FAP-1在人结肠癌组织中的表达

[目的]探讨Fas相关磷酸酯酶(FAP-1)在结肠癌抵抗Fas介导的凋亡中的作用。[方法]通过免疫组化方法检测结肠癌组织中FAP-1、Fas受体(Fas-R)的表达及癌旁肿瘤浸润淋巴细胞Fas配基(Fas-L)的表达,通过TUNEL染色原位检测肿瘤细胞凋亡。[结果]56例结肠癌组织中,肿瘤细胞FAP-1阳性率为71％(40/56),FAP-1表达与组织分化程度及病理分期无关,P均>0.05。56例结肠癌组织中肿瘤细胞Fas-R免疫组化染色均阳性,且肿瘤组织中均可见到Fas-L免疫组化染色阳性的癌旁肿瘤浸润淋巴细胞浸润。FAP-1阴性的结肠癌组织中肿瘤细胞凋亡百分比较FAP-1阳性组高,(6.0±1.6)郴(4.0±1.2),P<0.05。FAP-1阴性的结肠癌组织中,肿瘤细胞凋亡与Fas-L阳性的肿瘤浸润淋巴细胞数目呈正相关,r=0.785,P<0.01;FAP-1阳性组未见此现象。[结论]结肠癌抵抗Fas介导的细胞凋亡与结肠癌细胞表达FAP-1有关。     

Stat3信号传导通路对结肠癌细胞G1～S期的调控

目的：探讨Stat3信号传导通路对结肠癌细胞G1-S期调控的可能机制。方法：应用阳离子脂质体介导Stat3反义寡核苷酸转染人结肠癌SW480与HCT116细胞，阻断其Stat3通路；MTT法检测细胞增殖状态；流式细胞术检测细胞周期；Western blot检测Stat3、磷酸化Stat3、G1期Cyclins、CDKs、p21、p27的表达。结果：转染Stat3反义寡核苷酸后结肠癌细胞增殖受抑制，Stat3、磷酸化Stat3、G1期Cyclins、CDKs表达水平下降，p21与p27表达水平上升。结论：Stat3信号传导通路可能通过调节CDK/Cyclin复合物与CK1成员之间的平衡而调节结肠癌细胞G1-S期转换。     

细胞凋亡调节基因蛋白表达与前列腺癌的预后

目的 :探讨细胞凋亡调节基因蛋白表达与前列腺癌临床预后的关系。方法 :采用免疫组化染色方法 ,检测 5 7例前列腺癌中Fas及其配体 (FasL)、bcl 2、bax的表达 ,并同前列腺癌临床和病理特征一起 ,先后进行单因素和多因素分析。结果 :bax在前列腺癌低分化肿瘤中的表达强于在高分化肿瘤中的表达 (P <0 0 5 ) ;FasL表达可能对生存预后有一定影响 ,而肿瘤分化程度与临床分期仍是重要的预后指标。结论 :FasL表达可能与前列腺癌预后有关。     

靶向转录信号传导子与激活子-3基因的RNAi对人结肠癌细胞HCT116侵袭能力的影响

目的探讨抑制靶向转录信号传导子与激活子-3（STAT-3）基因表达对结肠癌细胞增殖以及侵袭转移行为的影响。方法实验分三组：空白对照组、转染NC-siRNA（阴性对照组）及转染特异性STAT-3-siRNA组（RNAi组）。人结肠癌细胞HCT116瞬时转染特异性siRNA,24、48、72 h后MTT法检测三组细胞的增殖活性,48 h后RQPCR检测STAT-3基因mRNA表达。RQ-PCR及细胞免疫化学法检测MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果 RNAi组与其他两组相比细胞增殖受抑明显（均P〈0.01）;细胞生长减慢,RNAi组较阴性对照组STAT-3mRNA下降了71.91%（P〈0.01）。RNAi组与其他两组相比MMP-9在mRNA和蛋白水平表达均明显下降（均P〈0.01）;侵袭实验RNAi组较空白对照组侵袭力下降了49.75%（P〈0.01）,而两对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论下调STAT-3基因表达可有效抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭转移,抑制MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达。沉默STAT-3基因抑制结肠癌细胞侵袭能力的机制之一可能是通过下调MMP-9途径。     

短发夹状干扰RNA沉默信号传导和转录激活子3基因表达对大肠癌细胞的影响

目的构建携带信号传导和转录激活子3（STAT3）基因短发夹状干扰RNA（shRNA）的真核表达载体,观察干扰STAT3表达对大肠癌细胞HT-29细胞增殖的影响。方法从GenBank STAT3mRNA上寻找到3条符合特征的靶序列,合成靶序列的DNA寡核苷酸链,合成双链DNA,并和BamHⅠ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒连接产生重组质粒,行PCR和测序鉴定。重组质粒瞬时转染大肠癌HT-29细胞,实时定量PCR、Western blot检测STAT3的表达。筛选出最佳重组质粒,转染大肠癌细胞后,MTT检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功构建了携带有STAT3基因的shRNA的重组质粒,PCR和测序证实重组质粒构建正确。3种重组质粒对大肠癌HT-29细胞STAT3的表达有明显的抑制作用。筛选出的最佳重组质粒转染大肠癌细胞后,细胞增殖能力明显减弱;细胞周期分析显示,G0/G1期细胞占（74.80±1.85）%,S期细胞占（15.72±2.26）%,与对照组差异显著（P〈0.01）。结论干扰STAT3基因的表达可以有效抑制大肠癌HT-29细胞的生长。     

三氧化二砷对人胆管癌细胞系QBC939生长与凋亡的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人胆管癌细胞系QBC939的生长抑制与促凋亡作用 .方法　采用 MTT法检测 As2 O3 对胆管癌细胞的抑制作用 ;相差显微镜、电镜下观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定 DNA L adder;流式细胞术分析 DNA含量 .结果　 0 .5 ,1,2 ,4,8μmol· L- 1 As2 O3均能抑制人胆管癌细胞 QBC939的生长 ,且抑制率具有浓度和时间依赖性 ,4μmol· L- 1 (IC50 )的 As2 O3 作用后 ,QBC939细胞出现典型的凋亡形态特征 ,DNA L adder出现 ,并检测到亚二倍体峰 .结论　 As2 O3 能有效地抑制 QBC939细胞生长并促进其凋亡 .     

阻断自分泌性胃泌素对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胃癌组织中是否存在胃泌素／胆囊收缩素（CCK）-B受体自分泌环及其在胃癌的发生发展中的作用。方法 采用人胃癌细胞系SGC-7901在含10％新生小牛血清RPMI-1640培养基中培养于37％、5％CO：的培养箱中。SGC-7901细胞中胃泌素／CCK-B受体自分泌环的检测分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学及放射免疫分析法。抗胃泌素单克隆抗体阻断自分泌环对细胞生长与凋亡的影响采用SGC-7901细胞与不同浓度的抗胃泌素单克隆抗体共同孵育72h后,搜集细胞,分别用四甲基偶氮唑盐比色法及流式细胞术检测细胞生长率、细胞周期及凋亡细胞,以不加抗体孵育作为阴性对照。结果 SGC-7901细胞复合表达CCK-B受体和胃泌素基因,其序列已被测序证实。胃泌素蛋白主要在SGC-7901细胞的胞质中表达,且培养液中的胃泌素浓度随培养时间的延长和细胞数的增加而增加。用抗胃泌素单克隆抗体阻断此自分泌环后,细胞的生长率从正常对照的100％降至31．4％（抗体浓度为2μg／ml）,而S期细胞数从正常对照的27．8％降至9．5％（抗体浓度为1．2μg／ml）,且细胞凋亡率分别从正常对照的0．9％（亚G1峰法）和1．1％（膜联蛋白-V／碘化丙啶双染法）升至6．5％（亚G1峰法）和7．5％（膜联蛋白-V／碘化丙啶双染法）。结论 胃癌细胞系SGC-7901中存在胃泌素／CCK-B受体自分泌环,阻断此自分泌环后能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

一氧化氮对人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2生长增殖的影响

目的：应用两株人肝癌细胞（SMMC-7721和HepG2）为实验模型，以硝普钠（SNP）为NNO供体，探讨NO对人肝癌细胞生长增殖的影响。方法：应用MTT、荧光染色技术和电子显微技术、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术定性和定量地检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡情况。结果：NO供体SNP能抑制人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2的生长增殖，并诱导其凋亡，在一定范围内呈时间-剂量依赖关系，同时也引起细胞坏死；SMMC-7721细胞对NO作用的敏感性较HepG2高。结论：NO可抑制人肝癌细胞生长增殖，诱导细胞凋亡，并引起死亡，且两株细胞对其敏感性不同。     

Caspase-3融合蛋白基因的构建及其对HeLa细胞凋亡的诱导作用

目的：观察重构型caspase-3及其N-端融合蛋白的表达对HeLa细胞的凋亡诱导作用。方法：用反转录PCR获取人caspase-3基因,用重组PCR方法构建人重构型caspase-3及其融合蛋白基因,将基因克隆入表达载体pcDNA3,脂质体法转染HeLa细胞,通过细胞计数、电镜观察、MTT法等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果：成功获得了caspase-3基因,构建了重构型caspase-3基因和重构型caspase-3与绿脓杆菌外毒素（PE）转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因及其表达载体,与对照组相比,在转染后1-4d内,两种基因的表达均导致HeLa细胞存活数减少,大量细胞发生凋亡,且二活性相当。结论：重构型caspase-3及其融合蛋白可以诱导转染的HeLa细胞发生凋亡。     

环氧合酶-2抑制剂调控Stat5信号转导通路抑制结肠癌细胞增殖的分子机制

目的观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Stats与PPAR8信号转导通路的影响,以期初步阐明选择性COX-2抑制剂抗结直肠癌非COX-2依赖性的作用机制。方法应用RT—PCR检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平,用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480,Western印迹检测Stats与PPAR8信号转导通路成员表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达,NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后,G1期细胞比率由31．2％上升至40．6％,S期细胞比率由52．8％下降至41．2％,细胞增殖受抑制。Stats、PPAR8、细胞周期蛋白D1与Bcl—x1表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在人结肠癌中的表达及其对HT-29细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)基因在人结肠癌组织中的表达及其对HT-29细胞增殖与凋亡的影响.方法 免疫组织化学方法检测磷酸化mTOR (p-mTOR),在郑州大学第一附属医院普通外科2009年10月至2010年6月50例结肠癌组织和50例正常结肠组织中的表达情况.体外合成mTOR小干扰RNA(siRNA),转染人结肠癌HT-29细胞为实验组,同时设空白对照组(不转染)及无义对照组(转染无义siRNA),Western印迹法检测各组HT-29细胞的mTOR蛋白表达;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖;原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 结肠癌组织中p-mTOR的表达高于对照组[60％(30例)比14％(7例),P＜0.05],mTOR的表达和淋巴结转移、肿瘤的分化程度相关(r=0.311、0.427,均P＜0.05).实验组HT-29细胞mTOR的表达和细胞增殖均低于空白对照组和无义对照组(0.39±0.25比1.18±0.05、1.46±0.09,0.275±0.033比0.460±0.028、0.450±0.037,均P＜0.05);细胞凋亡指数则均高于空白对照组和无义对照组(12.33±1.53比0.33±0.31、1.67±0.58,均P＜0.05).结论 在结肠癌组织中存在mTOR高表达,mTOR siRNA对HT-29细胞mTOR基因的表达有抑制作用,能抑制HT-29细胞的增殖并促进其凋亡.     

激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路对人结肠癌细胞增殖及相关基因的影响

目的探讨野生型RAF和MEK持续激活细胞外信号调节激酶．丝裂原蛋白激酶信号通路（ERK-MAPK）对人结肠癌细胞增殖及细胞周期相关基因的影响。方法培养人结肠癌细胞系SW1116,脂质体介导RAF、MEK基因和空质粒转染,G418筛选阳性克隆。流式细胞仪分析细胞周期,光学显微镜下观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,生长曲线和软琼脂集落形成检测细胞增殖,实时定量PCR检测p21^WAF1和p16^INK4A及癌基因c-myc转录水平。结果建立稳定表达RAF或MEK的细胞系,RAF或MEK高表达均能明显降低G0／G1期细胞百分比,促进细胞周期由G1向S期进行,增加DNA合成的S期细胞百分比,细胞活力和增殖力升高3—4倍,细胞分裂增殖旺盛。转染RAF／MEK质粒后,细胞均呈现p21^WAF1和p16^INK4A转录水平降低,c-myc转录水平升高。结论ERK-MAPK信号通路激活可下凋细胞周期相关基因p21^WAF1和p16^INK4A表达,并上调c-myc表达,减少G0期时相,加速G1／S期转化,促进细胞增殖。     

灵芝乙醇提取物对宫颈癌细胞生物学行为和JAK1/STAT3信号通路的影响

目的：探讨灵芝乙醇提取物(GLEE)对宫颈癌细胞生物学行为和Janus激酶1 (JAK1)/信号传导和转录激活因子3 (STAT3)信号通路的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将人宫颈癌HeLa细胞随机分为对照组(给予完全培养液)和低、中及高剂量GLEE组(给予25、50、100 mg·L^-1GLEE)。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,平板克隆实验检测各组克隆形成率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中JAK1、磷酸化JAK1 (p-JAK1)、STAT3、磷酸化STAT3 (p-STAT3)、细胞因子信号传导抑制蛋白3 (SOCS3)和活化STAT蛋白抑制因子1 (PIAS1)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,低、中和高剂量GLEE组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞克隆形成率、迁移细胞数和侵袭细胞数降低(P<0.05),细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平降...     

SPK1/S1P信号途径对人肝癌耐药细胞株BEL-FU凋亡、侵袭力及耐药特性的影响

目的 研究利用N,N,-二甲基鞘氨醇（dimethyl sphingosine,DMS）干涉鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇（SPK1/S1P）信号后对人肝癌耐药细胞株BEL-FU的凋亡、侵袭能力及耐药特性的影响。方法  利用不同浓度的DMS处理人肝癌耐药细胞株BEL-FU,观看凋亡形态变化,检测凋亡发生;并用transwell小室模型测定侵袭力;Western blot杂交检测多药耐药相关蛋白1（MRP1）表达的变化。结果  随着DMS浓度的升高,细胞凋亡率增加,浓度组与对照组及各浓度组间比较差异均有统计学意义（P<0.01）,且呈剂量依赖效应;同时可观察到侵袭力减弱,各浓度组穿膜细胞数、抑制率与对照组比较及组间比较差异均有统计学意义（P<0.01）,且呈剂量依赖效应;MRP1蛋白表达量明显减少,浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论  SPK1/S1P信号和肝癌细胞的侵袭和耐药密切相关,利用DMS干涉SPK1/S1P信号能引起人肝癌耐药细胞株BEL-FU的凋亡、降低其侵袭力并且克服其耐药。     

TRAIL联合奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合奥沙利铂(oxaliplatin)对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法分别检测TRAIL组、奥沙利铂组及联合组的细胞抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色,流式细胞仪检测SW480细胞的凋亡率.结果 SW480细胞对TRAIL不敏感,对奥沙利铂相对敏感,TRAIL与亚毒性浓度的奥沙利铂联用对细胞的杀伤作用显著增强;亚毒性浓度的TRAIL、奥沙利铂及联合组作用SW480细胞24h的抑制率分别为8.62%,60.51%,81.28%;凋亡率分别为2.43%,11.76%,18.37%,流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现.结论 TRAIL能显著提高奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现.     

Hedgehog及Wnt信号通路交互作用与宫颈癌发生的关系

目的探讨宫颈癌发生的可能机制。方法对2例宫颈癌、2例癌旁组织及1例正常宫颈组织进行人全基因组芯片检测,使用RT-PCR方法验证芯片结果,并分析其中主要的信号传导通路及关键基因、转录因子。结果通过对芯片差异基因筛选及信号通路分析,发现FORKHEAD转录因子家族为差异基因重要调控因子。癌旁组织与正常组织比较中Hedgehog信号通路激活（=0.018,包含7个差异基因）;癌组织和正常组织比较Wnt信号通路出现激活（=0.032,包含7个差异基因）。宫颈癌患者Hedgehog通路中Gli-1表达下调;Wnt信号通路抑制基因SFRP-1基因表达静默,Fra-1基因表达上调。结论Wnt和Hedgehog信号通路差异性激活及两者的信号交互在宫颈癌发生过程中起着重要作用。     

桂枝提取物对动脉粥样硬化大鼠白细胞介素6/信号转导子和转录活化子3信号通路的影响

目的  分析桂枝提取物对动脉粥样硬化（AS）大鼠白细胞介素6/信号转导子和转录活化子3（IL-6/ STAT3）信号通路的影响。方法  选取健康纯种SD雄性大白鼠共366只,随机分为正常对照组、空白AS模型组和桂枝提取物组。免疫组织化学法检测Toll样受体4（TLR4）、肝脏X受体（LXR）、C-Jun的N末端激酶（JNK/P-JNK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2/P-ERK1/2）、P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK/p-P38MAPK）、白细胞介素6（IL-6）、蛋白质酪氨酸激酶JAK-1抗原（JAK1/p-JAK1）、转录活化子3（STAT3/p-STAT3）及核转录因子kappa B（NF-κB）P65的表达在AS大鼠腹主动脉中的表达;用实时荧光定量PCR技术检测AS大鼠腹主动脉血管AGTRl mRNA和IL-6 mRNA的表达。结果  与正常对照组比较,空白模型组腹主动脉血管IL-6阳性表达率明显升高（P <0.05）;与空白模型组比较,桂枝提取物组IL-6的阳性表达率显著降低（P <0.05）。与正常对照组比较,空白模型大鼠腹主动脉血管IL-6 mRNA的表达显著升高（P <0.05）;与空白模型组比较,桂枝提取物组IL-6 mRNA的表达显著降低（P <0.05）。与正常对照组比较,空白模型组腹主动脉p-JAK1阳性表达率显著提高,p-STAT3阳性表达率显著降低（P <0.05）;与空白模型组比较,桂枝提取物组p-JAK1阳性表达率显著降低,p-STAT3阳性表达率显著升高（P <0.05）。结论  桂枝提取物可以通过降低TLR4水平,升高LXR水平,同时抑制JNK、p38MAPK和ERK1/2的磷酸化,作用于NF-κB转录因子,抑制IL-6分泌,进而影响JAK2/STAT3信号转导通路。