转人APP基因小鼠视网膜视神经细胞超微结构改变

目的 观察转人APP基因AD模型小鼠视网膜各层细胞超微结构的改变。 方法实验采用C57BL/ 6J 转人APP基因小鼠6只,采用同背景10个月龄的 C57 BL/ 6J正常小鼠6只做为对照。灌注处死小鼠,完整取出右眼球分离视网膜,制作电镜标本观察视网膜各层细胞超微结构改变。结果与对照组相比, 模型组视网膜各层细胞异常明显:膜盘排列结构模糊, 局部间隙溶解、甚至消失;外核层细胞体干枯变形,染色质聚集浓缩;内核层可见固缩细胞; 神经节细胞胞膜不完整, 线粒体水肿,并可见染色质聚集。结论转人APP基因AD模型小鼠视网膜各层神经细胞超微结构存在明显病理改变。     

不同类型脑震荡对基底前脑胆碱能神经元的影响

目的 通过免疫组织化学的方法,观察不同类型脑震荡大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响,初步探讨脑震荡认知障碍的机制。方法 成年SD大鼠36只,复制不同损伤程度的脑震荡模型,用胆碱乙酰转移酶（ChAT）标记基底前脑的胆碱能神经细胞,光镜下计数,并捡测反映ChAT活性的荧度值。结果 单纯型、复杂型脑震荡与对照组相比,复杂型脑震荡组与单纯性脑震荡组相比,大鼠基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支ChAT阳性表达细胞数减少,ChAT活性降低,差异具有显著性。结论 不同类型的脑震荡基底前脑胆碱能神经元变化程度不同,这种变化可能是脑震荡后不同程度认知障碍的病理学基础。     

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的 应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况.方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力.运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量.结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P＜0.01).空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041).APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P =0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P =0.089、0.059).APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P =0.076、0.074).结论 早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一.     

猫基底前脑内胆碱能神经元的分布、形态特征及隔——海马投射

本文用胆碱乙酰化酶(choline acetyltransferase ChAT)免疫组化法观察了猫基底前脑内胆碱能神经元的分布及细胞形态特征,并研究了在切断一侧伞一穹窿后,隔区胆碱能神经元消失情况。含有胆碱能神经元的核包括:内侧隔核、斜束带核、隔袱核、尾核、苍白球、下丘脑视前区和外侧区及冠状回邻近的皮质区。核中细胞呈多角形、卵圆形、梭形或三角形。以中型(20-25μm)和小型(<20μm)为常见,偶有大型的(>25μm)。切断一侧伞—穹窿后,术侧内侧隔核和斜束带垂直部胆碱能神经元比健侧的明显减少(P<0.01),说明此处胆碱能神经元发支经伞—穹窿投射至海马。     

神经生长因子和神经节苷脂GM1联合应用对鼠基底前脑胆碱能神经元的保护作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)和神经节苷脂GM1联合应用对基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用.方法 实验分为NGF组、NGF+神经节苷脂GM1组和单纯对照组.取孕20 d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种子24孔培养板中,按分组加入NGF、NGF+神经节苷脂GMI和不含神经营养因子的DMEM培养液,分别于体外培养12、18、24、30 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应.显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数,每孔随机测量和计数20个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度.数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理.结果 在培养的4个时期,NGF组和联合组的各项数据均明显优于单纯对照组,神经节苷脂GM1+NGF组的各项数据,特别是最长突起长度优于单独使用NGF组.结论 NGF和神经节苷脂GM1联合应用及NGF单独应用不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用,而且还可延缓体外长期培养的人鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变;联合应用效果更佳.     

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。     

Spatial learning deficits in amyloid precursor protein 770 transgenic mice

Objective To determine whether learning deficits could be seen in transgenic mice expressi ng human amyloid precursor protein 770 (APP770).Methods Female heterozygous transgenic and nontransgenic mice aged 3, 6 and 9 months at the start of testing were used, with eight mice in each age group.All mice wer e subjected to various behavioral tasks including the Y-maze task and the Morri s water maze.After behavioral testing, the mice were sacrificed, and their bra in tissues were used for measuring the choline acetyltransferase (ChAT) activity . Results Nine-month-old transgenic mice exhibited spatial learning deficits in the Morr is water maze and in spontaneous alternation in the Y-maze, compared with those o f the age-matched non-transgenic mice.The behavioral changes accompanied a red uction of ChAT activity in the cortical and hippocampal regions of transgenic mi ce.On the other hand, these behavioral deficits were not observed in transgeni c mice either at 3 or at 6 months of age, in which ChAT activity remained unchan ged. Conclusions The present results show that the learning impairment observed in 9-month-old APP770 transgenic mice are accompanied by a decrease in cortical and hippo campal ChAT activities.This suggests that cholinergic deficits may be involved in the learning impairment observed in these APP770 mice.This model wi ll be a useful tool in advancing our understanding of the relationship between t he cholinergic system and the cognitive deficits observed in Alzheimer’s disease (AD).     

大鼠基底前脑Nestin阳性神经元表达雌激素α受体

目的:探讨雌激素对基底前脑巢蛋白(Nestin)阳性神经元的作用机制。方法:采用免疫组织化学技术观察大鼠基底前脑Nestin阳性神经元雌激素α受体的表达。结果:大鼠基底前脑有20%-40%的Nestin阳性神经元表达雌激素α受体。结论:雌激素可通过雌激素α受体对大鼠基底前脑Nestin阳性神经元进行调节。     

梓醇对APP/PS1双转基因小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响

目的：观察梓醇对APP/PS1双转基因小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响。方法：将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠按随机数字表法分为梓醇治疗组和生理盐水对照组,每组10只,用梓醇[（5 mg/（kg·d）]和等量生理盐水腹腔注射阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠3周,应用高架十字迷宫检测两组小鼠的焦虑情绪的变化;应用免疫组织化学染色和Western blot检测脑内神经元及突触相关蛋白的表达变化。结果：与生理盐水对照组比较,梓醇治疗组小鼠进入开放臂的次数（P=0.000 2,t=4.742）和时间（P=0.001,t=3.936）显著增加,神经元数量（P=0.028 4,t=2.872）及突触蛋白表达（P=0.002,t=5.265）明显增多。结论：梓醇治疗能显著缓解AD模型小鼠的焦虑情绪,这种改善作用可能是通过改善神经元及突触的丢失来实现的。     

大鼠基底前脑中神经降压肽样和甘丙肽样神经元的老年变化

作者用免疫组化法及显微分光光度计研究了年轻(4—5月)及老年(2—24月)大鼠基底前脑中神经降压肽样(NT-L)和甘丙肽样(GAL-L)胞体及纤维终末的老年变化,NT-L胞体主要位于基底前脑的外侧隔核(LS),斜角带核(DBN)及腹侧苍白球(VP)中,NT-L纤维终末主要位于LS及VP中,GAL-L胞体主要位于内侧隔核(MS)及DBN中,LS和VP中仅有少量纤维终末。老年大鼠LS,DBN及VP中NT-L胞体的数量以及MS,DBM中GAL-L胞体的数量均比年轻大鼠明显减少,光吸收率明显下降,我们的结果表明大鼠基底前脑中的NT-L及GAL-L神经元有明显的老年变化,此种变化的意义有待进一步研究。     

不同月龄阿尔茨海默病模型小鼠行为学改变与胆碱酯酶活性的关系

目的：研究不同月龄淀粉样前体蛋白（APP）转基因小鼠学习记忆功能,脑皮质,海马胆碱酯酶以及突触蛋白-Ⅰ的变化.方法：采用Morris水迷宫测试学习、记忆功能,比色法测定胆碱酯酶活性,免疫组织化学法测定突触蛋白-Ⅰ变化.结果：6,9,12mo APP阳性转基因小鼠（APP^＋）学习、记忆能力明显降低,9～12月龄降低尤为显著;皮层,海马胆碱酯酶活性降低,且皮层胆碱酯酶活性下降更为明显;海马CAⅠ区突触蛋白-Ⅰ的表达随着月龄的增加而减少.结论：APP转基因小鼠学习、记忆功能与海马内胆碱酯酶活性及突触蛋白-Ⅰ的表达呈负相关.说明在阿尔茨海默病（AD）的发病机制中乙酰胆碱的变化和神经突触的萎缩都是重要原因.     

雌激素β受体免疫阳性物质在生后不同发育时期小鼠基底前脑的表达研究

目的 研究出生后不同发育时期小鼠基底前脑内雌激素β受体（ER－β）的表达。方法 采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化S－P法。结果 小鼠基底前脑内ER－β免疫阳性物质位于细胞核。新生时在两性基底前脑ER－β免疫阳性细胞数目较少，生后第14天至3月龄时最多，老龄（18月时）表达显著减少甚至消失，尤其在雌性更明显。ER－β的表达具有一定的性别差异，表现为生后早期和老龄时雄性表达强于同期雌性。结论 小鼠生后不同发育时期基底前脑内ER－β蛋白表达的变化与循环雌激素水平的变化一致，表明该受体可能参与了雌激素对基底前脑神经结构与功能的调节。     

银杏内酯对体外培养的大鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响

目的 :探讨银杏内酯对体外培养的鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响。方法 :实验分成银杏组、NGF组和单纯对照组。取 E17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF及不含上述成份的 DMEM培养液 ,于体外分别培养 18d和 3 0 d后 ,用 TUNEL 法检测细胞凋亡情况 ,显微镜下计数各组的凋亡细胞。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果 :培养 18d和 3 0 d两个时期的银杏组凋亡细胞数均明显少于单纯对照组 ( P<0 .0 1) ,而略多于 NGF组 ,但其差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :银杏内酯具有类似NGF的作用 ,可有效抑制体外培养的胚基底前脑神经元凋亡     

H102对APP转基因小鼠脑内IDE和NEP表达的影响

目的:观察H102对β淀粉样蛋白前体(APP)转基因小鼠脑内胰岛素降解酶(IDE)及脑啡肽酶(NEP)的影响.方法:将APP转基因小鼠随机分为模型组和给药组,每组10只;并设10只同月龄同背景C57BL/6J小鼠为对照组.对照组、模型组每日侧脑室注射生理盐水,给药组每日注射H102(80 μmol/L)生理盐水溶液.4周后行Morris水迷宫测试.之后采用免疫组化方法观察小鼠脑组织内IDE及NEP阳性细胞的表达变化及蛋白质免疫印迹技术半定量检测两者的含量.结果:(1)Morris水迷宫测试:给药组小鼠比模型组小鼠学习记忆能力提高(P＜0.05,P＜0.01).(2)免疫组化测试:给药组及对照组小鼠脑内IDE及NEP阳性细胞表达均比模型组增强(P＜0.01).(3)蛋白质免疫印迹检测结果:对照组及给药组小鼠脑组织内Aβ42与APP含量均低于模型组(P＜0.01),且IDE与NEP含量均高于模型组(P＜0.01).结论:H102可提高APP转基因小鼠脑内IDE及NEP的活性及含量,改善学习记忆能力,降低Aβ及APP的水平,有助于改善阿尔茨海默病(AD)病情,为治疗AD提供前景.     

Synphilin-1转基因小鼠纹状体多巴胺代谢变化的研究

目的探讨Synphilin-1蛋白对小鼠黑质纹状体多巴胺能神经元递质传递的影响。方法利用转基因技术制备Synphilin-1转基因小鼠（转基因组,11只）,另以野生型小鼠为非转基因组（11只）作对照。通过加速转圈测试和足迹分析观察两组小鼠的运动能力。分别测定两组小鼠的多巴胺及其代谢产物,并且测定参与纹状体多巴胺代谢酶的表达水平,进行分析比较。结果转基因组小鼠的运动能力较非转基因组下降（转圈能力减弱、步长较短）,且转基因组小鼠表现为短暂步态。Synphilin-1蛋白使黑质纹状体多巴胺能神经元的多巴胺代谢产物/多巴胺的比例明显下降（P＜0.05）,而参与多巴胺代谢的酶的含量并无明显变化（P＞0.05）。结论Synphilin-1蛋白引起小鼠运动能力损害,对黑质纹状体多巴胺代谢影响主要是通过改变突触前膜多巴胺能神经元递质传递来实现的。     

刺五加皂甙对胚基底前脑AChE阳性神经元发育的影响

目的:探讨刺五加皂甙(Acanthopanax Senticousus Saponins,ASS)对胚基底前脑乙酰胆碱酯酶(acetyl-cholinesterase,AChE)阳性神经元发育的影响。方法:将孕17 d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于24孔培养板中。分别加入含12.5、25、50、75 mg/L的ASS(ASS组),或100 ng/mL的神经生长因子(nerve growth factor,NGF组),及不含上述成份(对照组)的DMEM培养液,于体外培养18 d后,进行AChE组织化学染色,显微镜下统计各组每孔中的AChE阳性神经元数,并用CMM-301图像分析系统对AChE阳性神经元的细胞面积和细胞周径进行统计,数据用单因素方差分析进行统计学处理。结果:ASS各质量浓度组AChE阳性神经元数量均显著多于对照组(P<0.01);ASS各质量浓度组AChE阳性神经元的面积和周径的指标亦明显好于对照组(P<0.01)。结论:ASS可能通过促进胚基底前脑AChE阳性神经元的发育来改善认知功能。     

EGCG对 APP/PS1 双转基因小鼠神经突触损伤的保护作用

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epi-gallocatechin-3-gallate,EGCG）对APP/PS1 双转基因小鼠中神经突触损伤的保护作用及其可能机制。方法：实验采用APP/PS1 双转基因小鼠,随机分为模型组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）、EGCG组[20 mg/（kg?d）,EGCG灌胃],每组 10 只,另以同窝同性别阴性小鼠10只设立正常组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）,共 3组。Morris 水迷宫实验测试各组小鼠逃避潜伏期和跨越平台变化,电镜观察各组小鼠海马神经元损伤情况,免疫组化法检测小鼠海马PSD95、GAP43 表达,RT-PCR检测小鼠海马PSD95 mRNA、GAP43 mRNA含量。结果：模型组逃避潜伏期明显延长,海马神经元损伤严重,PSD95表达下降、GAP43表达增高。免疫组化结果表示,EGCG组PSD95平均光密度高于模型组[（0.11±0.03） vs. （0.05±0.02）,P=0.001],EGCG组GAP43平均光密度低于模型组[（0.10±0.03） vs. （0.16±0.04）,P=0.002]。RT-PCR检测结果再次验证,EGCG组PSD95 mRNA表达高于模型组[（0.82±0.11） vs. （0.50±0.06） ,P=0.000],EGCG组GAP43 mRNA表达低于模型组[（1.12±0.11） vs. （1.56±0.16）,P=0.000]。结论：EGCG对 APP/PS1 转基因小鼠的空间学习记忆和突触损伤具有明显的改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高PSD95表达、下调GAP43 表达有关。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元ChAT表达的影响

目的 观察淀粉样前体蛋白/早老素1( APP/PS1)双转基因小鼠海马CA1区神经元胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达,评价姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆的影响.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组及姜黄素大、中、小剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组.各治疗组每天灌胃给药1次,连续灌胃3个月.应用跳台实验、免疫组织化学和蛋白质印迹( Western-blot)检测学习记忆能力和海马神经元ChAT的变化.结果 与正常组小鼠相比,模型组小鼠潜伏时间显著缩短(P＜0.01),与模型组小鼠相比,姜黄素各剂量组小鼠潜伏时间增加(P＜0.05或P＜0.01).免疫组化检测,模型组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞较正常对照组明显减少(P＜0.01),而姜黄素干预组可以使其不同程度地恢复.Western blot检测,模型组小鼠海马ChAT的蛋白表达条带比正常组小鼠明显变细、颜色变浅(P＜0.01);姜黄素干预组小鼠海马ChAT的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P＜0.05或P＜0.01).结论 姜黄素能通过增加ChAT的蛋白表达,促进阿尔茨海默(AD)模型动物神经传导障碍,进而改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力.     

银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响

目的:探讨银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响及可能的作用机制。方法:实验分银杏组、神经生长因子(NGF)组、脑原神经营养因子(BDNF)组和单纯对照组。取孕17天SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成分的DMEM培养液。于体外培养18天后,96孔培养板行MTT比色分析测定光密度值(A值),以检测培养的神经元活力。2块24孔培养板分别行NADPH-d和AchE组织化学染色,显微镜下计数各组每孔中一氧化氢合酶(NOS)、AchE阳性神经元数目,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理,数据用方差分析、SNK检验作统计学处理。结果:银杏组MTT比色分析的A值和NOS、AchE阳性神经元数目、细胞面积、细胞周长等指标均优于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论:银杏内酯在促进大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育方面具有类似NGF或BDNF的作用。     

5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变

目的 评价5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑部病理改变。方法 5月龄APP/PS1（+/-）小鼠,采用Morris水迷宫实验评价空间学习记忆功能,免疫组织化学和刚果红染色观察淀粉样斑块沉积情况。结果 Morris水迷宫实验显示APP/PS1（+）小鼠逃避潜伏期明显长于APP/PS1（-）小鼠,表明5月龄APP/PS1（+）小鼠已经出现了空间学习记忆功能的损害。新物体识别实验中5月龄APP/PS1（+）小鼠对新物体的分辨指数无显著降低,免疫组化、刚果红染色显示5月龄APP/PS1（+）小鼠海马及皮质均出现斑块沉积。结论 5月龄APP/PS1双转基因小鼠出现空间学习记忆功能损害,小鼠脑内已经出现相应的病理改变。