转染NF-κB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的:将NF-κB抑制物基因pcDNA3/mI κBα S32A/S36A转染食管癌细胞株EC1,观察对NF-κB因子活性及对细胞生长的影响.方法:采用脂质体转染法将pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达,检测其对EC1细胞的影响,用Western blot和RT-PCR方法检测转染前后NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达水平的变化.结果:与转染pcDNA3.0质粒和未转染质粒组比较,转染pcDNA3.0/mI κBα S32A/S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制,P＜0.05.转染pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒的EC1细胞,在0、24、48、96小时未见NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达,而转染pcDNA3.0质粒EC1细胞可见核内NF-κB p65和NF-κB p50蛋白表达.结论:转染NF-κB抑制物基因IκBα后可抑制EC1细胞的生长,并抑制细胞NF-κB p65、NF-κBp50基因的表达,该结果提示调节NF-κB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点.     

喉癌组织中NF-Κb和IκB表达及其意义

目的　探讨NF κB和IκB在喉癌组织中的表达及其意义。方法　采用免疫组织化学染色S P法 ,检测 40例喉癌组织和 2 0例正常喉黏膜组织中NF κBp65和IκBα表达水平。 结果　喉癌组织中NF κBp65表达水平明显高于正常组织 ,IκBα表达水平明显低于正常组织 (P <0 .0 5 )。有颈部淋巴结转移的喉癌组织中NF κB p65表达水平明显较无转移喉癌组织高 ,IκBα表达水平则明显下降 (P <0 .0 5 )。结论　NF κB和IκB在喉癌组织中存在异常表达 ,与喉癌发生、发展及转移有密切的关系 ,抑制NF κB表达可能为喉癌治疗提供了 1个新靶点     

转染NF—kB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的：将NF—kB抑制物基因pcDNA3／mI kBα S32A／S36A转染食管癌细胞株EC1，观察对NF—kB因子活性及对细胞生长的影响。方法：采用脂质体转染法将pcDNA3／mI kBα S32A／S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达．检测其对EC1细胞的影响，用Western blot和RT—PER方法检测转染前后NF—kB p65、NF—kB p50蛋白和mRNA表达水平的变化。结果：与转染pcDNA3．0质粒和未转染质粒组比较，转染pcDNA3．0／mI kBα S32A／S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制，P〈0．05。转染pcDNA3／mI kBα S32A／S36A质粒的EC1细胞，在0、24、48、96小时未见NF—kB p65、NF—kB p50蛋白和mRNA表达，而转染pcDNA3．0质粒EC1细胞可见核内NF—kB p65和NF—kB p50蛋白表达。结论：转染NF—kB抑制物基因IkBα后可抑制EC1细胞的生长，并抑制细胞NF—kB p65、NF-kB p50基因的表达．该结果提示调节NF—kB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点。     

乙肝病毒x蛋白对肝癌细胞中PUMA表达的影响

目的:探讨乙肝病毒x蛋白（hepatitis B virus x protein,HBx）对肝癌细胞中PUMA表达的影响及其机制。方法:利用质粒转染技术对p53基因不同状态的肝癌细胞转染野生型HBx基因,用RT-PCR检测转染后肝癌细胞中HBx mRNA表达和荧光定量PCR检测NFκB mRNA表达,Western blot检测HBx、p53、NFκB、PUMA蛋白表达。结果:转染后随着HBx的表达,在p53野生型肝癌细胞BEL-7402和p53突变型肝癌细胞Huh-7中NFκB mRNA和蛋白上调而p53蛋白表达下降,BEL-7402细胞PUMA蛋白表达下降而Huh-7细胞中PUMA蛋白表达略有下降。加入NFκB抑制剂PDTC后并随着PDTC浓度逐渐增加,BEL-7402细胞NFκB蛋白表达逐渐下降而p53蛋白和PUMA蛋白表达逐渐上升;但在Huh-7细胞中随着NFκB蛋白表达的抑制,p53蛋白逐渐上升而PUMA蛋白上升不明显。结论:结果提示转染HBx基因可以抑制肝癌细胞中PUMA蛋白表达,在p53野生型肝癌细胞这种抑制可能与HBx通过NFκB 的激活有关。     

三七总甙对NB4细胞核转录因子-κB及组织因子表达的影响

 目的　通过核转录因子NFκB及其抑制因子IκB的表达探讨三七总甙 (PanaxnotoginsengsaponinsPNS)对NB4细胞组织因子的调控机制。方法　用三七总甙处理NB4细胞 ,分别于处理后 2 4h、4 8h、72h、96h、12 0h收获细胞 ,半定量逆转录PCR检测TF mRNA的表达 ;Western蛋白印迹检测细胞内NFκB的亚单位 p6 5及IκBα的蛋白 ,以及核蛋白p6 5的表达。 结果　三七总甙处理NB4细胞 2 4h ,TF mRNA表达开始下降 ,12 0h完全抑制。Westernblot显示三七总甙抑制细胞内IκBα及核蛋白 p6 5的表达。结论　三七总甙抑制组织因子的表达 ,可能是通过抑制NFκB的活化起作用。     

核因子κB在人卵巢癌血管生成中的作用及机制

背景和目的:有研究表明核因子κB(nuclear factor κB,NFκB)与体外血管生成有关,但其与卵巢癌血管生成的关系未见报道.本研究旨在探讨NFκB在鸡胚尿囊膜(chick chorioallantcic membrane,CAM)上人卵巢癌(human ovarian carcinoma,HOC)血管生成中的作用及作用机制.方法:将指数生长期的HOC细胞株TYK细胞以1×109/只鸡胚接种于CAM以建立HOC CAM模型.1、20只鸡胚应用ELISA法检测接种细胞后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时间点NFκB、bFGF、αV β3的水平;2、检测NF κB、bFGF和αVβ3在CAM上人卵巢癌血管生成过程中的水平及其对血管生成的影响.另将80只鸡胚分为6组,细胞接种后6 h,不同组CAM上分别加入生理盐水(normal saline,NS)(对照组,16只)、抗NF κB(A组,16只)、抗bFGF(B组,16只)、抗NFκB+抗bFGF(D组,8只)、接种后12 h加入抗αV β3(C组,16只)和抗NF κB+抗αVβ3(E组,8只)抗体.加抗体后48h NS、A、B、C组各取出8只鸡胚,用ELISA检测CAM中NFκB、bFGF和αV β3的水平.其余的鸡胚孵育5天,用图像分析法检测各组CAM血管面积比(vessel area/area,VA/A).结果:人卵巢癌CAM模型上NF κB、bFGF水平自6h、αV β3水平自接种后12 h开始显著增加(P＜0.01)(0.185±0.01、0.771±0.16、0.231±0.02),三者水平均在48h达到高峰(P＜0.01)(0.337±0.01、1.639±0.01、0.349±0.01).在各个时间点bFGF的水平均显著高于NF κB及αV β3(P＜0.01),NF κB及αV β3的水平差异无显著性(P＞0.05).A、B组NF κB、αV β3与bFGF水平显著低于NS组(P＜0.01),(0.098±0.02、0.156±0.02、0.329±0.01;1.106±0.33、0.412±0.01、1.591±0.13;0.138±0.03、0.114±0.02、0.322±0.01).C组αVβ3水平与NS组相比显著降低(P＜0.01),(0.119±0.02、0.322±0.01),而NFκB、bFGF表达与NS组相比无显著变化(P＞0.05).A、B、C、D、E五组VA/A均显著低于NS组(P＜0.05)(26.10±13.71、34.12±4.85、25.50士11.41、14.32±3.11、24.36±4.95、66.62±17.64),D组VA/A与A组相比则显著降低(P＜0.05)(14.32±3.11、26.10±13.71),而A、B、C、E四组间差异无显著性(P＞0.05).结论:NFκB通过上调bFGF与αV β3的表达与bFGF共同促进卵巢肿瘤血管的生成;它不仅可作为血管生成的标记物,还可成为卵巢癌的治疗靶.     

NF-κB抑制剂对卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的探讨NF—κB抑制剂（PDTC）对卡铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察了卡铂诱导下卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB在细胞质和细胞核中的表达变化;采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,检测卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF—κB的活性;MTT和流式细胞仪分别检测2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率。结果NF—κB在卵巢癌SKOV3细胞质中表达,卡铂诱导12h后卵巢癌SKOV3细胞质中的NF—κB转移至细胞核。EMSA实验结果表明,卡铂诱导后的卵巢癌SKOV3细胞NF—κB的活性增强,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为6．7％、20．1％;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率为14．0％、32．7％,两者比较差异显著（P〈0．05）。结论卡铂能诱导NF—κB的活化,NF—κB的抑制剂可以增强卡铂诱导SKOV3细胞的凋亡,提高化疗疗效。     

核因子-κB在人脑肿瘤中的表达及意义

目的 :探讨核因子 κB(nuclearfactorkappaB ,NF κB)在人脑肿瘤组织中的表达及意义。方法 :应用免疫组织化学方法检测NF κBP65在 1 0 6例人脑肿瘤中的表达 ,其中星形细胞肿瘤 64例、髓母细胞瘤 2 2例、脑膜瘤 2 0例。 1 0例正常大脑组织作为对照。结果 :星形细胞肿瘤、髓母细胞瘤及脑膜瘤中NF κBP65蛋白阳性表达率分别为54 7% (35 64)、36 4% (8 2 2 )和 5 0 % (1 2 0 ) ;1 0例正常脑组织中NF κBP65无 1例阳性表达。NF κBP65蛋白的表达在星形细胞瘤与脑膜瘤、髓母细胞瘤与脑膜瘤之间差异显著 (P <0 0 5)。结论 :NF κB组成性活化与脑恶性肿瘤的发生相关 ,NF κBP65是一种与人脑肿瘤相关的新的癌蛋白