用机制。方法：24只雄性ICR小鼠分为假手术组、模型组和阿利吉仑干预组,采用单侧输尿管结扎方法制作小鼠肾纤维化模型。HE染色观察小鼠肾间质纤维化的病理组织形态,Masson染色观察小鼠肾间质纤维化中胶原蛋白的表达情况,免疫组织化学染色法观察胞浆中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,免疫印迹法检测小鼠肾组织中E钙黏蛋白（E-cad）、α-SMA和Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的表达水平。结果：通过单侧输尿管结扎方法成功制备小鼠肾纤维化模型。HE染色和Masson染色,与模型组比较,阿利吉仑干预组小鼠肾纤维化程度明显降低,胶原蛋白表达明显减少。免疫组织化学染色,阿利吉仑干预组小鼠肾小管间质纤维化区域胞浆内α-SMA阳性显色较模型组明显减少。免疫印迹法,模型组小鼠肾组织中α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平升高,分别是假手术组的1.79倍和1.95倍;E-cad蛋白表达水平降低,为假手术组的37.23%,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;阿利吉仑干预组小鼠肾组织中α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平降低,E-cad蛋白表达水平升高,分别是模型组的63.72%、65.54%和2.1倍,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：阿利吉仑能够通过上调E-cad的表达同时下调α-SMA、Col Ⅰ的表达抑制小鼠肾纤维化中EMT,进而发挥抗纤维化的作用。     

miR-155在血管紧张素II诱导的肾小管上皮-间充质转化中的作用及其机制

目的：阐明miR-155在血管紧张素II（Ang II）诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化（EMT）中的作用并探究其调控机制。方法：将体外培养的NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组、Ang II组、NC miRNA处理组、miR-155 inhibitor处理组、溶剂对照组和蛋白激酶B（AKT）激动剂处理组,予相应处理。CCK8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测EMT相关蛋白、TGF-β蛋白表达水平以及AKT磷酸化水平,qPCR检测miR-155表达水平,免疫荧光染色检测Collagen I蛋白荧光强度。结果：随着Ang II浓度增加,细胞增殖能力、TGF-β以及EMT相关蛋白表达水平显著增加,miR-155表达水平显著上调（均P＜0.05）。与Ang II组相比,miR-155 inhibitor处理组miR-155表达水平、EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著降低（均P＜0.05）;与miR-155 inhibitor处理组和溶剂对照组相比,AKT激动剂处理组EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著上调（均P＜0.05）。结论：miR-155可通过调控AKT信号通路促进Ang II诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。     

脂溢性角化病皮损区Smurf1和Smurf2表达增强

目的 探讨脂溢性角化病皮损区Smad泛素化调节因子1和2(Smad ubiquitination regulatory factor 1 and 2, Smurf1, 2)的表达及其意义.方法 采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫组织化学技术分别检测脂溢性角化病皮损和对照正常皮肤中Smurf1和2的表达情况.结果 与对照正常皮肤相比,脂溢性角化病皮损中Smurf1和2表达水平上调.结论 脂溢性角化病皮损中Smurf1和2的过度表达可干扰转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)信号转导通路,可能使TGF-β抑制上皮增生的作用不能有效发挥,促进了脂溢性角化病表皮的过度增生.     

小RNA在器官纤维化上皮-间质转化(EMT)中的作用

 小RNA是一类长度约22~28个核苷酸的非编码小分子RNA,近年来发现其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用。上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,它在生理和病理过程中发挥了重要作用。近年来发现小RNA在各种器官纤维化的EMT过程中也起了重要作用。本文就小RNA在器官纤维化EMT过程中的作用作一综述,以期为器官纤维化疾病的治疗提供新的思路。     

小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型研究

目的：探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞-间充质细胞转型的形态学变化。方法：利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型，常规组织学分析小鼠肾脏病理变化，免疫组化检测α-SMA的表达，肾基底膜六胺银染色和透射电镜观察肾小管基底膜的变化情况，明胶酶谱分析观察肾脏中MMP2和MMP9的表达情况。结果：成功地建立了小鼠肾间质纤维化模型，并被组织学分析证实。免疫组化分析显示肾脏中出现了大量表达α-SMA的细胞，肾基底膜六胺银染色和透射电镜分析显示小鼠肾间质纤维化早期肾脏出现了肾小管基底膜局部断裂和肾小管上皮细胞迁出的改变，明胶酶谱分析显示小鼠肾脏中MMP2和MMP9于肾间质纤维化早期有一过性增高变化。结论：肾小管基底膜局部断裂，肾小管上皮细胞迁出以及MMP2和MMP9的表达变化参与了小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型的过程。     

小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型研究

目的:探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞间充质细胞转型的形态学变化.方法:利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,常规组织学分析小鼠肾脏病理变化,免疫组化检测a-SMA的表达,肾基底膜六胺银染色和透射电镜观察肾小管基底膜的变化情况,明胶酶谱分析观察肾脏中MMP2和MMP9的表达情况.结果:成功地建立了小鼠肾间质纤维化模型,并被组织学分析证实.免疫组化分析显示肾脏中出现了大量表达a-SMA的细胞,肾基底膜六胺银染色和透射电镜分析显示小鼠肾间质纤维化早期肾脏出现了肾小管基底膜局部断裂和肾小管上皮细胞迁出的改变,明胶酶谱分析显示小鼠肾脏中MMP2和MMP9于肾间质纤维化早期有一过性增高变化.结论:肾小管基底膜局部断裂,肾小管上皮细胞迁出以及MMP2和MMP9的表达变化参与了小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型的过程.     

配对盒基因2对正常肾小管上皮细胞间充质转分化的诱导作用

［摘 要］ 目的:观察体外转染配对盒基因2（PAX2）对肾小管上皮细胞表型标志物的影响,探讨PAX2诱导转分化的作用,为肾纤维化治疗提供依据。方法:正常肾小管上皮细胞株NRK52E分为对照组、空载组(转染pGC-Fu空质粒)和转染组(采用脂质体转染法将pGC-FU-GFP-PAX2质粒转染至细胞中)。转染72 h后应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,应用Western blotting法和Real-time PCR法检测PAX2蛋白和mRNA表达水平;转染72 h后应用免疫组织化学法、Western blotting法和Real-time PCR法检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin) 和α-肌动蛋白(α-SMA)及其mRNA表达水平。结果：pGC-FU-GFP-PAX2转染72 h后,转染组细胞绿色荧光强度较对照组明显增强,且肾小管上皮细胞的形态伸长; Western blotting法检测,转染组PAX2蛋白表达水平明显高于空载组和对照组（P<0.05）;Real-time PCR检测,转染组细胞的PAX2mRNA表达水平明显高于空载组和对照组（P<0.05）;转染组细胞中的E-cadherin染色较空载组和对照组明显减弱;α-SMA染色较空载组和对照组明显增强。Western blotting法检测,转染组细胞中E-cadherin表达水平明显低于空载组和对照组（P<0.05）;α-SMA表达水平明显高于空载组和对照组（P<0.05）;Real-time PCR检测,转染组细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显低于空载组和对照组（P<0.05）;α-SMA mRNA表达水平明显高于空载组和对照组（P<0.05）。结论：PAX2转染正常肾小管上皮细胞后E-cadherin表达减少,α-SMA表达增加,PAX2可能在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化。     

Role of protein kinase C in advanced glycation end products-induced epithelial-mesenchymal transition in renal proximal tubular epithelial cells

The role of protein kinase C （PKC） activation in advanced glycation end products （AGEs）-induced epithelial-mesenchymal transition in renal proximal tubular epithelial cells was investigated. HKC cells were divided into three groups： normal group, AGE-BSA group （100 mg/L AGE-BSA） and AGE-BSA＋PKC inhibitor （10 μmol/L chelerythrine chloride） group. PKC activity was measured by PKC assay kit. The expression of Vimentin, and phosphorylated β-catenin was detected by using Western blotting, and the content of TGF-β1 was examined by ELISA method. The intracellular disposition of Vimentin was observed by fluorescence microscopy. As compared with normal group, PKC activity was increased significantly in AGE-BSA group. The expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 was enhanced significantly in AGE-BSA group. The expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 was significantly blocked by chelerythrine chloride. High expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 induced by AGE-BSA may be mediated via the activation of PKC signal transduction pathway.