BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫漂移的实验研究

目的：动态分析BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫失衡及免疫漂移特点,并探讨转录因子T-bet和GA-TA-3在此过程中的改变及其意义。方法：90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组30只,弓形虫感染组60只。于感染后奇数天每天处死感染组小鼠2只,对照组小鼠1只,采用ELISA法动态检测各组小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平,同时应用荧光定量PCR方法检测小鼠脾细胞中T-bet和GATA-3 mRNA的表达情况。结果：感染组小鼠中,血清IFN-γ于感染后第4天开始显著升高,第5~7天维持在高峰值,从第8天开始下降,第9天降至正常水平;IL-4于感染后第8天开始显著升高,第9天升至峰值,从第14天开始下降,第15天降至正常水平;脾细胞T-bet mRNA的表达在感染后第3天升高,第5天达高峰后于第9天降至正常水平;脾细胞GATA-3 mRNA的表达在感染后第7天升高,第11天达高峰,于第13天降至正常水平。正常对照组小鼠在实验期内IFN-γI、L-4水平没有明显变化,维持在正常的较低水平。结论：BALB/c小鼠感染弓形虫后诱导的免疫应答在感染急性期（第1~8天）以Th1应答为主,第9至13天,宿主免疫应答以Th2细胞应答为主,之后Th1/Th2应答基本恢复平衡。Th1应答向Th2应答的漂移与T-bet和GATA-3 mRNA的表达相关并受其调控,Th1/Th2型免疫应答的发生时相和效应强度可能影响弓形虫感染的最终结局。     

DBA/2小鼠感染不同疟原虫Th应答特点的比较研究

目的：探讨不同疟原虫感染DBA/2小鼠的免疫应答特点。方法：DBA/2小鼠经腹腔注射致死型约氏疟原虫（P.y17XL）和夏氏疟原虫（P.c AS）感染的红细胞,计数红细胞感染率;ELISA动态检测感染小鼠脾细胞培养上清中IFNγ-和IL-4水平;采用RT-PCR动态检测脾细胞中Th1和Th2型转录因子T-bet和GATA3 mRNA表达量。结果：两种疟原虫感染小鼠在感染早期T-bet mRNA表达量均明显增加,升高幅度明显高于GATA3,T-bet/GATA3比值明显高于感染前水平;IFNγ-明显升高后伴随IL-4分泌水平增加。但是,P.c AS感染小鼠IFNγ-水平明显高于P.y17XL感染小鼠,且随后的IL-4水平仅出现短暂升高,感染后前8天T-bet/GATA3比值未有明显下降趋势,原虫血症逐渐升高至小鼠全部死亡。相比,P.y17XL感染小鼠T-bet/GA-TA3比值在感染后第3天达峰值,随后缓慢下降但仍高于对照组,原虫血症得到控制至小鼠自愈。结论：抗疟保护性免疫不仅依赖于Th1和Th2型免疫应答的有效建立和协调过渡,而且Th1/Th2型免疫应答的发生时相和效应强度可能影响着疟疾感染的最终结局。     

BALB/c小鼠急、慢性弓形虫感染时Th细胞应答的基因表达谱分析

目的:分析弓形虫感染BALB/c小鼠后诱导Th细胞应答的基因表达谱特征.方法:以刚地弓形虫速殖子感染BALB/c小鼠,分别于感染后第6天和第12天各处死小鼠2只,制备小鼠脾细胞悬液并混合,提取细胞总RNA.采用基因芯片技术检测小鼠Th细胞应答各相关基因的表达情况,并对部分表达变化的基因应用Real time-PCR予以验证.结果:BALB/c小鼠感染弓形虫后,基因芯片检测共有20种基因表达差异超出2倍以上.感染后第12天比第6天,8种基因(Gata-3、Ccr3、Ccr4、Bcl6、Nfatc1、CD80、Fos、CD69)表达上调,12种基因(T-bet、CIITA、Irf1、Mapk9、Nfatc3、Fasl、Tyk2、Lat、Mapk10、Socs3、Socs6、Yy1)表达下调.总体呈现Th2型免疫应答基因上调,Th1型免疫应答基因呈下调趋势.Gata-3和T-bet基因的Real time-PCR检测结果与基因芯片检测一致.结论:从基因表达谱分析来看,BALB/c小鼠感染弓形虫后在感染急性期以Th1细胞应答为主,度过急性期后以Th2细胞应答为主.     

泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA表达水平的研究

目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月,分别在感染2天、8天、1月、3月、6月和10月处死小鼠,收集肝脏组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肝脏组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA的表达水平。结果:T-bet mRNA的表达水平在感染早期开始增高,1月时达高峰后又开始缓缓下降至感染前水平;GATA-3 mRNA的表达水平在感染1月时明显升高,随后一直保持较高的表达水平;ROR-γt mRNA的表达水平在感染早期开始增高,感染1月时达到高峰,随后缓慢下降。IL-17 mRNA表达水平自感染早期开始持续性增高,到感染3月时达高峰,之后又逐渐降低至感染前水平。各组小鼠肝组织ROR-γt mRNA表达水平与T-bet mRNA表达水平呈正相关(r=0.67),IL-17 mRNA表达水平与ROR-γt mRNA表达水平有相关性(r=0.35),P值均<0.05。结论:泡球蚴感染宿主早期,主要以Th1型和Th17型细胞免疫为主,感染中后期出现Th1向Th2转化,机体呈现出以Th2细胞为主的优势应答。     

巨细胞病毒感染对小鼠心肌组织TH1/TH2类细胞因子及其特异性转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的动态观测MCMV感染对小鼠心肌组织TH1/TH2类细胞因子及其特异性转录因子T-bet／GATA-3表达的影响。方法建立小鼠巨细胞病毒感染心肌炎模型。观察小鼠血清删浓度变化，心肌组织病理损害和心肌组织细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平以及脾组织中转录因子T-bet、GATA-3表达强度。结果心肌组织病理积分和血清cTnI浓度在MCMV感染后第3天增高，第7天达高峰，第14天仍维持较高水平；IFN-γ在MCMV感染第3天时表达迅速增高达到峰值，随后下降，第14天基本下落至正常水平；IL-4在MCMV感染第5天表达迅速增高达到峰值，随后下降，在第14天又升高；MCMV感染第3天转录因子T-bet蛋白表达达峰值，随后逐渐降低，到第14天时降低更为显著。转录因子GATA-3在MCMV感染第7天时表达明显增强，第14天时增强更为显著。结论MCMV感染通过上调GATA-3转录因子和叫表达，下调T-bet转录因子和IFN-γ表达，导致TH1/TH2平衡失调，表现为TH2细胞优势应答状态，使心肌损害加重。这可能是CMV感染致宿主特异性细胞免疫功能降低并造成组织损伤的机制之一。     

创伤弧菌感染BALB/c小鼠诱导适应性免疫应答的研究

为探讨创伤弧菌感染BALB/c小鼠后引起的适应性免疫应答类型及规律,我们首先通过半数致死量实验筛选创伤弧菌MO6-24/O腹腔注射感染菌量,随后通过流式细胞术检测创伤弧菌感染后小鼠脾脏Th细胞亚群应答情况,通过ELISA实验检测血清中IFN-γ浓度,采用real-time PCR检测创伤弧菌感染小鼠腹腔巨噬细胞后Th1细胞调控因子的表达。最后,采用流式细胞术动态检测Th1细胞亚群应答规律。结果显示,创伤弧菌MO6-24/O腹腔注射感染小鼠的半数致死量是2.5×105cfu,平均存活时间是16h,我们后续实验选择感染菌量为5×104cfu/只。创伤弧菌感染后能够诱导Th1型细胞应答,并且感染后血清中IFN-γ浓度显著增加(P0.05),并且创伤弧菌体外感染小鼠腹腔巨噬细胞后能够引起IL-12/IL-23p40、IL-12p35以及IFN-γmRNA表达显著增高(P0.05)。最后,流式结果显示,创伤弧菌感染后,脾脏Th1细胞的应答逐渐增强,在感染后3天达到高峰,随后逐渐下降到正常水平。因此,Th1型应答是创伤弧菌诱导的获得性免疫应答的主要类型。     

急慢性MCMV感染对小鼠脾细胞Foxp3/T-bet/GATA-3蛋白表达水平的影响

目的：在整体水平研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠辅助性T细胞亚群Th1、Th2和调节性T细胞（Treg）分化特异性转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平的影响。方法：建立MCMV播散型感染模型,依据主要脏器内病毒滴度,确定感染后28天为本模型急、慢性期界定点。42只模型鼠分别于接种MCMV Smith株后第1、3、7、14、28、45天和60天各处死6只,分离脾细胞;另设42只正常小鼠作为模拟感染对照。Western blot法检测脾细胞中特异转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平。结果：MCMV感染后第3天T-bet蛋白表达显著增高达峰值,与模拟感染对照组比较有显著差异（P〈0.01）,随后下降,第28天后降至模拟感染对照组相当水平;而GATA-3蛋白表达在感染后第3天开始升高,第7天达峰值（P〈0.01）,第14天开始缓慢下降,但至第60天仍显著高于模拟感染对照组（P〈0.05）;Foxp3蛋白表达在感染后7天明显低于模拟感染对照组,第28天降至最低（P〈0.01）,第45天和60天表达明显上调,并显著高于模拟感染对照组水平（P〈0.05）。结论：感染急性期,MCMV上调Th1/Th2特异性转录因子T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期,MCMV诱导Treg特异性转录因子Foxp3蛋白表达上调,同时显著抑制T-bet和GATA-3蛋白表达,提示CMV诱导Foxp3表达增加可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因。     

转录因子T-bet/GATA-3比率评价哮喘患者Th1/Th2失衡及CpG ODN干预机制的研究

目的: 探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系及体外CpG干预后T-bet/GATA3比率的变化及其对Th1/Th2细胞平衡的调节作用。方法: 用RT-PCR法测定30例发作期哮喘患者（哮喘组）及20例慢性阻塞性肺病患者（COPD组）及20例正常人（对照组） PBMCs中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，用ELISA法测定血浆IL-4、IL-5、IL-13和IFNγ的表达水平，以观察哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系。将20例发作期哮喘患者的PBMCs分为2部分，一份加入CpG ODN和PHA（CpG组），一份仅加入PHA（对照组），培养48 h后分别收集培养液和细胞，采用RT-PCR法测定细胞中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，ELISA法测定培养液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表达水平。结果： 哮喘患者PBMCs中T-bet/GATA-3的比率显著低于COPD患者和正常人，IL-4、IL-5、IL-13的水平显著高于COPD患者和正常人，与T-bet/GATA-3的比率呈负相关，而IFN-γ的水平显著降低，与T-bet/GATA-3的比率呈正相关。哮喘组TLR9的表达强度显著弱于COPD患者和正常人。CpG干预组细胞培养液中IL-4、IL-5和IL-13的水平分别显著低于对照组，IFN-γ的水平显著高于对照组。CpG干预组细胞中T-bet mRNA和TLR9 mRNA的表达强度显著强于对照组，GATA-3 mRNA的表达强度显著低于对照组；T-bet/GATA-3的比率显著高于对照组。结论: 哮喘患者T-bet/GATA-3的比率降低，可以作为评价Th1/Th2细胞失衡的精确指标。CpG ODN可以上调T-bet的表达，下调GATA-3的表达，从而上调T-bet/GATA-3的比率，逆转Th1/Th2细胞失衡，是一种很有前景的哮喘治疗手段。     

大蒜新素治疗小鼠巨细胞病毒性心肌炎作用研究

目的探讨大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎治疗作用及其抗CMV机制. 方法 60只BALB/c小鼠随机分成大蒜新素治疗组(20只)、安慰剂组(20只)和正常对照组(20只).大蒜新素治疗组接种MCMV K181后24 h开始用大蒜新素一般剂量(25 mg/kg)腹腔注射,每天1次,共14 d;安慰剂组和正常对照组仅用等量生理盐水.各组分别于治疗后第3、5、7、14天各处死5只小鼠,观察小鼠心肌组织病理损害;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠心肌组织细胞因子IFN-γ表达水平;用RT-PCR方法检测小鼠脾核转录因子T-bet mRNA表达强度. 结果 MCMV感染下调小鼠T-bet mRNA和TH1类细胞因子IFN-γ的表达(P＜0.01);大蒜新素能诱导MCMV性心肌炎模型小鼠转录因子T-bet mRNA和细胞因子IFN-γ的表达显著增加(P＜0.01),并显著改善MCMV感染小鼠心肌组织病理损害(P＜0.05). 结论大蒜新素通过上调转录因子T-bet mRNA表达进而促进TH1类细胞因子IFN-γ分泌,诱导和促进TH1优势应答反应,增强机体特异性细胞免疫功能而发挥抗MCMV作用.     

地塞米松对哮喘大鼠T-bet/GATA-3的影响

目的：探讨地塞米松对转录因子T-bet/GATA-3的影响。方法：将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组与地塞米松组,每组10只。于第1、8天腹腔注射卵白蛋白,第15天雾化吸入卵白蛋白引喘,每日一次,共14次。地塞米松组于实验开始后第15天起,按0.5 mg/kg予以腹腔注射地塞米松,每日一次,共14次。流式细胞术测脾及外周血Th1、Th2含量,免疫组化法及免疫印迹法测T-bet、GATA-3蛋白表达,逆转录聚合酶链反应测T-bet、GATA-3mRNA的表达。结果：模型组与正常组比较,脾与外周血中Th1、Th2含量有非常显著性增多（P＜0.01）;肺组织中T-bet、GATA-3蛋白与mRNA的表达亦有非常显著性升高（P＜0.01）。而地塞米松组与模型组比较,T-bet/GATA-3有显著（P＜0.05）或非常显著（P＜0.01）性升高。结论：T-bet/GATA-3是影响Th1/Th2平衡的关键转录因子,地塞米松可提高T-bet/GATA-3比值,从而减轻哮喘的发作。     

The Th1/Th2 paradigm

The Th1/Th2 paradigm provides a useful model for understanding the pathogenesis of several diseases, as well as for developing novel immunotherapeutic strategies. Here, Sergio Romagnani examines Th1/Th2 polarization in the context of associated pathophysiological conditions.     

Th1/Th2 balance in infection

Cytokines produced by T helper (Th) cells are of critical importance for the outcome of many infectious diseases. Producing the right set of Cyokines in response to an infectious agent can be a matter of life or death. The Th1/Th2 dichotomy, although an oversimplification has proven useful in the analysis of immune responses to infections. In some infectious diseases, most notably leishmaniasis or infections with gastrointestinal helminths, one Th subset is indispensable for clearing the infection, whereas the opposite Th subset is detrimental. More frequently, both Th1 and Th2 responses are required at different time points to effectively eradicate an infectious agent. The granuloma responses to eitherMycobacterium tuberculosis orSchistosoma mansoni provide illustrative examples and are discussed in this review. There is accumulating evidence for frequent coexpression of Th1 and Th2 Cyokines during the in vivo immune response to infections. The mechanisms by which infectious agents modulate Th1/Th2 phenotype development are summarized here. Finally, we review here the current evidence for cytokine imbalances induced by infections as pathogenic or protective factors in autoimmunity and allergy.     

Th1, Th2, and Th3 cytokine alterations in major depression

BACKGROUND: Many studies have shown that the balance between Th1 cytokines and Th2 cytokines plays a role in modulation of cellular responses in the brain during psychological stress and psychiatric disorders. The Th3 cytokine, transforming growth factor beta-1 (TGF-beta1), has been shown to regulate the balance between Th-1 and Th-2 cytokines. However, the role of TGF-beta1 in the psychoimmunology of depression has never been explored. METHODS: A total of 40 depressed patients and 80 normal controls were recruited. The plasma levels of IFN-gamma, IL-4, and TGF-beta1 were studied at the time of admission and 8 weeks after antidepressant treatment. RESULTS: The proportion of patients who showed immunoreactivity to IFN-gamma and IL-4 in the plasma, and the plasma IFN-gamma/IL-4 ratio, were significantly higher in depressed patients than in controls. The IFN-gamma/TGF-beta1 ratio was also higher in depressed patients, and TGF-beta1 levels showed a significant negative correlation with the HDRS depression scale. After treatment, TGF-beta1 level increased significantly, and the IFN-gamma/IL-4 ratio decreased significantly, in the patient group. However, Th1 changes in male and female showed different trend such as Th1 arm was decreased after the treatment in all male, whereas it was increased in premenopausal age women. LIMITATIONS: Replication and extension using a larger sample size are required. CONCLUSIONS: The Th1 and Th2 cytokine imbalance was observed in subpopulation of depressed patients. TGF-beta1 seemed to play a role in the pathophysiology of depression in this population. Moreover, antidepressant treatment was found to affect the Th1/Th2 balance through the action of TGF-beta1.     

Stability of Th1 and Th2 populations

Using an in vitro model for the development of IFN-y-producIng(Th1) and IL-4-produclng (Th1) cells from CD4 T lymphocytesexpressing a transgenlc TCR, we show that IL-12 and IL-4 arethe most potent stimuli for the differentiation of naive T cellsto effector populations. When combinations of cytokines arepresent during T cell priming, the effect of IL-4 Is dominant.Furthermore, differentiated Th1 cells can be converted intoIL-4 producers by exposure to IL-4, but the Th2 phenotype Isnot reversible. The stability of Th2 populations may limit theability to regulate Th2-domlnant responses In pathologic situations.     

Th1、Th2、Th17型细胞因子与糖尿病肾病相关性的研究

糖尿病肾病(diabetic Nephropathy,DN)是导致终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的最主要病因,因此,早期诊断和治疗是糖尿病肾病的诊治要点。但目前糖尿病肾病的确切发病机制尚未完全明确,糖尿病肾病的发生发展与血流动力学改变和代谢的紊乱、氧化应激和炎症等多种因素有关,而细胞因子在2型糖尿病及其相关肾脏并发症的病因、发病机制中也起着重要的作用,各种细胞因子的识别将为糖尿病肾病的诊治提供新的潜在治疗靶点。文章就Th1、Th2、Th17型细胞因子与DN相关性的研究作了综述。