异源双链泳动分析法在人类免疫缺陷病毒1基因亚型分析中的应用

目的 运用异源双链泳动分析法（HMA）进行人类免疫缺陷病毒1（human immunodeficiency virus-1,HIV-1)基因亚型分析。了解福建省HIV-1亚型的流行情况。方法 收集细胞培养中HIV-1感染的外周血单个核细胞（PBMC），聚合酶链反应（PCR）扩增HIV-1膜蛋白基因（env)区的核酸片段，与标准亚型的对照质粒的PCR产物进行杂交，形成异源双链二聚体，根据其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的泳动率确定其亚型，并进一步对标本进行序列测定和系统树分析，结果 15份标本中，80.00%为E亚型，6.67%为B亚型，2份不能确定其亚型，比较异源双链泳动法和序列测定法的结果，显示两种分析方法对HIV-1病毒基因分型有较高的一致性，其亚型一致率为86.67%。结论 福建省流行的HIV-1毒株以E亚型为主，亚型分析5法具有快速，简便，经济和高特异性的特点，可用作对HIV流行毒株进行长期监测的重要手段。     

1217例脑卒中住院病人的流行病学分析

为了解珲春市脑卒中流行特点，对珲春市各医院１９９３～１９９６年脑卒中住院１２１７例病人进行分析，结果报告如下。一、发病率：１９９３～１９９６年间共住院脑卒中病人１９６４例，住院病例年度发病率分别为２６６．６１／１０万、２６８．３８／１０万、２４６．４６／１０万和２５５．３６／１０万，平均为２５９．０１／１０万。其中脑出血（ＣＨ）９３．２１／１０万，脑梗塞（ＣＴ）１５０．６８／１０万，蛛网膜下腔出血（ＳＡＨ）１０．００／１０万，短暂性脑缺血发作（ＴＩＡ）５．１２／１０万。二、民族分布：住院发病率汉…     

福建省HIV-1病毒基因亚型分布的研究

目的 了解福建省HIV1各亚型的流行情况,帮助分析其传染来源和判断流行趋势.方法 采集福建省检出的13例HIV1感染者的外周血单核细胞(PBMCs),提取核酸后用套式聚合酶链反应技术进行扩增HIV1膜蛋白(env)基因C2V3区目的核酸片段,应用异源双链泳动分析法(HMA)进行HIV1亚型的分析.结果 13份标本PCR扩增均阳性,亚型分析结果表明福建省存在HIV1B亚型和E亚型.结论 HIV1B亚型和E亚型可能是福建省流行的主要亚型,主要经性途径由境外传入,且经性传播途径在人群中流行.异源双链泳动分析法可作为HIV1分子流行病学分析的筛选技术推广应用.     

HIV-1基因亚型分型:异源双链泳动分析法

应用套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）对２４份ＨＩＶ感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）样品进行扩增，从样品中获得了ＨＩＶ１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段，然后与已知各标准亚型的对照质粒的相同片段ＰＣＲ产物进行杂交，使样品ＤＮＡ与质粒ＤＮＡ同源部位配对形成异源双链体，根据其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的泳动率可确定其亚型。并将这种异源双链泳动分析法（ｈｅｔｅｒｏｄｕｐｌｅｘｍｏｂｉｌｉｔｙａｓａｙ，ＨＭＡ）的结果与ＤＮＡ序列测定结果比较。实验证明，ＨＭＡ是一种快速、简便、特异和可靠的ＨＩＶ亚型的分析方法     

6份人类免疫缺陷病毒的基因亚型分析

艾滋病是由于人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus。HIV)引起的一类高感染率、高发病率、高死亡率的传染病。由于HIV的高度变异性使得机体的免疫机制难以适应病毒的变异速度。造成感染者的免疫功能部分或全部丧失。而使感染者病死率极高。同时。HIV的这种高度变异性也使其自身发展成为一组复杂的病毒种群。其中包括HIV-1和HIV-2两个型别。目前引起全世界范围内大面积流行的HIV-1病毒主要为HIV-1型M组中的A-J(除E以外)9个亚型和14种流行重组模式(CRF01～CRF14)毒株。而不同亚型病毒的生物学特性、分子流行病学特征、疾病进程和相关治疗手段均有所不同。笔者根据通过复合套式PCR鉴定HIV-1基因亚型的方法。对沈阳医学院附属中心医院门诊和住院患者中筛查出的HIV-1阳性感染者进行基因亚型的鉴定与分析。报告如下。     

广东省HIV-1流行株的基因亚型分析

目的　了解广东省人免疫缺陷病毒 - 1(HIV - 1)感染毒株的亚型分布情况。方法　用巢式聚合酶链反应 (nPCR)技术 ,对 1998年初至 2 0 0 2年 2月间广东省内 13例HIV - 1感染者血标本进行膜蛋白基因 (env)部分片段扩增 ,将扩增产物克隆至T载体上并进行序列分析。结果　在 11例扩增成功的血标本中 ,B亚型 6例 ,其中 3例来自献血人员 ,1例为性乱人员和 2例为吸毒人员 ;E亚型 5例 ,其中 3例为性乱人员 ,1例来自吸毒人员 ,1例来自献血人员。 5例E亚型基因离散率为 ( 6 6± 3 8) % ;6例B亚型基因基因离散率为 ( 7 6± 1 9) % ,与来自泰国和国内的B亚型代表株最接近。结论　广东省至少有HIV - 1B和E亚型毒株流行 ,且分布广泛 ,来源复杂     

1131例宫颈糜烂流行病学因素分析

为了解已婚妇女宫颈糜烂的患病特点 ,自 2 0 0 2年 2～ 10月对湖南省永州市部分县区及厂矿年龄在 2 0～ 6 0岁的已婚妇女进行了宫颈糜烂流行病学调查分析。1.患病情况 :对 40 18名已婚妇女进行宫颈刮片细胞学检查 ,必要时作阴道镜检查及活体组织检查。诊断标准依据全国高等医药院校第 5版《妇产科学》教材[1] ,确诊为宫颈糜烂者 1131例 ,患病率为 2 8.15 %,其中轻度糜烂者 834例、中度糜烂者 2 49例、重度糜烂者为 48例 ,患病率分别为73 .74%、2 2 .0 2 %和 4.2 4%。2 .年龄分布 :年龄按 2 0～ 2 9岁、30～ 39岁、40～ 49岁、5 0～ 5 9岁分…     

广东省人免疫缺陷病毒1亚型基因序列特征分析

目的研究广东省人免疫缺陷病毒1（HIV-1）亚型的基因序列特征。方法2002年采集100份HIV-1感染者的外周静脉抗凝血,分离单核细胞（PBMC）,提取前病毒DNA,通过聚合酶链反应（PCR）扩增,获得包膜蛋白（ENV）区基因的核酸片段,并对其C2～V3及邻区核苷酸序列进行测定和分析。所得序列用GCG软件包进行系统进化树和氨基酸变异分析。结果经过离散率计算和系统进化树分析后证实,其PCR扩增阳性的75份样品中,44份（58．7％）为重组毒株CRF01-AE（circulating recombinant form 01-AE）,27份（36％）为CRF—BC,4份为泰国B’亚型（5．3％）。结论广东省HIV-1以CRF01-AE和CRF—BC为主,也存在泰国B’亚型。目前我省境内有多种亚型存在,流行趋势日益严峻。加强艾滋病患者的治疗,以及控制和预防艾滋病的传播是今后面临的重要任务。     

人免疫缺陷病毒1型的亚型分类

人免疫缺陷病毒(HIV)有两型：HIV-1和HIV-2。HIV-1基因具有很高的变异性，因而对HIV-1基因进行分类是该病毒基因研究的重要部分。本文就HIV-1亚型分类的进展作了综述。     

上海市人类免疫缺陷病毒阳性人群HIV-1分布特征分析

[目的 ]　分析上海市人类免疫缺陷病毒 (HIV )阳性人群HIV -1分布特征 ,为制定预防HIV传播措施提供科学依据。　 [方法 ]　选择 40例不同感染途径的HIV阳性者 ,提取其血浆中核酸进行扩增 ,然后进行序列测定 ,确定其HIV -1型别。　 [结果 ]　 3 8例分离到核酸的阳性者中 ,发现 4种HIV -1亚型 (A、B、B’和C)、2种重组亚型 (CRF0 1_AE和CRF0 8_BC)和 1种未见报道的亚型 (CRF0 1_AEenvBgagUpol)。不同人群感染毒株不同 ,经性接触传播感染者感染毒株较为广泛 ( 7种 ) ,而经血传播者都为B/B’亚型。　 [结论 ]　上海地区存在着多样的HIV -1亚型和重组毒株     

辽宁省艾滋病病毒1流行株膜蛋白V3环氨基酸变异特点

目的　了解辽宁省艾滋病病毒 1(HIV 1)感染者 艾滋病 (AIDS)患者体内不同亚型HIV 1膜蛋白V3环氨基酸序列特征 ,突变种类特点。方法　提取含有整合HIV 1前病毒的基因组DNA ,巢式聚合酶链反应 (nest PCR)扩增后直接测序 ,并做序列排列比对、翻译和分析。结果　辽宁省HIV 1感染者感染病毒分属A、B’、C、G四种亚型 ,AIDS患者体内病毒V3环发生与T嗜性 SI表型有关的氨基酸突变形式 (11位出现R ,13位出现S、T、N ,19位出现V ,2 0位出现Y ,2 5、2 9位出现N等 )高于无症状感染组 (P <0 .0 5 ) ,此外还发现GQGR、APGQ、RPGA、GLGR、RPGA等少见的V3环顶端四肽组成形式及第 5位H ,34位S、F等罕见突变形式。结论　辽宁省AIDS人群中 ,A、B、C、G亚型HIV 1毒株V3环各位置出现氨基酸突变情况与国外对B亚型毒株的研究结果总体上相似 ,但发现一些罕见突变和少见V3环顶端四肽组成形式。     

河南省1157份人免疫缺陷病毒1型毒株亚型分析

目的 了解河南省人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株的亚型状况及序列变异、流行特征,分析其传染来源及传播规律,为河南省艾滋病防治策略提供依据.方法 对2005-2006年在河南全省收集的1157例HIV-1感染者抽取静脉血,分离单个核细胞(PBMC),用套式聚合酶链反应(nest-PCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸(DNA)的膜蛋白(env)基因进行扩增,并对其C2V3区核苷酸序列进行了测定和分析.结果 1157份样本中存在B'、C亚型及BC、AE 2个重组亚型.其在所有分析样本中的比例分别为96.456%(1116/1157)、0.346%(4/1157)、2.593%(30/1157)、0.605%(7/1157).与国内及国际的参考毒株RL42、C.95in21068、07-BC.CN.97.C54A、01AE.TH.90.CM240间的离散率分别为(8.971±3.182)%、(5.109±0.112)%、(3.568 4±0.254)%、(4.775±0.128)%.B'亚型以既往有偿献血人员为主,BC亚型以性传播为主,AE亚型以性传播及既往献血途径为主,C亚型以性传播为主.结论 目前河南省艾滋病感染者中有B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型.泰国B'亚型依然占主导地位.在局部地区,非B'亚型有聚集的现象,应引起当地卫生机构的注意,加大对流动人员的检测.     

河南省人免疫缺陷病毒1型流行现状研究

目的 了解河南省人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株的亚型状况及序列变异、流行特征,分析其传播来源和传播规律.方法 对2006-2007年在河南省采集的1287例HIV-1感染者抽取静脉血,用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸的env基因和gag基因进行扩增,并测定和分析核苷酸序列.结果 1287份样本中存在B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型,其在所有分析样本中的比例分别为95.882%(1234/1287)、0.466%(6/1287)、2.875%(37/1287)、0.777%(10/1287).与国内及国际的参考毒株RL42、C.95in21068、07-BC.CN.97.C54A、01AE.TH.90.CM240间的离散率分别为(9.327±0.245)%、(5.214±0.183)%、(6.278±0.194)%、(5.332±0.1 58)%.结论 目前河南省艾滋病感染者中有B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型.泰国B'亚型依然占主导地位.B'亚型以既往有偿献血人员为主,BC亚型以性传播为主,AE亚型以性传播及既往献血途径为主,C亚型以性传播为主.     

干血斑样本用于HIV-1基因序列测定和亚型分析的研究

目的 将干血斑样本用于HIV-1基因序列测定和哑型分析。方法采集20例静脉吸毒HIV-1感染者的EDTA抗凝静脉全血2ml，80μl制备干血斑样本。QIAamp Blood Mini试剂盒，10％Chelex 100树脂分别提取全血和干血斑中细胞DNA。HIV-1enu基因Gp41区2对外侧和内侧引物，按照巢式PCR方法，扩增Gp41区，PCR产物用内侧正反向引物测序。MEGA3．0等软件完成序列比对及亚型分析。结果18对符合要求的干血斑和全血样本进入研究。16对经序列分析归为中国流行的BC重组亚型，样本间的基因平均离散率为5．79％，与中国流行的BC重组业型的基因离散率为491％，与C亚型代表序列基因离散率为8．89％，与其他几个国际亚型代表株的基因离散率在15％～20％之间。另2对样本分别归属于泰国B’亚型和欧美B亚型。结论干血斑样本与全血样本HIV-1 DNAPCR产物亚型分析一致，氨基酸序列比对同义和非同义替换比例、位置和类型基本一致，其易采集，便于运输，保存条件和生物危险性低，费用低廉的优点适合作为实验条件较差的偏远地区HIV-1分子流行病学研究的一种样本采集手段。     

北京地区流行的HIV-1 CRF01_AE株基因特征研究

目的 分析北京地区HIV-1 CRF01 AE株在的基因特征.方法 采集北京地区2006-2008年新确证HIV感染者的抗凝全血标本,分离血浆和提取病毒RNA,用反转录/巢式聚合酶链式反应扩增病毒gag基因,对获得的105条CRF01_AE株序列进行系统进化分析,并通过计算组间距离和Entropy核苷酸多态性差异方法分析病毒株的遗传特征.结果 在CRF01 AE株序列系统进化树中存在4个主要的亚簇,Homo-Max亚簇包含67例样本,同参考株CM240组间基因 离散率为5.4%,组内离散率为2.8%;Hetero亚簇包含6例样本,组间基因离散率为4.8%,组内离散率为4.2%.Mix亚簇包含8例样本,组间基因离散率为4.2%,组内离散率为5.2%.Homo-Min亚簇包含18例样本,组间基因离散率为4.4%,组内离散率为2.8%.Homo-Max、Hetero和Homo-Min亚簇无其他国家的序列,Mix亚簇与越南和泰国CRF01 AE株关系密切;核苷酸多态性分析结果显示,以Mix亚簇为参照,Homo-Max、Homo-Min和Hetero亚簇分别有37、29和11个位点的核苷酸组成,差异有统计学意义.结论 北京地区流行的CRF01_AE病毒株中首次观察到4个独立的亚簇;Homo-Max亚簇株为最主要的CRF01_AE株;Mix亚簇株与来自于泰国和越南的CRF01 AE株有较高同源性.     

浙江省2015年HIV分子亚型特征及其传播关系研究

目的 了解浙江省现阶段HIV毒株亚型流行分布特征和分子网络传播关系。方法 采用分层随机抽样方法抽取浙江省2015年4-6月新发现HIV感染者302例进行横断面调查,运用RT-PCR和巢式PCR扩增pol基因成功获得276份序列,结合流行病学调查数据开展测序及系统进化树分析。结果 276例HIV感染者毒株亚型构成：CRF07_BC 122例（44.2%）,CRF01_AE 103例（37.3%）,CRF08_BC 17例（6.1%）,B亚型9例（3.2%）,CRF55_01B 6例（2.2%）,C亚型5例（1.8%）,CRF59_01B 1例（0.4%）,CRF67_01B 1例（0.4%）,A1亚型1例（0.4%）,URFs 11例（4.0%）。CRF07_BC、CRF01_AE毒株亚型在进化树上已形成明显的分簇现象,传播簇主要集中分布在MSM人群（76.5%）。MSM人群的成簇比例高于其他人群,且不同传播途径感染人群存在传播联系。结论 2015年浙江省HIV主要流行毒株以CRF07_BC、CRF01_AE为主,亚型构成有复杂化趋势,应加强对HIV毒株亚型和流行簇的监控和预警,开展分类管理,针对高风险人群和传播链开展有效防控。     

辽宁省2008-2010年HIV-1基因亚型分布特征及流行病学分析

HIV-1毒株的感染力较强,是目前HIV流行的主要病毒株和重点研究对象[1].HW-1分为M(main)、O(outlier)和N(non-M-non-O)3个组.其中M组又分为A～K亚型.近年又证实了至少16种各种亚型的重组型CRF 01至CRF016.本研究对59例HIV-1感染者血浆样本进行基因扩增和序列分析并收集相关流行病学资料,结果报道如下. 1.材料与方法: (1)样本来源:选取2008-2011年经病毒载量检测,载量＞1000 copy/ml的59例样本进行HIV蛋白酶(PR)和反转录酶(RT)基因区的扩增和测序.     

辽宁省HIV-1株的基因序列测定和亚型分析

目的　通过DNA序列分析 ,确定辽宁省HIV -1流行毒株的亚型。方法　从辽宁省HIV -1抗体阳性者中选择 16例 ,其中经性接触感染者 8例 ,经静脉吸毒和血液途径感染者 7例 ,垂直传播者 1例 ,采集全血提取DNA作为PCR扩增的模板 ,套式引物扩增HIV -1前病毒DNA的C2～V 3区用于测序。所测序列与国际标准株及国内外参考序列进行比较 ,确定被检标本的亚型。结果　辽宁省流行的HIV -1病毒分属A、B、C、G4种亚型 ,其中经性途径传播者 8例分别为B′亚型和A亚型 ,静脉吸毒者 4皆为C亚型 ,经血途径感染者分别属B′和G亚型 ,垂直传播者为A亚型。亚型内基因离散率分别为 :A亚型 (7 5± 1 0 ) % ,B′亚型 (8 5± 0 9) % ,C亚型 (5 4± 0 9) % ,G亚型 (13 5±2 1) %。结论　辽宁省目前HIV -1的流行株亚型较为复杂 ,不同传播途径感染HIV毒株亚型有所不同 ,C亚型毒株只见于静脉吸毒者 ,经性途径和血途径感染主要为B′亚型 ,而A亚型和G亚型只见于非洲劳务输出人员及其配偶子女。