定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

2种方法检测乙型肝炎病毒标志物的比较

我国是乙型肝炎感染的高发区。据流行病学调查,我国一般人群的乙肝表面抗原(HBsAg)阳性率为7.18%,远高于美国的乙肝表面抗原(HB-sAg)阳性率(0.3%)。ELISA法是我国目前实验室检测HBsAg的常用方法,但由于干扰因素较多,一些弱阳性标本的结果不够稳定,给结果的判定带来一定的困扰,随着生物学技术的发展,核酸检测技术受到人们的重视,该法具有灵敏度高、特异性     

酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应检测生殖器标本中的单纯疱疹病毒

目的 评价酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断生殖器疱疹的临床应用价值。方法 对120例具有生殖器皮肤、粘膜损害的病人，采用ELISA和分型聚合酶链反应(PCR)检测其生殖器标本中的单纯疱疹病毒(HSV)，两种试验结果不符合者采用第二种PCR检测。结果 120例受检者中，ELISA检出49例HSV阳性，分型PCR检出50例阳性。单纯HSV-1感染者占生殖器疱疹的10.0％，单纯HSV-2感染者占80.0％，HSV-1和HSV-2混合感染者占10.0％。在120例标本中，107例两种试验结果是符合的，13例结果不符合。与“扩大金标准”比较，ELISA的敏感性、特异性、阳性预期值分别为92.0％、95.7％、93.8％，分型PCR的敏感性、特异性、阳性预期值分别为94.0％、95.7％、94.0％。结论 ELISA法检测HSV感染，其敏感性和特异性高，方便、快速，尤其适合大批量样本的检测，值得在临床应用。     

乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果的对比分析

我国为乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染高发区．约有１亿人为乙肝表面抗原携带者．ＨＢＶ感染后血清学检测组合的标志模式多且复杂．由于ＰＣＲ方法的引入,可以直接检测病毒核酸（ＤＮＡ）［１］,所以对患者体内ＨＢＶ复制及传染性有了更深刻地认识．然而,由于基层单位开展ＰＣＲ检测受到条件限制,仅以血清学检测结果作为实验诊断依据,可能会出现漏检．因此,将ＨＢＶＤＮＡ与血清学标志物（ＨＢＶＭ）进行对比分析,对临床诊断ＨＢＶ感染及治疗效果的判断具有重要作用．我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ…     

乙型肝炎病毒在家庭内的传播现状

1日常生活的密切接触已成为目前乙型肝炎的主要传播途径之一2003年,Balter、陈安海等[1,2]采用酶联免疫吸附实验和聚合酶链反应检测发现,在慢性乙型肝炎(乙肝)患者的胃液中HBsAg、HBeAg及HBVDNA的检出率分别为51.7%、12.1%和34.4%,而部分血清HB-sAg、HBeAg及HBV DNA阴性者,胃液     

各型病毒性肝炎患者庚型肝炎病毒感染状况

目的:了解武汉地区各型病毒性肝炎患者中庚型肝炎病毒(HGV)感染的情况。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各型病毒性肝炎患者的抗HGV和HGV RNA,并对庚肝病毒感染者进行临床分析。结果:351例各型病毒性肝炎患者中抗HGV阳性者56例,占15.05％;此56例中HGV RNA阳性者21例,占37.50％。各型病毒性肝炎患者中抗HGV阳性率及庚肝抗体阳性者中HGV RNA阳性率分别为:甲肝14.29％(5/35)及20.00％(1/5);乙肝17.29％(37/214)及35.14％(13/37);丙肝14.52％(9/62)及55.56％(5/9);戊肝4.00％(1/25),0.00％(0/1);非甲～戊肝26.67％(4/15),50.00％(2/4)。56例抗HGV阳性者中43例有输血、使用血制品或静脉药癌史,占76.79％。HGV感染在肝炎各临床类型分布为急性、慢性和重型肝炎患者无明显差异,且无性别和年龄分布的差异。HBV重叠感染HGV患者的SALT及TBil水平明显高于单纯HBV感染者(P<0.05),而HGV和其它肝炎病毒((HAV、HCV、HEV)重叠感染患者与单纯其它肝炎病毒感染者的SALT及TBiL水平无明显差异(P>0.05)。结论:武汉地区各型病毒性肝炎患者均可存在HGV感染。HGV可单独感染或与其它病毒混合感染。血液传播是HGV感染的主要途径。乙型肝炎患者合并庚肝病毒重叠感染可加重病情,而甲、丙、戊型肝     

聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验技术在诊断肺结核病的临床应用

1989年聚合酶链反应(PCR)用于结核分支杆菌以来，该技术已广泛应用于结核病的诊断，如何提高PCR的敏感性和特异性成为检验人员和临床医师共同关注的问题。我们通过采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR—ELISA)技术检测肺结核病患者的痰标本，并将其涂片和培养、BBL-MGIT快速培养、PCR-凝胶电泳法进行对照比较，取得了较为满意的结果。     

以聚合酶链反应法研究乙型肝炎HBV—DNA与e系统的关系

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测了１２２例乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。对照患者ｅ系统的模式，发现ＨＢｅＡｇ（＋），抗－ＨＢｅ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９０．９％，抗－ＨＢｅ（＋），ＨＢｅＡｇ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５０．１％，ＨＢｅＡｇ（－），抗－ＨＢｅ（－）者的ＨＢＶＤＮＡ阳性率为３５．７％。结果表明，ＰＣＲ法较ｅ系统更能准确反映了ＨＢＶ的复制情况。     

细胞因子对乙型肝炎预后的影响

追踪观察61例乙型肝炎病毒(HBV)感染患者，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测研究对象的血清细胞因子水平，分析病情变化与血清细胞因子水平的关系。     

反向聚合酶链反应检测肝细胞癌中乙型肝炎病毒DNA整合

目的 应用反向聚合酶链反应(inverse polymerase chain reaction,IPCR)法检测肝细胞癌(HCC)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA整合。方法 提取手术切除石蜡包埋入肝癌组织中DNA,根据IPCR原理,选用HBV DRl区无酶切位点的限制性内切酶酶切,通过连接反应形成环化DNA分子,以此作为模板进行PCR扩增得到已知序列的旁侧序列。琼脂糖凝胶电泳观察PCR扩增产物片段。结果 19例HCC标本中有14例检出整合型HBV DNA,2例同时存在游离型HBV DNA。结论 IPCR可以准确测定肝细胞中HBVDNA的整合。该方法为研究HBV DNA在肝细胞中的整合机制提供一简单、快速、经济途径。     

PCR及PCR-ELISA法检测蚊体内马来丝虫幼虫

目的：建立一种检测蚊体内马来丝虫幼虫的灵敏、快速、特异的方法。方法：选择应用PCR及PCR－ELISA法检测马来丝虫幼虫DNA的最佳反应条件，并在该条件下分别以马来丝虫Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期幼虫各1条作模板，测定检测的灵敏度及检测实验室人工感染中华按蚊体内的马来丝虫幼虫。结果：PCR及PCR－ELISA法均能检测出1条Ⅰ期幼虫（L1），而PCR的检测下限为1／10条L1，PCR－ELISA检测下限为1／100条L1；将分离的感染期幼虫加阴性蚊媒进行粗提、扩增及电泳，结果未见明显的扩增条带，扩增产物作ELISA检测，全部为阴 性；个体解剖人工感染的中华按蚊120只，分别收集113只阳性蚊体内的幼丝虫，用两种方法检测，结果均为阳性。结论：初步建立了PCR及PCR－ELISA法检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者肝外组织中的乙型肝炎病毒DNA

应用巢式聚合酶链（ＰＣＲ）技术对１８例石蜡包埋的胆囊、肾、脾、肾上腺、心、睾丸、胰腺及肝脏组织的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行了检测，并与其免疫组化及原位杂交方法作比较。二组引物检测的结果表明：肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ的复制。肝外组织中ＨＢＶ检出率分别为胆囊８５．７％、７５．０％、肾７２．７％、肾上腺６６．７％、心脏５５．６％、睾丸５５．６％和胰腺５４．５％，但均未检测出ＨＢＶ的复制，ＰＣＲ检测发现与免疫组化及原位杂交结果基本一致。ＨＢＶ可以感染肝外组织但并不在这些组织中复制的发现可以解释受感染的肝外组织可以作为肝外感染源，但并不引起这些脏器出现明显的病理变化。     

酶联免疫吸附测定法检测ζ珠蛋白链在广西东南亚缺失型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的 评价并比较酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ζ珠蛋白链与聚合酶链反应(PCR)方法在诊断广西东南亚缺失型α-地中海贫血中的临床诊断价值.方法 收集广西壮族自治区人民医院门诊部和产科住院病例210份血样标本(其中115例为正常对照;95例均有MCV<80 fl、MCH<27 pg,Hb在25～128 g/L之间),采用ELISA法和聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,最后对ELISA法筛查--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值、阳性预测值与聚合酶链反应(PCR)方法进行分析并比较其诊断--SEA携带者的临床应用价值.结果 ELISA法诊断--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值分别是96.2%、98.3%、97.6%和98.3%、96.2%,而聚合酶链反应(PCR)法检测的相应指标均为100.0%(P>0.01),两者无显著性差异.ELISA法不但对--SEA携带者有很高的检出率,而且还能检出个别-α/αα的病例,但其不能筛查出β-地中海贫血,对脐带血的检出率低(仅为65.0%).结论 ELISA法能非常有效地检出--SEA携带者,加之该法简便快速、技术要求不高且经济实用,故很适用于常规实验室和大样本的人群筛查.     

以聚合酶链反应法研究乙型肝炎HBV－DNA与e系统的关系

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测了１２２例乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。对照患者ｅ系统的模式，发现ＨＢｅＡｇ（＋），抗－ＨＢｅ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９０．９％，抗－ＨＢｅ（＋）、ＨＢｅＡｇ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５０．１％，ＨＢｅＡ（－）、抗－ＨＢｅ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为３５．７％。结果表明，ＰＣＲ法较ｅ系统更能准确反映ＨＢＶ的复制情况。     

丙型肝炎抗体的检测与HCVRNA定量及ALT的关系探讨

目的比较不同实验诊断方法在丙型肝炎(丙肝)抗体检测中的应用价值,并探讨HCV RNA定量与ALT指标之间的关系。方法对105例增强化学发光法(CIA)检测丙肝抗体初筛结果呈阳性(S/Co>1)的标本,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(RFQ-RT-PCR)进行检测,并对可疑结果(①CIA检测结果S/Co在1～8之间的标本,②ELISA检测结果呈阴性的标本)采用HCV RIBA3.0进行确认;应用OLYMPUS AU-5400全自动生化仪及其生化检测试剂检测全部标本ALT指标。结果ELISA及RFQ-RT-PCR方法检测样本阳性率分别为93.33%和70.48%;对可疑标本经HCV RIBA3.0确认试验显示,2例结果呈阳性(分别为NS3、HCV-C和NS3、NS4阳性),1例为阴性,4例仍为可疑(其中1例HCV RNA>103copies/ml);HCV RNA含量呈阳性的样本中,ALT异常率与HCV RNA含量间呈正相关(r=0.96,P<0.01),而ALT数值的变化与HCV RNA含量并无相关性(r=0.19,P>0.05)。结论第三代ELISA诊断试剂盒检测丙肝抗体同样具有较高的灵敏度,2种检测方法均可能存在假阳性或假阴性情况;RFQ-RT-PCR检测结果阳性率低于CIA与ELISA检测结果;在临床诊断中丙肝抗体的检测应与荧光定量聚合酶链反应一起使用,以提高临床丙肝诊断的准确率。     

PCR-ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA的研究

目的　建立卡氏肺孢子虫 (P.c )DNA的聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)方法 ,并探讨其应用价值。　方法　实验组患卡氏肺孢子虫肺炎的SD大鼠和Wistar大鼠各 2 8只 ,采用PCR法扩增大鼠肺组织DNA和支气管肺泡灌洗液 (BALF)DNA ,用PCR ELISA检测其扩增产物。 2 8只患病大鼠分别制作肺组织印片及BALF涂片 ,姬姆萨 (Giemsa)染色镜检 10 0个视野中有无P .c包囊 (或滋养体 ) ,与PCR ELISA检测扩增产物结果比较。　结果　两种方法检测大鼠肺组织DNA阳性率及BALFDNA阳性率 ,结果相同 ,均分别为 96.4% (27/28)和100% (28/28)。Giemsa染色镜检P.c包囊 (或滋养体 ) ,结果为阳性的大鼠 ,PCR ELISA检测扩增产物结果也均为阳性。阴性对照组 ,两种大鼠的肺组织和BALF各10份标本 ,均有1只大鼠阳性。　结论　PCR ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA ,敏感性较高 ,特异性较好 ,操作简便 ,具有实用价值。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

ELISA法和GICA法检测乙型肝炎表面抗原的比较

目前,检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的方法较多,有反向间接血凝试验(RPHA)、放射免疫试验(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标记免疫渗滤法(GIFA)和金标记免疫层析法(GICA)等.     

丙氨酸氨基转移酶正常人群隐匿型乙型肝炎病毒核酸的检测

[目的]了解隐匿型乙型肝炎病毒(occult HBV)在丙氨酸氨基转移酶(ALT)正常人群中的感染情况。[方法]应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测538例ALT正常、HBsAg阴性人群血清中HBV-DNA水平。[结果]538例人群中HBV-DNA阳性率为15.6%,男性(22.8%)显著高于女性(7.8%)(P<0.01),≥50岁(16.7%)与<50岁(15.5%)差异无统计学意义(P>0.05),有输血史(21.9%)高于无输血史(14.1%)(P<0.05),且HBV-DNA水平均<103.6copies/ml。[结论]ALT正常人群中存在隐匿型HBV感染,且与输血史和性别有关。提示临床进行输血和器官移植等异体成分治疗时,在检测ALT和HBV标志物的同时,应结合灵敏度高的FQ-PCR方法检测HBV-DNA,以杜绝隐匿型HBV传播的可能性。