人肝癌HCC-9204细胞膜钾离子通道特性的研究

目的研究人肝癌HCC-9204细胞膜钾离子通道的特性。方法人肝癌细胞株HCC-9204传代培养72 h后,以膜片钳全细胞记录方式检测细胞膜钾离子通道电流。结果HCC-9204细胞膜静息膜电位为-21.2±1.8mV,细胞膜电容为12.5±2.6pF;HCC-9204细胞所记录到的跨膜电流具有电压依赖及不失活等特性,能被高浓度K 通道阻断剂TEA或4-AP阻断。结论人肝癌HCC-9204细胞膜存在钾离子通道,其主要类型可能是电压依赖性钾通道。     

人肺腺癌A549细胞膜钾离子通道特性与细胞增殖关系的研究

背景与目的肺癌的发生发展、侵袭和转移均受肺癌相关基因的调控，而相关基因的表达、缺失或／和突变常是通过细胞膜信号传导系统和细胞膜离子通道实现的。本研究观察了人肺腺癌细胞系A549细胞膜钾离子通道的特性，以探讨应用钾通道阻断剂抑制肺腺癌细胞增殖的可行性。方法以人肺腺癌细胞系A549细胞为研究对象，采用全细胞膜片钳技术记录细胞膜离子通道特性；通过细胞体外增殖试验，观察钾通道阻断剂四乙胺（TEA）对细胞增殖影响。结果A549细胞在保持电压为-70mV，测试电压-30～＋110mV时，记录到一种跨膜电流，该跨膜电流具有电压依赖性、外向整流特性，并且500ms内不失活，可被钾通道阻断剂TEA阻断；细胞体外增殖试验显示，20、40和60mmol／L的TEA作用24h能明显抑制人肺腺癌A549细胞的体外增殖，而0．2和2mmol／L的TEA对细胞的体外增殖无明显抑制作用。结论人肺腺癌细胞系A549细胞中存在外向性电压门控性钾通道，该钾通道可被TEA阻断；钾通道阻断剂TEA能抑制A549细胞的体外增殖：抑制作用与TEA存在剂量依赖关系。     

甲状腺转录因子-1在肺癌细胞核中表达的定量研究

目的: 观察甲状腺转录因子-1 (TTF-1) 在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌以及淋巴结转移癌癌细胞胞核中的表达, 从量化角度探讨其在肺癌发生及其转移过程中的意义。方法: 石蜡包埋切片, 应用免疫组织化学SP法及LeicaQ500MC图像分析系统,对TTF- 1表达强度进行定量分析。结果: 胚胎肺泡上皮细胞胞核TTF 1阳性单位(PU) 值小于正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞胞核TTF- 1的PU值, 差异具有极显著性(P<0 .001); 不同类型肺癌癌细胞胞核TTF 1的PU值均小于胚胎肺泡上皮细胞和正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞胞核TTF -1的PU值, 且差异具有极显著性(P<0. 001); 肺腺癌和肺小细胞癌癌细胞胞核TTF 1的PU值均大于肺鳞癌和肺大细胞癌癌细胞胞核TTF 1的PU值, 且差异均具有极显著性(P<0 .001); 肺鳞癌癌细胞胞核TTF 1的PU值大于肺大细胞癌癌细胞胞核TTF- 1的PU值, 差异具有极显著性(P<0. 001)。肺腺癌、肺鳞癌和肺大细胞癌淋巴结转移灶中癌细胞胞核TTF 1的PU值均大于其癌原发灶癌细胞胞核TTF 1的PU值, 差异具有显著性(P<0 .001, P<0 .001,P<0. 05); 肺小细胞癌淋巴结转移灶癌细胞胞核与其原发灶癌细胞胞核TTF 1的PU值基本相同, 差异无显著性(P>0 .05)。有淋巴结转移的肺癌癌细胞胞核TTF 1的PU值大于无淋巴结转移     

钾离子通道与胶质瘤关系的研究进展

钾离子通道是细胞膜上的跨膜蛋白质分子,是一种具有选择性的允许适当电荷离子通过的亲水性微孔道,联系着细胞内部和外部环境。DeCoursey[1]等率先发现K+通道阻断后对淋巴细胞的增殖具有抑制作用。我们使用K+通道阻断剂四乙胺(TEA)证实可以抑制C6和9L胶质瘤细胞的增殖并导致凋亡,Bcl-2/Bax比例失调、ROS增高[2]。现综述近几年钾离子通道阻断剂与胶质瘤增殖关系的研究进展。     

反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用

目的　探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法　将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果　转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论　反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 ,并可抑制肺癌细胞的生长     

4-氨基吡啶对小细胞肺癌中电压激活性钾离子电流和细胞增殖的影响

目的　探讨 4 氨基吡啶 (4 AP)对小细胞肺癌 (SCLC)中电压激活性K 电流和细胞增殖的抑制作用。方法　运用全细胞膜片钳技术 ,记录和分析 4 AP对SCLC中电压激活性K 电流的抑制作用 ;运用流式细胞仪 ,检测 4 AP对SCLC细胞增殖周期的影响 ;通过细胞体外增殖试验 ,证实 4 AP对SCLC细胞增殖的抑制作用。结果　 5mmol/L的 4 AP可将峰值外向K 电流 (除极化到 80mV时激活 )从 1.2 2± 0 .11nA降低到 0 .5 9± 0 .10nA。流式细胞仪检测结果显示 ,应用 4 AP 3d后 ,能使SCLC细胞增殖周期中的G0 /G1期阻滞 ,S期和G1/M期的比率下降 (P <0 .0 1) ;0 .1,5 ,10 ,15 ,2 0mmol/L的 4 AP均能抑制SCLC细胞体外增殖 ,抑制的程度与药物的浓度、作用时间有关。结论　电压激活性K 通道在SCLC细胞增殖过程中起重要作用 ,K 通道阻滞剂能抑制SCLC细胞的增殖。     

钾通道在重组改构人肿瘤坏死因子抑制肺癌细胞增殖中的作用

背景与目的 随着膜片钳技术和分子生物学技术的发展，及其在肿瘤细胞膜离子通道研究中的应用，肿瘤细胞膜离子通道已逐渐成为肿瘤基础研究的热点。本研究旨在探讨钾通道（K^＋通道）在重组改构人肿瘤坏死因子（rmhTNF）抑制肺腺癌细胞A-549增殖、促进凋亡中的作用。方法 以人肺腺癌细胞系A-549为研究对象，采用全细胞膜片钳技术记录应用rmhTNF前后细胞膜K^＋电流特性变化，分析rmhTNF对细胞膜K^＋电流的影响；用MTT法检测rmhTNF对细胞增殖的影响；流式细胞仪检测rmhTNF作用后细胞周期分配及凋亡率。结果 经rmhTNF作用48h后肺癌细胞膜上跨膜K^＋电流幅值明显降低（P＜0．01），且与rmhTNF存在剂量依赖关系。MTT实验显示rmhTNF抑制肺癌细胞的体外增殖，随rmhTNF浓度的增加，抑制率由14．56％增至38．68％。流式细胞仪检测细胞周期分配发生变化，G1期由53．02％增至72．93％（P〈0．01），且细胞凋亡率由2．08％增至8．68％（P＜0．01）。结论 rmhTNF可抑制肺癌细胞膜K^＋通道的表达。rmhTNF通过使A-549细胞周期受阻于G1期，激发细胞凋亡而抑制肺癌细胞增殖。在rmhTNF抑制人肺腺癌A-549细胞增殖、促进其凋亡的作用中细胞膜K^＋通道起着一定的作用。     

非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p水平及其临床意义

目的: 探讨非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p 的表达水平是否可作为分子标志物。方法: 收集昆明医科大学第三附属医院2011 年6 月至2012 年6 月非小细胞肺癌首诊患者60 例,其中无远处转移患者30 例,有远处转移患者30例。另外收集健康志愿者30 例作为对照组。qPCR技术检测人支气管上皮细胞BEAS-2B、云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90、云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05 以及人外周血有核细胞的表达水平。分析外周血有核细胞miR-205-5p 的表达水平与非小细胞肺癌患者血清标志物水平、TNM分期、淋巴结转移、远处转移等临床病理参数的相关性。结果：miR-205-5p 在BEAS-2B细胞中表达水平低（0.820 8±0.255 3）,而在YTMLC-90（17.507 2±1.906 3）和XWLC-05（5.725 2±1.012 0）细胞中表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-205-p 在健康人外周血中的表达水平显著低于无转移的以及转移的非小细胞肺癌患者（1.073 0 vs 3.658 8、19.6324,均P<0.01）。外周血有核细胞miR-205-5p 的阳性表达率与非小细胞肺癌患者性别、年龄、淋巴结转移、病理类型和血清肿瘤标志物水平（CEA、CA125、CA242）无关(P>0.05),而与患者远处转移、TNM分期、血清肿瘤标志物CA153 水平明显相关(P<0.01)。结论：miR-205-5p表达水平异常升高可能作为非小细胞肺癌患者转移相关的分子标志物。     

以CTP方案双介入治疗中晚期非小细胞肺癌的临床疗效观察

目的为了评估支气管动脉+肺动脉双介入化疗非小细胞肺癌临床疗效.方法对30例中晚期非小细胞肺癌采用CTP方案双介入化疗,并与同期采用的CTP方案静脉化疗34例中晚期非小细胞肺癌相比较.结果双介入组完全缓解(CR)2例,部分缓解(PR)20例,有效率(RR)73.3%),毒副反应小.静脉化疗组部分缓解(PR)14例,有效率44.5%.结论支气管动脉+肺动脉双介入化疗非小细胞肺癌临床疗效增加,值得临床应用的一种方法.     

树突状细胞浸润与肺癌预后相关性研究

目的　研究肿瘤浸润树突状细胞 (TIDC)在肺癌组织中的数量 ,以及与肺癌生物学行为的关系和对预后的价值。方法　用免疫组化法检测 39例肺癌组织S_10 0蛋白表达水平 ,流式细胞仪检测S_10 0 +TIDC的数量及DNA倍体。结果　 39例标本中S_10 0蛋白阳性表达率为 10 0 % ,S_10 0 +细胞具有典型树突状细胞形态学特征。异倍体肿瘤组织中S_10 0 +TIDC百分率为 2 1.81%± 8.18% ,明显高于二倍体肿瘤组织 ( 16 .0 3%±4.75 % )。有淋巴结转移组S_10 0 +TIDC百分率为 2 0 .43%± 7.74% ,无淋巴结转移组为 19.41%± 7.76 % ;肿瘤大于或等于 3cm组S_10 0 +TIDC百分率为 2 0 .90 %± 8.6 5 % ,小于 3cm组为 19.70 %± 7.6 1% ;非小细胞肺癌组S_10 0 +TIDC百分率为 19.48%± 7.98% ,小细胞肺癌组为 2 1.74%± 6 .17% ;存活期小于 1年组S_10 0 +TIDC百分率为 2 1.96 %± 8.0 5 % ,1～ 3年组为 19.47%± 6 .18% ,大于 3年组为 19.14 %± 8.76 %。经统计学分析 ,S_10 0 +TIDC数量与肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移情况及患者生存期之间均未见明显相关性。结论　TIDC数量在人类肺癌中不宜作为一个独立的预后指标。     

Control of the cell cycle

Cell biology has made major progress in identifying the molecules that drive the cell cycle. The evidence accumulating from these studies indicates that derangements in the cell cycle machinery contribute to the uncontrolled cell growth of tumours. The cell cycle machinery has been found to be substantially altered in tumour cells and also may be crucial for carcinogenesis. In this context, various aspects of tumour cell growth have been studied in an effort to understand 1) why tumour cells display uncontrolled growth, 2) why radiation selectively affects growing cells, and 3) whether aspects of the cell cycle and tumour cell growth may be used in tumour diagnosis and prognosis.     

阿霉素诱导粘液表皮样癌细胞凋亡时细胞周期的变化

 在证明10ug／ml阿霉素诱导粘液表皮样癌MEC—1细胞凋亡的基础上，研究细胞凋亡过程中细胞周期变化，以利于临床用药。方法：通过显微镜观察细胞的形态变化和DNA电泳来观察图形，并依靠流式细胞术准确了解用药后细胞周期的变化。结果：光镜下见癌细胞凋亡改变，DNA电泳是典型梯状条图；流式细胞仪测得阿霉素作用5h时，细胞阻于G₂期，24h时细胞阻于G₁期。结论：阿霉素诱导MEC—1细胞凋亡初期，细胞阻于G₂期，后期细胞阻于G₁期。     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的 探讨microRNA-27a(miR-27a)在肾癌细胞中的作用及调控机制.方法 应用miR-27a反义寡核苷酸(ASO)在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响.结果 786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞(P<0.05);利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低(P<0.05).结论 miR-27a 可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用.miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点.     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的：探讨microRNA-27a（miR-27a）在肾癌细胞中的作用及调控机制。方法：应用miR-27a反义寡核苷酸（ASO）在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响。结果：786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞（P〈0.05）;利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低（P〈0.05）。结论：miR-27a可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用。miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点。     

Adenoendocrine cell carcinoma of the gallbladder clinically mimicking squamous cell carcinoma

We present the case of a 62-year-old Japanese man whose histological diagnosis was adenoendocrine cell carcinoma of the gallbladder at autopsy, but whose antemortem diagnosis was squamous cell carcinoma. The patient was admitted to hospital with complaints of occasional vomiting and abdominal pain. Abdominal computed tomography revealed a large tumor on the gallbladder involving the adjacent liver, colon, and duodenum, with multiple metastases in the greater omentum and paraportal lymph nodes. The serum level of squamous cell carcinoma antigen (SCCA) was high, whereas that of carbohydrate antigen (CA) 19-9, as well as that of carcinoembryonic antigen (CEA) was within the normal range. Due to these clinical features, we first suspected advanced squamous cell carcinoma of the gallbladder. After two cycles of gemcitabine monotherapy, the tumor had become enlarged and the regimen was changed to a combination of docetaxel and cisplatin. Though tumor regression was achieved and his serum SCCA level normalized after 3 months, the patient rejected additional chemotherapy and died 8 months after the diagnosis. The histopathological findings made by autopsy demonstrated the tumor to be an adenoendocrine cell carcinoma without squamous carcinoma cells. The case is interesting in that the clinical features were similar to those of squamous cell carcinoma of the gallbladder.     

Oat cell carcinoma of the esophagus

An oat cell carcinoma occurring in the esophagus of a 59-year-old man is described. A review of another 22 cases of such a tumor from the English literature is made. These tumors may have three histologic patterns; pure oat cell carcinoma, oat cell carcinoma with squamous cell carcinoma, and oat cell carcinoma with adenocarcinoma. They appear to arise from enterochromaffin cells; the neoplastic cells show argyrophilia and neurosecretory-type granules on electron microscopy. Resection has been the principal mode of therapy. Overall survival for these patients is about 6 months, with most patients dying of extensive metastatic disease.     

大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖周期影响的实验研究

目的：观察大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖及周期的影响。方法：设计空白对照组及不同浓度的大黄素溶液作用于A-549细胞，MTT比色法测定A-549细胞生长的抑制率；流式细胞仪分析A-549细胞增殖周期的变化。结果：大黄素对人肺腺癌A-549细胞有明显的生长抑制作用，其抑制作用呈浓度依赖性，其抑制率随药物浓度升高而增加。400mg／L时达到83．33％，实验组与对照组之间差异有统计学意义，P=0．000；对A549细胞具有细胞周期阻滞作用，可将其阻滞于G0／G1期，阻止细胞进入S期。结论：大黄素对人肺腺癌A549细胞的增殖生长具有显著的抑制作用；并可使A-549细胞增殖周期停滞于G0／G1期，而阻止其进入S期。     

桥接整合因子1 去甲基化诱导细胞周期阻滞抑制食管鳞状细胞癌EC109细胞增殖

目的：分析桥接整合因子1（bridging integrator-1, Bin1）去甲基化对Bin1 基因表达和食管鳞状细胞癌EC109 细胞增殖能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：甲基化特异性PCR（methylation specific polymerase chain reaction, MSP）法检测去甲基化药物5-氮杂-2''脱氧胞苷（5-Aza-2''-deoxycytidine, 5-Aza-dc）处理后EC109 细胞Bin1 启动子区域的甲基化状态,用qPCR、Western blotting 和MTT法分别检测单独5-Aza-dc 和5-Aza-dc 加转染Bin1 基因干扰片段（Bin1 siRNA）处理对EC109 细胞Bin1 mRNA及其蛋白表达和细胞增殖能力的影响,流式细胞术和Western blotting 检测5-Aza-dc 处理后EC109 细胞周期和细胞周期相关蛋白（Cyclin D1 与CDK4）表达的变化。结果：去甲基化药物5-Aza-dc 处理后,EC109 细胞Bin1 基因启动子区域发生去甲基化。5-Aza-dc 处理的Bin1 去甲基化EC109 细胞Bin1 mRNA和蛋白表达明显上调（均P<0.05）,细胞增殖能力明显下降（P<0.05）,细胞阻滞在G0/G1 期,表现为S 期细胞比例显著减少,细胞周期相关蛋白Cyclin D、CDK4 表达均明显下调（均P<0.05）。Bin1 去甲基化EC109 细胞转染Bin1 siRNA后,Bin1 mRNA和蛋白表达明显下调,细胞增殖能力增强（均P<0.05）。结论：Bin1 基因启动子区域在EC109 细胞中呈完全甲基化状态,5-Aza-dc 去甲基化可使食管鳞癌细胞EC109 细胞Bin1 表达升高,通过降低细胞周期相关蛋白表达诱导细胞周期阻滞抑制EC109 细胞增殖。证实表观遗传学变化可能与食管癌细胞恶性增殖有关,可为食管癌治疗提供新的思路。     

甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响

目的 探讨甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的影响及其可能机制。方法 采用Western blot检测磷酸甘露糖异构酶在6个肺癌细胞系中的表达。利用MTT法观察甘露糖对肺癌细胞系的增殖抑制作用;分别给予对照组、甘露糖组0、2、4、6、8、10Gy照射,采用平板克隆形成实验检测甘露糖对6个肺癌细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测对照组、甘露糖组、照射组及联合组细胞的凋亡情况。结果 6个肺癌细胞系中磷酸甘露糖异构酶表达量各不相同,其中A549细胞表达量最高,H460细胞表达量最低。11.1mmol/L甘露糖对A549、H460细胞系抑制作用相同,随着甘露糖浓度增加,对H460细胞系抑制作用更显著。采用11.1mmol/L的甘露糖可明显增加H460细胞系放射敏感性及细胞凋亡率,而对A549细胞系放射敏感性和凋亡率影响不大。结论 在磷酸甘露糖异构酶高表达的6个肺癌细胞系中,甘露糖可增强部分肿瘤细胞的放射敏感性。