五味子乙素对转染多药耐药1基因的MCF-7细胞的多药耐药逆转作用

目的 探讨五味子乙素(SchB)对转染多药耐药1基因(MDR1)的人乳腺癌细胞MCF-7的多药耐药逆转作用及相关机制。方法 将人MDR1基因导入MCF-7细胞,形成耐药细胞株MCF-7／MDR1;用该细胞株为模型评价SchB的体外逆转多药耐药作用,用MTT法进行化疗药物单独或与SchB联合作用时对耐药细胞的IC50比较,计算逆转倍数。结果 转染细胞MCF-7／MDR表现为P糖蛋白高表达,对阿霉素、长春新碱、紫杉醇、高三尖杉酯的抗药性均增加;SchB(25μmol／L)显著减少阿霉素、长春新碱、紫杉醇和高三尖杉酯对MCF-7／MDR细胞的IC50,逆转倍数达6．03-23．94倍;SchB(25μmol／L)使MCF-7／MDR细胞对若丹明123的胞内积聚增加约5倍。效果与维拉帕米10μmol／L浓度时相当;但SchB(25μmol／L)不影响MCF-7／MDR细胞的P-糖蛋白表达。结论 SchB能有效逆转转染MDR1的MCF-7细胞的多药耐药,其机制可能是抑制了P-糖蛋白的药物外排生物学活性。     

mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势.方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积.结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCR mdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85.杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质.免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱.P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上.SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强.SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P＜0.05).SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P＜0.001).结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中.     

内皮素及其受体对心脏细胞肥大与增殖的作用

目的观察内皮素-1(ET-1)及其受体(ETR)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的作用。方法体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的ET-1作用细胞24h,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白质合成,Bradford法测定细胞总蛋白含量,RT-PCR法测定心肌细胞心钠素(ANP)mRNA的表达;用针对ETA受体(ETAR)、ETB受体(ETBR)的特异性拮抗剂BQ123、BQ788分别阻断两个受体,观察两种受体的作用。结果ET-1显著促进心肌细胞和心脏成纤维细胞3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,ET-1的作用呈剂量依赖性,并且使心肌细胞ANP mRNA表达明显增加,ET-1的作用可被ETAR拮抗剂BQ123明显抑制,ETBR拮抗剂BQ788对此无影响。结论ET-1促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ET-1的作用通过ETAR介导,ETBR对此无明显作用。     

内皮素-3对A375人类恶性黑素瘤细胞株骨桥蛋白基因表达的影响

目的研究内皮素3（ET3）对A375人类恶性黑素瘤细胞株骨桥蛋白（OPN）基因表达的影响。方法体外培养A375细胞株，分别设立对照组，ET3不同浓度（1、10、100nmol／L）实验组和ET-3同一浓度（100nmol／1．）不同时间（6、12、18、24、30、36h）实验组，采用RT-PCR和Westernblot结合吸光度分析技术检测骨桥蛋白基因表达情况。结果不同浓度的ET3能显著上调A375细胞株骨桥蛋白基因表达，与对照组比较差异有统计学意义，并且这种E调效应呈剂量依赖性。不同浓度干预组组间比较差异有统计学意义。在100nmol／LET-3浓度条件下，随着培养时间的延长，OPN的表达逐渐增加，24h达到高峰，随后缓慢下降，RTPCR结果吸光度分析显示各时间段实验组与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05），6、12、18、24h实验组组间比较除6h和12h组间差异无统计学意义外，其余各组组间差异均有统计学意义，24、30、36h实验组组间比较差异有统计学意义。Westernblot吸光度分析显示各时间段实验组与对照组比较差异有统计学意义，6、12、18、24h实验组组间以及24、30、36h实验组组间比较差异有统计学意义。结论ET-3能时间和剂量依赖性地上调A375细胞株骨桥蛋白基因的表达。     

ET-1及受体在不明原因复发性流产绒毛中的表达及其对滋养细胞迁移的调节

目的 通过检测内皮素-1(endothelin-1, ET-1)及受体(endothelin receptors, ETR)在不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)绒毛组织中的表达,探讨其与URSA的关系。方法不明原因复发性流产患者30例(RSA组)及正常早孕人流妇女30例(正常组,即CTL组),采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)及Western印迹法检测两组绒毛组织中ET-1、ETR-A、ETR-B mRNA及蛋白的表达。取体外培养的妊娠早期绒毛外滋养细胞Transwell迁移实验法检测ET-1、ETR-A阻断剂BQ-123及ETR-B阻断剂BQ-788受体对绒毛外滋养细胞迁移能力的影响。结果RSA组较正常组绒毛组织中ETR-B mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ET-1、ETR-A mRNA及蛋白在二组绒毛组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。ET-1促进HTR-8细胞迁移,ETR-B阻断剂阻断ET-1的促迁移作用。结论 ET-1可能通过ETR-B受体促进妊娠早期绒毛外滋养细胞迁移,URSA患者较正常组绒毛中ETR-B mRNA及蛋白表达降低可能与URSA相关。     

COPD患者血浆中ET-1和EDNRB含量变化及临床意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）患者血浆内皮素-1（endothelin-1,NET-1）及内皮素受体B（endothelin receptor B,EDNRB）含量变化与COPD发生的关系;这两项指标之间的相关性以及吸烟是否会影响血浆中ET-1及EDNRB的浓度发生变化。方法采用ELISA法测定血浆ET-1、EDNRB的含量。结果COPD患者急性加重期血浆中ET-1和EDNRB的浓度明显高于健康对照组（P〈0．05）,ET-1与EDNP,B含量经统计学处理呈正相关（r=0．284,P〈0．05）。吸烟与非吸烟组ET-1和EDNRB血浆含量的变化无统计学差异（P〉0．05）。结论ET-1、EDNRB是参与COPD急性期发病过程的重要因素。     

槲皮素对白血病细胞中膜转运蛋白的调节作用

目的 探讨槲皮素对白血病细胞中膜转运蛋白的调节作用。方法 通过四唑蓝(MTT)体外药敏法证明槲皮素对柔红霉素的增敏作用，作用于K562／ADM和HL-60／ADM耐药株及相应敏感株K562／S和HL-60／S，采用RT-PCR和流式细胞术检测多药耐药基因(Mdr1)和多药耐药相关基因1(MRP1)及其膜蛋白产物P-170糖蛋白(P-gP)和MRP1蛋白的表达情况。结果 终浓度为20～40umol／L的槲皮素在体外能明显提高柔红霉素对K562／ADM和HL-60／ADM耐药株的敏感性，并能下调Mdr1和MRP1基因及其膜蛋白产物P-gP和MRP1蛋白的表达，从而逆转多药耐药，且有效浓度范围的药物对细胞本身无毒性作用。结论 槲皮素有可能成为蒽环类药物治疗白血病中有效且低毒的化疗增敏剂。     

耐药蛋白表达对NSCLC患者预后的影响

目的探讨P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP1）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测66例临床资料完整的NSCLC患者肿瘤组织中3种耐药蛋白的表达情况,分析耐药蛋白表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果P-gp、MRP1和BCRP在NSCLC组织中总阳性表达率分别为40.91%、72.73%和43.94%,P-gp的表达分别与性别、年龄、吸烟史、病理类型相关;MRP1的表达与病理类型相关;BCRP的表达与年龄相关。患者整体生存时间与TNM分期和P-gp、MRP1共同表达有关;腺癌组患者生存时间与TNM分期和P-gp表达有关。结论P-gp和MRP1可以作为预测NSCLC患者预后的指标,BCRP的表达和预后无关。     

内皮素受体拮抗剂对肝硬变门静脉高压症大鼠门静脉压及ET-1 mRNA表达的影响

目的 :探讨内皮素受体拮抗剂在肝硬变门静脉高压症大鼠降压中的作用。方法 :32只雄性SD大鼠 ,随机分成 4组 ,每组 8只。其中模型对照组、BQ 12 3组、BQ 788组制备CCl4诱导的肝硬变模型 ,后 2组于造模成功后每d 2次分别皮下注射BQ 12 3(12 .5 μg/kg)和BQ 788(15 μg/kg) ;正常对照组 (NL) ,普通饲养 ,不做任何处理。采用生理八导仪测定门静脉压力 (PVP) ;RT PCR测定大鼠肝组织ET 1mRNA表达水平。结果 :BQ 12 3组 ,BQ 788组的PVP及肝组织ET 1mRNA表达量均较模型对照组显著降低 (P均 <0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差异无统计学意义 ;模型对照组、BQ 12 3组、BQ 788组PVP与其ET 1mRNA的表达水平明显相关 (r分别 0 .94 4 ,0 .837和 0 .85 5 ;P均 <0 .0 5 )。结论 :应用内皮素受体拮抗剂能显著降低肝硬变门静脉高压症大鼠的PVP。     

胃上皮永生细胞、胃腺癌细胞和胃腺癌淋巴结转移细胞多耐药基因1和P-糖蛋白的表达

目的:探讨胃上皮永生细胞、胃腺癌细胞和胃腺癌淋巴结转移细胞中多耐药基因1(mdr1)和P-糖蛋白(P-gp)的表达.方法:常规培养胃上皮永生细胞系(GES-1)、胃腺癌细胞系(BGC823)和胃腺癌淋巴结转移细胞系(SGC7901)细胞,用RT-PCR和原位杂交检测此3种细胞的mdr1 mRNA表达,用免疫印迹和免疫组化检测它们的P-gp表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积以判断它们的P-gp功能状态.结果:在原位杂交的标本上,杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质.GES-1细胞颗粒数量少,BGC823颗粒数量多,细胞轮廓十分明显;SGC7901颗粒细小而少,少数细胞杂交信号丰富.免疫印迹显示GES-1 P-gp的表达较BGC823和SGC7901弱;GES-1 P-gp积分光密度为46.36±19.24,BGC823为61.32±28.46,SGC7901为50.45±21.36,BGC823的P-gp表达强于SGC7901和GES-1(P＜0.05),SGC7901和GES-1的差异无统计学意义(P＞0.05).GES-1阿霉素特异荧光强度为10.12±4.18,BGC823为27.44±7.06,SGC7901为35.88±14.55,3者相比差异有统计学意义(P＜0.001).结论:在胃癌的发生发展中,细胞对抗肿瘤药的反应性不同,随着细胞恶性变,P-gp介导的耐药性增加.     

The Expression of Endothelin Receptor B in Melanoma Cells A375 and Sk-mel-1 and the Proliferative Effects of Endothelin 3 on A375 Cells

In order to investigate the expression of endothelin receptor B （ETR-B） in human malignant melanoma （MM） cells A375 and SK-mel-1 and the proliferative effects of endothelin 3 （ET3） on A375 cells, RT-PCR was applied to detect the expression of ETR-B gene in human MM cells A375 and SK-mel-1. MTT method was used to evaluate the growth enhancing effects of ET3 on A375 cell line in vitro. The results showed that ETR-B gene was expressed in both MM A375 and SK-mel-1 cells. ET3 had stronger ability to enhance the proliferation of A375 cells in vitro in a concentration-dependent manner. It was suggested that ET3/ETR-B might play an important proliferative role in MM.     

恶性淋巴瘤mdr1和MRP mRNA及 P-gp表达水平与化疗疗效的相关研究

目的探讨恶性淋巴瘤mdr1、MRP mRNA和P-gp表达水平与化疗疗效的相关性.方法应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术和流式细胞术(FCM)方法,以8例人正常淋巴结为正常对照,对46例淋巴瘤患者[23例初治(HD1例,NHL22例)及23例复发(HD5例,NHL18例)]的mdr1 mRNA、MRP mRNA和P-gp表达水平与化疗疗效间的关系进行了前瞻性研究.结果复发患者mdr1基因和P-gp表达水平及阳性率均高于初治患者(P<0.001),而MRP基因表达水平及阳性率在复发与初治患者间差异无显著意义(P>0.05).mdr1基因及P-gp表达阳性患者的化疗有效(CR+PR)率(33.33%和26.67%)明显低于mdr1基因及P-gp表达阴性患者(85.71%和83.87%,P<0.001),而MRP基因表达阳性患者与阴性患者的化疗有效率差异无显著意义(P>0.05).相关分析显示,mdr1基因和P-gp表达水平之间有明显相关性(r=0.296 3,P<0.05),而mdr1和MRP之间、MRP与P-gp之间均无明显相关性(r=0.072 3,P>0.05;r=0.081 8,P>0.05).结论 mdr1基因及P-gp表达是恶性淋巴瘤患者多药耐药的主要机制,而MRP基因不是产生耐药的主要机制.mdr1基因及P-gp表达水平的高低与恶性淋巴瘤化疗疗效密切相关,而MRP基因的表达与化疗疗效未见相关.     

多药耐药基因产物和激素受体在乳腺癌中的表达及意义

目的：探讨多药耐药基因产物谷胱甘肽转移酶π（ GST-π）、肺耐药相关蛋白（ LRP）和DNA拓扑异构酶Ⅱ（ TopoⅡ）和雌激素受体（ ER）、孕激素受体（ PR）在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义,并分析多药耐药基因产物与雌、孕激素受体之间是否有关联。方法应用免疫组织化学SP二步法检测194例乳腺浸润性导管癌组织中GST-π、LRP、TopoⅡ、ER、PR的表达,且结合乳腺癌临床病理因素进行分析。结果194例乳腺浸润性导管癌组织中GST-π、LRP、TopoⅡ表达的阳性率分别为62.4％、81.4％、51.5％。 LRP和TopoⅡ在伴有淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者中的表达高于无淋巴结转移者（ P＜0.05）,而与患者年龄、肿块长径、组织学分级、TNM分期等临床病理因素之间无相关性（P＞0.05）;LRP和TopoⅡ的表达与ER、PR的表达均无明显相关性（ P＞0.05）。 GST-π的表达与ER、PR的表达呈负相关（ P＜0.05）,而与其它临床病理因素之间未见相关性（ P＞0.05）。 LRP、GST-π、TopoⅡ两两之间无相关性（ P＞0.05）。结论 GST-π、LRP、TopoⅡ与乳腺浸润性导管癌的多药耐药有关,且LRP和TopoⅡ与乳腺癌的转移有一定关系,GST-π与ER、PR负性相关。联合检测可为乳腺癌的临床化疗药物选择及评估预后提供依据。     

鼻咽癌中P糖蛋白和多药耐药相关蛋白-1的研究现状及其应用

进一步提高晚期鼻咽癌( nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者生存率的主要障碍是较高的远处转移率,出现远处转移的主要原因之一是由P糖蛋白( P-glycoprotein,Pgp)和多药耐药相关蛋白-1(multidrug resistance associated protein 1,MRP1)...     

耐药逆转剂对人乳腺癌细胞P-糖蛋白、EMMPRIN和MMP表达的影响

 目的 观察耐药逆转剂川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人乳腺癌MCF7/Adr细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶诱导物(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对MCF7/Adr细胞的毒性作用;荧光分光光度法测定细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)的荧光强度;Realtime RT-PCR和Western blot检测细胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9 mRNA和蛋白水平的变化。结果 TMP与ADM联合作用于细胞,与单用ADM相比,ADM对细胞的杀伤效应及细胞内ADM的荧光强度明显升高(P＜0.05),且有浓度依赖性;与对照组相比,ADM能上调细胞P-gp、EMMPRIN和MMP2、MMP9蛋白表达;TMP能抑制ADM对细胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上调作用。结论 TMP在有效逆转肿瘤多药耐药的同时,还能抑制ADM对P-糖蛋白、EMMPRIN、MMP2和MMP9的上调。     

Retroviral-mediated transfer and functional expression of multidrug resistance gene in human placenta mesenchymal stem cells

Background Most of gynecologic malignancies are sensitive to chemotherapy. Myelosuppression is the main dose-related toxicity of many chemotherapeutic drugs. The human multidrug resistance （mdrl） gene is well known for its ability to confer drug resistance. This study aimed to explore the feasibility of expression and resistance of mdrl gene transduction into human placenta mesenchymal stem cells （P-MSCs） by retrovirus vector. Methods Human P-MSCs were isolated from trypsin-digested term placentas, and their immunophenotypes and differentiation potential were evaluated. Human P-MSCs were transduced by reconstructed retroviral vector containing the mdrl gene and green fluorescent protein （GFP） reporter gene. The integration and expression of the mdrl gene were observed indirectly by the expression of GFP, and fluorescence-activated cell sorter was used to evaluate the functional activity of permeability glycoprotein （P-gp） encoded by the mdrl gene. The stimulating test was made in vitro to show pleiotropic drug resistance of transfected cells. Results The isolated, cultured and expanded P-MSCs expressed stem cell markers such as CD29, CD44 and CD73, and showed osteogenic and adipogenic differentiation potentials under appropriate conditions. The expression of P-gp in the non-transfected P-MSCs cells was （0.4±0.1）%, but increased to （28.1±4.7）% after gene transfection （P〈0.01）. And positive staining of P-gp located mainly at cell membrane and cytoplasm. Accumulation and extrusion assays showed that P-gp expressed by the transfected cells had pump-functional activity and could efflux daunomycin out of cells. The analysis of cell survival confirmed that transfected P-MSCs had a characteristic of multidrug resistance with a significant increase in the resistance to anticancer agents. Conclusions Transfer and expression of human mdrl gene mediated by retrovirus vector conferred P-MSCs drug resistance. It might provide a new alternative to chemoprotection strategies.     

胃癌多药耐药基因1表达及其与生物学行为的关系

目的了解胃癌多药耐药基因1(mdr1)的表达及其与生物学行为的关系。方法应用现代信息技术,收集有关文献进行综合分析。结果正常和病理胃均可表达mdr1,胃癌的mdr1表达水平最高。胃癌的mdr1表达和胃癌对抗肿瘤药物敏感性及病人的生存期、生存率呈负相关,和组织分化、肿瘤浸润、分期及转移的关系不肯定,和肿瘤发生部位、大小、组织类型、患者年龄、性别之间无相关性。结论胃癌mdr1基因表达和生物学行为相关。     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

TP化疗方案联合康莱特治疗宫颈癌的效果及对血清CYFRA21-1、CK19水平的影响

Objective: To study the effect of TP chemotherapy regimen combined with Kanglaite in the treatment of cervical carcinoma and its effect on the serum level of CYFRA21-1 and CK19. Methods: 74 patients with cervical carcinoma were admitted in our hospital from October 2015 to May 2017 and were randomly divided into observation group and control group according to random digital table method, 60 cases in each group. The control group was treated with TP chemotherapy and the observation group was treated with TP chemotherapy regimen combined with Kanglaite. The clinical efficacy, the quality of life, serum CYFRA21-1 and CK19 levels and adverse reactions were compared between the two groups before and after treatment. Results: After treatment, the clinical effective rate(83.78%) in the observation group was significantly higher than that of control group (62.16%), u=4.390,P=0.036, with statistical significance(P<0.05). The KPS scores of the two groups were significantly decreased, and the KPS scores in the observation group were significantly higher than those in the control group(u=6.538,P=0.000). After treatment, the serum levels of CYFRA21-1 and CK19 were significantly decreased in both groups, and the levels in the observation group were significantly lower than those in the control group (u = 6.659, 8.647, P=0.000). The adverse reactions were mainly myelosuppression, gastrointestinal reaction and phlebitis. The incidences of myelosuppression and gastrointestinal reaction of grade III-IV in the observation group were significantly lower than that in the control group, while the incidence of phlebitis was significantly higher in the observation group than in the control group ((u = 2.160, 2.000, 4.16, P = 0.030, 0.045, 0.041, respectively). Conclusion: The effect of TP chemotherapy regimen combined with Kanglaite on cervical carcinoma is significantly. It can effectively reduce serum CYFRA21-1 and CK19 levels, improve the quality of life and safety, which is worth popularizing in clinical application.