小鼠神经管发生中抑凋亡基因bcl-2的表达及其对细胞生长的作用

目的：研究小鼠神经管形成过程中原癌基因bcl-2表达及与程序性细胞死亡(programed cell death，PCD)的关系。方法：分别取交配后7．5，8．5，9．0，9．5，10．5d鼠胚做全胚胎交实验。结果：交配后7．5d鼠胚，Bcl-2mRNA杂交信号弥散分布于整个胚体，但胚体前1／2的杂交信号较弱，后1／2则相对较强。交配后8．5d鼠胚Bcl-2mRNA有较强的杂交信号沿逐渐升高的神经褶分布(权重为19)。到交配后9．0d，随着神经管的关闭，Bcl-2mRNA在神经褶的表达下降(权重为8)。到交配后9．5dBcl-2mRNA的表达开始回升(权重为14)，到交配后10．5dBcl-2mRNA的表达在胚胎颅神经管升高(权重为19)。结论：Bcl-2在早期神经管发生中的作用是多方面的，参与对细胞凋亡的调节和促进细胞的生长和分化。     

Western印迹技术研究神经管发育和神经管畸形鼠胚Bcl-2蛋白的表达

目的:探讨转染外源性bcl-2基因后,能否通过Bcl-2蛋白表达抑制凋亡,从而减轻和改善鼠胚神经管缺陷的程度。方法:分别取维甲酸致神经管缺陷鼠胚、转染正义bcl-2DNA的神经管缺陷鼠胚、正常鼠胚、转染反义bcl-2DNA的正常鼠胚神经管组织,用Western免疫印迹实验技术检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达情况。结果:经转染外源性bcl-2后,神经管缺陷鼠胚的Bcl-2蛋白表达升高,神经管缺陷程度得到改善。结论:维甲酸对内源性bcl-2的抑制包括了mRNA水平和蛋白水平。本实验从蛋白表达水平证实了外源性bcl-2转染成功并有表达。     

Western印迹技术研究神经管发育和神经管畸形鼠胚Bcl-2蛋白的表达

目的：探讨转染外源性bcl-2基因后，能否通过Bcl-2蛋白表达抑制凋亡。从而减轻和改善鼠胚神经管缺陷的程度。方法：分别取维甲酸致神经管缺陷鼠胚、转染正义bcl-2 DNA的神经管缺陷鼠胚、正常鼠胚、转染反义bc／-2DNA的正常鼠胚神经管组织，用Western免疫印迹实验技术检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达情况。结果：经转染外源性bcl-2后，神经管缺陷鼠胚的Bcl-2蛋白表达升高，神经管缺陷程度得到改善。结论：维甲酸对内源性bcl-2的抑制包括了mRNA水平和蛋白水平。本实验从蛋白表达水平证实了外源性6cl-2转染成功并有表达。     

小鼠神经管发生中程序性细胞死亡的时空规律

目的:研究小鼠神经管发生中程序性细胞死亡(programmedcelldeath,PCD)的时空规律。方法:分别取交配后9.0d、交配后9.5d、交配后10.5d鼠胚做石蜡包埋连续切片的TUNEL染色。进行神经上皮凋亡细胞的计数分析。结果:观察到交配后9.0d神经上皮的细胞凋亡率(0.1815±0.14)最高,交配后9.5d后细胞凋亡率(0.1377±0.09)降低,交配后10.5d(0.1284±0.07)降至更低。从空间分布看,神经管头端的凋亡细胞明显多于尾端。结论:交配后9.0d神经管的高细胞凋亡率,可能与神经管的关闭有关;神经管颅侧的细胞死亡与脑泡的塑形有关。     

神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚.目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成.材料:孕14-15 d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养.清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只.方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T_9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T_8椎板切除.用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×10~(10)L~(-1),吸取细胞悬液15 μL滴加到约2 mm~3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处.分别于细胞移植后3,7,14,21,28 d取材进行指标检测.主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的变化.结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28 d Bcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3 d Caspase-3的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3 d Bax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21 d Bcl-2的表达明显增高(P相似文献   

小鼠神经管发生中程序性细胞死亡的时空规律

目的：研究小鼠神经管发生中程序性细胞死亡(programmed cell death．PCD)的时空规律。方法：分别取交配后9．0d、交配后9．5d、交配后10．5d鼠胚做石蜡包埋连续切片的TUNEL染色。进行神经上皮凋亡细胞的计数分析。结果：观察到交配后9．0d神经上皮的细胞凋亡率(0．1815&;#177;0．14)最高，交配后9．5d后细胞凋亡率(0．1377&;#177;0．09)降低，交配后10．5d(0．1284&;#177;0．07)降至更低。从空间分布看，神经管头端的凋亡细胞明显多于尾端。结论：交配后9．0d神经管的高细胞凋亡率，可能与神经管的关闭有关；神经管颅侧的细胞死亡与脑泡的塑形有关。     

苯并芘损伤胎盘组织机制及维生素E的防护作用

目的 探讨苯并芘(benzo-a-pyrene,BaP)导致胎盘绒毛组织细胞凋亡的作用机制及维生素E的保护作用.方法 选择性成熟ICR小鼠150只(雌鼠100只,雄鼠50只),随机分为A、B、C、D、E共5组,每组各30只,雌雄分开饲养.A组予BaP 2 mg/(kg·d);B、C、D组予BaP同时,分别予维生素E 10、20、40 mg/(kg·d);E组灌胃橄榄油.15 d后雌雄鼠同笼,第2d发现精液栓者为受孕,将受孕鼠继续灌胃7d后处死,取胎盘组织测定Bax、Bcl-2基因表达.结果BaP能使Bax基因蛋白及mRNA的表达量升高,Bcl-2基因蛋白及mRNA的表达量下降,Bax/Bcl-2的比值升高,A组与E组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);与A组比较,予维生素E的各组Bax基因表达量降低而Bcl-2表达量升高,BaP/Bcl-2比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).Bax、Bcl-2基因蛋白及mRNA表达量存在一定相关性(r=-0.951,P=0.002;r=-0.825,P =0.021).结论BaP通过升高Bax与降低Bcl-2基因表达量使胎盘绒毛组织细胞凋亡,而维生素E可阻止这一途径而抑制其凋亡.     

上皮型钙粘蛋白在小鼠胚胎干细胞体外分化中动态表达及与细胞黏附状态关系

背景:体内胚胎期,上皮型钙粘蛋白对肝脏组织的发育起到决定作用,探讨其在胚胎干细胞分化中的动态表达对于肝脏组织的体外发育可行性具有重要意义.目的:观察上皮型钙粘蛋白在小鼠胚胎干细胞体外分化过程中的动态表达,及其与细胞间黏附状态的关系.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2098-12在中山大学附属第一医院外科实验室完成.材料:BALB/c系小鼠胚胎干细胞由中山大学眼科中心黄冰教授建系和保存.清洁级BALB/c系孕13 d小鼠20只,由中山大学实验动物中心提供.方法:BALB/c系小鼠胚胎干细胞克隆经胰酶消化后,利用含胎牛血清、2-巯基乙醇、HEPES、青霉素、链霉素的DMEM培养基悬浮培养,使其自然发育5 d形成拟胚体,第6天转至培养板使其贴壁生长.取BALB/c系孕13 d小鼠,取其胎鼠肝脏组织制备胎肝细胞及冰冻切片,作为对照组.主要观察指标:按胚胎干细胞初分化、拟胚体形成、细胞分化群落形成等阶段,于细胞分化第1,5,9,13,17天利用RT-PCR和免疫细胞化学法检测上皮型钙粘蛋白的表达,观察其表达水平与细胞黏附状态的关系.结果:RT-PCR检测结果显示,在胚胎干细胞自然分化系统中,上皮型钙粘蛋白mRNA于分化第1天未表达,在第5天拟胚体形成后表达最强,其后表达能力逐渐降低,至17 d时不再表达,作为对照的BALB/c系小鼠胎肝细胞表达较强的上皮型钙粘蛋白mRNA.免疫细胞化学检测结果亦体现相同规律.胚胎干细胞在形态学上由单细胞发育为致密的包含3胚层结构的拟胚体,再继续分化为松散的细胞群落.结论:上皮型钙粘蛋白在胚胎干细胞体外培养系统中的表达水平与分化细胞间黏附状态变化呈一定的相关性,其在体外环境中丧失表达可能是分化细胞不能组织化的一个重要原因.