调宁蛋白的研究近况

调宁蛋白的研究近况曹圣＊综述唐大椿＊审校微血管舒缩功能的紊乱是微循环发生障碍的主要因素之一，引起这些变化的体液因子有组胺、５－ＨＴ、缓激肽、前列腺素和白三烯等，但目前仍不完全清楚它们引起微血管舒缩异常的分子机理［１］。调宁蛋白（ｃａｌｐｏｎｉｎ）是一...     

碱性调宁蛋白对糖尿病大鼠烧伤创面成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨碱性调宁蛋白在糖尿病大鼠烧伤创面愈合过程中的表达情况及其对成纤维细胞增殖与凋亡的影响。 方法选64只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为实验组和对照组,每组32只。实验组大鼠,腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg,制作糖尿病大鼠模型;对照组大鼠,腹腔注射0.9%氯化钠溶液1.0 mL。适应性饲养2周后将2组大鼠均制作为深Ⅱ度烫伤模型(以下称为烧伤),伤后立即液体复苏、常规治疗。观察两组大鼠的创面愈合时间及在伤后第7、14、21、28天的创面愈合率,创周切取组织、制作切片,行苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,免疫组织化学SP法分析碱性调宁蛋白表达,成纤维细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,原位末端转移酶标记(TUNEL)法测定成纤维细胞凋亡情况。对数据行方差分析和t检验。 结果实验组大鼠创面平均愈合时间[(25.6±2.8) d]长于对照组大鼠创面平均愈合时间[(19.1±2.1) d],差异有统计学意义(t＝10.49,P<0.05);在伤后第7、14、21、28天,实验组大鼠创面愈合率分别为(18.8±4.6)%、(37.6±7.9)%、(66.3±11.4)%、(85.4±4.8)%,明显小于对照组[(40.8±4.5)%、(62.1±6.7)%、(90.2±9.7)%、(95.4±5.5)%,差异均有统计学意义(t＝9.69、6.69、4.51、3.87,P值均小于0.05)。伤后第7、14、21天,两组大鼠创面逐渐愈合,创面组织中成纤维细胞、新生微血管均逐渐增多,且对照组大鼠未愈合创面组织中成纤维细胞、新生微血管均较实验组增多。伤后第7、14、21、28天,实验组大鼠碱性调宁蛋白在烧伤创面组织中的表达分别为1.43±0.07、1.17±0.11、0.73±0.06、0.77±0.07,均高于对照组大鼠(0.75±0.09、0.60±0.10、0.63±0.06、0.64±0.10),差异均有统计学意义(t＝17.58、10.92、3.44、3.10,P值均小于0.05)。实验组大鼠成纤维细胞PCNA在烧伤创面组织中表达分别为654.19±102.80、820.84±112.86、766.68±156.63、232.75±55.37,较对照组(766.85±73.30、1322.22±121.44、1112.35± 142.32、740.79±106.90)低,差异均有统计学意义(t＝2.52、8.55、4.62、11.94,P值均小于0.05)。伤后第7、14、21、28天,实验组细胞凋亡数分别为58.51±10.89、41.53±9.95、27.28±6.58、20.13±4.23,较对照组(30.70±6.41、25.31±5.74、17.46±5.36、15.29±4.10)高,差异均有统计学意义(t＝6.23、4.00、3.27、2.32,P值均小于0.05)。 结论碱性调宁蛋白在糖尿病大鼠烧伤创面愈合过程中表达水平增高,可能调控创面组织中成纤维细胞的增殖和(或)凋亡水平,是糖尿病创面延迟愈合的原因之一。     

培养血管平滑肌细胞收缩蛋白表达与表现型转变及细胞增殖的关系

目的　探讨体外血管平滑肌细胞 (SMC)的失分化与其表现型转变及增殖的关系。　方法　采用电镜形态定量及蛋白印迹 (Westerblot)方法检测家兔主动脉SMC在原代培养过程中肌丝体密度及收缩蛋白表达的动态变化 ,并分析这些变化与细胞增殖状态的关系。　结果　根据对细胞生长曲线的分析 ,原代培养SMC的增殖可分为 3个阶段 ,即潜伏期 (第 1～ 6d)、对数增殖期 (第 6～ 12d之间 )和增殖后静止期 (第 12d以后 )。电镜定量显示 ,胞质中肌丝的体积密度均值由培养前的 (32 14± 1 4 4 ) %下降至潜伏期末的 (18 36± 2 0 1) % (P <0 0 5 ) ;然后逐渐增高 ,到细胞进入增殖后静止期第 3d恢复至培养前水平 [(32 5 0± 1 2 1) % ;与培养前相比 ,P >0 0 5 ]。Westernblot分析显示 ,培养过程中平滑肌特异型收缩蛋白 ,如α SM肌动蛋白、SM肌球蛋白重链随培养时间逐渐降低 ,其中作为血管SMC成熟标志的SM肌球蛋白重链亚型 2在培养第 9d后消失 ;而非肌细胞型收缩蛋白 ,β NM肌动蛋白则随培养时间逐渐增高。上述蛋白含量的变化不随细胞增殖状态及肌丝的消涨而波动。　结论　体外培养血管SMC的表现型转变和失分化是两个相对独立的过程。前者与SMC的增殖状态密切相关 ,可能是肌丝系统为适应细胞分裂而发生的可逆性重组 ;而     

Rho/Rho激酶与动脉粥样硬化及冠心病的关系

1Rho/Rho激酶的生理特性Rho是一种小分子G蛋白,是Ras超家族成员之一,在细胞的信号转导通路中作为信号转换器或分子开关,作用于细胞骨架或其靶蛋白而产生多种生物效应。不仅在细胞骨架调节、细胞形态维持、细胞迁移、平滑肌细胞收缩等细胞活动中有重要作用,在细胞的各种生物活动     

慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响

目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca~(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca~(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca~(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca~(2+)浓度和Ca M表达。     

血管平滑肌细胞增殖抑制剂的研究进展

血管平滑肌细胞增殖是动脉粥样硬化、高血压和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的核心病理过程。寻找平滑肌细胞增殖的刺激因子和抑制因子将有助于对其发病机制的研究和防治工作，故该研究已成为近年文献报道中的热点．本文概述了肝素、前列腺素、ｃＡＭＰ、钙通道阻滞剂、干扰素和雌激素等血管平滑肌细胞增殖的抑制剂的主要作用和研究进展。     

BH3-only促调亡蛋白研究进展

细胞凋亡在多细胞生物的发育、组织稳态的维持等方面发挥重要的作用。近年来发现的BH3 only促凋亡蛋白是BCL 2家族促凋亡成员中的一大亚类 ,在不同凋亡刺激作用下 ,通过拮抗BCL 2和BCX Xl等抗凋亡蛋白及协助BAX和BAK等促凋亡蛋白参与凋亡反应 ,是细胞凋亡过程中重要的起始因子。     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长和分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以下呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。     

稀土离子诱导钙调蛋白构象变化的单克隆抗体制备

钙调蛋白是广泛存在于生物体内的一种多功能的调节蛋白,它通过结合钙离子后自身的构象变化参与许多细胞代谢调控过程。已有文献报道,三价的稀土离子可以拮抗钙调蛋白的调节作用,原因可能是稀土离子和钙调蛋白结合后改变了它的构象变化。为了研究金属离子对钙调蛋白三级结构变化的影响,我们采用免疫化学的方法,制备稀土离子诱导钙调蛋白构象变化后的单克隆抗体,来研究金属离子诱导钙调蛋白构象变化后与抗体的分子识别能力差异。牛脑钙调蛋白经超滤脱钙后,用２４－二硝基氟苯修饰,以增强其免疫原性,再与三价的铕离子饱和,以此作为抗…     

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞增殖和骨架蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)骨架蛋白表达与增殖之间的关系,探讨神经因素对VSMC的调控作用.方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,用BrdU标记增殖的细胞;免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白SM α-actin、β-tubulin和desmin的表达.结果:血清培养对VSMC有明显促增殖作用,而血清饥饿则能可逆性抑制VSMC增殖;NE能明显促VSMC增殖和下调SM22α的表达;随血清培养SM α-actin表达减少,血清饥饿培养可使SM α-actin表达可逆性上调;β-tubulin和desmin随血清培养其表达减少更明显,第6代基本不表达,而血清饥饿也不能上调其表达,NE对SM α-actin、β-tubulin和desmin的表达有下调作用.结论:NE可促进VSMC增殖和下调SM α-actin、β-tubulin和Desmin骨架蛋白的表达作用.     

分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究

目的：探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法： 构建强力霉素（Dox）调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体；分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆；RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达；Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后，HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达；流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后，hCREG表达与细胞增殖的关系。结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆；RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性；Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1 mg/L)，HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加；流式细胞周期分析提示，hCREG表达增加后，HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加。结论： hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖。     

着丝粒蛋白A的生物学功能研究进展

自从20世纪80年代着丝粒蛋白特异抗血清ACA被发现至今,现已有9种着丝粒蛋白被定名,其中着丝粒蛋白A（CENP—A）是最早被发现者之一。近年来,关于CENP—A与肿瘤细胞增殖的关系越来越受到关注,本文就其生物学功能的研究进展做一综述。     

糖尿病大鼠心肌肌浆网钙调蛋白基因表达的改变

目的:探讨糖尿病大鼠心肌细胞肌浆网钙调蛋白基因表达的改变。方法: 雄性SD大鼠经尾静脉注射四氧嘧啶(40 mg/kg)复制糖尿病大鼠模型,对照组注射生理盐水,分别于4,6周处死,取心室肌组织,应用逆转录-聚合酶反应技术以肌动蛋白为内参照,测定肌浆网钙调蛋白钙泵(SERCA )、磷酸受纳蛋白(phospholamban)、ryanodine受体2型(RyR₂)、1,4,5三磷酸肌醇受体2型(IP₃R₂)mRNA的变化。结果: 4,6周后糖尿病组大鼠的体重和心脏重量均低于正常对照组,但心脏/体重比显著大于正常对照组。4周糖尿病组大鼠心肌肌浆网SERCA 、磷酸受纳蛋白、RyR₂、IP₃R₂ mRNA的表达与对照组相比无显著差异;6周的糖尿病组大鼠心肌肌浆网Ca²⁺-ATP酶 的 mRNA表达无明显变化,但磷酸受纳蛋白的mRNA表达显著高于而RyR₂、IP₃R₂的mRNA表达显著低于对照组。结论: 糖尿病大鼠心肌细胞的肌浆网磷酸受纳蛋白的mRNA表达增加,RyR₂、IP₃R₂的mRNA表达下降。     

登革病毒衣壳蛋白研究进展

登革病毒衣壳蛋白是病毒的结构蛋白之一，可与病毒基因组RNA结合构成病毒的核衣壳。同时，衣壳蛋白可进入细胞核，与多种蛋白质结合，并有可能参与对宿主细胞的调控，在病毒的感染过程中具有重要的作用。本文综述了近年来登革病毒衣壳蛋白的结构与功能等方面的研究进展情况。     

纤维粘连蛋白和层粘蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长的分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以上呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。     

血清钙调蛋白水平与急性缺血性脑卒中神经功能缺损程度的关系

目的:观察急性缺血性脑卒中(IS)后48h血清钙调蛋白(CAM)水平变化及与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的关系。方法:急性IS患者(IS组,n=120),入院时采用NIHSS进行评分,并按NIHSS评分5分(A组,n=51)和NIHSS评分≤5分(B组,n=69)分为两个亚组,于IS后48h测定血清CAM值;另取体检健康人群(对照组,n=100)平行测定血清CAM值。比较IS组与对照组以及不同NIHSS评分IS患者血清CAM水平差异,分析IS组CAM水平与NIHSS评分的相关性。结果:IS组血清CAM值较对照组显著增高(t=15.34,P0.01);A组患者CAM水平明显高于B组(t=10.51,P0.01);急性IS患者血清CAM水平与NIHSS评分呈显著正相关(r=0.308,P0.01)。结论:血清CAM水平可反映IS患者急性期病情程度。     

周期性应变诱导血管平滑肌细胞桩蛋白和踝蛋白的表达

利用脉动膜式张应力系统,给离体培养的VSMCs施加14%,1 Hz的周期性应变,免疫荧光细胞化学染色,激光共聚焦扫描显微镜观察、分析桩蛋白和踝蛋白的表达变化.结果表明,周期性应变促进VSMCs桩蛋白和踝蛋白的表达增加.说明桩蛋白和踝蛋白是周期性应变条件下VSMCs细胞内信号传递的重要信号物质.     

钙调神经蛋白在抗肾小球基底膜病肾小球内的表达增强

 目的 观察抗肾小球基底膜（GBM）病患者肾小球足细胞钙调神经蛋白（CaN）的表达,了解其与临床病理特点及肾脏长期存活的关系。方法 选取临床病理资料完整的抗GBM病患者29例,对照为8例肾小球轻微病变患者。收集患者临床资料,免疫组化方法检测CaN A亚基α亚单位（CnAα）在肾小球的表达,免疫荧光染色观察足细胞骨架蛋白synaptopodin表达,分析CnAα与临床病理表现及预后的关系。结果 29例抗GBM病患者肾小球内均有不同程度的CnAα表达阳性,阳性区域占肾小球面积百分比显著高于轻微病变者（21.63%±14.27% vs 2.21%±1.41%,p<0.01）,同时伴有synaptopodin缺失。CnAα的表达量与抗GBM抗体峰值、血肌酐水平、血红蛋白水平、新月体比例及细胞/细胞纤维新月体比例呈现显著相关性,并与预后相关。结论 首次观察到抗GBM病患者肾小球内CnAα表达增强,表达量与疾病活动、严重程度及预后相关,提示足细胞可能参与抗GBM病新月体形成,其作用机制仍有待进一步研究。     

FADD研究进展

FADD是Fas系统的一个信号连接蛋白,是死亡受体与胞浆成分之间联系的纽带,可将膜表面受体与胞浆中细胞凋亡的终末酶联接起来,从而向胞内传递凋亡信号,介导细胞凋亡,与多种疾病过程有关。同时,FADD在T细胞增殖中也起一定的作用。现就有关FADD与细胞凋亡、T细胞增殖以及在疾病中作用的研究进展加以综述。