RNase等10种标准蛋白质在高效疏水作用色谱上的复性

目的: 研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPHIC)上的保留行为及复性效率. 方法: 分别用盐酸胍(GuHCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将核糖核酸酶(Rnase)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为硫酸铵的条件下,用HPHIC对变性蛋白质进行复性,并测定其保留时间、Z值、质量及活性回收率. 结果: 在10种变性蛋白质中有5种在HPHIC上得到复性,其保留时间、峰形、Z值与天然蛋白基本一致,其中溶菌酶和核糖核酸酶的质量和活性回收率高,复性效果好. 结论: 用HPHIC对变性的标准蛋白质进行复性,得到较好的复性效果.     

脲变性α-糜蛋白酶的高效液相色谱复性

目的研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPHIC)固定相表面上的保留行为及活性回收率。方法用脲将标准蛋白质α-糜蛋白酶(α-Chy)变性,然后以硫酸铵为流动相,用HPHIC固定相(TSK)对脲变性α-Chy进行复性,并测定复性α-Chy的Z值、质量及活性回收率。结果Z值随脲浓度的增大而减小,变性剂浓度在1.0～3.0mol·L-1范围内时,HPHIC对变性α-Chy有较高的活性回收率。结论HPHIC是变性蛋白复性的有效工具,蛋白质与固定相之间的疏水作用是蛋白折叠的主要驱动力。     

还原变性核糖核酸酶的高效液相色谱复性

目的:研究还原变性的核糖核酸酶(RNase)在高效疏水作用色谱(HPHIC)及高效离子交换色谱(HPIEC)上的复性及影响因素.方法:在二硫苏糖醇(DTT)存在的条件下用盐酸胍(GuHCl)和尿素(Urea)将RNase变性还原,先在溶液中加入氧化型谷胱苷肽(GSSG)进行氧化,然后在流动相中有低浓度变性剂存在的条件下,用HPHIC,HPIEC及稀释法对其进行复性并测定其生物活性及回收率.结果:HPHIC和HPIEC对RNase的复性效率均高于稀释法,两者的色谱固定相对RNase的复性均有所贡献.在色谱流动相中加入低浓度的变性剂可以提高复性效率,改变GSSG的浓度对复性效率也有影响.结论:用HPHIC,HPIEC对RNase进行复性,不仅复性效率高,而且快速、简便,具有很好的应用前景.     

血管抑素3A工程蛋白的柱复性与离子交换纯化

由大肠杆菌以包涵体形式表达的一种抗内皮细胞生长工程蛋白(A nti-ang iogen ic agent,简称3A)经变性,Sephacry l S-100 HR柱复性,SP Sepharose FF离子交换吸附纯化,SephadexG-25脱盐,获得复性率为53.47%,HPLC纯度为92.52%的3A活性蛋白。以猪髋动脉内皮细胞为受检细胞,表明纯化蛋白具有抑制内皮细胞生长的特性。     

变性高效液相色谱在细菌耐药基因检测中的研究进展

目前在临床上如何能快速准确地筛查出细菌的耐药基因,为临床医师提供合理使用抗生素的依据,已经成为迫切需要解决的问题。变性高效液相色谱作为一种新的筛查耐药基因突变的技术,以其高效、灵敏、准确的特点,在耐药基因检测中异军突起。近年来在细菌耐药性检测方面包括β-内酰胺酶的分型、喹诺酮耐药基因突变等方面已经显示出其广泛的应用前景,开始备受临床实验室关注。     

高效液相色谱测定糖化血红蛋白方法的建立与评价

目的:建立高效液相色谱(HPLC)测定糖化血红蛋白(GHb)方法,并对其进行评价.方法:以Bio-Rex 70阳离子交换树脂为填料,在HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定GHb,对其分析性能进行评价.对50例健康人和50例糖尿病患者标本中糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的含量进行测定.结果:Hb、HbA0和HbA1c的吸收...     

高效液相色谱在中草药研究中的应用

绪论中草药化学研究主要是利用化学方法研究中草药的化学组成，寻找具有药用价值的活性化合物和其它具有开发价值的新化合物。经典的分离方法大多基于各种化合物溶解度的不同而采用不同溶剂由低极性到高极性分步提取，用溶剂结晶法纯化所提制得到的物质。由于中草药中化合...     

大肠埃希菌表达的含PTD穿膜序列的融合蛋白3种复性方法比较

目的:探索融合蛋白PTD-NFATminiDBD-eGFP纯化以及复性的条件,以提高其复性效率,为后续融合蛋白生物学功能的研究做准备。方法:表达、提取并纯化包涵体形式的融合蛋白PTD-NFATminiDBD-eGFP,分别用稀释复性、透析复性、柱上复性的方法,对融合蛋白进行复性,分析不同方法的特点及包涵体复性率,采用流式细胞术检测融合蛋白的穿膜活性。结果:3种复性方法得到的融合蛋白复性率依次为:柱上复性得率最高,其次是透析复性,稀释复性得率最低。柱上复性后蛋白的穿膜效率最高,相对较低的是稀释复性,而未复性的融合蛋白穿膜效率极低。结论:3种复性方法均能对PTD穿膜蛋白复性,但以柱上复性最佳。     

SA-TNF-α融合蛋白高效表达、纯化及复性研究

目的 研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法 ,并研究其生物学功能.方法 在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍体系中复性,Western blot对其进行鉴定.MTT法检测SA-TNF-α融合蛋白对L929细胞的杀伤活性,流式细胞仪分析SA-TNF-α融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰率.结果 SA-TNF-α融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的目标蛋白占菌体蛋白30%以上,镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱纯化的SA-TNF-α融合蛋白纯度达到95.7%,经过两种体系复性形成的SA-TNF-α融合蛋白的二聚体和多聚体均具有双功能活性:既对L929细胞有杀伤活性又能锚定修饰生物素化的MB49细胞,锚定修饰率大于90%.结论 初步建立了SA-TNF-α融合蛋白制备工艺,SA- TNF-α二聚体和多聚体均具有双功能活性,SA-TNF-α融合蛋白的研制有望为肿瘤的治疗提供新的治疗方法 及新型药物.     

基因重组蛋白L243诱导表达包涵体的变性、复性与纯化

目的 对来自于日本七鳃鳗的基因重组蛋白L243包涵体进行变性、复性与纯化,以获得成分均一的活性蛋白.方法 以6 mol/L尿素为变性剂,以0.1 mol/L氧化型谷胱甘肽及0.9 mol/L还原型谷胱甘肽为复性剂,对构建于pET23b的日本七鳃鳗L243基因在大肠杆菌Rosetta中表达的包涵体进行了的变性、复性与组氨酸亲和层析纯化.结果 经变性、复性后,获得了均质的L243纯化蛋白,该蛋白的复性率达80%.结论 成功对上述重组蛋白包涵体进行了变性、复性及纯化,为后续与此蛋白相关的生物活性测定奠定了物质基础.     

高效液相色谱在中药研究中的应用进展

中药制剂多为复方制剂，且所含成分复杂，给分析研究带来很大困难。高效液相色谱法是6O年代末发展起来的一项新技术，具有分离效能高，准确性好，分析速度快等优点、随着HPLC技术的不断发展，在中药分析研究方面的应用也日益广泛，并为中药分析研究工作提供了条件。近些年，HPLC在中药研究中的应用综合有以下几个方面。1HPLC在中药制剂分析研究中的应用中药制剂的质量，直接影响到药物的疗效，密切关系着病人的安危，应确保中药制剂、中成药的质量。但由于中药成分复杂，特别是复方制剂，除被测定的活性成分外，还含有其他许多成分，…     

变性高效液相色谱技术检测qnr阳性肺炎克雷伯菌染色体突变位点

目的 检测质粒介导喹诺酮耐药基因(quinolone resistance,qnr)阳性肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)染色体旋转酶GyrA和拓扑异构酶ParC的突变位点.方法 应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)对有异常峰型的菌株进行DNA测序.结果 qnr阳性Kpn GyrA亚基...     

高效液相色谱在中药研究应用中的新进展

研究表明,高效液相色谱在中药化学成分研究方面很有优势。从中药制剂分析、中药药材及中药炮制三方面综述了近年高效液相色谱研究新进展。     

应用部分变性高效液相色谱技术检测胃癌组织、血清中基因突变的研究

目的:探讨部分变性高效液相色谱(DHPLC)在检测胃癌组织、血浆中基因突变中的应用.方法:应用DHPLC对39例胃癌组织及血清中p53基因突变进行检测,并测序验证.结果:本研究中p53基因的突变率为21%(8/39);其中肠型胃癌突变率40%(6/15)明显高于弥漫型胃癌8.33%(2/24)(P＜0.01);发现既往未见报道突变3例.血清标本中50%(4/8)可扩增出目的片段,但均未检出突变.结论:DHPLC是一项较好的检测胃癌组织中基因突变的筛查方法,在血清中的应用仍需探讨.     

巴中等地产栀子高效液相色谱指纹图谱的比较研究

目的研究四川巴中产栀子与其他产地栀子指纹图谱的异同。方法建立30年生巴中产栀子高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并计算其与其他产地栀子HPLC指纹图谱的相似度。结果经计算不同产地栀子HPLC指纹图谱的相似度,发现各产地栀子间在成分组成上存在一定差异。结论通过对巴中产栀子指纹图谱与其他3产地指纹图谱的比较评价,为进一步控制巴中产栀子的质量提供了可靠的科学依据。     

强心甙的高效液相色谱方法

<正> 由于多数强心甙安全范围小,治疗量和中毒量接近,在剂量上不易掌握,因而在使用上受到一定限制。许多药物分析化学家长期从事植物强心甙及制剂的定性定量方法的研究,探寻灵敏,快速、准确的分析方法。如先后有纸层,薄层分析法,比色分析法,荧光分析法等,但结果往往不能令人满意,尤其在分析成分复杂的生药时,选择性问题难以克服。由于强心甙挥发性衍生物衍生过程复杂,气相色谱方法进展也较为缓慢,1974年     

茯苓萜类的高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立茯苓三萜化合物的指纹图谱。方法 反相高效液相色谱法。结果 道地药材茯苓及不同地区收集的市场商品具有相当稳定的、相似程度很高的指纹图谱。结论 可利用液相色谱的特征峰控制茯苓及其制剂的质量。     

枳实的高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立枳实药材HPLC指纹图谱分析方法。方法 采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),以乙腈-0.01%磷酸二氢钠水溶液梯度洗脱,测定了36批枳实药材的指纹图谱。应用相似度分析、聚类分析和主成分分析,对枳实药材进行分类,建立枳实药材指纹图谱的共有模式,并应用主成分分析对共有模式进行研究。结果在选定的色谱条件下,得到两类枳实药材HPLC指纹图谱;根据相似度分析、聚类分析和主成分分析的结果,将36批药材分为2类,分别建立指纹图谱。结论 应用本方法评价枳实药材的质量是可行的。     

超高效液相色谱在中药领域的应用

超高效液相色谱是近年来发展起来的一种相对快速、便捷的分析手段。由于其在高效液相色谱的基础上进行了突破性地改造,使得其具有较高分离效能和灵敏度,较短的分析时间以及较少的分析溶剂消耗等优点。超高效液相色谱在天然药物的有效成分检测、质量控制、指纹图谱及代谢等多研究方面得到了愈发广泛的应用。