SBEM、hMAM及CK19预测乳腺癌外周血微转移的临床价值

目的：探讨生物学标志物乳腺上皮小黏蛋白（ SBEM ）、乳腺珠蛋白（ hMAM ）和细胞角蛋白19（ CK19）在乳腺癌患者外周血循环中的表达及其作为乳腺癌外周血微转移预测指标的价值。方法采用巢式PCR技术,检测47例乳腺癌患者和45例乳腺良性瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的表达;采用半定量PCR技术10例乳腺癌及对应的癌旁组织以及10例乳腺良性肿瘤组织中SBEM、hMAM和CK19的表达。结果 SBEM和hMAM在乳腺癌组患者外周血中表达率高于乳腺良性肿瘤组患者（ P＜0．05）,而两组外周血CK19表达率差异无统计学意义（P＞0．05）。 SBEM、hMAM和CK19在乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性肿瘤组组织中均呈高表达,3组患者hMAM和CK19表达量没有差异（ P＞0．05）, SBEM在癌组组织中表达量低于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织组（ P＜0．05）。结论 SBEM、hMAM、CK19在乳腺组织中呈稳定高表达,作为乳腺癌外周血微转移生物学标志物灵敏性高,但缺乏特异性,联合检测可提高特异性。     

乳腺癌患者外周血hMAM、CK19、CEA、SBEM mRNA表达与淋巴结微转移的关系

目的探讨腋淋巴结阴性（ANN）乳腺癌患者外周血hMAM、CK19、CEA和SBEM mRNA的表达及与淋巴结微转移的关系。方法研究对象为62例ANN乳腺癌患者,免疫组化S-P法检测CK（AE1/AE3）在其淋巴结中的表达,以判定微转移;用荧光定量PCR技术检测外周血hMAM、CK19、CEA、SBEM mRNA的表达。结果 ANN组腋窝淋巴结微转移率为27.42%,有微转移的患者外周血hMAM、CK19、CEA和SBEM mRNA的阳性表达率分别为41.18%、29.41%、23.52%和35.29%,与对照组相比有显著差异。4种标记物联合检测比单项检测有更高的敏感度和准确性。结论外周血中的hMAM、CK19、CEA和SBEM mRNA联合检测可能为预测ANN乳腺癌患者淋巴道转移和微转移提供有用的观测指标。     

乳腺癌患者外周血中hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测及其临床意义

目的:探讨外周血中人乳腺珠蛋白(hMAM)、乳腺小黏蛋白(SBEM)和癌胚抗原相关黏附因子19(CEACAM19)mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的作用,阐明其临床意义.方法:收集104例乳腺癌患者(乳腺癌组)、52例乳腺良性病变患者(良性乳腺病组)和50名健康人(健康对照组)的外周血,采用实时荧光定量PCR(RT-qP...     

巢式RT-PCR检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值?方法:采用MCF-7 RNA与健康志愿者外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)RNA进行梯度混合后的反转录产物,检测优化后巢式RT-PCR体系的敏感性,再选择10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血检测其特异性后,对56例乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA及SBEM mRNA表达情况进行检测? 结果:优化后的检测体系能够在3 ml外周血PMNCs中检测到1个MCF-7细胞,10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血中未检测到CK19 mRNA与SBEM mRNA的表达;两者的表达与原发肿瘤大小,腋窝淋巴结状况及TNM分期相关(P < 0.05),而与原发肿瘤病理类型,激素受体以及C-erbB-2的表达无明显相关性(P > 0.05)? 结论:经过优化的巢式RT-PCR体系联合检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA及SBEM mRNA的表达敏感性和特异性较高,能用于检测外周血CTC,对进一步精确评估预后及指导治疗可能有较高的临床价值?     

实时荧光定量RT—PCR检测乳腺癌患者外周血CK19及hMAMmRNA表达的临床意义

目的动态监测乳腺癌患者外周血液中CK19及hMAMmRNA的表达,探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术,动态检测40例经病理证实的乳腺癌及10例健康对照组外周血液中CK19及hMAM的表达。结果40例乳腺癌循环血液中CK19及hMAM的表达显著高于正常人群。在治疗过程中,乳腺癌患者循环血液中上述指标表达的阳性率呈下降趋势。不同分期乳腺癌在治疗前、中期的表达无显著性差异,但在治疗后期不同分期乳腺癌表达的阳性率差异有统计学意义（CK19：P=0．044;hMAM：P=0．005）,对持续阳性的乳腺癌患者,其复发转移率较高,差异有显著性统计学意义（P〈0．001）。结论实时荧光定量PCR技术可检测出各期乳腺癌患者外周血中CK19及hMAM的表达,有较高的敏感性和特异性,在判断乳腺癌预后、监控复发中的应用具有一定的可行性。     

乳腺癌患者外周血中角蛋白19 mRNA,乳腺小粘蛋白mRNA和泌乳素诱导蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌患者外周血中角蛋白(CK)19mRNA,乳腺小粘蛋白(SBEM)mRNA和泌乳素诱导蛋白(PIP)mRNA的表达,并探讨三者在微转移检测中的意义。方法:用RT-PCR检测乳腺癌患者50例、结直肠癌20例、乳腺良性肿瘤21例、健康者20例外周血中的CK19mRNA、SBEM mRNA、PIP mRNA。结果:CK19mRNA在乳腺癌组的阳性率(36.0%)明显高于乳腺良性肿瘤组(0.0%,P<0.05)与健康者(0.0%,P<0.05)。SBEM mRNA、PIP mRNA在乳腺癌组的阳性率(28.0%、18.0%)明显高于其它3组(0.0%,P<0.05)。联合检测3个基因,可将阳性率提高到62.0%。结论:乳腺癌患者外周血中的SBEM mRNA、PIP mRNA均可能作为微转移标志物;而CK19mRNA作为乳腺癌微转移标志物的特异性尚待探讨;联合检测三者可提高乳腺癌外周血微转移的检出率。     

人乳房珠蛋白外周血表达RT-PCR检测及乳腺癌诊治应用

目的建立灵敏外周血人乳房珠蛋白(hMAM)表达 RT-PCR 检测方法,探索 hMAM 在乳腺癌诊治中的应用价值。方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL 液提取总 RNA,作 RT-PCR,并查β-actin 监控;确认的 cDNA 先作普通PCR 扩增,再作荧光定量 PCR 扩增。结果 64例标本有63例确认转录为 cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通 PCR 后再作荧光定量 PCR,乳腺癌 hMAM 表达阳性率为53.3%,与良性乳腺肿瘤和正常对照间阳性率有显著差异(P<0.05);而不作普通 PCR 的 cDNA 直接行荧光定量 PCR,结果无阳性。淋巴结转移较未转移,hMAM 表达阳性率有极显著差异(P<0.01)。结论外周血 hMAM 表达是乳腺癌细胞微转移的特异指标;单次 PCR 法的灵敏度不够,二次 PCR 可明显提高灵敏度,并一次普通 PCR 加一次荧光定量 PCR 的组合效果更理想。外周血 hMAM 表达可能是监测淋巴结转移较好指标。     

外周血中乳腺癌细胞hMAM表达检测方法的建立及初步应用

目的建立反转录结合荧光定量PCR(FQ-PCR)检测外周血乳腺癌细胞hMAM基因表达方法,了解其监测乳腺癌细胞微转移的应用价值。方法克隆目的片段,制备标准品并做测序验证。培养乳腺癌MDA-MB453、MCF7细胞株,制成血液标本模型,GAPDH基因为内对照,反转录结合FQ-PCR检测乳腺癌细胞株血标本模型和10例乳腺癌患者外周血的hMAM表达。结果电泳和测序证实,克隆产物系预期的目的片段。FQ-PCR标准曲线的相关系数为-1.0;用103拷贝/微升标准品重复检测5次,x±s:718.9±120.5,CV值:16.7%;MDA-MB453细胞的血标本做灵敏度试验,相当于104个血细胞中含1个乳腺癌细胞可检出阳性。未检测到MCF7细胞的hMAM表达。10例乳腺癌患者,淋巴结转移的5例中,3例hMAM表达阳性、2例阴性;无淋巴结转移的5例中,1例hMAM表达阳性、4例阴性。结论本方法可有效监测外周血中微转移的乳腺癌细胞,发现不同乳腺癌细胞系hMAM表达程度差异大。     

乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞和外泌体的表达及其临床意义*

目的 探讨循环肿瘤细胞（CTCs）和外泌体在乳腺癌患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法 收集87例乳腺癌患者、40例乳腺良性肿瘤患者及20例健康体检者外周血,采用Cell search系统检测外周血中CTCs,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测microRNA-1246（miR-1246）的表达。结果 乳腺癌患者外周血中CTCs为（4.36±1.08）个/ml,高于良性乳腺肿瘤患者和健康体检者（P?<0.05）;乳腺癌患者外周血中miR-1246相对表达水平为（102.94±43.28）,高于良性乳腺肿瘤患者与健康体检者外周血 miR-1246（P?<0.05）。外周血中CTCs诊断乳腺癌的符合率为68.9%,miR-1246的诊断符合率为63.2%;CTCs 联合miR-1246诊断乳腺癌的符合率为81.6%,3组间诊断符合率比较差异有统计学意义（P?<0.05）。以病理活检为金标准,外周血CTCs和miR-1246单独诊断乳腺癌的κ值均<0.4（一致性较差）;两者联合诊断乳腺癌 κ值为0.46（具有较好的一致性）。结论 外周血中CTCs与miR-1246联合检测有助于早期发现乳腺癌,为乳腺癌的个性化检测和治疗提供方向。     

人乳房珠蛋白外周血表达RT-PCR检测及乳腺癌诊治应用

目的 建立灵敏外周血人乳房珠蛋白（hMAM）表达RT-PCR检测方法，探索hMAM在乳腺癌诊治中的应用价值。方法 分离受检者外周血单个核细胞，TRIZOL液提取总RNA，作RT-PCR，并查B-acfin监控；确认的cDNA先作普通PCR扩增，再作荧光定量PCR扩增。结果64例标本有63例确认转录为cDNA，其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通PCR后再作荧光定量PCR，乳腺癌hMAM表达阳性率为53．3％，与良性乳腺肿瘤和正常对照间阳性率有显著差异（P〈0．05）；而不作普通PCR的cDNA直接行荧光定量PCR，结果 无阳性。淋巴结转移较未转移，hMAM表达阳性率有极显著差异（P〈0．01）。结论 外周血hMAM表达是乳腺癌细胞微转移的特异指标；单次PCR法的灵敏度不够，二次PCR可明显提高灵敏度，并一次普通PCR加一次荧光定量PCR的组合效果更理想。外周血hMAM表达可能是监测淋巴结转移较好指标。     

悬浮阵列技术检测循环肿瘤细胞基因预测乳腺癌术后复发

目的建立可以同时检测乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞多个基因表达水平的悬浮阵列方法,探讨多基因联合检测在乳腺癌术后复发早期预测中的应用价值。方法以悬浮阵列技术检测73例乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞癌基因,并用COX比例风险模型寻找影响乳腺癌复发转移的独立预后因素。结果成功建立了可以同时检测乳腺癌患者外周血中8种循环肿瘤细胞基因表达水平的悬浮阵列方法,基因阳性率从大到小排列的结果为乳腺珠蛋白（hMAM）、人类表皮生长因子受体2（HER2）、细胞角蛋白19（CK19）、乳腺小黏蛋白（SBEM）、肿瘤相关钙信号转导蛋白1（EPG2）、端粒酶逆转录酶（hTERT）、人绒毛膜促性腺激素β亚基（β-HCG）和B305D基因,分别为57．5％、57．5％、53．4％、52．1％、31．5％、26．1％、21．9％和15．1％。1个及1个以上基因表达的阳性率为79％,高于血清CA15—3检测（44％,P〈0．05）。SBEM的表达与临床分期有关（P〈0．05）;hMAM、SBEM、HER2、雌激素受体（ER）为乳腺癌复发转移的独立预后因素（均P〈0．05）。结论建立的悬浮阵列方法在乳腺癌的预后判断方面具有实用价值。外周血循环肿瘤细胞hMAM、SBEM和HER2的表达可以作为分子标记物预测乳腺癌的复发转移。     

乳腺癌患者外周血癌胚抗原及细胞角蛋白19 mRNA表达的临床意义

目的 探讨细胞角蛋白19(CK19)mRNA、癌胚抗原(CEA)mRNA的表达在诊断乳腺癌患者外周血微转移的临床意义及与临床病理指标的关系.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)法,测定28名健康女性志愿者、20例良性乳腺疾病患者、108例乳腺癌患者(88例行手术切除乳腺癌患者、20例复发转移乳腺癌患者)的外周血中CK19、CEA mRNA的表达.以上有一项为阳性即判定为转移.结果 28名健康对照者CK19 mRNA和CEA mRNA两个指标检测结果均为阴性.20例良性乳腺疾病患者中,CK19 mRNA阳性1例(5%),无CEA mRNA表达阳性者.108例乳腺癌患者中,26例(24.1%)CK19 mRNA阳性,23例(21.3%)CEA mRNA阳性,15例(13.9%)两者均阳性.在108例乳腺癌患者中,复发转移乳腺癌患者CK19 mRNA和(或)CEA mRNA的表达高于行手术切除乳腺癌患者.88例行手术切除乳腺癌患者外周血微转移阴性组、阳性组在肿瘤大小、病理分期、kI67,细胞黏附分子CD44变异型v6(CD44v6),血管内皮生长因子(VEGF)表达方面差异有统计学意义(P<0.05),但在年龄、肿瘤位置、病理组织学类型、淋巴结转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB2、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达等方面差异无统计学意义(P>0.05).多因素分析表明肿瘤大小、病理分期、kI67、CD44v6、VEGF与患者外周血微转移有关.结论 联合检测CK19mRNA和CEA mRNA可提高乳腺癌患者外周血微转移的检出率.肿瘤大小、病理分期、kI67、CD44v6、VEGF可评估乳腺癌患者外周血微转移风险.     

乳腺癌分子分型与外周血循环肿瘤细胞相关性探讨

目的探讨乳腺癌分子分型与外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的相关性。方法抽取116例乳腺癌及20例乳腺纤维腺瘤患者外周静脉血5 ml,利用密度梯度离心法富集单个核细胞,通过荧光定量PCR技术检测所获单个核细胞中细胞角蛋白(cytokeratin,CK)19 mRNA表达阳性的CTC,分析乳腺癌分子分型与CTC的关系。结果 116例乳腺癌患者中CTC阳性率为31%(36/116),20例乳腺纤维腺瘤患者均未检测出CTC。36例CTC阳性患者的中位CTC水平为1.65(1.18,2.87)个MCF-7细胞/2μg总RNA;116例乳腺癌患者中各分子亚型(luminal型、HER-2过表达型、basal-like型)所占比例分别为62.1%(72/116)、17.2%(20/116)、20.7%(24/116);各亚型(luminal型、HER-2过表达型、basal-like型)CTC阳性率分别为27.8%(20/72)、35%(7/20)、37.5%(9/24),差异无统计学意义(P=0.615),各亚型(luminal型、HER-2过表达型、basal-like型)CTC阳性患者的中位CTC水平分别为2.1(1.18,3.9)、1.37(1.12,2.12)、1.53(1.32,2.64)个MCF-7细胞/2μg总RNA,差异有统计学意义(P=0.046)。结论乳腺癌各分子亚型间CK-19 mR-NA阳性CTC水平存在差异,提示各亚型间临床异质性可能与患者CTC水平相关。     

乳腺癌外周血乳腺上皮粘蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌外周血乳腺上皮粘蛋白(SBEM)的表达及临床意义.方法:用RT-PCR法检测58例乳腺癌患者外周血SBEM mRNA的表达,并用健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者各10例作为对照.结果:78例标本全部确认转录为cDNA,SBEM在乳腺癌患者外周血的阳性表达率为25.9%,乳腺良性肿瘤和正常对照均无阳性表达,SBEM阳性表达与患者的腋淋巴结状况,TNM临床分期均有明显相关(P＜0.05),而与患者的原发肿瘤大小及激素受体状况均无明显相关.结论:SBEM特异性表达于乳腺癌外周血,可作为标志物检测乳腺癌外周血微转移,并有可能成为诊断乳腺癌和判断预后的一个独立指标.