Significance of apoptosis status and apoptosis-associated antigen expression in human colorectal adenocarcinoma sequence]

To investigate the effects of apoptosis on colorectal tumorigenesis and its possible biological significance, the apoptotic frequency in primary cultural cell of 9 normal mucosa, 4 adenomas and 9 adenocarcinomas in time period of 2, 12, 24, 48 hour was measured by flow cytometry. The apoptotic cells index (AI) in situ for 15 colorectal normal mucosa, 7 hyperplastic epithelial, 25 adenomas and 77 adenocarcinomas was identified by the terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP-biotin nick end labeling technique (TUNEL). Ki-67 proliferate index (KI), wafl and p53 genes were immunostained with ABC method. The results showed that culture related apoptotic incidence was obviously decreased in cultural tumor cell when compared with mucosa cell after 24-48 hour in vitro. There was a directly positive relationship between the spontaneous apoptosis and Ki-67-index in vivo. The well differentiated or early stage lesions with intensive bcl-2 expression were significantly more likely to have low AI and KI. Both mp53 accumulation and wafl depression which mainly related to KI, had no apparent correlation with AI, bcl-2/bax expression and clinicopathological features statistically; elevatory bax/bcl-2 and pervasive wafl depression led to an increasing AI/KI both in adenoma with atypia and in advanced cancer with distant metastasis or embolus, comparatively. The data indicated that the reduction of susceptibility to inductive apoptosis may contribute to the early phase of tumorigenesis, that AI in vivo may reflect proliferative activity, and that bcl family was closely associated with spontaneous apoptosis and biological behavior of human colorectal cancer.     

大肠瘤-癌序列中细胞凋亡及其相关调控基因表达的生物学意义

为探讨细胞凋亡状态及其相关调控基因表达水平与人大肠癌演进的关系,作者分别采用ＦＣＭ检测短期原代培养的人大肠粘膜、腺瘤及癌细胞不同时相凋亡频率;ＴＵＮＥＬ技术检测２５例腺瘤和７７例腺癌组织中原位凋亡指数（ＡＩ）;免疫组化ＡＢＣ法检测原位增殖指数（ＫＩ）及ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｗａｆ１及ｐ５３基因表达。结果显示：体外培养癌细胞生长期凋亡频率明显低于粘膜细胞;体内瘤－癌组织中ＡＩ与ＫＩ相平衡;高分化和早期癌中ｂｃｌ－２呈高表达,癌前腺瘤、癌栓及远处转移病例中ＡＩ／ＫＩ增高并与ｂａｘ阳性表达和ｗａｆｌ缺失表达有一定联系,ｐ５３突变与高增殖水平有关。从而提示凋亡易感性改变可能在结直肠肿瘤形成早期起着重要作用;ＡＩ可能是一个反映增殖活性的指标;Ｂｃｌ家族基因与大肠癌细胞自发性凋亡及生物学行为有密切关系。     

大肠腺瘤及腺癌细胞凋亡与p53和bcl-2的表达

目的探讨大肠粘膜癌变中细胞增殖和凋亡的特征以及凋亡相关调控基因的表达。方法对60例大肠腺瘤．癌用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测PCNA增殖指数（proliferative index,PI）及bcl-2和p53蛋白的表达。另选大肠高分化腺癌和正常粘膜20例作为对照检测。结果①正常粘膜、腺瘤和腺癌的p53蛋白表达率为5％、33．3％和70％。三组间有显著的差异（P均〈0．05）。②正常粘膜、腺瘤和腺癌的bcl-2蛋白表达率分别为15％、70％和65％．腺瘤和腺癌组均高于正常对照组（P均〈0．01）,腺瘤与腺癌组间差异不显著（P均〉0．05）。③大肠腺瘤和腺癌细胞的凋亡指数（AI）均高于正常粘膜（P均〈0．01）,bcl-2和p53蛋白的表达率与细胞AI呈显著负相关（rs=-0．66,rs=-0．62）。结论凋亡和增殖在肿瘤的发生、发展、转化中起着重要作用,上述指标的联合检测可以作为临床早期判断人肠腺瘤癌变的重要参考指标。     

大肠腺瘤—癌序列细胞凋亡及其调控基因p53的研究

目的研究细胞凋亡及其调控基因p53在大肠腺瘤—癌序列中的变化,以探讨其在大肠癌发生中的作用。方法利用DNA断裂原位标记法(缺口末端标记技术,TUNEL法)和免疫组织化学方法(SP法),对60例大肠腺瘤(腺瘤组)和60例大肠腺癌(腺癌组)的活检组织分别进行细胞凋亡和p53蛋白表达的检测,并采用30例正常大肠粘膜作对照组。结果对照组细胞凋亡指数(AI)显著高于腺瘤各组和腺癌组(P<0.01);腺瘤各组均高于腺癌组(P<0.01)。p53在三组中的表达差异有高度显著性(P<0.01)。在腺瘤和腺癌组中,p53阴性者的AI均高于其阳性者(P<0.05或0.01)。结论从正常大肠粘膜到腺瘤、腺癌的过程中细胞凋亡逐渐减少,表明细胞凋亡受抑制可能在大肠癌的发生发展过程中起着重要的作用。p53蛋白的表达在从正常大肠粘膜到腺瘤、腺癌的过程中逐渐增多,提示p53基因突变可能在大肠腺瘤转化为腺癌的过程中起促进作用。     

前列腺癌p53、bcl-2、bax基因表达与凋亡、增殖的关系

目的:研究前列腺癌组织中细胞增殖与细胞凋亡,及其相关蛋白表达意义。方法:采用原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)及免疫组织化学ABC法对36例前列腺癌(Pca)和11例正常前列腺(NP)组织石蜡切片p53、bcl鄄2、bax、PCNA蛋白及细胞凋亡检测。结果:前列腺癌细胞的增殖指数和细胞凋亡指数较NP明显增高,且AI/PI比值较正常组织AI/PI低(P<0.01);随着肿瘤分级的增加,细胞增殖水平明显增加(P<0.01)。p53蛋白表达与前列腺癌细胞增殖水平相关;bcl鄄2蛋白表达与细胞凋亡水平相关(P<0.05);bax基因表达与凋亡无关,但发现它们的bcl鄄2/bax的比值与凋亡有关。表明高bcl鄄2/bax比值多见于低凋亡组,低bcl鄄2/bax比值多见于高凋亡组。结论:细胞增殖与细胞凋亡均参与了前列腺癌的发生、发展。p53基因与细胞增殖水平的调控有关。bcl鄄2和bax在细胞凋亡调节中起到重要作用,由于bcl鄄2蛋白过量表达引起bcl鄄2/bax失平衡,在前列腺癌发生、发展过程中起到重要作用。     

缺血再灌注后胆管上皮细胞凋亡和bcl-2/bax的表达及意义

目的探讨肝脏经不同时间热缺血再灌注后胆管上皮细胞的凋亡和bcl-2／bax的表达及意义。方法以大鼠肝脏原位缺血再灌注为模型，经15、30和60min缺血再灌注6h后取材，用TUNEL法原位检测胆管上皮细胞的凋亡，免疫组织化学方法检测bcl-2／bax在胆管上皮细胞中的表达。结果随着缺血时间延长，经再灌注后发生凋亡的胆管上皮细胞逐渐增多，bcl-2／bax蛋白表达指数呈进行性降低，bax则随凋亡细胞的增多表达增强。结论热缺血再灌注损伤引起胆管上皮细胞的凋亡，并随缺血时间的延长而加重，bcl-2／bax凋亡基因介导了缺血再灌注后损伤引起的胆管上皮细胞的凋亡，bcl-2对细胞凋亡具有抑制作用。     

生长抑素与大肠癌细胞凋亡及调控基因bcl-2、bax及p53关系的研究

目的　探讨生长抑素 (SS)与大肠癌细胞凋亡指数 (AI)和凋亡调控基因p5 3、bcl 2、bax的关系。方法　采用免疫组织化学SABC法和分子生物学细胞原位凋亡检测技术中的TUNEL法 ,检测 6 2例大肠癌组织中SS、p5 3、bcl 2、bax及细胞凋亡的表达情况。结果　在大肠癌组织SS高表达组、中表达组的AI明显高于SS低表达组 (P <0 .0 1) ;p5 3、bcl 2、bax阳性表达率在SS低表达组、中表达组、高表达组三组间相比较存在着明显差别 (P <0 .0 5 ) ,其中bax在SS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2与其相反。p5 3在SS高表达组的阳性表达率明显低于低表达组 (P <0 .0 5 ) ;而p5 3在SS中表达组表达的阳性表达率低于低表达组 ,但其统计无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论　生长抑素对大肠癌细胞凋亡的调控可能与 p5 3、bcl 2、bax基因的异常表达有关     

The Relationship of Expression of bcl-2, p53, and Proliferating Cell Nuclear Antigen （PCNA） to Cell Proliferation and Apoptosis in Renal Cell Carcinoma

To investigate the relationship of bcl-2, p53, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) to cell proliferation, apoptosis and pathological parameters, the patterns of cell growth and turnover in renal cell carcinoma (RCC), formalin-fixed and paraffin-embedded tissue blocks from 34 patients with RCC were examined. Cell proliferation activity was detected by PCNA immunostaining and the proliferation index (PI) was expressed as a percentage of the PCNA-positive cells in the tumor cells. Apoptosis was detected by terminal deoxy- nucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL), and the apoptotic index (AI) was expressed as a percentage of the TUNEL-positive cells in the tumor cells. Expressions of bcl-2 and pS3 were assessed immunohistochemically. Our results showed that the PI ranged from 6.0 % to 24.0 % (median 12.3 %) and the AI from 2.0 % to 8.0 % (median 5.4 ~) in RCC. The expression of the bcl-2 protein was demonstrated in 15 cases (44. 1%); the expression of the p53 protein, however, was seen in only 3 case. bcl-2 positivity was not associated with PI or AI or any pathological parameters. There were close associations between PI and tumor grade and stage, and a significant relationship between AI and the tumor grade of RCC. Our study suggests that bcl-2 positivity was not associated with PI or AI or any pathological parameters. There are close associations between PI and AI and tumor grade and stage of RCC. Active cell proliferation may be accompanied by frequent apoptosis in RCC.     

功能失调性子宫出血和细胞凋亡与bcl-2及bax基因表达的关系

目的研究功能失调性子宫出血与细胞凋亡及其相关基因表达产物的关系。方法应用TUNEL技术检测30例正常月经周期的增生期子宫内膜,28例简单增生,2例复杂增生子宫内膜标本的凋亡指数（AI）。应用免疫组化方法检测bcl-2及bax基因在子宫内膜的表达。结果简单增生和复杂增生子宫内膜AI比正常增生期AI高（P〈0.05）;bcl-2基因在正常增生期表达比在简单增生和复杂增生表达略高,差异无显著性（P〉0.05）;bax基因在简单增生和复杂增生表达比在正常增生期表达高（P〈0.05）。结论功能失调性子宫出血的发病与细胞凋亡有关,且与bcl-2,bax表达相关。     

细胞凋亡及增殖细胞核抗原表达与大肠肿瘤生物学行为的关系

目的：探讨大肠肿瘤组织中细胞凋亡及增殖细胞核抗原（PCNA）表达与其生物学行为的关系。方法：应用免疫组化S－P法及凋亡细胞TUNEL检测法检测10例正常大肠黏膜，15例大肠腺和62例大肠癌标本中细胞增殖指数（PI）及凋亡指数（PI），并分析其与临床病理学参数间的关系。结果：在正常大肠黏膜，大肠腺瘤和大肠癌组织中PI，AI存在显差异（P＜0．05），腺瘤和腺癌组织AI和PI显高于正常黏膜组织；在腺瘤中，不典型增生I级与Ⅱ-Ⅲ级两组间AI和PI存在显差异（P＜0．05），且癌组织中PI高于均数，AI低于均数组淋巴结转移率明显高于其他组织（P＜0．01）。结论：细胞增殖与凋亡平衡失调是大肠黏膜上皮细胞恶性转化的重要因素，两联合检测对判断大肠肿瘤生物学行为及预后有重要意义。     

Caspase-3基因在大肠癌、大肠腺瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨大肠癌、大肠腺瘤中Caspase-3基因的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化S-P法和原位末端标记法分别检测28例大肠癌、10例大肠腺瘤及5例正常大肠黏膜中Caspase-3基因的表达水平及细胞凋亡。结果Caspase-3基因在大肠癌、大肠腺瘤和正常黏膜组织中表达分别为46．4％（13／28）、60．0％（6／10）、80.0％（4／5），三者之间有显著性差异（P〈0．01）。大肠癌、大肠腺瘤中细胞凋亡指数显著高于正常黏膜组织（P〈0．01），凋亡指数与肿瘤的分化程度有关（P〈0．01），与病理类型、Dukes分期无关。大肠癌、大肠腺瘤中Caspase-3基因表达与细胞凋亡指数密切相关，阳性表达的细胞平均凋亡指数明显高于阴性表达的平均凋亡指数（P〈0．01），而正常黏膜组织中二者无显著性差异（P〉0．05）。结论肿瘤早期阶段的细胞凋亡异常和过度增生，可能是大肠癌的发病原因之一，作为细胞凋亡的调控因子，Caspase-3可能在大肠癌的发生发展中起重要作用。     

Bcl-2、Bax在高温致神经管畸形发生中的表达

目的：探讨高温致畸中细胞凋亡的发生及其与bcl-2、bax基因表达的关系,进一步揭示高温致畸的机理。方法：在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上,用原位末端标记方法,观察神经管畸形发生过程中细胞凋亡的组织学改变,用免疫组织化学法对各期实验组和对照组鼠胚的神经上皮和周围间充质的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达进行了定性、定位和半定量观察。结果：①高温后8h鼠胚神经上皮和周围间充质的细胞凋亡迅速增加。至高温后16h达到高峰;②bel-2和bax蛋白正常分布于金黄地鼠胚胎的神经上皮和周围间充质中。高温后4h,实验组胚胎的神经上皮细胞的bcl-2、bax发生一过性表达增加,随后bcl-2均不同程度地低于对照组,bax则高于相应的对照组。结论：高温能干扰bcl-2和bax的表达,诱发神经上皮的凋亡,导致神经管畸形的发生。     

大肠腺瘤—腺瘤恶变—腺癌演进过程中PCNA，p53与细胞凋亡的表达及其关系

目的：观察大肠腺瘤－腺瘤恶变－腺癌演进过程中细胞凋亡与p53,PCNA的表达状况,探讨其内在联系,方法：利用DNA缺口末端标记技术,PCNA,p53蛋白免疫组织化学染色及p53与凋亡双重染色技术,原位观察大肠腺癌,腺瘤恶变区,腺瘤非恶变区及管状绒毛状腺瘤（分别为34,27,27及27例）标本中凋亡细胞和PCNA,P53阳性表达细胞密度及分布,以非肿瘤大肠粘膜（6例）作为对照。结果：腺瘤非恶变区凋亡细胞密度分别高于腺癌,管状绒毛状腺瘤及非肿瘤粘膜（P均＜0．01）,腺癌及腺瘤恶变区P53蛋白阳性细胞密度分别高于管状绒毛状腺瘤（P均＜0．01）和腺瘤非恶变区（P均＜0．01）及非肿瘤粘膜（P分别＜0．01）,腺癌PCNA阳性细胞密度分别高于腺瘤恶变区（P＜0．05）,管状绒毛状腺瘤（P＜0．01）,腺瘤非恶变区（P＜0．01）及非肿瘤粘膜（P＜0．01）,而腺瘤恶变区亦分别高于后3组（P分别＜0．01）,双染原位观察P53蛋白与凋亡细胞的分布发现：P63低表达区凋亡细胞分布则有增加趋势。结论：P53突变可能通过抑制细胞凋亡促进大肠癌的形成,而当突变型P53蛋白表达增加时,PCNA表达亦增加,提示P53突变的肿瘤具有较高的增殖活性,其中腺癌增殖程度最高。     

新城疫病毒对体外培养人膀胱癌EJ细胞凋亡作用机制研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)对体外肿瘤细胞的抑制作用机制。方法以人膀胱癌EJ细胞株为靶细胞,观察NDV对人膀胱癌EJ细胞的作用。结果NDV病毒能作用于体外培养膀胱癌细胞,光镜下细胞的贴壁率和生存率显著下降,电镜下可见到凋亡典型形态结构,TUNEL方法检测膀胱癌细胞有大量凋亡,新城疫病毒作用膀胱癌细胞24h凋亡细胞阳性指数(AI)为9.9%,48h凋亡细胞阳性指数(AI)为17.8%。免疫组化检测膀胱癌细胞有p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1表达增加而原癌基因bcl-2的表达降低从而诱导膀胱癌细胞凋亡。结论NDV病毒是一种有效抗肿瘤细胞的病毒,在体外具有明显的抑制肿瘤细胞作用。     

环孢菌素A诱导人白血病HL-60细胞株凋亡机制的研究

目的:观察环抱菌素A对人白血病HL-60细胞株凋亡的影响及其作用机制。方法:采用瑞氏染色、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对HL-60细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响HL-60细胞凋亡时bcl-2基因表达的改变情况。结果:20mg/L环孢菌素A作用6h可诱导HL-60细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪显示凋亡峰。细胞周期分析发现,环孢菌素A可使HL-60细胞生长阻滞于G_0-G_1期。环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组(P<0.01)。环孢菌素A处理组的bcl-2蛋白阳性率低于对照组(P<0.01)。结论:环孢菌素A可诱导HL-60细胞株凋亡,其机制可能是通过下调bcl-2基因表达。     

Effects of L-Tetrahydropalmatine on the Expressions of bcl-2 and bax in Rat after Acute Global Cerebral Ischemia and Reperfusion

Polygenesregulateapoptosis .bcl 2isananti apoptosisgene ,whilebaxisapro apoptosisgene .L Tetrahydropalmatine (L THP) ,akindofalkaloidextractedfromtraditionalChinesemedicineRhizomacorydalis,possessesanalgesic ,sedativeandhypnoticeffects.Recently ,ithasbeen…     

垂体腺瘤中凋亡抑制基因survivin的表达和bcl-2、p53相关性的研究

目的 :通过检测垂体腺瘤中的凋亡细胞 ,研究新的凋亡抑制基因survivin在垂体腺瘤组织中的表达及其与bcl- 2和 p5 3基因表达的相关性 ,探讨垂体腺瘤的发生与细胞凋亡的关系 ,以及survivin、bcl- 2、p5 3基因在垂体腺瘤AP发生中的调控作用。方法 :应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL)和免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 -过氧化酶连接法 (SP法 )检测 8例正常垂体组织和 4 8例不同分化程度的垂体腺瘤组织的细胞调亡和survivin、bcl- 2、p5 3基因的表达。统计学分析采用SPSS10 .0软件系统进行处理 ,检验水准取α=0 .0 5。结果 :本组 4 8例垂体腺瘤标本中 ,4 3例有不同程度的凋亡发生 ,凋亡细胞发生率为 89.6 % (4 3/ 4 8)。在非侵袭性垂体腺瘤组织中细胞凋亡指数 (apoptosisindex ,AI)平均为 12 .6 % ,在侵袭性垂体腺瘤组织中AI为2 .7% ,两者相比差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。survivin基因在正常垂体组织中不表达 ;4 8例垂体腺瘤组织中 ,32例表达阳性 ,占 6 6 .7% ;其中侵袭性垂体腺瘤survivin基因的阳性表达率为 81.5 % (2 2 / 2 7) ,非侵袭性垂体腺瘤为 4 7.6 % (10 / 2 1) ,两者相比 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。分泌型 (功能性 )垂体腺瘤中survivin基因表达阳性率为     

姜黄素诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究姜黄素在体外诱导宫颈癌H eL a细胞凋亡及其作用机制。方法:3H-脱氧胸苷掺入法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测HPV E 6的mRNA水平表达;W estern b lot检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax、P 53和P 21ras的蛋白水平表达。结果:姜黄素对H eL a细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式细胞仪和荧光双染法结果提示姜黄素可诱导H eL a细胞凋亡;RT-PCR提示姜黄素作用H eL a细胞后HPV E 6的mRNA水平表达逐渐降低;W estern b lot结果提示姜黄素能上调B ax、P 53和P 21ras的蛋白水平表达,而B cl-2的表达无明显影响。结论:姜黄素通过抑制HPV E 6的表达,恢复P 53的功能,引起细胞凋亡,起到杀伤肿瘤的作用。     

尖锐湿疣Fas、bcl—2、Ki—67的表达与细胞凋亡的关系

OBJECTIVE: This study inquired into the significance and relationship of apoptosis to the regulation and proliferation of condyloma acuminatum(CA). METHODS: Apoptotic cells were detected in situ by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated-dUTP nick end labeling (TUNEL). The detection of Fas, bcl-2 and Ki-67 expression was performed using immunohistochemical staining in 28 specimens of CA. RESULTS: Apoptotic cells were found in 24 cases (85.7%) in keratinocytes. All of the in 28 cases(100%) had Fas and Ki-67 positive expressions, but only 8 cases (28.6%) had bcl-2 mild or moderate expression. The disease severity (serious, moderate and mild) groups did not significantly differ in apoptotic index (AI), Fas, bcl-2 and Ki-67 positive expression (P > 0.05). There was positive correlation between AI and Fas(r = 0.866, P = 0.000). bcl-2 and Ki-67 were negatively correlated with AI (r = -0.416, P = 0.018; r = -0.475, P = 0.006). CONCLUSION: It is suggested that apoptosis in keratinocytes may play an important role in inhibiting the proliferation of virus, that Fas may be an upregulative factor and bcl-2 may be an inhibition factor to apoptosis, and that excessive Ki-67 expression may be associated with the acceleration of cell cycle.     

胆管癌组织中自发性细胞凋亡和bcl-2/bax表达的状况及意义

目的：研究胆管癌组织中自发性细胞凋亡和bcl-2/bax基因表达的状况及意义。方法：TUNEL法原位检测凋亡细胞，免疫组化检测bcl-2和bax蛋白表达。结果：40例胆管癌标本自发性细胞凋亡指数（AI）的中位值为7．89％，高／中分化和无淋巴结转移胆管癌AI分别高于低分化和淋巴结转移者（P＜0．01），胆管癌组织bcl-2和bax蛋白表达率分别为７２．５％（２９／４０）和５７．５％（２３／４０），与癌旁正常胆管壁组织比较差异显著（Ｐ＜０．０１），高／中分化胆管癌bcl-2蛋白表达率高于低分化胆管癌（P＜0．01），bcl-2表达阳性胆管癌AI低于阴性，bax阳性高于阴性（P＜0．01），结论：胆管癌细胞仍保胃凋亡机制，bcl-2凋亡途径参与了胆管癌的发生，发展过程，AI和bcl-2蛋白表达可作为判断胆管癌恶性程度的指标。