热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力，用效放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤 。     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理（４２℃，２ｈ）使肺泡巨噬细胞（ＰＡＭｓ）中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ＿２Ｏ＿２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中ＨＳＰ７０增多；在基因转录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂──Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

抑制热休克蛋白70表达对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的：探讨抑制热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）表达对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法利用细胞培养,电子显微镜及流式细胞仪的方法,观察民ＨＳＰ７０表达后对细胞生长的影响。结果体外培养脑胶质细胞株,经不同浓度槲皮素作用不同时间后,碘化丙碇染色荧光显微镜观察发现细胞核固缩、致密和碎裂现象;流式细胞检测发现亚二倍体峰,提示出现细胞凋亡。分析细胞周期,发现凋亡细胞主要出现在Ｇ０－Ｇ１期,随药物浓度的增加而增加     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃,２ｈ）或Ｈ２Ｏ２预处理,均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中的ＨＳＰ７０增多;在基因围录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂－－Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ２Ｏ２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ２ＯＳ诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

透明质酸刺激因子对三维培养的增生性瘢痕成纤维细胞收缩特性的影响

目的：了解透明质酸刺激因子（ＨＡＳＦ）对三维培养的瘢痕成纤维细胞收缩特性的影响．方法：将提纯的兔源性ＨＡＳＦ加入以人皮肤胶原为支架的人增生性瘢痕成纤维细胞三维培养系统（ＦＰＣＬ）,通过计算ＦＰＣＬ的收缩指数,用放免法测定其中ＨＡ的含量,就ＨＡＳＦ对三维培养的瘢痕成纤维细胞收缩性,快速收缩和ＨＡ合成的影响及其相关性进行初步研究．结果：三维培养系统中ＨＡＳＦ浓度≥１×１０－３ｇ／Ｌ时,ＨＡＳＦ与细胞介导的ＦＰＣＬ最大收缩指数有明显的剂量—效应关系,ＦＰＣＬ的收缩指数与对照组之间的差异非常显著（Ｐ＜０．０１）;ＨＡＳＦ对ＦＰＣＬ的快速收缩无影响（Ｐ＜０．０５）;ＦＰＣＬ中ＨＡ含量随ＨＡＳＦ浓度升高呈剂量依赖性升高;ＦＰ－ＣＬ的最大收缩指数与其中ＨＡ含量呈正相关（ｒ＝０．９８７５,Ｐ＜０．０１）．结论：ＨＡＳＦ能促进三维培养的瘢痕成纤维细胞的收缩,这种作用可能是通过刺激其合成ＨＡ实现的．     

高热致胚胎发育毒笥性机理的研究：——热休克蛋合成

按Ｋｉｍｍｅｌ实验条件热暴露孕天大鼠。暴露后２小时取胚胎用＾３５Ｓ－蛋氨酸标记，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白分析，可见７０和９０ＫｉｌｏｄａｌｔｏｎＫＤ热休克蛋白合成增加。７０ＫＤ ＨＳＰ合成用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析又进一步得到证实。离体培养胚胎热暴露后，用同样方法分析蛋白，证实７０和９０ＫＤ ＨＳＰｓ合成增加。结果与Ｋｉｍｍｅｌ骨骼畸形和胚胎体节融合发生率相符合。本结果为Ｇｅｒｍａｎ提出的环境致畸机     

维拉帕米对人单核巨噬细胞蛋白质、DNA、RNA合成的影响

目的：观察维拉帕米对人单核巨噬细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成过程的影响。方法：维拉帕米与人单核巨噬细胞孵育２４ｈ或４ｄ，测定细胞３Ｈ－ＴｄＲ、３Ｈ－ＵＲ、３Ｈ－Ｌｅｕ掺入人单核巨噬细胞状态及细胞内蛋白质含量。结果：维拉帕米在低浓度时对ＤＮＡ、ＲＮＡ合成有抑制作用，呈浓度依赖性；高浓度时作用明显，对ＲＮＡ作用较ＤＮＡ显著（Ｐ＜０．０５）；对蛋白质合成在高浓度时有抑制作用。维拉帕米与成熟过程中人单核巨噬细胞作用４ｄ，细胞蛋白含量显著降低（Ｐ＜０．０５），并呈浓度依赖性。结论：此作用可能为维拉帕米抑制细胞生长及动脉粥样斑块形成逆转心肌肥厚的机制之一。     

大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究

本工作采用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，检测了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与其正常对照（ＷＫＹ）大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平，并对ＳＨＲ和ＷＫＹ肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：ａ．３７℃培养的ＳＨＲＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ大鼠，ＳＨＲＡＳＭＣ受热刺激（４２℃１５ｍｉｎ）后２ｈ，ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加的程度明显大于ＷＫＹ大鼠。ｂ．大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在压力超负荷４ｈ时已明显升高，１ｄ、２ｄ、１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐降低。ｃ．ＳＨＲ和ＷＫＹ鼠肝组织基因组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切后，ＳＨＲＨＳＰ７０基因缺失一条约５．６ｋｂ的片段。提示：ＳＨＲＡＳＭＣ对热敏感性增加；压力负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加；ＨＳＰ７０基因结构异常可能与高血压发生有关。     

低渗透压反应液促进甲状腺细胞合成cAMP机理

应用ＦＲＴＬ－５大鼠甲状腺细胞研究了无氯化钠低渗透压反应液促进促甲状腺激素（ＴＳＨ）刺激的甲状腺细胞合成环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的机理。结果：无氯化钠低渗液组细胞内和细胞外液ｃＡＭＰ浓度均高于含氯化钠等渗液组。无氯化钠低渗液组细胞外液ｃＡＭＰ与总ｃＡＭＰ比率高于对照组。低渗液组细胞内和细胞外液ｃＡＭＰ浓度随反应时间延长持续升高；等渗组细胞内ｃＡＭＰ浓度在反应１０ｍｉｎ后达最高水平，以后无增加。结果表明，无氯化钠低渗反应液可能对提高甲状腺细胞膜ｃＡＭＰ的通透性，增强ＴＳＨ受体后反应有一定作用。     

无血清K-SFM培养条件下大鼠毛囊Bulge细胞生物学特性的研究

目的研究无血清K-SFM培养条件下,大鼠毛囊Bulge细胞的生物学特性.方法分离大鼠毛囊Bulge细胞,分别置于无血清的K-SFM培养基(实验组)及有血清DMEM/F12培养基(对照组)的培养条件下培养.比较Bulge细胞在两种培养体系中的生长增殖和K19的表达状况.结果无血清培养的Bulge细胞在克隆形成率及K19的表达率均明显高于对照组(P＜0.05).结论体外培养和扩增大鼠毛囊Bulge细胞,无血清的K-SFM培养基较有血清DMEM/F12培养基更有利于Bulge细胞的扩增和表型的维持.     

不同浓度胎牛血清对原代心肌成纤维细胞增殖及分化的影响

目的:探讨不同浓度胎牛血清体外培养对原代心肌成纤维细胞增殖和分化的影响。方法:用酶消及差速贴壁法分离并培养SD乳鼠心肌成纤维细胞;采用不同浓度胎牛血清(1%、5%、10%和20%)培养心肌成纤维细胞并观察细胞形态,免疫荧光共聚焦法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达,划痕实验检测心肌成纤维细胞的迁移能力,CCK8实验检测心肌成纤维细胞的增殖能力。结果:随着胎牛血清浓度升高,细胞形态逐渐变圆,细胞表面积增加,α-SMA阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化增多,细胞迁移能力增加。高浓度胎牛血清(20%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最旺盛,低浓度胎牛血清(1%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最低,5%和10%胎牛血清培养时心肌成纤维细胞增殖均旺盛。结论:高浓度胎牛血清培养会导致心肌成纤维细胞分化,5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较10%和20%胎牛血清培养分化程度少,增殖能力较1%胎牛血清好,选用5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较好。     

心肌球培养基血清浓度优化研究

目的 通过比较含有不同胎牛血清浓度的心肌球培养基分离培养大鼠心肌干细胞(CSCs)的效果,探讨最优的心肌干细胞血清培养浓度.方法 选取15只健康新生Wistar大鼠(出生1天龄),无菌条件下取出心脏,经胰酶和Ⅱ型胶原酶反复消化后,种植于培养瓶中,应用含20%胎牛血清的完全培养基培养组织块源性心脏祖细胞(CPCs),将所得的培养外植物源性细胞(EDCs)随机分为A、B、C 3组,各组5瓶细胞(25 mL塑料培养瓶),分别应用含10%、11%、15%不同浓度胎牛血清的心肌球生长培养基培养,培养至第三代CSCs时行细胞表面抗原C-kit染色,鉴定C-kit阳性CSCs占所获得细胞的比率,比较所得的细胞数量,生长周期和生长曲线.结果 从新生大鼠心肌组织中成功分离培养出CSCs,C-kit阳性率87%.培养后所得细胞数量以细胞倍增水平(PDL)表示,各组细胞PDL呈匀速递增,PDL水平和其递增速率(生长曲线所示)比较:B组>C组>A组.应用含11%胎牛血清的心肌球生长培养基培养EDCs获得的CSCs,与其他两组相比,具有生长周期短(P<0.05),生长数量多的特点(P<0.05).结论 含11%胎牛血清浓度是心肌球生长培养基培养原代大鼠心肌干细胞的最优血清培养浓度.     

17β-雌二醇对新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖反应的影响及其机制

目的：探讨雌甾-1,3,5（10）-三烯-3,17β-二醇（17β-雌二醇）对新生牛血清诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖反应的影响及其机制。方法：用新生牛血清刺激培养的VSMCs增殖,MTT法检测17β-雌二醇对新生牛血清诱导的VSMCs增殖的影响,并用Western blot检测caveolin-1蛋白,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及NO在此过程中的变化。结果：与对照组比,新生牛血清可促进VSMCs增殖（P〈0.05）,17β-雌二醇作用24 h后能明显抑制上述作用（P〈0.05）;17β-雌二醇预处理可抑制新生牛血清诱导的VSMCs中caveolin-1,iNOS蛋白表达下降及NO释放（P〈0.05）;17β-雌二醇受体阻断剂1-{4-[2-（n,n-二甲氨基）乙氧基]苯}-1,2-二苯-1-丁烯（他莫昔芬）预处理可部分逆转17β-雌二醇的抑制作用（P〈0.05）。结论：17β-雌二醇通过其受体可抑制新生牛血清诱导的VSMCs增殖,此过程与上调caveolin-1蛋白表达,激活iNOS,增加NO释放有关。     

不同浓度葛根素对体外培养血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度葛根素对体外培养血管内皮细胞增殖的影响。方法：取3只5d龄SD大鼠·分离心脏，在体外消化收集血管内皮细胞并进行培养，第3代细胞用于实验。除空白对照组外·血管内皮细胞分别于含0．01、0．1、1、10和100umol／L葛根素的培养基中进行培养。24h后纠置显徽镜下观察细胞形态并进行细胞计数，采用甲基噻唑基四唑比色法、免疫组织化方法和流式细胞仪检测血管内皮细胞的增殖情况。结果：与空白对照组比较，1、10和100umol／L葛根素组血管内皮细胞细胞计数增加（P〈0．05，P〈0．01）·增殖细胞梭抗啄阳性细胞比率及细胞分裂增殖指数增加（P〈0．05，P〈0．01）．结论：葛根素对体外培养的血管内皮细胞有明显的促进增殖作用，其作用与葛根素的剂量有关。     

Effects of neonatal calf serum on differentiation of human fetal neural stem cells in the hippocampus]

OBJECTIVE: To investigate the effects of neonatal calf serum on the differentiation of human neural stem cells in the hippocampus. METHODS: The effects of various concentrations of neonatal calf serum on the differentiation of human fetal neural stem cells in the hippocampus were observed in cell culture experiment and immunocytochemical staining. RESULTS: Neonatal calf serum efficiently induced the differentiation of human fetal neural stem cells into neurons and astrocytes, whose amount varied between serum-free cell culture and the culture with neonatal calf serum of different concentrations. As the concentration of neonatal calf serum increased, the differentiation of human fetal neural stem cells shifted toward astrocytes, while the differentiation into neurons was decreased. CONCLUSION: Neonatal calf serum causes alteration of the ratio between neurons and glial cells differentiated from human neural stem cells in the hippocampus.     

Colony formation in culture by bovine granulopoietic progenitor cells

Calf bone marrow cells cultured in a semi-solid medium of 0.8% methyl cellulose produced colonies of granulocytic cells and macrophages by seven days. A prerequisite for colony growth was the presence of serum obtained from a calf three hours after intravenous injection of endotoxin. Three morphological types of colonies were seen but cell types within these types of colonies did not differ. Cultured cells were identified by morphological and cytochemical characteristics.Optimum growth occurred when serum from endotoxin stimulated calves and fetal calf serum were present in a volumetric ratio of 7:3. Inhibition of colony growth occurred when endotoxin-stimulated serum was present at greater than optimum concentration. Normal calf serum, fetal calf serum, mouse L-cell conditioned medium and bovine urine did not stimulate significant colony growth when 8.0 x 10(4) marrow cells were cultured.There was a linear relationhip between the number of marrow cells in the cultures and the number of colonies produced. Colony forming efficiency ranged from 13 to 59 colonies per 10(5) cells plated.The behaviour of calf colony forming units in suspension culture was similar to that reported for mouse colony forming units.     

血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察血竭提取物对体外培养成纤维细胞增殖的影响,探讨血竭促进创面愈合的机制. 方法: 将血竭经过氯仿、乙酸乙酯、乙醇回流提取得到的3种提取液,分别加入培养液并进行成纤维细胞的培养,MTT法检测不同血竭提取物在不同浓度以及不同时间点对体外培养成纤维细胞增殖的影响, 并绘制最适浓度条件下细胞生长曲线. 利用流式细胞仪分析最适浓度培养条件下成纤维细胞的细胞周期变化. 结果: 血竭乙酸乙酯提取物在0.5～2.0 g/L浓度范围内,促进成纤维细胞增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为2.0 g/L时促进作用最为显著,此条件下处于S期的细胞较对照组增加18.3% (P＜0.01). 结论: 血竭乙酸乙酯提取物能显著促进成纤维细胞增殖,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

PDGF-AB对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨ＰＤＧＦ－ＡＢ促进伤口愈合的作用机理及其在瘢痕增生中的作用。方法：取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞（ＨＴＳＦＢ）测定生长曲线,用ＭＴＴ法观察ＰＤＧＦ－ＡＢ对其增殖影响的差异。结果：两种细胞生长曲线存在差异,ＰＤＧＦ－ＡＢ对两种成纤维细胞增殖均有明显刺激作用,且均呈剂量依赖性关系,但作用有差异。结论：ＰＤＧＦ－ＡＢ可能通过刺激成纤维细胞增殖促进伤口愈合,同时在瘢痕增生性疾病中起     

自体血清对牛血清适应性人间充质干细胞增殖的影响

目的观察自体血清对牛血清适应性人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)体外增殖的影响.方法用10%的自体血清培养牛血清适应性hMSCs,分别以新生牛血清、胎牛血清及全程自体血清组作为对照,通过相差显微镜、细胞计数、MTT法、CCK-8(cell counting Kit-8)检测观察各组hMSCs的增殖状况.结果各组细胞均呈现正常的形态,细胞生长曲线相似,自体血清促进hMSCs体外增殖的效率与胎牛血清相似,较新生牛血清高;自体血清对牛血清适应性hMSCs的增殖效率有负面影响,但仍比新生牛血清更高.结论10%的自体血清对hMSCs具有与胎牛血清类似的良好促增殖作用,并对牛血清适应性hMSCs的促增殖效率有尚可接受的轻微不利影响.