铀矿尘对RAW 264.7细胞的氧化损伤作用

目的 探讨铀矿尘作用于小鼠RAW 264.7细胞一定时间后羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)及丙二醛(MDA)含量的变化.方法 用120 μg/ml的铀矿尘混悬液作用于小鼠RAW264.7细胞,分别在作用2、4、8、16、24和32 h后,采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测RAW264.7细胞存活率；HE染色镜下观察细胞形态学变化；比色法测定细胞上清液中·OH、H2O2及MDA含量的改变.结果 铀矿尘作用于RAW264.7细胞2、4、8、16、24、32 h后,可见铀矿尘对RAW264.7细胞的增殖有明显抑制作用,染尘32 h后细胞存活率仅有(28.37±3.3)％；铀矿尘在作用于RAW264.7细胞16、24、32 h后,镜下可见梭型或不规则型细胞、多核细胞明显增加,细胞胞质缺失,胞核外露和染色变浅,细胞数目明显减少；铀矿尘处理的细胞上清液中·OH、H2O2及MDA在染尘后24 h达到峰值,分别为(94.05±4.72) U/ml、(68.83±4.34) mmol/L、(5.67±0.29) nmol/ml,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 铀矿尘可明显抑制RAW264.7细胞的增殖作用,导致细胞死亡数量增多.可引起细胞上清液中·OH、H2O2及MDA含量增高,对RAW264.7细胞具有氧化损伤作用.     

高温和内毒素联合对RAW264.7细胞凋亡影响

目的 研究高温和内毒素复合因素对RAW264.7细胞凋亡的影响。方法 将RAW264.7细胞分成37℃空白(BLANK)组、37℃内毒素(LPS)组、40℃空白组和40℃内毒素组,置于含50%CO2细胞培养箱中,分别于3、24 h后取出,用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,并对凋亡细胞生化标志性指标DNA片段进行检测。结果 37℃BLANK3 h组和24 h组细胞凋亡率极低,分别为(3.6±0.7)%和(4.6±1.9)%,同时37℃LPS 3 h组未见明显细胞凋亡现象,凋亡率为(2.8±0.6)%;而40℃LPS组凋亡情况较37℃LPS组严重,其中,40℃LPS 3 h组细胞凋亡率(6.7±0.6)%与37℃LPS 3 h组比较明显增高(P<0.05);40℃BLANK3 h组凋亡率与37℃BLANK3 h组比较虽有所增加,但差异无统计学意义(P>0.05);随着时间的延长,细胞凋亡情况明显加剧,37℃LPS 24 h组、40℃BLANK24 h组和40℃LPS 24 h组细胞凋亡率分别为(13.4±5.5)%、(21.2±2.8)%、(67.4±3.8)%,与同温度不同时间组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 高温和内毒素对RAW264.7细胞具有损伤作用,在高温和内毒素作用下细胞会出现明显凋亡现象,且随着时间的延长,损伤程度逐渐加重,凋亡细胞数量大大增加。     

上海市吴淞地区大气PM2.5两种提取成分的细胞毒性研究

[目的]研究上海市吴淞地区大气细颗粒物（PM2.5）两种提取成分（有机和无机提取成分）的细胞毒性。[方法]采用滤膜法采集上海市吴淞地区大气中PM2.5，以中国仓鼠肺成纤维细胞（chinese hamsterfibroblast cell line，CHL）为靶细胞研究PM2.5，有机及无机提取成分对细胞活力、代谢的影响及氧化损伤毒性，具体包括细胞形态、活力和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LD）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平的测定。[结果]上海市吴淞地区大气PM2.5的有机和无机两种提取成分分别以10、50、100、200μg/ml浓度染毒CHL细胞10h，结果显示随着染毒剂量的增加细胞形态损伤加剧，细胞存活率、SOD含量呈下降趋势，LD和MDA则呈上升趋势，LDH则呈现先升后降趋势。与阴性对照组相比，200μg／ml染毒组的LD含量的升高同100、200μg/ml组的LDH和MDA含量的升高及SOD水平的下降均具有统计学显著性（P〈0．05）～除200μg/ml染毒组，有机提取成分要高于无机提取成分所染毒细胞的生长抑制率外，其他各染毒浓度组的氧化损伤及代谢指标水平在两种染毒成分之间尚不能认为有差别。[结论]上海市吴淞地区PM2.5，的有机及无机提取成分均具有一定的细胞毒性。     

石家庄地区PM2.5诱导A549细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨石家庄地区PM2.5染尘A549细胞对细胞凋亡的影响及其分子机制.方法 PM2.5作用于体外培养的A549细胞后,检测细胞存活率、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,细胞凋亡及凋亡相关基因的表达水平.结果 PM2.5暴露可显著降低A549细胞存活率和M...     

PM2.5致大鼠肾脏氧化损伤效应研究

目的通过建立大鼠PM_(2.5)经呼吸道亚慢性染毒模型,探讨PM_(2.5)对大鼠肾脏的氧化损伤效应。方法将SPF级雄性大鼠20只随机分为对照组(生理盐水)和PM_(2.5)染毒组(染毒剂量10 mg/kg),每组10只。采用气管注入法染毒,每周1次,连续染毒24周。采用试剂盒测定肾脏丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用免疫组织化学方法检测肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达水平,采用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,采用HE染色对肾组织进行病理形态学检测。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏SOD及GSH-Px活力均降低,MDA含量升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。TUNEL检测结果显示,PM_(2.5)染毒组肾脏细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);PM_(2.5)染毒组肾脏出现明显的病理形态学改变。结论 PM_(2.5)可致大鼠肾脏发生明显的氧化损伤效应。     

PM2.5致大鼠肝脏氧化损伤效应研究

目的通过建立PM_(2.5)染毒模型,探讨PM_(2.5)对大鼠肝脏的氧化损伤效应。方法将SPF级雄性大鼠20只随机分为PM_(2.5)染毒组和对照组,每组10只。采用气管注入法染毒,PM_(2.5)染毒组给予20 mg/kg的PM_(2.5)混悬液,对照组给予等体积的生理盐水,每周染毒1次,共染毒24周。染毒结束后测定两组大鼠肝脏系数,测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肝脏丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,并采用HE染色观察肝脏病理形态学改变。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肝脏系数升高,差异有统计学意义(P0.05)。PM_(2.5)染毒组大鼠血清ALT及AST水平均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肝脏SOD及GSH-Px活力降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P0.05)。PM_(2.5)染毒组大鼠肝细胞排列紊乱,间质重度充血,细胞固缩,双核增加,可见大量散在性炎细胞浸润。结论 PM_(2.5)可致大鼠肝脏发生明显的氧化损伤效应。     

香烟烟雾提取物对RAW264.7细胞增殖、自噬的影响及机制

目的研究香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对RAW264. 7细胞增殖、自噬的影响及其机制。方法以RAW264. 7细胞作为实验对象,实验分为对照组、阳性对照组(剥夺血清)和CSE组(2%、3%、4%、5%CSE)。利用增强型CCK-8试剂盒测定CSE对RAW264. 7细胞增殖的毒性作用,Western blot实验、mRFP-GFP-LC3细胞荧光斑点计数进行CSE影响RAW264. 7细胞自噬及其机制的研究。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,处理时间为24 h,CSE组吸光度值(0. 671±0. 03、0. 746±0. 10、0. 584±0. 07、0. 588±0. 05)显著下降,显示CSE有效抑制了RAW264. 7细胞的增殖,且差异有统计学意义(P<0. 05)。Western blot实验结果显示,与对照组相比,CSE组LC3B蛋白表达量增加且最高表达量在6 h(6. 612±0. 35)、12 h(4. 383±1. 99)和24 h(5. 781±0. 78)均不同,P62蛋白表达量下降且最低表达量在6 h(1. 815±0. 08)、12 h(0. 274±0. 06)和24 h(0. 414±0. 06)也不同,Pm TOR(1. 744±0. 15)、P-AKT(0. 376±0. 03)蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P<0. 05),而Beclin1蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义。mRFP-GFP-LC3细胞荧光斑点计数结果显示,CSE组绿色荧光斑点(GFP)显著减少,红色荧光斑点(mRFP)稳定不变,mRFP-GFP结合后显示为黄色和红色斑点。结论CSE对RAW264. 7细胞的增殖具有毒性作用,且通过AKT/m TOR信号通路诱导RAW264. 7细胞产生自噬。     

不同地区大气PM2.5对大鼠肺泡巨噬细胞毒性作用的实验研究

目的比较不同地区大气PM2.5对肺泡巨噬细胞的毒性作用。方法采集广州市、东莞市、深圳市和肇庆市4个地区的大气PM2.5,将PM2.5分别以1、10、50、100、200、300μg/ml剂量对肺泡巨噬细胞染毒24 h。检测一氧化氮(NO)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)生成量、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及细胞存活率。以肇庆作为对照,观察PM2.5对各指标的影响。经剂量与效应指标回归分析,以斜率评价各地区PM2.5的效应大小。结果不同地区大气PM2.5致肺泡巨噬细胞释放TNF-α、NO、MDA的水平和LDH的漏出率均随着染毒剂量增加而升高,SOD的活力和细胞的存活率随染毒剂量升高而降低。深圳和东莞大气PM2.5对肺泡巨噬细胞胞内的SOD活力的抑制程度高于广州和肇庆(P<0.05)。深圳和东莞大气PM2.5致肺泡巨噬细胞内MDA的生成量明显高于肇庆(P<0.05)。广州大气PM2.5致肺泡巨噬细胞生成TNF-α量最高,其次为东莞,均明显高于肇庆(P<0.05)。广州大气PM2.5致肺泡巨噬细胞内LDH的漏出率最高,其次为东莞和深圳,均高于肇庆(P<0.05)。剂量高于100μg/ml时,广州、深圳和东莞大气PM2.5致肺泡巨噬细胞存活率低于肇庆(P<0.05)。回归分析显示,广州大气PM2.5对肺泡巨噬细胞的TNF-α、LDH漏出率、NO释放量的效应最强,肇庆大气PM2.5对肺泡巨噬细胞的LDH漏出率、NO释放量和细胞存活率的效应最低。结论不同地区大气PM2.5对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性作用随染毒剂量增加而增强,广州、东莞、深圳地区大气PM2.5的毒性效应总体上强于肇庆地区。     

逍遥丸含药血清影响巨噬细胞RAW264.7的功能

目的:采用中药血清药理学的方法,制备逍遥丸含药血清(XCS),体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察XCS对巨噬细胞功能的影响。方法:Wistar大鼠30只,以2.7g·kg-1·d-1剂量灌胃逍遥丸,连续3周,第22日取动物血离心,制备XCS;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将细胞分为空白组、空白血清组、XCS不同浓度组,取细胞培养上清测NO及TNF-α分泌量。结果:LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7 NO、TNF-α分泌量增加,与空白血清组相比有显著差异(p<0.05)。结论:XCS对NO和TNF-α有明显促进作用。     

不同地区大气PM2.5致大鼠肺损伤的比较实验研究

目的利用动物实验比较不同地区大气PM2.5对呼吸系统的毒性作用。方法采集广州、东莞、深圳和肇庆4个城市的大气PM2.5。将雄性SD大鼠分为3个染毒组(10、3和1 mg/kg)和1个对照组,每组7只。4个城市的PM2.5均按此分组并染毒。气管滴注PM2.5,对照组滴注等量生理盐水。分别于48 h和28 d后处死动物,收集左侧肺和一定量的肺泡灌洗液(BALF),观察肺部病理变化和测定灌洗液中总蛋白(TP)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化。结果肇庆地区大鼠体重增长率较高,东莞地区最低。PM2.5主要导致间质炎性细胞浸润、支气管炎症等。与对照组比较,PM2.5导致肺泡灌洗液中TP、LDH、IL-6和TNF-α水平增高,SOD活力降低,差异有统计学意义(P<0.05)。广州PM2.5组LDH的漏出量最高,深圳PM2.5组肺泡灌洗液中SOD活力最低,东莞PM2.5组肺泡灌洗液中IL-6释放量最高,肇庆PM2.5染毒48 h组SOD活力均高,LDH、TNF-α、IL-6均较低。结论本次采集的四城市大气PM2.5可致大鼠肺组织发生氧化应激损伤和炎性反应。广州、东莞、深圳PM2.5对上述效应指标的影响强于肇庆。     

大气颗粒物PM2.5致大鼠肺损伤研究

目的：探讨大气细颗粒物对大鼠肺的炎症损伤和氧化应激的损伤作用。方法：雄性Wistar大鼠24只，随机分成生理盐水对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，气管滴注染毒，测定生化指标包括：白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）和过氧化物歧化酶（SOD）；同时，取右肺组织，提取RNA，PCR检测MIP-2和IL-1β的表达量。结果：对照组体重逐渐增加，而各染毒组体重逐渐减少，LDH、AKP、白蛋白中剂量组和高剂量组与对照组比较存在显著性差异（P〈0.05），ACP高剂量组与对照组比较存在显著性差异（P〈0.01），并且均有剂量-反应关系。MDA、SOD各指标，各剂量组与生理盐水对照组比较存在明显差异（P〈0.01）；随着染毒剂量的增加，肺部MIP-2和IL-1β的表达量也相应增加。结论：PM2.5对肺组织中产生炎症损伤和氧化应激反应，对肺组织造成损伤。     

银川市冬季大气PM2.5对居民尿液中金属元素影响的定群研究

目的了解银川市冬季大气PM_(2.5)浓度与居民尿液中金属元素含量的暴露-反应关系,为定量评价大气PM_(2.5)对人群健康影响及其相关机制探讨提供理论依据。方法以银川市为研究地点,采用前瞻性的定群研究方法,于2016年10月—2017年3月分5个周期采集大气PM_(2.5),随访50名居民并于5个周期测定其尿液中金属元素含量,采用混合效应模型分析大气PM_(2.5)浓度与居民尿液中金属元素含量的暴露-反应关系。结果共采集PM_(2.5)34 d,采样78份,其中21 d的日均浓度超标,超标率为61.76%;PM_(2.5)质量浓度呈供暖前低、供暖后升高、供暖结束后降低的变化特征。5个随访周期共采集尿样250份,尿中金属元素质量浓度从高到低依次为:AlAsSeMnNiCrBeCdTlSb。采样点大气PM_(2.5)质量浓度对研究对象尿中Al、Se、Be含量的升高影响有统计学意义(P0.05),而对尿中As、Mn、Ni、Cr、Cd、Tl、Sb含量的升高影响无统计学意义(P0.05)。结论本次调查的大气PM_(2.5)质量浓度与研究对象尿中Al、Se、Be存在一定的暴露-反应关系。     

不同地区大气PM2.5对人血管内皮细胞毒性作用的实验研究

目的比较不同地区大气PM2.5对血管内皮细胞的毒性,并探讨其作用机制。方法采集广州、东莞、深圳和肇庆4个城市的PM2.5。试验细胞为人脐静脉内皮细胞。将PM2.5分别以10、50、100、200、300μg/ml剂量染毒,作用于细胞24 h,测定细胞NO释放量、SOD活力、LDH漏出量及细胞存活率(MTT试验)。以肇庆作为对照,观察PM2.5对各指标的影响。经剂量与指标回归分析,以斜率评价不同城市PM2.5的效应大小。结果各城市PM2.5致细胞NO释放量和LDH漏出量随剂量增加而升高,SOD活力和细胞存活率随剂量升高而降低(P<0.05)。广州和深圳PM2.5在高剂量时致NO释放量明显高于肇庆(P<0.05)。广州、东莞和深圳PM2.5致SOD活力降低的程度在各剂量组均强于肇庆(P<0.05)。深圳PM2.5致LDH释放量明显高于肇庆,广州、东莞在高剂量时高于肇庆(P<0.05)。广州、深圳PM2.5致细胞死亡率高于肇庆(P<0.05)。回归分析表明,广州PM2.5致LDH漏出和细胞死亡的毒性效应最高,深圳PM2.5对NO释放和SOD活力降低的毒性效应最高,肇庆PM2.5对NO、SOD、LDH的细胞毒性均处于最低水平。NO释放量、LDH漏出量与细胞存活率呈负相关,SOD活力与细胞存活率呈正相关(P<0.01)。结论不同城市PM2.5对血管内皮细胞的毒性表现不同。NO、SOD、LDH与细胞存活率有关联,氧化应激损伤可能是其作用机制之一。     

毛蕊异黄酮对脂多糖和γ干扰素诱导的RAW264.7细胞产生一氧化氮的影响

目的探讨毛蕊异黄酮对脂多糖(LPS)和γ干扰素(INF-γ)诱导的RAW264.7分泌一氧化氮(NO)的影响。方法LPS和INF-γ共同刺激生长良好的RAW264.7细胞,并用不同浓度(25、50、100μmol/L)毛蕊异黄酮进行干预;MTT法检测毛蕊异黄酮对RAW264.7细胞的毒性作用;硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO含量;实时定量PCR法检测细胞中诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达水平。结果 125、50、100μmol/L浓度的毛蕊异黄酮对RAW264.7细胞无毒性作用(P0.05);2LPS和INF-γ共同刺激RAW264.7细胞后,细胞上清液中NO的含量明显增加(P0.01);毛蕊异黄酮进行干预后,NO的含量明显下降,并呈现出浓度依赖性(P0.01);3用LPS和INF-γ共同刺激RAW264.7细胞后,细胞中iNOS mRNA的表达水平显著升高(P0.01);毛蕊异黄酮进行干预后,iNOS mRNA表达水平显著降低,并呈现出浓度依赖性(P0.01)。结论毛蕊异黄酮能抑制LPS和INF-γ诱导的RAW264.7细胞产生NO,其抗肿瘤作用可能与此有关。     

上海市浦东新区冬季大气PM2.5中多环芳烃源解析

目的了解上海市浦东新区冬季大气PM_(2.5)中多环芳烃的污染来源。方法 2016年12月至2017年2月期间在浦东新区城区和郊区分别设置采样点采集PM_(2.5)样品,采用高效液相色谱-荧光法测定PM_(2.5)中载带的15种多环芳烃的含量并运用特征比值法和正矩阵因子分解法分析其污染来源。结果特征比值法显示浦东新区冬季大气PM_(2.5)中多环芳烃的主要污染源为机动车尾气(包括汽油车和柴油车)、煤燃烧和生物质燃烧。正矩阵因子分解法研究发现这3个因子在城区采样点的贡献率依次为51.6%、27.7%、20.7%,在郊区采样点的贡献率依次为50.8%、30.0%、19.2%。结论 2016年冬季浦东新区大气PM_(2.5)中多环芳烃污染来源中机动车尾气比例最高,煤燃烧源的比例郊区略高于城区,提示相关部门需加强机动车尾气和郊区工业排放的控制和管理。     

石家庄冬季大气PM2.5污染特征及来源分析

目的了解石家庄冬季大气PM_(2.5)污染特征及来源。方法选取石家庄市区为采样点,对2017年冬季大气PM_(2.5)样品进行采集,并对PM_(2.5)浓度及其中水溶性离子和元素的污染特征及PM_(2.5)来源进行分析。结果采样期间PM_(2.5)日均浓度为(182.3±83.1)μg/m~3,水溶性离子是PM_(2.5)中含量较高的组分,硫氧化率和氮氧化率分别为0.10和0.14,无机元素占PM_(2.5)浓度的18.9%;富集因子法表明,S等8种元素来源于人为源(富集因子10)。结论石家庄冬季大气PM_(2.5)浓度相对较高,主要来自燃烧源和二次污染源,其次是工业一次源和扬尘源。     

大气PM2.5致人支气管上皮细胞DNA损伤的研究

目的研究大气PM2.5对人支气管上皮细胞(16-HBE)DNA的损伤效应。方法将人支气管上皮细胞(16-HBE)分别暴露于8、16、32、64、128μg/ml的广州大气PM2.5 24、48、72 h,采用MTT法测定细胞存活率,彗星试验检测细胞DNA损伤水平。结果染毒24、48、72 h后,64、128μg/ml组细胞存活率均明显低于对照组(P<0.05),各染毒组细胞Olive尾矩均明显高于对照组(P<0.05);72 h各剂量组细胞存活率均低于24 h相应处理组(P<0.05),48、72 h各剂量组细胞Olive尾矩与24 h相比均明显增加(P<0.05);经多重线性回归分析,Olive尾矩(y)与染毒剂量(d)和染毒时间(t)的回归方程为y=-6.481+0.162 d+0.210t(R~2=0.842,P<0.05)。结论大气PM2.5可导致人支气管上皮细胞(16-HBE)DNA损伤,且损伤程度与染毒剂量、时间有一定关联。     

贵阳市大气颗粒物PM10、PM2.5日污染特征

于2015年秋季(1月)、夏季(8月)对贵阳市五个区的大气颗粒物(PM10、PM2.5)进行了监测研究。结果发现,贵阳市大气颗粒物污染很轻,8月和11月PM10、PM2.5的超标率都为0;大气颗粒物PM10和PM2.5浓度季节变化大,11月PM10和PM2.5浓度明显大于8月;2个月的监测数据显示5个区PM10和PM2.5日均值浓度变化趋势基本一致,5个区中南明区的PM10和PM2.5浓度最高,花溪区的PM10和PM2.5浓度最低。PM10中PM2.5比重较大,PM2.5粒径小,对人体健康危害很大。