胸腺肽α1联合动脉插管化疗栓塞对原发性肝癌患者血清可溶性白细胞介素—6受体和可溶性gp130的影响

目的：了解胸腺肽α1（thymosin alpha-1 Tα1）对原发性肝癌（PHC）患者血清可溶性白细胞介素－6受体（sIL-6R）、可溶性gp130(sgp130）的影响。方法：采用双抗体夹心ELISA法观察10例HCC经Tα1联合动脉插管化疗栓塞（TACE）治疗后血清sIL-6R、sgp130的动态改变。结果：PHC患者血清sIL-6R、sgp130水平较对照组（NC组）明显升高,Tα1联合TACE治疗后PHC患者生存率提高,治疗结束后sIL-6R、sgp130水平较单用TACE明显下降,结论：监测sIL-6R、sgp130水平能反映HCC患者的免疫功能及判定预后;Tα1联合TACE能提高患者生态率。     

胸腺肽α_1联合动脉插管化疗栓塞对原发性肝癌患者血清可溶性白细胞介素-6受体和可溶性gp130的影响

目的 :了解胸腺肽α1(thymosinalpha 1Tα1)对原发性肝癌 (PHC)患者血清可溶性白细胞介素 6受体 (sIL 6R)、可溶性gp130 (sgp130 )的影响。方法 :采用双抗体夹心ELISA法观察 10例HCC经Tα1联合动脉插管化疗栓塞(TACE)治疗后血清sIL 6R、sgp130的动态改变。结果 :PHC患者血清sIL 6R、sgp130水平较对照组 (NC组 )明显升高 ,Tα1联合TACE治疗后PHC患者生存率提高 ,治疗结束后sIL 6R、sgp130水平较单用TACE明显下降。结论 :监测sIL 6R、sgp130水平能反映HCC患者的免疫功能及判定预后 ;Tα1联合TACE能提高患者生存率。     

IL-11及可溶性gp130在自体外周血动员过程中的变化及其意义

目的探讨IL-11及sgp130在自体造血干细胞移植的动员过程中的变化及其意义。方法采用生物学活性检测和ELISA检测方法分别对造血动员患者的血清IL～11及sgp130含量进行动态观测。同时通过流式细胞仪及细胞计数观察患者外周血CD34^ 细胞、白细胞和血小板数量变化，对整个动员过程中的上述指标进行动态观察。结果在动员过程中。患者外周血CD34^ 造血细胞、白细胞及血小板计数与血清中IL-11水平呈平行性升高。而血清中sgp130的含量在动员过程中呈下降趋势。结论自体干细胞移植造血过程中，血清IL-11和sgp130的含量与患者CD34^ 细胞数、白细胞和血小板计数有一定的相关性，是监控造血动员过程的重要参数。     

可溶性白细胞介素6受体β亚基在重组痘苗病毒中的表达及其对动物的免疫效果

目的 :构建可溶性白细胞介素 6受体 ( IL- 6R) β亚基 ( sgp130 )重组痘苗病毒 ,感染动物细胞使其表达 sgp130 ,用重组病毒免疫动物产生特异性抗 sgp130抗体。　 方法 :将 sgp130基因导入痘苗病毒载体 p JSA1175,用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在 TK-143细胞中发生同源重组 ,用 Bud R和 X- gal双重选择 ,得到带有人 sgp130的重组病毒 ( Vsgp130 )。　 结果 :采用 IDA和 Western Blotting法证实 ,感染 Vsgp130的 TK-143细胞上清中有较强的 sgp130表达 ,表达产物分子量为 10 0 0 0 0左右。用重组病毒免疫家兔和 Balb/c小鼠 ,可刺激抗体产生。　 结论 :sgp130在痘苗病毒载体系统中的表达成功及抗 sgp130多克隆抗体的产生为进一步研究 IL- 6等细胞因子信号传导机理及研制抗 sgp130单克隆抗体奠定了基础     

Graves病外周血单个核细胞gp130mRNA的表达

目的探讨Graves患者外周血单个核细胞(PBMCs)内gp130 mRNA在抗甲状腺药物治疗前后不同时期的表达情况。方法采用细胞原位杂交技术、计算机图像分析系统进行定量检测分析Graves患者病程不同时期与正常对照组PBMCs内gp130 mRNA的表达水平。结果gp130 mRNA原位杂交棕黄色阳性物质主要分布在细胞膜附近,胞浆着色较浅,正常对照组外周血单个核细胞仅有少量的gp130 mRNA表达(16.02±4.77),Graves患者gp130 mRNA表达量较对照组高,其中初发期组患者表达量最高(28.51±6.63),经治疗至维持期gp130 mRNA表达量明显降低(22.25±2.92),但仍较正常对照组高(P=0.015);停药组患者gp130 mRNA表达量(17.98±8.01)与正常对照组比较差异无显著性,明显低于初发组患者。结论Graves患者外周血单个核细胞内gp130 mRNA表达被激活,初发期组患者PBMCs中gp130 mRNA表达程度最高,随甲亢治疗好转逐渐恢复至正常。     

IL-11及可溶性gp130在自体外周血动员过程中的变化及其意义

目的　探讨IL - 11及sgp130在自体造血干细胞移植的动员过程中的变化及其意义。 方法　采用生物学活性检测和ELISA检测方法分别对造血动员患者的血清IL - 11及sgp130含量进行动态观测 ,同时通过流式细胞仪及细胞计数观察患者外周血CD34 细胞、白细胞和血小板数量变化 ,对整个动员过程中的上述指标进行动态观察。结果　在动员过程中 ,患者外周血CD34 造血细胞、白细胞及血小板计数与血清中IL - 11水平呈平行性升高 ,而血清中sgp130的含量在动员过程中呈下降趋势。 结论　自体干细胞移植造血过程中 ,血清IL - 11和sgp130的含量与患者CD34 细胞数、白细胞和血小板计数有一定的相关性 ,是监控造血动员过程的重要参数     

冠心病病人血清sgp130与hs-CRP变化及其意义

目的探讨冠心病(CHD)病人血清可溶性糖蛋白130(sgp130)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的变化及其临床意义。方法采用ELISA和散射速率比浊法检测了20例急性心肌梗死(AMI)病人、20例不稳定型心绞痛(UAP)病人、20例稳定型心绞痛(SAP)病人血清sgp130、hs-CRP水平的变化,并与20例健康体检者(对照组)进行比较。结果CHD病人血清sgp130水平明显降低,血清hs-CRP水平明显增高,与对照组比较,差异有显著性(t=6.97、6.86,P<0.01)。AMI、UAP及SAP病人sgp130和hs-CRP水平比较,差异有显著性(F=47.14、36.23,q=4.26-15.66,P<0.01)。AMI病人血清sgp130、hs-CRP水平均低于或高于UAP病人、SAP病人和对照组(q=4.59-15.66,P<0.01);UAP病人血清sgp130、hs-CRP水平显著低于或高于SAP病人和对照组(q=4.26-11.06,P<0.01);SAP病人血清sgp130水平与对照组之间亦有统计学差异(q=4.93,P<0.01)。CHD病人血清sgp130与hs-CRP水平呈负相关(r=-0.574,P<0.01)。血清sgp130、hs-CRP水平在AMI、UAP组AUCROC均大于0.90,对AMI诊断的灵敏度和特异度分别为0.95、0.90和0.90、0.95,对UAP诊断的灵敏度和特异度分别为0.95、0.90和0.90、0.95。结论血清sgp130、hs-CRP浓度的变化对AMI和UAP具有较高的诊断准确度,其变化的程度可以作为炎症反应和病情严重的判断指标之一。     

脂质体介导gp130反义寡核苷酸对PC-3细胞增殖影响的研究

目的:研究脂质体介导gp130反义寡核苷酸对人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞PC-3体外增殖活性的影响。方法:采用细胞计数及MTT比色法评价反义寡核苷酸对PC-3细胞体外增殖的影响,应用荧光免疫细胞化学法检测gp130基因的蛋白表达情况,流式细胞计数评价其对细胞周期的影响。结果:脂质体介导gp130反义寡核苷酸组与正义寡核苷酸组及对照组比较,PC-3细胞增殖活性受到明显抑制。转染48h后,gp130蛋白表达完全受到抑制,细胞周期明显阻滞于G0/G1期,细胞增殖抑制率为53.7%,细胞凋亡率高达51.28%。结论:脂质体介导gp130反义寡核苷酸可抑制人AIPC细胞PC-3体外增殖活性。应用反义技术为AIPC的基因治疗提供了新的思路和探索。     

抗gp130单克隆抗体B-R12，B-S8和B-K11的生物学特性研究

我们已研究5个抗如gp13O单克隆抗体的生物学特性,证明gp130分子上不同的位点涉及不同IL-6家族细胞因子的活动。本文继续研究另3个抗gp130单克隆抗体B－R12，B-S8和B-K11的生物学特性。结果显示，B-R12和B-S8可抑制IL-6家族细胞因子的活动；相反,B-K11IL-6家族细胞因子的活动无任何影响。     

CT-1mRNA和gp130在高血压大鼠心肌中的表达变化及意义

目的观察CT-1mRNA和gp130在高血压大鼠心肌中的表达变化、意义,以及替米沙坦对心肌营养素-1(CT-1)和糖蛋白130(gp130)表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠行腹主动脉缩窄术后2周造成压力负荷性心肌肥厚模型,随机分为心肌肥厚组和替米沙坦组,另设10只作为假手术组。替米沙坦组灌胃给药3 mg/(kg.d),连续4周。原位杂交法检测心肌的CT-1mRNA表达水平;免疫组化法检测心肌中gp130表达水平。结果与假手术组比较,心肌肥厚组心肌组织CT-1mRNA和gp130表达水平明显增加。与心肌肥厚组比较,替米沙坦组CT-1mRNA和gp130含量显著降低(P<0.01)。结论压力超负荷性大鼠心肌中CT-1mRNA及其受体gp130的过度表达与心室重构的发生密切相关;替米沙坦逆转心室重构的机制可能与抑制CT-1及受体gp130的过度表达相关。     

胺碘酮对家兔在体心脏心室复极及复极离散度影响的研究

为探讨胶碘酮抗心律失常的细胞电生理机制，采用同步记录心室外股不同部位单相动作电位的方法，观察健康家兔静注胶碘酮前后心室复极及复极离散度的变化。结果显示：胺碘酮对正常心肌可延长心室复极，但对其复极离散度则无显著影响。结论：胺碘酮能同步均一地延长心室复极，可以提高心电稳定性。     

Fas调节白血病细胞HL-60内Stat3的表达和磷酸化

观察Ｆａｓ对ＨＬ－６０细胞的异常增殖是否有调节作用。方法用基因重组技术将Ｆａｓ的细胞外区跨膜区与ＩＬ－６信号传导子ｇｐ１３０细胞区内构成嵌合型受体（Ｆａｓ／１３０）,同时,将Ｆａｓ死亡区域（ＦａｓＤＤ）替换Ｆａｓ／１３０中１３０细胞内区无结构域部分（Ｆａｓ／１３０ｆ）,分别在ＨＬ－６０中表达后,用抗Ｆａｓ抗体激活这些嵌合型受体,随后用免疫组化和蛋白质印迹法分析受体细胞内区形成同源性三聚体（１３０ｃ     

卡托普利和缬沙坦对大鼠心肌梗死后胶原网络重塑的干预研究

目的研究卡托普利和缬沙坦对心肌梗死（MI）后胶原网络（cardiac collagennet—work,CCN）重塑的作用及作用机制。方法SD大鼠29只,建立心肌梗死模型,随机分为3组,分别为单纯心肌梗死组（MI）、卡托普利组（Cap）和缬沙坦组（Val）,另设假手术组（s）不结扎冠状动脉。观察大鼠心肌羟脯氨酸含量（HC）;采用RT-PCR方法检测心肌营养素-1（CT-1）mRNA和糖蛋白gpl30基因（gp130）mRNA的表达。结果（1）与S组相比,MI组、Cap组和Val组心肌组织HC明显增加（P〈0．01）,差异有统计学意义;与MI组相比,Cap组和Val组非梗死区（NIZ）心肌组织HC均明显降低（P〈0．01）,差异有统计学意义。（2）与S组相比,MI组、Cap组和val组心肌CT-1及gp130mRNA表达增强（P〈0．01）,差异有统计学意义;与MI组相比,Val组CT-1及gp130mRNA表达均显著减弱（P〈0．05）,差异有统计学意义;Cap组gpl30mRNA表达显著减弱（P〈0．05）,差异有统计学意义,CT-1mRNA差异无统计学意义（P〉0．05）。结论大鼠MI后CT-1及gp130mRNA的过度表达与MI后CCN重塑的发生密切相关;缬沙坦改善MI后CCN重塑的机制还可能与抑制CT-1及gp130基因的过度表达有关,值得进一步研究。     

白血病抑制因子受体中gp130细胞内区诱导白血病细胞Meg-01内c-myc的表达

观察人白血病细胞系Ｍｅｇ－０１白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基（ｇｐ１９０）和另一亚基ｇｐ１３０细胞内区与ｃ－ｍｙｃ的关系,以探明白血病细胞过度增殖和晚期分化异常的机制。方法：用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体（１９０／１３０,１３０１９０）,并分别在Ｍｅｇ－０１表达,其与     

白血病抑制因子受体与白血病细胞HL-60内有丝分裂原活化蛋白激酶的关系

探讨人白血病细胞系ＨＬ－６０白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基（ｇｐ１９０）和另一亚基（ｇｐ１３０）的细胞内区与有丝分裂原活化原白激酶（ＭＡＰＫ）的关系,了解ＬＩＦ受体在调节白血病细胞增殖和分化中的意义。方法：用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体（１９０／１３０,１３０／１９０）并分别在ＨＬ－６０表达,其与野生型受体竞争性结合ＬＩＦ,用免疫组化和蛋白质印迹法分析受体细胞内区形成同源     

耐药基因与肺癌药敏的相关性研究

目的 研究耐药基因P-糖蛋白（p-g）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）表达与肺癌药物敏感试验的相关性及临床应用价值.方法 50例肺癌组织（纤支镜＋手术）纳入研究,耐药基因选用免疫组织化学进行检测,药敏方法采用MTT比色法.结果 （1）P-gp、TopoⅡ在肺癌中阳性表达率分别为：67.5％、50.0％.其两者在鳞癌和腺癌中表达差异无统计学意义（P＞0.05）,但在非小细胞肺癌和小细胞肺癌中,P-gp表达有显著性差异（P＜0.05）.（2）P-gp的表达与化疗药物（顺铂、吉西他滨、长春瑞滨、紫杉醇）的耐药性均呈显著的正相关（P＜0.05）,与异环磷酰胺的耐药性无显著性差异（P＞0.05）;TopoⅡ的表达与顺铂、吉西他滨、紫杉醇、异环磷酰胺的耐药性均呈显著的正相关（P＜0.05）,与长春瑞滨的耐药性无显著性差异（P＞0.05）.结论 P-gp高表达及TopoⅡ的低表达共同介导并可能参与了肺癌耐药机制,且与检测的化疗药物有不同程度的相关性.耐药基因检测可能对指导临床化疗药物的选择具有一定的参考性.     

恶性淋巴瘤mdr1和MRP mRNA及 P-gp表达水平与化疗疗效的相关研究

目的探讨恶性淋巴瘤mdr1、MRP mRNA和P-gp表达水平与化疗疗效的相关性.方法应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术和流式细胞术(FCM)方法,以8例人正常淋巴结为正常对照,对46例淋巴瘤患者[23例初治(HD1例,NHL22例)及23例复发(HD5例,NHL18例)]的mdr1 mRNA、MRP mRNA和P-gp表达水平与化疗疗效间的关系进行了前瞻性研究.结果复发患者mdr1基因和P-gp表达水平及阳性率均高于初治患者(P<0.001),而MRP基因表达水平及阳性率在复发与初治患者间差异无显著意义(P>0.05).mdr1基因及P-gp表达阳性患者的化疗有效(CR+PR)率(33.33%和26.67%)明显低于mdr1基因及P-gp表达阴性患者(85.71%和83.87%,P<0.001),而MRP基因表达阳性患者与阴性患者的化疗有效率差异无显著意义(P>0.05).相关分析显示,mdr1基因和P-gp表达水平之间有明显相关性(r=0.296 3,P<0.05),而mdr1和MRP之间、MRP与P-gp之间均无明显相关性(r=0.072 3,P>0.05;r=0.081 8,P>0.05).结论 mdr1基因及P-gp表达是恶性淋巴瘤患者多药耐药的主要机制,而MRP基因不是产生耐药的主要机制.mdr1基因及P-gp表达水平的高低与恶性淋巴瘤化疗疗效密切相关,而MRP基因的表达与化疗疗效未见相关.     

人源化卵巢癌单链抗体基因的构建与表达

目的：通过基因工程技术获得完全人源化的卵巢癌患者自身的单链抗体并在毕氏酵母中获得表达，为人源化单链抗体(ScFv)在卵巢癌的诊断与治疗的应用提供实验基础。方法：用TRIZOL法自卵巢癌患者的淋巴细胞中提取RNA,利用SOEingPCR方法分别获得V_H、V_L基因，构建真核表达载体pPICZα/ScFv。电转化毕赤酵母菌株X-33。用PCR法筛选转染阳性克隆,SDS-PAGE法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的ScFv的表达,筛选高表达工程菌。结果：构建ScFv基因,V_H与V_L连接后得到700 bp左右的条带，ScFv基因在毕赤酵母中获得表达，在26 000处出现目的条带。结论：获得ScFv基因及其真核表达载体以及高效表达ScFv的毕赤酵母工程菌。     

HIV-1膜蛋白基因gpl20和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达

目的 合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gpl20和gp41基因，在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gpl20和gp41抗原。方法　选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gpl20和gp41基因的酵母稀有密码子，采取基因搭桥法及聚合酶链反应（PCR），制备合成HIV－1 gpl20和gp41基因，插入pPICZɑA分泌型酵母表达载体。携带有合成HIV-1 gp120和gp41基因的重组质粒转化毕赤酵母菌株GS115，经甲醇诱导表达HIV－1外膜糖蛋白gpl20和gp41。结果 酶切电泳及DNA测序证实合成的HIV-1 gpl20和gp41基因正确克隆到表达载体中；聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gpl20和gp41在毕赤酵母中高效分泌表达。结论 gpl20和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达。