海洋芽孢杆菌次生代谢产物的分离、鉴定及生物学活性的初步研究

目的:开发药用海洋微生物资源,从微生物代谢产物中获取活性物质.方法:利用硅胶柱、凝胶柱、高效液相等色谱技术对抗菌模型筛选到的活性菌株F81612发酵液的乙酸乙酯浸膏进行分离,通过1HNMR、13CNMR和MS对化合物进行结构鉴定,利用纸片法和四甲基偶氮唑盐比色法对单体化合物进行生物学活性评价.结果和结论:分离鉴定了11个化合物,它们分别为:macrolactin A(1),3-羟基乙酰基吲哚(2),3-吲哚乙醇(3),环(色-脯)二肽(4),环(异亮-色)二肽(5),环(亮-脯)二肽(6),环(亮-缬)二肽(7),环(异亮-脯)二肽(8),环(苯丙-缬)二肽(9),N-苯乙基乙酰胺(10).对羟基苯甲醛(11).化合物1为主要活性成分,对稻瘟霉、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC值分别为3.6、0.45和6.3ìg/ml,对肿瘤细胞株HeLa及HepG2的IC50值分别为2.0和1.8ìg/ml.     

粘细菌代谢产物的研究进展

粘细菌能产生多种次级代谢产物。近5年来,epothilone类化合物进入Ⅰ/Ⅱ期临床试验,研究了构效关系,发现新的大环内酯类及环肽类化合物。随着对粘细菌代谢产物研究的逐步重视,粘细菌研究将有更大的发展。     

云芝多糖组分的分离,鉴定及生物学活性的初步研究

通过Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析将云芝多糖分成三人不同组份，其含量分别为全组分的８３．６％，８．６％和５．１％。三个组分的糖的含量分别为６５．９％，５７．８％和６４．１％。高压液相层析结果显示三组份均为单一对称峰，平均分子量分别为１１８８９５８，７９１１２８和５４７７０８。对其生物学活性的研究发现三个组分对叔丁基脂氢化氧物化引起的小鼠腹腔巨噬细胞损伤显示类似程度的保护作用。     

真菌Tolypocladium sp.抗细菌次级代谢产物研究

目的 从黄河三角洲土壤来源真菌次级代谢产物中寻找抗细菌活性化合物。方法 利用化学和生物相结合的方法,筛选黄河三角洲土壤来源真菌中抗菌活性优异、代谢产物丰富的活性菌株,采用硅胶柱层析和制备HPLC等色谱技术对真菌次级代谢产物中抗菌活性组分进行分离纯化,采用¹H NMR、¹³C NMR数据及文献对比鉴定化合物结构。结果 从黄河三角洲土壤来源真菌中获得抗细菌活性菌株Tolypocladium sp.BYFY-1,从其大米发酵产物中分离得到化合物4个,分别是Tolypoalbin(1)、F-14329(2)、Pyridoxatin(3a和3b),其中化合物Pyridoxatin(3a和3b)对金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(ATCC 25922)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)的MIC分别为8.0、16.0、32.0、128.0μg/mL。结论 首次报道了化合物Pyridoxatin的抗细菌活性,表明黄河三角洲真菌次级代谢产物是抗细菌活性化合物的重要来源。     

一株海洋放线菌次级代谢产物的抗肿瘤活性研究

目的 对一株南海深海海洋沉积物来源放线菌SCSIO 11594分离出的5个天然次级代谢产物进行初步的抗肿瘤活性研究.方法 将5个天然次级代谢产物命名为化合物1~5,通过CCK8细胞毒性试验检测化合物作用于5株肿瘤细胞及1株正常肝脏细胞HL-7702后的效果,通过Graphad prism软件测定其IC50,并与经典抗肿瘤药物顺铂对比.结果 顺铂作用于5株肿瘤细胞的IC50值范围3.75~5.32μmol/L,化合物2作用于5株肿瘤细胞的IC50值范围0.24~0.74μmol/L,对肿瘤细胞的抑制作用是顺铂的10~20倍;化合物4作用于5株肿瘤细胞的IC50值范围0.28~6.93μmol/L,对肿瘤细胞的抑制作用是顺铂的1~10倍;化合物2和4作用于正常肝脏细胞HL-7702的IC50值分别为3.67μmol/L和12.47μmol/L,与作用于肿瘤细胞的IC50值相比,提示具有较好的抗肿瘤选择性.结论 放线菌SCSIO 11594分离出的次级代谢产物2和4具有较好的抗肿瘤活性和选择性,具有潜在的开发前景.     

黏球菌产生的活性天然产物

从化学结构、生物学活性、生物合成、应用开发等角度,综述了已有文献报道的黏球菌活性天然产物,重点介绍了作用于肌动蛋白的大环内酯类化合物rhizopodin、作用于呼吸链的肽类化合物myxothiazol和多烯类化合物myxalamid、作用于核酸的芳香类化合物myxopyronin和saframycin Mx1,以及作用于细胞壁的大环类化合物myxovirescin,阐明了黏球菌次级代谢产物的化学结构多样性和生物活性多样性,为进一步开发黏球菌活性天然产物提供线索。     

复方丹参方中主要活性成分的代谢产物研究进展

复方丹参方是我国传统医药常用方剂之一,主要由丹参、三七和冰片三味药组成.药理研究表明,该方可有效改善心功能、减轻缺血/再灌注损伤的作用.目前该方药及其制剂已广泛用于心脑血管疾病的治疗.随着研究的深入,复方丹参方的物质基础及作用机制逐渐明晰,对其主要成分的代谢产物的研究也不断深入.该文就丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1等9个主要成分的代谢产物的研究进展进行综述,为阐明复方丹参方在体内的代谢过程提供参考.     

贵州5种药用植物内生菌的分离及次级代谢产物研究

目的 分离筛选具有抗菌活性及抗肿瘤活性的药用植物内生菌.方法 采集贵州地道药用植物大黄、刺梨、杜仲、白芍和刺五加等5种组织材料,经表面消毒、无菌匀浆后,用改良的GYM培养基和TWYE培养基进行分离,利用耐药大肠杆菌、耐药金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌及白色链球菌等测试菌和稻瘟霉模型对分离菌株的发酵产物进行筛选,并通过HPLC对活性菌株发酵产物做进一步分析.结果 分离得到植物内生菌180株,其中46株有不同程度的抗菌活性,占分离菌株总数的25.6％,58株菌有不同程度的抗稻瘟霉活性,占分离菌株总数的32.2％.结论 5种药用植物中内生菌种类极其丰富,且有活性的菌株所占比例较高,HPLC检测有新的紫外吸收峰,值得对其次级代谢产物进一步研究.可见贵州药用植物具有丰富的活性内生菌资源,有巨大的开发研究价值.     

家兔胆汁中乌头碱代谢产物的提取分离和鉴定方法研究

家兔胆汁中乌头碱代谢产物的提取分离和鉴定方法研究李绪文１张宏桂１王陆黎１王晓峰２郭鼎２（基础医学院１化学教研室２法医教研室）关键词乌头碱代谢产物中毒中图号Ｑ５－５３由于乌头碱在人体内代谢分解速度快，药代动力学半衰期仅２ｍｉｎ〔１〕，在中毒者体内经常查...     

华南毛蕨内生真菌抑菌活性筛选及活性菌株Pestalotiopsis sp.CYC38代谢产物的研究

目的 筛选具有抑菌活性的华南毛蕨内生真菌及分析其中1株活性较强的菌株的代谢产物.方法 以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为供试指示菌,采用琼脂块法对43株内生真菌进行抑菌活性筛选,以Pestalotiopsis sp.CYC38作为目标菌株,对其次级代谢产物进行分离,并采用波谱学分析手段鉴定化合物结构.结果 43株内生真菌中有19株菌株至少对1种指示菌有抑菌作用,占分离菌株总数的44%;从高活性菌株CYC38的发酵产物中分离到2个化合物,分别鉴定为啤酒甾醇和1-(4-羟基苯基)-2氨基乙醇.结论 华南毛蕨内生真菌具有较好的抗菌活性,且对耐药型金黄色葡萄球菌也表现出良好的抑制作用,该结果为开发新型的抗耐药菌药物提供基础.     

粘细菌转录因子FruA结合蛋白敲除分析

目的：构建粘细菌发育特异性转录因子FruA相关蛋白FruB的敲除菌株，初步阐明FruB在粘细菌发育周期中的作用。方法：在fruB基因中央编码区插入四环素抗性基因。导入野生型粘细菌DZF1后通过双交叉同源重组途径阻断基因组内fruB的功能。结果：抗性筛选和PCR检测显示分离出了fruB基因阻断菌株fruB∷TcΩ2,fruB功能缺失延缓子实体的发育及营养细胞向粘孢子分化。结论：fruB与粘细菌发育分化存在相关性。     

深海放线菌Streptomyces sp.WP6次生代谢产物的研究

目的 研究深海来源链霉菌Streptomyces sp.WP6具有生物活性的次级代谢产物.方法 采用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、TLC薄层制备层析色谱、中压快速制备层析色谱和高压液相色谱等方法分离纯化次生代谢产物,采用13C NMR、1H NMR、HMBC、HSQC、1H-1H COSY、LC-MS等波谱技术鉴定结构.结果 从该菌株发酵产物中分离得到8个次级代谢产物,分别鉴定为:邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(1)、N-乙酰基酪胺(2)、脯氨酸-亮氨酸(3)、N-乙酰色胺(4)、吲哚-3-甲酸(5)、苯乙酸(6)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)(7)、(4S)-4,10二羟基-10甲基-2烯-1,4内酯(8).结论 首次从Streptomyces sp.WP6发酵产物中分离到上述8个次生代谢产物.     

链霉菌I06A-02580发酵产物的分离提取及其结构鉴定

目的从链霉菌I06A-02580中提取分离和纯化小分子血管内皮细胞生长因子（VEGF）受体抑制剂,并进行结构鉴定。方法以酪氨酸酶活性测定方法即酶联免疫吸附测定法（ELISA法）为活性跟踪方法,利用大孔吸附树脂方法、高效液相色谱（HPLC）等方法进行分离纯化。利用紫外（UV）、红外（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）四谱联合分析,进行结构解析。结果分离纯化到两个已知化合物大豆苷元和染料木素并具有相关活性。结论大豆苷元和染料木素为已知化合物,大豆苷元对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有抑菌作用;染料木素有抗真菌的作用。该研究为首次报道该化合物具有VEGFR拮抗活性。     

损伤软骨的细胞提取、鉴定及生物学活性研究

目的对从膝关节软骨损伤区分离出的细胞进行鉴定,并对其生长活性进行研究,以解决自体软骨细胞移植中软骨细胞来源不足的问题。方法通过膝关节镜,在软骨损伤区取少量损伤软骨组织,不含正常软骨及软骨下骨为实验组;取正常软骨组织为对照组。在胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶作用下从实验组中提取细胞,对照组中提取正常软骨细胞。实验组细胞培养贴壁后在倒置相差显微镜下观察细胞的形态是否与对照组软骨细胞一致。实验组细胞行甲苯胺蓝染色鉴定,与对照组对比;噻唑蓝（MTT）法比较两组细胞生长活性;以具有专利知识产权的Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜为生长载体,培养实验组和对照组第3代软骨细胞,在电镜下观察两组生长活性。结果从少量损伤的软骨组织中提取的细胞为活性正常的软骨细胞,其特征及生长活性与对照组比较,差异无统计学意义（p <0.05）。结论软骨损伤过程中软骨细胞未发生变性,少量损伤的软骨组织仍可获得适量软骨细胞,MTT 法和电镜扫描表明,其生长活性符合自体软骨细胞移植的要求,无需取正常软骨组织作为细胞来源。     

芸香科柠檬苦素类化合物及其生物活性研究进展

柠檬苦素类化合物是由大戟烷或甘遂烷型三萜衍生而来的一类高度氧化的四降三萜类化合物,是芸香目主要特征的化学成分,主要存在于芸香科和楝科植物中,叶柄花科和苦木科等亦有分布。芸香科中柠檬苦素类化合物以苷元和糖苷2种形式存在。这类化合物具有明显抗癌和抗菌等生物活性,近年来的研究集中在其化学结构、生物合成和生物活性等方面。本文对从芸香科植物中分离得到的柠檬苦素类化合物的化学结构、生物合成途径及生物活性等方面的研究现状进行综述。     

犬根尖牙乳头干细胞的分离培养和生物学特性

的：分离培养比格犬（Beagle犬）根尖牙乳头干细胞并研究其生物学特性。方法：拔除Beagle犬上颌年轻恒前牙,切取根尖牙乳头,采用酶消化法分离培养Beagle犬根尖牙乳头细胞,进行成纤维细胞克隆形成实验、生长曲线测定、多向分化能力研究及间充质干细胞相关表面标记物STRO-1、CD146和CK的表达分析,并将其移植至免疫缺陷鼠皮下观察矿化组织的形成。结果：Beagle犬根尖牙乳头组织中存在一群具有高度增殖能力的细胞,在相同培养条件下,其克隆形成率明显高于人根尖牙乳头干细胞,差异具有统计学意义（P<0.001）;所获得Beagle犬根尖牙乳头干细胞具有成骨、成脂和成软骨等多向分化能力;在体外经成骨诱导后可形成矿化结节,成脂诱导后可形成脂滴,成软骨诱导后免疫组织化学染色Ⅱ型胶原阳性表达;同时该群细胞STRO-1和CD146阳性表达,而CK阴性表达;与羟基磷灰石混合移植于免疫缺陷鼠皮下可形成矿化组织和牙髓 牙本质复合体样结构。结论：Beagle犬根尖牙乳头中存在具有高增殖能力和多向分化能力的根尖牙乳头干细胞。     

积雪草酸及其衍生物的生物活性研究概况

积雪草酸(asiaticacid)是传统药用植物积雪草中量较高的乌苏烷型五环三萜酸。生物活性研究表明积雪草酸及其衍生物具有治疗皮肤创伤、抗抑郁、抗阿尔茨海默病以及保肝、保护心脑血管和诱导肿瘤细胞凋亡等多种作用。综述近年来积雪草酸及其衍生物生物活性的研究概况并就开发积雪草酸及相关衍生物提出建议。     

Long-Evans大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性研究

目的对Long-Evans大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）进行分离培养,并检测其生物学特性。方法采用0．85％NH4Cl分离培养Long-Evans大鼠股骨来源BMSCs,检测生长曲线和生长周期,并进行细胞表面抗原和成骨能力鉴定。结果BMSCs体外培养生长状况良好,具有活跃的增殖能力。第5代细胞生长速度较第3代略减慢。细胞周期显示93．79％细胞处于G0～G1期。表面抗原检测绝大多数细胞阳性表达CD29和CD90,几乎不表达CD45。在体外能够向成骨细胞分化。结论Long-Evans大鼠股骨来源骨髓间充质干细胞经0．85％NH4Cl分离培养后,纯度高,具有良好生物学特性。     

重组溶葡萄球菌蛋白的原核表达、纯化及生物学活性研究

目的 原核表达重组溶葡萄球菌蛋白并检测其杀菌效力.方法 在成熟溶葡萄球菌蛋白编码序列的基础上,设计重组序列,采用PCR技术扩增,克隆至大肠埃希菌表达载体,IPTG诱导表达,用微量稀释法研究其对金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)的杀菌效果.结果 目的DNA片段克隆至表达载体后经测序鉴定正确,在大肠埃希菌中获得高效表达,经免疫印迹鉴定重组蛋白表达正确.重组溶葡萄球菌蛋白对金葡菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)均小于传统抗生素.结论 成功表达重组溶葡萄球菌蛋白,其对金葡菌有强大的杀菌效力.