乙型脑炎病毒反向遗传学系统的建立及应用

目的探讨乙型脑炎病毒反向遗传学系统在临床中的应用价值。方法对在我院自2011年12月至2013年1月接受治疗的80例乙型脑炎病毒患者资料进行回顾性分析，医护人员根据患者住院时间将其分为实验组和对照组，每组有患儿40名。对照组患者采用传统方法进行治疗，实验组患者在传统方法基础上利用分子生物学技术构建获得乙型脑炎病毒复制子，比较两组患者的诊断效果及其价值。结果实验组患者总有效率为95％，优于对照组患者；两组患者神经功能状况指数、患者意识评分等指标治疗前没有差异性，患者治疗后，两组患者指标明显改善，实验组患者改善效果更好FEVl（87．2±10．5VS70．1±8．2）。结论临床上医护人员对乙型脑炎病毒在常规诊断和治疗基础上利用反向遗传学技术临床上效果较好，患者确诊率较高，能够为治疗乙型脑炎病毒提供依据，值得推广使用。     

Ⅰ型脊髓灰质炎病毒型内差异诊断方法的比较

将分子生物学方法、免疫学方法及生物学方法相结合，用于Ｉ型脊髓灰质炎病毒型内差异的综合鉴别诊断。分别比较了上述各方法区别野毒株与疫苗相关株，计算符合率的优缺点，为脊髓灰质炎病毒野毒株与疫苗相关株的鉴别诊断提供了依据。     

分子生物学技术诊断病毒性肝炎进展

分子生物学技术为诊断慢性病毒性肝炎提供了一种强有力的手段.可以利用它们检测血液及血液制品病毒分子,了解病毒活动感染情况,为临床的准确诊断、合理用药、判定预后提供切实可信的依据.     

SARS冠状病毒基因组编码蛋白的研究进展

SARS冠状病毒是一种新的病毒，能够引起人体以急性肺损伤为主要表现的传染病，对这种病毒的研究引起全世界的高度关注。本文就SARS冠状病毒的基因组所编码的结构蛋白和酶的研究现状和预测加以综述，为SARS的诊断、治疗和研究提供理论依据。     

Colti病毒抗原制备、保存及其在检测患者血清Colti病毒抗体中的应用

目的 获得较高滴度和稳定的Colti病毒抗原，进一步开展Colti病毒感染的血清学诊断。方法 用C6／36细胞培养Colti病毒，于不同时间收获后进行病毒滴度测定。病毒经聚乙二醇(PEG)纯化浓缩后抗原分别保存于-20℃和4℃备用。利用该抗原采用ELISA法检测患者血清标本的Colti病毒抗体。结果 在制备Colti病毒抗原时，以细胞培养3—4周的病毒滴度最高，经PEG纯化浓缩的抗原于-20℃和4℃条件下，保存6个月，其抗原滴度仍保持在较高水平。特别是加入甘油的抗原无论在-30℃，还是在4℃下，甚至可保存2年。用这些抗原，检测疑似乙型脑炎或病毒性脑炎患者标本1141份，Colti病毒IgM抗体阳性130例，阳性率为11．4％(130／1141)，特别是检测广州市儿童医院患者标本41份，9份Colti病毒抗体阳性，阳性率为22．0％，其中5例临床诊断为病毒性脑炎。结论 为建立检测Colti病毒抗体及诊断试剂盒提供了较稳定的抗原，Colti病毒可能是引起我国夏、秋季脑炎的又一重要病原。     

噬菌体展示技术在病毒抗原表位筛选中的应用

病毒的抗原表位分析在揭示病毒抗原分子的结构和功能，抗原一抗体反应机制方面具有重要意义，亦为研制诊断试剂，设计多肽疫苗和筛选药物等研究提供依据。近年来，许多学者将噬菌体展示技术应用于病毒抗原表位的筛选中，结果显示：这种新型分析技术弥补了传统分析技术的不足，为基于抗原表位的后继研究奠定了基础。     

文摘

文摘１２枢神经系统的病毒感染诊断－ＰＣＲ结果的临床分析［英」／ＫａｔｉｅＪＭ…／／Ｌａｎｃｅｔ－１９９７，３４９（２）．－３１３～３１７中枢神经系统（ＣＮＳ）的病毒感染常常难以进行早期诊断，因为常规的实验室技术如病毒培养和血清学诊断等仅提供ＣＮＳ病毒...     

原位RT-PCR法测定SARS患者肺组织中的病毒核酸

【摘要】目的观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者肺组织中SARS病毒核酸的定位和分布。方法采用原位逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术对3例SARS死亡患者肺组织进行病毒核酸测定。以固定在载玻片上的肺组织为靶细胞，直接掺入地高辛素一dN31P标记物进行PCR扩增，并观察病毒核酸阳性物质。结果检测3例尸解肺组织，其中2例可见SARS病毒核酸阳性信号。阳性物质表现为蓝紫色颗粒状物，分布于细胞核或细胞浆内。在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及单个核细胞中均可观察到该病毒核酸物质。肺组织病理改变明显，表现为出血、渗出，炎性浸润等改变。结论在肺组织中检出SARS病毒核酸物质，并与病理改变并存，为本病的病原学诊断提供直接证据。【关键词】严重急性呼吸综合征；SARS病毒；原位逆转录一聚合酶链反应；肺组织     

常见呼吸道病毒分子鉴别诊断技术的建立

目的 建立一种常见呼吸道感染病毒的快速检测方法,为尽早诊断、减少疾病的传播以及为临床提供良好的治疗依据.方法 采用液体芯片检测技术结合靶向多重RT-PCR技术建立可以同时检测13种呼吸道病原的检测技术.结果 该方法特异性方面检测13种常见呼吸道病毒没有交叉,标本的检出率为100%;灵敏度方面达到10e2-10e1（pfu/ml）.结论 该分子鉴别诊断可应用常见呼吸道病毒的检测,协助诊断病毒引起的病毒性呼吸道感染.     

异源双链泳动分析法的研究HIV基因变异中的应用

异源双链泳动分析法（heteroduplex mobility assay,HMA)是当前HIV基因分析中较简便的一种方法。它可在较短时间内对大量的HIV样品进行分型和初步的基因分析。了解追踪在不同时间不同地区和不同人群中流行的病毒亚型以及病毒在单个个体内的基因变异水平，为HIV的诊断，预防和治疗提供科学依据。     

B型流感病毒Yamagata系和Victoria系双重荧光PCR诊断方法的建立与应用

目的 建立一种新型的双重荧光PCR诊断方法,用于B型流感病毒By (B/Yamagata)和Bv(B/Victoria)亚系的准确分子分型.方法 从GenBank随机下载By和By HA(hemagglutinin)基因各50条序列,通过MEGA分析,利用Primer Primer软件设计亚系特异性引物和通用探针,建立双重荧光PCR诊断方法.用HAI(hemagglutination inhibition)实验确认的B型流感病毒亚系分离毒株和A型流感病毒进行特异性验证,用体外转录核酸拷贝数进行灵敏度实验.结果 2006-2010流感监测年份,对17 765份流感样病例咽拭标本中分离到B型流感病毒793株,本方法鉴定有152株By和641株Bv病毒,与HAI鉴定结果一致.本诊断方法的检测特异性达100％,灵敏度达102拷贝/μl,重复性变异系数＜3.5％.结论 本研究所建立的荧光PCR方法为流感实时监测提供了有力的技术支撑,适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断.     

多重PCR检测方法和液态芯片技术在呼吸道病毒检测中的应用研究

目的 评估澳大利亚维多利亚感染性疾病参比实验室（The Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory,VIDRL）的呼吸道病毒多重PCR检测方法和Luminex公司多指标同步分析液态芯片技术-呼吸道病毒检测试剂盒（xTAG RVP）,应用于多种常见呼吸道病毒检测的优势和缺点,为更好地、有针对性地选择合适技术进行临床实验诊断或公共卫生应急检测提供依据.方法 使用VIDRL的呼吸道病毒多重PCR检测方法和Luminex公司xTAG RVP试剂盒对198份临床流感样症状患者的咽拭子标本进行常见呼吸道病毒的核酸检测.结果 198份临床标本经VIDRL多重PCR方法和xTAG RVP方法检测,阳性率分别为38.89％和45.45％,符合率为72.22％.单一病毒的符合率为87.88％～100％.结论 xTAG RVP方法与VIDRL多重PCR方法相比,两者在常见呼吸道病毒检测中的特异性和敏感性相近,xTAG RVP方法具有明显的快速和高通量的优势.     

外泌体在新型冠状病毒感染和传播中作用的研究进展

外泌体在COVID-19的病理过程中起着重要作用，与其携带的核酸、蛋白质等物质，共同调控SARS-CoV-2的感染和传播。病毒感染细胞通过内体途径产生含SARS-CoV-2病毒颗粒的外泌体，介导病毒向健康细胞感染和传播，造成组织损伤和多器官功能障碍。同时，外泌体作为细胞间通讯的关键介质，起到免疫激活作用，促进机体产生免疫反应，抵抗病毒入侵。此外，外泌体协助病毒逃避机体免疫，是SARS-CoV-2再感染的潜在手段。总之，外泌体在新型冠状病毒感染和传播中的作用为其在诊断、防治COVID-19等方面的应用提供新思路。     

应用PCR技术检测小儿呼吸道病原体的研究

本文应用PCR技术检测了1370例患者的肺炎支原体（MP）阳性检出率为12．92％，EB病毒（EBV）阳性检出率为14．52％，腺病毒（AV）阳性检出率为12．35％。这些病原体在小儿呼吸道中感染十分常见，可引起上呼吸道感染、咽炎、肺炎及其他系统炎症。因此早期诊断具有较高的临床意义和流行病学意义。     

TBE病毒E蛋白分子生物学研究的进展

森林脑炎（ＴＢＥ）病毒是黄病毒科中的成员，象其它的黄病毒一样，成熟的ＴＢＥ病毒含有单链正股ＲＮＡ、３个结构蛋白即衣壳蛋白（Ｃ）、膜蛋白（Ｍ）、包膜（Ｅ）蛋白和七个非结构蛋白。病毒的蛋白开始以一个聚蛋白的形式合成，然后通过病毒和细胞编码的蛋白酶裂解产生病毒的单个蛋白，裂解后的蛋白和病毒的基因组ＲＮＡ首先组装成含有ＰｒＭ蛋白（Ｍ蛋白的前体）的未成熟的病毒，ＰｒＭ通过细胞编码的蛋白酶裂解成Ｍ蛋白成为成熟的病毒。在３个结构蛋白中Ｅ蛋白是病毒最重要的结构蛋白，决定着病毒的组织的嗜性，介导病毒与细胞受体的结合，诱导保护性的免疫反应。Ｅ蛋白内单个氨基酸的改变可导致病毒的组织嗜性、病毒的毒力、血凝活性和融合活性的改变。因此对ＴＢＥ病毒Ｅ蛋白结构和功能的研究有助于了解病毒与宿主细胞相互作用、病毒致病性以及病毒毒力改变的机理，从而，为病毒感染的特异性诊断、疫苗的研制和抗病毒药物的设计、进而为病毒的预防、控制和治疗提供理论依据，     

人类肠道病毒分子生物学分型鉴定方法的建立及应用

目的 建立人类肠道病毒（HEV）分子生物学分型鉴定方法,用于临床分离肠道病毒的分型鉴定.方法 根据已知各型别人类肠道病毒基因的核苷酸序列和文献资料,分别合成HEV种属特异性和分型鉴定引物;提取病毒RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒cDNA,通过琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列分析,鉴定病毒并分型,并与血清中和试验相互验证.结果 采用种属特异性引物鉴定18株疑似HEV毒株,其中17株阳性;型特异性引物鉴定结果：18株病毒中4株为科萨奇病毒A24型,3株为科萨奇病毒B3型;科萨奇病毒B2、A9、A15型、埃可病毒3、6、7、9、11、14、33型和鼻病毒9型各1株,分型结果与中和试验相符.结论 建立的人类肠道病毒分子生物学分型鉴定方法,具有特异性强、敏感性高、快速简便等优点,可以直接鉴定并分型诊断人类肠道病毒感染,适用于人类肠道病毒感染的实验室诊断和流行病学研究.     

聚合酶链反应技术在诊断孕妇人巨细胞病毒感染中的应用

人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,HCMV)是引起宫内感染的常见病原体之一。孕妇感染HCMV后 ,可通过胎盘垂直传播 ,引起流产、早产、死胎、胎儿畸形或新生儿先天性感染。为了早期、快速地诊断HCMV感染 ,为临床治疗或终止妊娠提供依据 ,降低畸胎或缺陷患儿的出生 ,达到优生优育的目的 ,已经建立了许多用于诊断HCMV感染的技术 ,如血清学法、病毒培养法、病毒血症检测法、抗原血症检测法及聚合酶链反应法 (polymerasechainreaction ,PCR)等。其中 ,PCR是一种DNA体外引物定向酶促扩增技术 ,具有简便、敏感和特异的优点。目前 ,采用…     

1286例高危孕妇的产前细胞遗传学诊断

建立孕期每阶段染色体检测技术是分析识别诊断染色体病的关键，本研究旨在探讨建立规范可靠的诊断技术，对1286例孕妇成功地进行核型分析，为临床应用提供依据。     

脑立体定位技术在光遗传学中的应用

近年来光遗传学技术迅速发展，并且在现代神经生物学领域应用广泛，规范精准的技术操作在科学实验中至关重要，而当前对光遗传学研究领域中应用脑立体定位技术的相关方法的资料较少。以病毒转染实现视蛋白的表达为例，详细阐述了在光遗传学研究领域中应用脑立体定位技术的方法，包括确定坐标、病毒载体的选择与保存，脑立体定位病毒注射，埋光纤及行为学等测试等方面，详细阐述了操作过程中的注意事项，以及目前脑立体定位技术的局限和未来的发展方向等，旨在为脑科学研究提供参考。     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备（文摘）

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb)，探讨HCMV感染的早期临床诊断。