人支气管上皮hsa-miR-148a-3p 低表达细胞株的建立

目的： 建立稳定的hsa-miR-148a-3p低表达人支气管上皮细胞株(16HBE)。方法：根据miRBase中提供的序列信息设计hsa-miR-148a-3p tough decoy RNA(TuD RNA),并将其连接到慢病毒载体pLKO.1-puro上。将重组慢病毒载体转染至293FT细胞并包装为慢病毒后,收集病毒上清,感染正常16HBE细胞。用嘌呤霉素筛选出has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株,通过荧光定量PCR对其进行鉴定,然后对筛选出的细胞分别采用荧光定量PCR和Western blot检测DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA和蛋白的表达水平。结果：测序结果表明含hsa-miR-148a-3p TuD RNA的重组慢病毒载体构建成功;荧光定量PCR检测显示has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株has-miR-148a-3p的表达量比正常16HBE细胞低44%(P<0.01),其作用靶基因DNMT1的mRNA和蛋白表达水平分别为正常细胞的3.4倍和2.0倍(P均<0.01)。结论：成功建立hsa-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞,hsa-miR-148a-3p的低表达能提高DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平。     

p53、nm23和PCNA在大肠癌组织中的表达及其意义

我们采用免疫组化方法检测 ｐ5 3、ｎｍ 2 3和ＰＣＮＡ在大肠癌组织中的表达 ,探讨其在大肠癌发生发展中的作用和意义。1　材料和方法1.1　材料收集我院 1996年 6月至 2 0 0 0年 6月手术切除的大肠癌标本 6 0例。男性患者 2 7例 ,女性 33例 ,年龄 39～ 80岁。肿瘤直径 <5ｃｍ者 2 8例 ,≥ 5ｃｍ者 32例。Ｄｕｋｅｓ分期 :Ａ期 12例 ,Ｂ期 16例 ,Ｃ期 2 7例 ,Ｄ期 5例。肿瘤分化程度 :低分化 10例 ,中分化 5 0例。标本均经 10 %的福尔马林液固定 ,石蜡包埋 ,4μｍ厚连续切片 ,ＨＥ染色。1.2　试剂及测定方法鼠抗人ｎｍ 2 3蛋白和兔抗人 ｐ5 3…     

Ataxin-3、nm23和Kiss-1在胃腺癌中的表达及意义

目的:检测胃腺癌中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达,探讨三者的关系及临床意义。方法:选择我院收治的104例胃腺癌术后存档的蜡块及患者的临床资料作为观察组,选择切端为正常胃黏膜的组织70例作为对照组,应用免疫组化方法检测组织中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达,观察三者在不同临床特征中的表达差别。结果:观察组中Ataxin-3、nm23和Kiss-1表达的阳性率明显低于对照组,观察组中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、脉管浸润及是否有癌结节密切相关。线性相关分析显示观察组中Ataxin-3和nm23、Ataxin-3和Kiss-1的表达具有正相关性。结论:胃腺癌中Ataxin-3、nm23和Kiss-1低表达,Ataxin-3对抑制转移蛋白nm23和Kiss-1具有一定调节作用。     

miR-199a-3p在乳腺癌中的表达及其作用

背景与目的：多种微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。miRNA可能是治疗乳腺癌的新靶点。该研究旨在探讨miR-199a-3p在乳腺癌中的表达水平,及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞和人乳腺细胞中miRNA-199a-3p的表达水平,miR-199a-3p mimic(或inhibitor)转染乳腺癌细胞MDA-MB-231过表达(或沉默)miR-199a-3p的表达后,通过MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst染色法和caspase-3活力测试检测细胞凋亡情况。结果：相对癌旁正常组织和人正常乳腺细胞,miR-199a-3p在乳腺癌患者癌组织和人乳腺癌细胞中表达下调。在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p mimic过表达miR-199a-3p可抑制细胞增殖,促进其凋亡;在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p inhibitor沉默miR-199a-3p可促进细胞增殖,抑制其凋亡。结论：miR-199a-3p在乳腺癌中表达下调,并通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡发挥抑癌作用。     

miR-196a-5p在食管鳞状细胞癌中表达及靶基因预测的生物信息学分析

目的:探讨hsa-miR-196a-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生发展过程中的作用,并对其生物学特征及表型功能进行预测分析,为最终研究miR-196a-5p的功能提供有利线索.方法:通过Quantitative Real-time PCR方法,...     

miR-34a-3p、DDX27在结直肠癌组织中的表达水平及临床意义

目的:检测结直肠癌患者组织中微小RNA-34a-3p（miR-34a-3p）、DEAD盒多肽27（DDX27）的表达水平,并探讨二者表达水平与结直肠癌预后的相关性。方法:选取2016年01月至2017年04月于本院住院的102例结直肠癌癌组织作为结直肠癌组,选取其癌旁正常组织作为癌旁对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测组织miR-34a-3p、DDX27 mRNA表达水平;分析结直肠癌患者组织中miR-34a-3p、DDX27 mRNA表达水平与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析结直肠癌组织中miR-34a-3p、DDX27表达水平与患者生存率的相关性;多因素Cox回归分析影响结直肠癌预后的因素。结果:Targetscan网站在线预测结果显示miR-34a-3p与DDX27的3' UTR之间存在碱基互补关系。双荧光素酶实验结果显示,与miR-NC相比,miR-34a-3p-mimics与野生型3' UTR区（WT-DDX27）共转出现了荧光减弱,而与突变3' UTR区（MUT-DDX27）共转后荧光强度未出现明显变化;Ualcan数据库中,结肠癌组织中DDX27水平高于正常结肠组织（P＜0.05）;结直肠癌组DDX27 mRNA水平高于癌旁对照组,miR-34a-3p水平低于癌旁对照组（P＜0.05）,且DDX27表达趋势与Ualcan数据库一致;miR-34a-3p、DDX27表达与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05）;miR-34a-3p低表达组三年内存活率（64.00%）低于高表达组（94.23%）,DDX27高表达组三年内存活率（66.67%）低于低表达组（92.16%）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;DDX27、组织分化程度、TNM分期是影响结直肠癌不良预后的独立危险因素（P＜0.05）,miR-34a-3p是影响结直肠癌不良预后的保护因素（P＜0.05）。结论:结直肠癌组织中miR-34a-3p、DDX27表达水平与组织分化程度、TNM分期等临床病理特征密切相关,且均是影响结直肠癌预后的因素,可对结直肠癌的病情评价及治疗提供一定理论依据。     

miR-93-5p和miR-27a-3p在直肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨在直肠癌组织中呈现出特异性表达的miRNA与临床病理分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移等参数之间的关系及其可能的意义。方法 用微阵列基因芯片技术分析未经任何术前放化疗的71例直肠癌患者癌组织与癌旁组织间miRNA表达的区别,筛选出上调的miR-93-5p和下调的miR-27a-3p,扩大样本量后进行qRT-PCR验证,随后进行多种临床病理参数分析并探讨其可能存在的意义。结果 miR-27a-3p的表达在芯片检测中呈现出低表达,但在PCR验证时呈现出了高表达,且数据较为离散;miR-93-5p在两种检测方法中均显示出高表达的特性(癌组织表达量是癌旁组织的3.165倍,P=0.006),并与肿瘤体积(P=0.004)、治疗前癌胚抗原水平(P=0.001)及淋巴结转移数目(r=0.534,P=0.005)具有相关性,其中与治疗前癌胚抗原水平及淋巴结转移阳性组受侵数目存在正相关。结论 在直肠癌组织中存在特异性表达的miRNA。根据miR-93-5p和miR-27a-3p在直肠癌组织中的表达特点,miR-93-5p有望作为新型生物标记物,为直肠癌的临床诊疗提供参考价值。     

Krüppel样转录因子3在肺腺癌中表达的意义

  目的  探讨Krüippel样转录因子3(Krüippel-like factor 3, KLF3)在肺腺癌中的表达及其与临床特征的关系, 为探索KLF3在肺腺癌中的作用提供依据。  方法  荧光定量PCR及Western blot分析KLF3的mRNA及蛋白在肺腺癌细胞株中的表达。收集72例肺腺癌患者的肿瘤组织标本, 免疫组织化学法分析KLF3在肺腺癌组织中表达并分析KLF3表达与患者临床特征的关系。  结果  KLF3在肺腺癌细胞株中表达下调。大部分肺腺癌组织中KLF3低表达(50/72), 其表达主要定位于胞浆及胞核内。KLF3表达与肺腺癌临床病理分期(P < 0.000 1)及T分期(P=0.004)、N分期(P < 0.000 1)、M分期(P < 0.000 1)明显相关。  结论  KLF3可能是一个重要的肺腺癌抑癌基因, 并有望成为新的抗肿瘤治疗靶点。      

p53和nm23在卵巢癌中的表达及意义

目的 研究p53抑癌基因和nm23肿瘤转移抑制基因与卵巢上皮性癌的关系.方法采用免疫组化SP法检测12例正常卵巢组织,20例卵巢良性肿瘤,16例交界性肿瘤以及79例卵巢上皮性癌组织中p53及nm23的表达情况.结果 p53表达率于卵巢上皮性癌为48.1%,其他组织均呈阴性,与组织类型无关,但与分化程度成反比,与分期、淋巴结转移成正相关.COX模型单因素及多因素分析显示,p53表达与预后相关;nm23表达率于卵巢上皮性癌中为49.3%,且与组织类型、细胞分化,临床分期以及淋巴结转移均有相关性,COX模型单因素分析表明nm23表达与预后有关.结论 p53和nm23可作为估计患者预后的指标,前者阳性者预后欠佳,后者阳性者预后较好.     

hsa-miR-125a-5p促进非小细胞肺癌细胞侵袭

背景与目的 microRNAs(miRNAs)是小的非编码RNA,它们通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达.尽管一些失常的miRNA调节机制在人许多恶性肿瘤中被发现,但是,has-miR-125a-5p在肺癌细胞中的表达及功能还尚不清楚.本研究探讨了has-miR-125a-5p在非小细胞肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞侵袭的关系.方法 应用real-time PCR的方法检测了has-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中的表达情况,并在EAS49细胞中分别转染正义的has-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸24 h、36 h、48 h、60 h和72 h后检测has-miR-125a-5p的表达情况.同时应用transwell小室观察上调has-miR-125a-5p后,A549细胞侵袭能力的变化.结果 has-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中低表达,以LH7、NCI-H460、SPC-A-1和A549细胞最为明显.在A549细胞中,转染正义的has-miR-125a-5p 2'O-甲基寡核苷酸36h后,has-miR-125a-5p表达最高,并进一步发现.上调has-miR-125a-5p后A549和NCI,H460细胞侵袭能力增强.结论 has-miR-125a-5p在肺癌细胞中低表达,但上调has-mig-125a-5p能够促进A549和NCI-H460细胞侵袭.     

hsa-miR-125a-5p通过上调Rock-1表达促进肺癌细胞侵袭

背景与目的 MicroRNAs(miRNAs)是广泛存在于真核生物体中的内源性非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达,影响了生物的许多复杂的生命过程.本研究探讨了hsa-miR-125a-5p促进肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 应用microRNA.org靶基因预测资源预测hsa-miR-125a-5p的靶基因及其结合位点,并进一步根据预测结果用RT-PCR和Western blot的方法榆测了Rock-1的mRNA及蛋白的表达情况.用Rock-1抗体阻断的方法,检测转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸后A549细胞侵袭能力的变化.结果 转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸36h后,A549细胞中Rocb-1 mRNA和蛋白表达均增加,在转染反义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸的A549细胞中则减少.Transwell小室的结果显示,与未阻断组相比较,阻断Rock-1后,转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核廿酸的A549细胞侵袭能力减弱.结论 hsa-miR-125a-5p能够上调Rock-1的表达,并促进肺癌细胞侵袭.     

Clinical and biological significance of miR-378a-3p and miR-378a-5p in colorectal cancer

To investigate miR-378a-3p and miR-378a-5p expression and their relationships with the clinicopathological features of colorectal cancer (CRC). Our results showed that miR-378a-3p and miR-378a-5p expression were dramatically lower in CRC cell lines and tissues than that in adjacent normal colorectal mucosal tissues, respectively. MiR-378a-3p and miR-378a-5p expression were significantly associated with histological differentiation and TNM stage, respectively. CRC patients with low miR-378a-3p and miR-378a-5p expression had a significantly shorter survival time than those patients with high miR-378a-3p and miR-378a-5p expression (p < 0.001, p < 0.001), respectively. Univariate and multivariable Cox regression analysis showed that tumour size, TNM stage, miR-378a-3p expression and miR-378a-5p expression were independent prognostic factors for CRC patients. Ectopic miR-378a-3p or miR-378a-5p expression inhibited cellular proliferation and colony formation, induced apoptosis and G1-phase cell cycle arrest in CRC cells, but had no effect on migration and invasion of CRC cells. Furthermore, miR-378a-3p over-expression or down-regulation could inhibit or enhance insulin-like growth factor 1 receptor (IGF1R) expression in CRC cells. There was a significantly negative correlation between IGF1R protein expression and miR-378a-3p expression in CRC tissues. MiR-378a-3p over-expression or down-regulation suppressed or enhanced phosphorylated-ERK1/2 protein level, but had no effect on phosphorylated-Akt protein level. In conclusion, miR-378a-3p and miR-378a-5p expression might play an important role as tumour suppressor gene in the initial stage of carcinogenesis of CRC.     

By inhibiting snail signaling and miR-23a-3p,osthole suppresses the EMT-mediated metastatic ability in prostate cancer

Here we showed that Osthole, 7-methoxy-8-(3-methyl-2-butenyl) coumarin, a bioactive coumarin derivative extracted from medicinal plants, inhibited migration, invasion, epithelial to mesenchymal transition (EMT) in androgen-independent prostate cancer (AIPC) cells in vitro and metastasis of AIPC in vivo. In patients, high Snail levels were correlated with a higher histological Gleason sum and poor survival rates. Osthole inhibited the TGF-β/Akt/MAPK pathways, reduced Snail-DNA-binding activity and induced E-cadherin. We found that osthole decreased miR-23a-3p. Ectopic miR-23a-3p suppressed E-cadherin 3′ untranslated region reporter activity and E-cadherin expression, and relieved the motility suppression caused by osthole treatment.     

TM9SF3在肺腺癌中的表达和临床意义

目的 探讨TM9SF3在肺腺癌中的表达及其临床意义。方法 利用TCGA和GEPIA数据库筛选差异表达的TM9SF家族分子,并分析其对肺腺癌患者预后的影响。通过人类蛋白组学图谱数据库、免疫印迹实验和聚合酶链式反应实验验证TM9SF3在LUAD患者中的表达和定位。利用GSEA分析与TM9SF3相关的基因的信号通路富集分析。使用TIMER数据库和CIBERSORT算法分析差异表达的TM9SF3和免疫细胞浸润程度的相关性。结果 TM9SF3在LUAD的表达显著升高,并对LUAD患者的预后有显著不良影响。免疫印迹实验和聚合酶链式反应实验结果证实TM9SF3在LUAD高表达。同时,与TM9SF3表达相关的基因主要富集在调节免疫细胞活性的细胞信号通路。TM9SF3的表达与六种免疫细胞的表达改变明显相关。结论 TM9SF3在肺腺癌中差异表达并且可作为肺腺癌患者潜在的预后标志物。TM9SF3也能够改变LUAD患者中免疫细胞浸润水平,有望成为一个新的肺腺癌免疫治疗潜在靶点。     

FXYD3蛋白在胃腺癌中的表达及意义

 目的 探讨FXYD3(Mat-8)蛋白在胃腺癌中的表达及其临床病理意义。 方法 采用免疫组织化学的方法检测29例正常胃黏膜和51例胃腺癌组织中FXYD3蛋白的表达。 结果 FXYD3蛋白在胃腺癌中的阳性表达率为66.67%（34/51）,明显高于正常胃黏膜组织中的 27.59%（8/29）, 两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。FXYD3蛋白的表达与患者性别、年龄及肿瘤 大小、大体形态、组织学分级和淋巴结转移情况均无相关性（P>0.05）。 结论 FXYD3蛋白在胃腺癌中的表达上调,可能只是胃腺癌发生阶段的一个早期事件,与肿瘤的浸润 转移可能关系不大。     

以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对NCI-H446细胞生物学特性的影响

背景与目的:miRNAs是一类小分子RNA,参与转录后调控.前期研究结果显示,hsa-miR-491-3p在肺痛和肾痛组织中高表达,目前鲜见其功能研究的报道.本研宄旨在探讨以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生物学特性的影响.方法:合成以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸和随机对照序列,转染NCI-H446细胞.实验分4组:空白对照组(组1)、空白转染组(组2) ⑺婊?对照组(组3)和反义寡核苷酸组(组4).用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,Hoechst33258染色检测细胞核的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化,划痕实验检测细胞的迁移能力.结果:转染反义寡核苷酸后细胞生长受到抑制,最佳作用浓度为0.5 μmol/L.Hoechst33258染色各组的凋亡率分别为(6.67±0.58)%、(7.00±1.00)%、(6.67±1.53)%和(26.33±1.53)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.001).流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(2.44±0.60)%、(2.59±0.85)%、(2.62±1.11)%和(5.22±0.40)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.01),且G1期细胞增多,S期细胞减少.划痕实验显示各组细胞24 h的迁移距离分别为(196.88±39.13)、(163.06±21.28)、(225.49±23.42)和(77.41±6.07)μ m,组4细胞的迁移距离小于前3组(P<0.05),迁移能力减弱.结论:以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸能够抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,并降低其侵袭能力.     

Hsa-miR-21-3p对食管癌细胞运动与侵袭能力的影响

目的： 研究hsa-miR-21-3p对人食管癌细胞Eca9706侵袭和迁移能力的影响。方法：采用终浓度为30 nmol/L的寡核苷酸hsa-miR-21-3p mimics和阴性对照转染Eca9706细胞48 h后,用实时荧光定量PCR检测转染后hsa-miR-21-3p的表达水平,通过Transwell体外侵袭试验和划痕愈合试验分别观察hsa-miR-21-3p对Eca9706细胞侵袭和迁移能力的影响。结果：与阴性对照组相比较,hsa-miR-21-3p mimics转染组细胞中hsa-miR-21-3p表达明显升高 (P<0.01),是阴性对照的1.1×104倍;Transwell体外侵袭试验结果显示镜下每个视野穿膜细胞数试验组 (76.67±6.11)较阴性对照组 (42.33±2.52)增加了81.1% (P<0.01),表明hsa-miR-21-3p的过表达显著增强食管癌细胞的侵袭能力;划痕愈合试验结果显示,hsa-miR-21-3p试验组的划痕宽度较对照组窄,在相同的时间点,试验组的划痕愈合能力均大于对照组 (P<0.01),说明转染了hsa-miR-21-3p mimics的试验组细胞的迁移能力大于对照组。结论：Hsa-miR-21-3p的高表达可以使人食管癌细胞Eca9706的侵袭和迁移能力增强,提示其可能参与了食管癌进程中的浸润和转移。