pS2融合蛋白的原核表达及其性质鉴定

目的：获得ｐＳ２融合蛋白。方法：ＲＴ－ＰＣＲ法从乳腺癌组织中扩增ｐＳ２片段，定向克隆到ＰＭＳ－３１ｂ载体上，重组质粒ＰＭＳ－ｐＳ２转化温度敏感型细菌ＰＯＰ２１３６，使之高效表达融合蛋白ＭＳ２－ｐＳ２。结果：免疫组织化学试验（ＩＨＣ）结果表明：纯化的融合蛋白ＭＳ２－ｐＳ２能与抗ｐＳ２进口单抗特异反应。酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｉｎｇ试验表明；ＭＳ２－ｐＳ２能与ｐＳ２Ｃ端     

抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗-HCV高变区1(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠。采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb。经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性;用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数。结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11。该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125×10-5;相对亲和常数为1.0×106L/mol。该株mAb与HBsAg、HBeAg、HBcAg、HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应。结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂。     

抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定

目的：制备抗潮霉素B磷酸转移酶(HPT)的单克隆抗体(McAb)，建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法：用基因重组潮霉素B磷酸转移酶(HPT)抗原免疫BALB/C小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对，建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原。结果：筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定均为IgG1，ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白。结合位点测定实验表明4株单抗是针对不同的抗原决定簇，与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法，均可较好地检测到HPT抗原。检测的灵敏度为30ng／ml，且与别的无关抗原无交叉反应性。结论：4株杂交瘤细胞株特异性好，亲和力强，组成双抗夹心ELISA法可用于快速、灵敏检测HPT抗原。     

一组小鼠抗大鼠单克隆抗体的鉴定

本室保存了一组小鼠抗大鼠的单克隆抗体(ｍＡｂ)ＯＸ５４(ＣＤ２) ,Ｗ３／２５(ＣＤ４) ,ＯＸ１９(ＣＤ５) ,ＯＸ３９(ＣＤ２５) ,ＯＸ７(ＣＤ９０ ,Ｔｈｙ１) ,ＯＸ１８(ＭＨＣ Ｉ单态 )和Ｒ７３(ＴＣＲαβ)。现以间接免疫荧光染色法和流式细胞仪分析技术 ,观察了这组ｍＡｂ在大鼠胸腺细胞及淋巴结细胞中的分布 ,并对其特异性进行了鉴定。１材料和方法１．１材料分泌ＯＸ５４(ＣＤ２) ,Ｗ３／２５(ＣＤ４) ,ＯＸ１９(ＣＤ５) ,ＯＸ３９(ＣＤ２５) ,ＯＸ７(ＣＤ９０,Ｔｈｙ１) ,ＯＸ１８(ＭＨＣ Ｉ单态 )和Ｒ７３(ＴＣＲαβ)等ｍＡｂ的杂…     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

抗Thy—1,l3T4,lyt—2单克隆抗体的产生和鉴定

本文应用淋巴细胞毒、间接免疫荧光、流式细胞分离仪和淋巴细胞转化抑制试验测定了三株杂交瘤细胞所分泌的抗小鼠T细胞表面Thy—1、L3T4、Lyt—2单克隆抗体的特异性和效价。发现抗L3T4和抗Thy—1单克隆抗体对胸腺和脾脏细胞的识别率为95％和25％;抗L3T4和抗Lyt—2单克隆抗体对胸腺细胞的结合率分别为80％和90％;对脾脏细胞结合率分别为18％和11％。经抗Thy—1和抗L3T4单克隆抗体加补体处理后的脾细胞对ConA刺激的增殖能力明显被抑制,而对LPS刺激的增殖能力正常。本文结果除抗L3T4、Lyt—2单抗的细胞毒试验未见报导外,其它结果均和原作者的报导符合。     

抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗人ＭＡｄＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）。　方法以重组人ＭＡｄＣＡＭ－１胞外区蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备ｍＡｂ。结果获得１０株可分泌特异性ｍＡｂ的杂交瘤细胞，其腹水ｍＡｂ的效价为３．２×１０５～１．９×１０６，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧ１，其中，８株ｍＡｂ的轻链属κ型，２株为λ型。应用于免疫组化染色法，检测表明，正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在ＭＡｄＣＡＭ－１阳性表达的血管内皮细胞。结论　成功地研制出抗人ＭＡｄＣＡＭ－１的ｍＡｂ，为进一步研究ＭＡｄＣＡＭ－１在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂。     

抗TPO单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗ＴＰＯ单克隆抗体的制备及初步鉴定徐荣佳，刘军权，方蕾，姚仁南，陈晓英，徐广奎，陈复兴甲状腺过氧化物酶（ＴＰＯ）现已证明是甲状腺微粒体（ＴＭ）的主要抗原成份［１］。国外就其分子已作了较为深入的研究，并重组了其分子和产生了单克隆抗体。它对研究甲状腺自身...     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。     

抗HBeAg单克隆抗体的制备及初步鉴定

为获得能替代抗ＨＢｅＡｇ多克隆酶标记抗体做ＥＬＩＳＡ，我们用纯化的ＨＢｅＡｇ阳性血清，免疫Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术，获得８株能稳定分泌小鼠抗ＨＢｅＡｇｍＡｂ的杂交瘤细胞。对其特性进行了初步鉴定，并就这些单克隆抗体（ｍＡｂ）在ＥＬＩＳＡ反应中的特性进行了分析。１　材料和方法１－１　材料　ｅ抗原阳性的人血清经亲和层析纯化的ＨＢｅＡｇ，由本室收集并纯化。Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞，由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。１－２　杂交瘤细胞株的…     

抗谷胱甘肽还原酶单克隆抗体的研制及鉴定

谷胱甘肽还原酶（ＥＣ１．６．４．２，ＧＲ）为一种黄素酶，可催化氧化型谷胱甘肽转变成还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ），从而提高细胞液中ＧＳＨ的含量。ＧＳＨ具有抵抗自由基氧化对机体损伤的作用。ＧＳＨ的储量与创伤、肿瘤等的预后，以及人体衰老有关〔１〕。本研究采用淋巴细胞杂交瘤技术，研制了抗酵母菌ＧＲ的单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其生物学特性进行了分析，从而为ＧＲ的纯化及其用免疫化学法测定提供了重要的试剂。１材料和方法１．１材料酵母菌谷胱甘肽还原酶，为美国Ｓｉｇｍａ公司产品。Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，８周～１２周龄，雌…     

抗人肝癌单克隆抗体HL2的制备及鉴定

用肝癌细胞株QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721以贯序法免疫BALB/c小鼠,获得一株分泌肝癌单抗的杂交窟株HL_2,其染色体数目为97—105。单抗HL_2系IgG_2b亚类。吸收实验及阻断实验证明HL_2抗原与CEA、AFP、HBsAg、HBcAg及HBeAg无免疫同源性。ABC法和ELISA法说明单抗HL_2与四株肝癌细胞、六例肝癌组织均呈明确阳性反应,除与SGC-7901、H_(128)、K_(562)、Hela细胞株及部分胚胎肝脏,胚胎结肠有较弱性反应外,与肝癌旁组织、正常肝脏、其它肿瘤组织和细胞株、二种正常人细胞及其它胚胎组织无反应。显示了单抗HL_2的特异性较好、阳性率较高,是一个有应用前景的单抗。     

抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定

神经营养因子（　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ＮＴＦｓ）是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质，其主要功能是促进神经系统的发育，保护并修复受损神经元，以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结［］。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　ＮＧＦ）是发现最早、研究最多的一种ＮＴＦ。制备抗ＮＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具，并可为基因工程制备ＮＧＦ提供检测方法。我们受澳大利亚Ｆｌｉｎｄｅｒ大学周兴福教授委托，研究制备了分…     

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。方法利用重组Derf1蛋白为免疫原,免疫BALB／c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western—blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Derf1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Derf1检测及纯化方法奠定了基础。     

抗GST单克隆抗体的制备和鉴定

ＰＧＥＸ4Ｔ是原核表达系统中常用的表达载体,其表达产物为目的蛋白(肽段)与谷胱甘肽转硫酶(ＧＳＴ)所形成的融合蛋白。本文制备了抗ＧＳＴ的单克隆抗体(ｍＡｂ),为上述融合蛋白的辅助检测、鉴定和纯化奠定了基础。1　材料和方法11　ＧＳＴ抗原　利用基因重组技术制备的Ｇ...     

抗rhG-CSF单克隆抗体的制备和初步鉴定

<正> 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种造血调控因子,为鉴定、检测和纯化人G-CSF,制备了四株特异识别人G—CSF的单克隆抗体(单抗,McAb)。1 材料和方法1.1 rhG-CSF和rhG-CSF融合蛋白 均由本实验室克隆、表达和纯化。纯化后的样品经SDS—PAGE鉴定,纯度大于95％。1.2 单抗制备 以rhG-CSF融合蛋白为抗原,按常规方法制备单抗。1.3 单抗识别抗原表位鉴定试验 用15μg/ml的抗原包被检测板(50μl/孔),对杂交瘤细胞的培养上清及其系列倍比稀释液进行间接ELISA检测,找出使抗原饱含的各McAb的最大稀释度。