小鼠骨髓嗜多染红细胞微核单激光流式细胞仪自动化检测

背景与目的建立快速检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化方法。材料与方法以环磷酰胺处理雄性KM小鼠,分别用丫啶橙(Acridine orange,AO)、单激光流式细胞仪(Flowcytometer,FCM)、姬姆萨(Giemsa)法检测小鼠骨髓及外周血嗜多染、正染红细胞微核率,将检测结果进行比较。结果以前置角散射光(Forward angle scatter,FSC)和DNA荧光(FL1)作图,清晰可见小鼠骨髓细胞被分成5个群体——有核细胞、嗜多染、正染、含微核的嗜多染及正染红细胞;环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多染及正染红细胞微核率呈良好的剂量-反应关系;FCM、快速AO法与Giemsa法检测结果具有良好的相关性(r=0.973,P<0.01;r=0.978,P<0.01)。结论AO-FCM自动化检测方法完全适用于小鼠骨髓红细胞微核率的检测。     

大鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化检测

背景与目的:建立一种基于单激光流式细胞仪的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率自动化检测方法.材料与方法:以环磷酰胺诱导雄性Wistar大鼠微核形成,采用吖啶橙(acridine orange,AO)荧光染色,分别用荧光显微镜及单激光流式细胞仪检测大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及正染红细胞微核率.结果:以前置角散射光(FSC)和DNA荧光(FLl)作图,大鼠骨髓细胞被分成明显的五个细胞群--有核细胞、嗜多染红细胞、正染红细胞、含微核的嗜多染红细胞及含微核的正染红细胞;经环磷酰胺处理的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及正染红细胞微核率均呈现良好的剂量-反应关系及时效关系;人工显微镜计数结果与流式细胞仪检测结果具有良好的相关性(R=0.949,P＜0.01),二者的曲线拟合方程为Y=1.0967 1.0639X(R=0.949,P＜0.01).结论:本研究建立了AO染色结合单激光流式细胞仪的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率自动化检测方法.     

人外周血网织红细胞微核的流式细胞仪自动化检测

背景与目的:建立一种基于单激光流式细胞仪的人外周血网织红细胞微核率自动化检测方法.材料与方法:在本室已建立的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核流式细胞仪自动化检测体系基础上,使用磁式细胞分选技术,富集并分离人外周血中的网织红细胞,采用吖啶橙(acridine orange,AO)荧光染色,用流式仪检测人外周血中的网织红细胞微核率.结果:磁式细胞分选技术分离到的CD71阳性红细胞占网织红细胞总量的20%至90%,产量在不同个体之间存在显著差异,但同一个体其分离效果几乎没有差异;网织红细胞经过富集后的人外周血样本被分成明显的五个细胞群--网织红细胞、含微核的网织红细胞、成熟红细胞、含微核的成熟红细胞以及有核细胞;7名健康人外周血网织红细胞微核率平均值为2.36‰,10名接受累积放疗剂量0、4、10、20、30、40及50Gy后的鼻咽癌患者外周血网织红细胞微核率平均值分别为2.97‰、29.37‰、57.90‰、69.05‰、62.58‰、51.19‰及50.07‰.结论:成功建立了基于单激光流式细胞仪的人外周血网织红细胞微核率自动化检测体系.     

基于三色流式细胞术的小鼠外周血微核试验方法的建立

目的：为克服传统显微镜检微核（micronucleus,MN）方法耗时、费力、主观等缺点,建立基于CD71、CD61荧光抗体和碘化丙啶（cyclophosphamidr,PI）的三色流式细胞术（flow cytometry,FCM）研究小鼠外周血微核的自动化检测方法。方法：经口单次给予小鼠0、20、40和80mg/kg环磷酰胺（CP）,于不同时间点收集外周血;另一批小鼠给予CP40mg/（kg·d）经口灌胃,连续染毒5d,分别于给药前和每次给药后24h收集外周血。采用-80℃甲醇固定血细胞,CD71、CD61荧光抗体、RNA酶和PI孵育血细胞,以疟原虫感染的红细胞作为生物标准物调校FCM后,对CP诱导的小鼠外周血中含MN的CD71＋网织红细胞（reticulocytes,RET）进行检测。结果：单次染毒后48h MN-RET达峰值,且MN-RET呈现明显的剂量依赖性增加（r=0.984 9,P〈0.01）;重复染毒5d,FCM监测的MN-RET染毒2d后达到稳态水平。FCM检测的MN-RET峰值和稳态水平与常规显微镜观察的骨髓微核率有良好的相关性（r=0.9212,P〈0.01）。结论：FCM小鼠外周血微核法稳定可靠,可以作为常规显微镜小鼠骨髓阅片法的替代方法,用于小鼠体内微核试验。     

苦参素对小鼠的急性毒性和外周血红细胞微核和精子畸变试验

背景与目的： 研究苦参素的急性毒性及遗传毒性。材料与方法： 采用LD50试验,外周血微核试验与精子畸变试验,按体重随机分为五组,以腹腔注射（i.p）方式给药。结果： 小鼠苦参素的LD50为(505±31)mg/kg。外周血24 h PCE、48 h PCE微核率显示：1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50组与阴性对照组相比均有统计学意义,且有一定的剂量反应关系。精子畸变试验中1/2 LD50组的畸变率与阴性对照组相比有统计学意义,1/4 LD50、1/8 LD50组与阴性对照组相比无统计学意义。结论： 苦参素基本属低毒类药物,在一定程度上有遗传毒性作用。     

流式细胞术检测体外微核方法的建立

目的： 建立96孔板流式细胞术体外微核自动化检测的方法,并探讨其用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的可能性。方法：试验分为+S9短时处理组(4 h)和-S9持续处理组(24 h),分别选择3个不同浓度的环磷酰胺和丝裂霉素C处理CHO-K1细胞,24 h后收获细胞。采用EMA和SYTOX Green双色标记,流式细胞仪分析96孔板的微核率,并与常规标准平皿培养、细胞分裂阻滞法的双核微核结果进行比较。结果：在有或无S9处理条件下,不同浓度的环磷酰胺、丝裂霉素C诱导产生的微核率较溶剂对照组均显著增加(P均<0.05),剂量-效应关系明显。两种微核检测方法的Spearman相关系数(rs)为1.000。结论：流式细胞术检测环磷酰胺、丝裂霉素C作用于CHO-K1细胞的微核试验结果均为阳性,与文献报道一致,因而本试验初步建立了流式细胞术体外微核检测方法。流式细胞术检测微核的方法与人工阅片的方法相关性好,提示该方法用于化合物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价具有良好的前景。     

水环境致突变物生物监测的研究——鱼类外周血红细胞微核检测敏感性比较

本文报道了用9种淡水养殖鱼类进行水环境污染物致突变敏感性试验结果,观察的定量指标是外周血细胞的微核率．核异常率等,试验结果表明,鲫鱼,黄鳝,泥鳅为敏感品种,其中鲫鱼是水环境中低浓度污染物长时间致突变性检验的好材料,其敏感指标是微核率,黄鳝的敏感指标是核异常率,泥鳅的敏感指标是核异常率和巨核细胞率;     

小鼠多染色性红细胞微核图象自动分析的研究

近１０年多年来，各种生物材料的微核实验（ＭｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓＴｅｓｔ，ＭＮＴ）已得到广泛应用，而其中小鼠骨髓红细胞的ＭＮＴ应用最为广泛。为了提高一般常规方法的检测速度，减少主观误差，我们用图象分析系统对小鼠多染色性红细胞微核（Ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｉ，ＭＮ）进行了自动化检测的研究。所编制的软件能将８９％的红细胞从图象中分割出来，其中约８８％含ＭＮ的红细胞能被正确识别。这个初步结果是令人满意的。     

鱼外周血红细胞微核率与采血时间,染毒次数关系的实验研究

致突变试验已广泛应用于多种环境污染物的检测。近年来,在各种致突变试验中,鱼外周血红细胞微核试验在水体污染检测中已开始应用,并具有特别的意义。由于鱼外周血红细胞体积较大,胞质丰富,核质之比为1:6,有利于胞浆中出现微核时观察。目前,以鱼为实验动物,取其外周血,观察红细胞微核,进行诱变性研究已日益引起人们关注。但是,对如何选择染毒次数和采血时间,才能获得最高的微核率,尚未见有系统的研究报道。为此,我们对鱼外周血红细胞微核率与染毒时间。染毒次数关系进行了     

外周血循环中肺癌细胞的流式细胞仪定量分析

目的 动用流式细胞仪定量分析外周血循环中肺癌细胞。方法 外周血经Ｆicoll梯度离心 分离单核细胞组分，后者用ＣＤ４５、细胞角蛋白（ＣＫ）及肺癌特异性单抗（２Ｆ７/Ｓ ５Ａ）染色后，应用流式细胞仪检测ＣＤ４５－ＣＤ＋２Ｆ７／Ｓ５Ａ）细胞。然后计算每升血中上术细胞含量。结果 ⑴外周血单核细胞的表型为ＣＤ４５＾＋ＣＫ＾－２Ｆ７／Ｓ５Ａ＾＋。因此，应用此方法能从１０＾６白细胞中检测到１个肺癌细胞，敏感性达到每毫     

不同工龄丙烯腈作业工人的外周血淋巴细胞微核

９０名丙烯腈（ＡＮ）从业工人按接触ＡＮ的工龄分成５组，工龄在０－２０年期间，外周血淋巴细胞微核率随工龄的增长而增加，呈线性正相关（ｒ＝０．９５），有显著意义（Ｐ〈０．０５）。在工龄超过２０年的ＡＮ接触人群中，微核细胞率有稳定的趋势，ＡＮ接触工龄在１０以下的工人中微核细胞的不明显。在ＡＮ工龄超过１０年的工人中微核细胞率明显增加。ＡＮ接触工龄小于１０年和大于１０年的两组人群相比较，微核细胞率有显著差异     

印刷作业女工外周血淋巴细胞微核观察

本文采用微量全血培养法对某印刷厂装订车间４０名女工外周血淋巴细胞微核进行了分析。结果表明,印刷作业女工的微核阳性检出率,微核细胞率和微核率均非常显著地高于对照组（Ｐ〈０．０１,而且随着作业工龄的延长,微核细胞率和微核率有极显著意义的增高趋势（Ｐ〈０．０１）。对印刷作业女工微核增高的原因进行了讨论。     

外周血循环癌细胞定量分析及其临床意义探讨

目的探讨流式细胞仪定量分析外周循环血中癌细胞的临床意义.方法外周血经Ficoll梯度离心分离单核细胞组分,后者用CD45、细胞角蛋白(CK)及肺癌单克隆抗体(2F7/S5A)染色后,应用流式细胞仪检测CD45-CK+2F7/S5A+细胞,计算每升血中上述细胞含量,定量分析143例肺癌,26例良性肺部疾病,20例健康对照外周血中的癌细胞.结果 20例健康对照均为阴性,26例良性肺部疾病2例阳性,143例肺癌患者60例阳性,阳性可测率42%,阴性可测率95.7%,检测阳性细胞含量的平均数为0.722×106/L.M1组阳性率高于M0组,两且差异有显著意义P=0.000,阳性率与期别正相关,P=0.024.阳性组和阴性组的中位生存期分别为17.0月及18.8月,生存率阳性组稍低,但无统计学意义.结论应用流式细胞仪定量分析肺癌患者外周循环血中CD45-CK+2F7/S5A+细胞反应肺癌惠者外周循环血中的微量癌细胞,有助于判断肺癌的转移倾向和预后.     

甲醛接触工人的外周血淋巴细胞微核研究

甲醛（ＦＡ）在多种体外诱变测试中呈阳性，啮齿动物吸入甲醛蒸气后引起鼻腔鳞状上皮细胞癌＾（１，２），接触人群的肿瘤发病主有升高趋势，因此对甲醛接触人群进行简单有效的遗传毒理学的生物学监测是十分必要的，本次研究微核测试的结果证实，８０名平均工龄，１２年甲醛接触者的外周血淋巴细胞微核细胞率较对照组有极显著的增加（Ｐ〈０．０１），接触组吸烟人群较对照组吸烟人群的微核细胞率有极明显的增高（Ｐ〈０．０１），接     

肾癌患者外周血粘附分子CD44的定量研究

应用流式细胞免疫学方法对３０例肾癌患者外周血粘附分子ＣＤ４４进行了定量研究，检测标本为肾癌患者手术前后外周静脉血。结果提示，肾癌患者术前外周血淋巴细胞ＣＤ４４阳性细胞较正常对照组明显增高（Ｐ＜０．０１），术后ＣＤ４４含量逐渐下降，且在尚无明显症状及体征的复发和转移者已见明显增高（Ｐ＜０．０５）。认为外周血ＣＤ４４分子的流式检测可作为肿瘤诊断、发现复发转移和监测疗效的重要指标     

放射诱导HL-60细胞凋亡的流式细胞计量术分析

目的　定性和定量地分析放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡。　方法　以人类白血病细胞系ＨＬ６０ 为材料,应用光学显微镜和电子显微镜及琼脂糖电泳定性分析６０ Ｃｏ 放射线诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡的发生,应用ＤＮＡ流式细胞计量术和末端转移酶（ＴｄＴ） 介导的缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ） 的流式细胞定量检测ＨＬ６０ 细胞凋亡。　结果　（１） 放射后ＨＬ６０ 出现细胞体积缩小,染色质固缩致密化、边缘化,染色体断裂,凋亡小体和细胞膜保持完整等形态学特征。（２） 琼脂糖电泳表现为特征性ＤＮＡ“梯谱”。（３）流式细胞计量术发现放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡在照射后６ｈ 已较明显,而且细胞凋亡百分比随着照射剂量增加而增加。ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡百分比值比ＤＮＡ流式细胞分析的方法得到的值要小,但差异无显著意义。　结论　流式细胞计量术结合细胞形态学检查和（ 或） 琼脂糖电泳能较好、简便、迅速地分析放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡     

流式细胞术相关性分析急性髓系白血病p21（H－ras）与DNA倍体

用流式免疫法分析３０例初治急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞ｒａｓ癌基因产物ｐ２１蛋白和ＤＮＡ倍体的关系。发现ｐ２１表达阴性者１７例，阳性者１３例。ｐ２１阳性者骨髓与外周血原始细胞百分比较高，外周白细胞数较低。ｐ２１表达不影响疗效。ｐ２１阳性及ＣＲ期有异倍体者易复发。认为ｐ２１对白血病发生、发展有一定作用。     

膀胱肿瘤患者外周血粘附分子CD44含量的改变及其临床意义

目的研究测定膀胱肿瘤患者外周血粘附分子ＣＤ４４含量的改变及其在临床诊断和治疗中的意义。方法应用流式细胞免疫学方法,测定３０例膀胱肿瘤患者手术前后外周血粘附分子ＣＤ４４含量,并与健康组作对照。结果膀胱肿瘤患者术前外周血淋巴细胞ＣＤ４４含量（４６２８％±１７９４％）较正常对照组（４８３％±１７０％）显著增高（Ｐ＜００１）,术后ＣＤ４４含量逐渐下降;在尚无症状和体征的原发及转移者（１９２２％±９５８％）,与对照组比较也显著增高（Ｐ＜００５）。结论检测膀胱肿瘤患者外周血ＣＤ４４含量,对其早期诊断、早期发现复发和转移,都有重要的临床价值。