实时荧光RT-PCR法在手足口病患儿病原检测中的应用

目的:了解核酸检测(RT-PCR)法在抚顺市手足口病患儿病原谱调查中的应用价值,为疾病防控提供依据。方法:在全市范围内收集2013年和2014年疑似手足口病患儿咽拭子、肛拭子标本,使用人肠道病毒通用引物、肠道病毒71型(EV71)引物和萨奇病毒A组16型(Cox A16)引物,采用实时荧光RT-PCR方法进行病原核酸检测。结果:2013年检测标本461份,其中EV71阳性16份,Cox A16阳性316份,其他肠道病毒阳性46份。2014年检测标本253份,其中EV71阳性112份,Cox A16阳性57份,其他肠道病毒阳性35份。两年标本肠道阳性率平均为81.51%,其中EV71型和Cox A16型占阳性标本总数的86.08%。结论:实时荧光RT-PCR方法因具有操作简便、快速和特异性高的优点,非常适合于手足口病患儿病毒核酸的快速分型。EV71型和Cox A16型肠道病毒是抚顺市近两年引起手足口病患儿感染的主要病原体。     

手足口病不同标本类型病原检出率对比分析

目的对比分析手足口病患儿咽拭子和肛周拭子标本的病原检出率。方法采用实时荧光定量PCR技术对310例手足口病患儿的咽拭子和肛周拭子标本进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)、肠道通用型病毒检测。结果 310例患儿的咽拭子、肛周拭子标本中,肠道通用型病毒阳性率分别为73.87%、89.68%,EV71阳性率分别为14.52%、20.00%,Cox A16阳性率分别为6.45%、9.35%。两种类型标本中肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型、柯萨奇病毒Cox A16型阳性检出率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论手足口病患儿肛周拭子病原标本检出率高,提倡及时优先采集肛周拭子标本。     

SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR测定肠道病毒71型(EV71)RNA拷贝数方法的建立

目的建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定实验动物等来源的EV71病毒RNA。方法运用EV71VP1保守区引物,优化real time RT-PCR条件,运用NASBA方法扩增EV71病毒RNA,计算拷贝数,经10倍系列稀释做出标准曲线,作为EV71病毒RNA定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100copies/μL,PCR扩增效率达到99.5%。结论 SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR法测定EV71病毒RNA拷贝数的方法敏感性高、稳定性好,可用于EV71病毒RNA载量的定量测定。     

大庆市2011年手足口病疫情的病原学检测结果分析

目的通过分析大庆市手足口病(hand-food-mouth disease,HFMD)疫情的病原学检测结果,了解大庆市手足口病疫情流行特征,为疫情的控制和病例的治疗提供科学依据.方法采集手足口病病例的肛拭子或咽拭子标本,提取标本中的核酸,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(Cox A16).结果2011年大庆市手足口病全年共发病1061例,其中155例进行手足口病病原学检测,检测结果中EV71阳性73例(47.10%),阴性70例(45.16%),Cox A16阳性12例(7.74%),阴性0例.1例重症病例(后死亡)EV71阳性.疫情主要集中在6~9月;发病人群以1~4岁幼托儿童和散居儿童为主.结论2011年大庆市手足口病疫情主要由EV71引起,特别要加强对EV71引起的重症、死亡病例的监测.     

2017-2018年西宁地区手足口病病原检测结果分析

目的 分析2017-2018年西宁地区手足口病病原学特点,为手足口病防控提供科学依据.方法 应用实时荧光PCR法对2017-2018年西宁地区疑似手足口病病例咽拭子进行肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)、柯萨奇病毒 A 组 16型(Coxsackie virus A16,Cox A16)、柯萨奇病毒...     

手足口病样本类别间检测结果的差异比较

目的 探索手足口病病毒核酸检测多类型样本间的阳性率差异,为手足口病病毒核酸检测样本类型选择提供依据.方法 选取2017年1月至2019年12月本院收治的385例手足口患儿为研究对象.采用荧光定量RT-PCR实时荧光探针技术同步进行病毒核酸检测肠道病毒EV通用型、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A16,CV-A16)及其他肠道病毒型,并统计分析结果.结果 第一组279例患儿肛拭EV通用型、EV71、CV-A16和肠道病毒其他型阳性率为81.00％、43.72％、30.47％、6.81％,高于咽拭子的67.38％、34.40％、26.52％、6.45％.肛拭标本肠道病毒检测的EV通用型和EV71的阳性检出率均明显高于同步检测的咽拭标本,差异有统计学意义(P<0.05).第二组106例患儿肛拭EV通用型、EV71、CV-A16和肠道病毒其他型阳性率为79.24％、42.45％、30.18％、6.60％,低于疱疹液的92.45％、56.60％、29.24％、6.60％,肛拭标本肠道病毒EV通用型,EV71阳性检出率均明显低于同步检测的疱疹液标本,差异有统计学意义(P<0.05).结论 3种类型标本间检出率存在明显差异,建议今后手足口病病毒核酸检测在患者实际条件允许的情况下,尽量同步送检两个类型的标本,首选疱疹液标本送检,肛拭标本次之,咽拭子为末选.     

2012-2018年西宁地区手足口病病原检测结果分析

目的分析2012-2018年西宁地区手足口病病原学特点,为手足口病防控提供科学依据。方法应用实时荧光RT-PCR法对2012-2018年西宁地区疑似手足口病病例咽拭子标本进行肠道病毒71型(enterovirus 71,EV 71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A16,Cox A16)和非EV 71/非Cox A16的其他肠道病毒(其他EV)进行核酸检测,并对结果进行分析。结果共检测标本2855份,检出核酸阳性标本2176份,病毒核酸阳性率为76.22%,其中EV 71、Cox A16和其他肠道病毒核酸阳性率分别为28.68%、25.09%和46.23%,以其他肠道病毒为主要型别。发病人群集中在1~5岁组,构成比为91.04%(1981/2176);男性病例阳性率稍高于女性(χ^2=8.647,P=0.004);全年均有发病,发病高峰在6~7月,具有明显的季节性。结论西宁地区各年手足口病病原谱有所不同,近几年其他肠道病毒所占比例逐渐增大,应加强对EV 71和Cox A16以外其他肠道病毒的监测,为更好地做好手足口病的防控工作提供病原学依据。     

湖北省2015年手足口病实验室确诊情况分析

目的分析湖北省2015年手足口病病原学特征,为手足口病科学防控提供依据。方法对手足口病临床诊断病例标本用实时荧光定量PCR法进行肠道病毒检测及EV 71、Cox A16特异性核酸检测。结果全年共检测粪便标本1 308份、咽拭子标本5 131份、疱疹液137份,粪便标本检测阳性率最高。2015年实验室确诊手足口病病例2 880例,其中EV 71、Cox A16和其他肠道病毒感染的构成比分别为21.0%、20.7%和58.3%。EV 71、Cox A16和其他肠道病毒均为男性病例多于女性.三者病例均以1~3岁组为主。4~6月为发病顶峰,Cox A16比EV 71和其他肠道病毒发病峰提前一个月。结论 2015年湖北省手足口病病原主要由其他肠道病毒引起,发病具有明显季节、人群特征。应做好重点人群、重点时段监测,同时进一步加强其他肠道病毒病原深入研究.     

人肠道病毒71型和科萨奇病毒A组16型所致手足口病的主要临床表现和预后

目的:人肠道病毒71型(human Enterovirus 71,EV71)和科萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,Cox A16)是引起手足口病的主要病毒病原,本文比较了两种病毒致手足口病的主要临床表现及其预后?方法:收集2011年1月至6月南京医科大学附属南京市儿童医院手足口病患者共570例的临床资料及咽拭子标本,采用实时荧光探针PCR法检测患者的咽拭子标本的病毒类型,比较EV71和CoxA16两种病毒引起的手足口病的主要临床表现及其预后?结果:350例EV71感染患者平均年龄(2.5 ± 1.7)岁,220例Cox A16感染患者平均年龄(2.3 ± 1.3)岁?EV71感染患者的住院时间长(P < 0.01);发热超过39℃且持续时间长(P < 0.001);肌阵挛性反射?口腔溃疡都明显偏高(P < 0.05);咳嗽?热性惊厥明显偏低(P < 0.05);嗜睡等中枢神经系统感染的临床表现明显偏高(P < 0.05),其中EV71感染患儿经治疗后有3.7%留有四肢肌力下降等后遗症,并有5例死于心肺衰竭;CoxA16感染的患者经过治疗后都治愈且没有留下后遗症?结论:南京地区2011年1月到6月引起的手足口病病毒以EV71为主?相对于Cox A16,EV71引起的临床表现严重?预后差?