载脂蛋白E多态性研究的方法学进展

人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）具有明显的遗传多态性，三种常见的等位基因（ε２，ε３，ε４）分别编码三种主要异构体（Ｅ２，Ｅ３，Ｅ４）。ａｐｏＥ多态性不仅是心血管疾病的一种重要易患因素，而且与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病及老化密切相关，目前国内外检测ａｐｏＥ多态性的方法主要有两类：一类以极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）或血清为样品检测ａｐｏＥ蛋白表型，另一类以ＤＮＡ为样品检测ａｐｏＥ基因型，本文仅对ａｐｏＥ基因结构与多     

载脂蛋白E基因多态性检测技术的对比性研究

目的建立并比较载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性检测技术,为ＡｐｏＥ基因分型提供良好的方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测技术对１１０例患者及相同人数的正常人进行ＡｐｏＥ基因型检测和分析。结果应用ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ技术测得正常对照组：ε２／２（０,０．０２０）,ε３／３（０．７００,０．７６０）,ε４／４（０,０．０４０）,ε２／３（０．１００,０．０６０）,ε２／４（０,０．０２０）,ε３／４（０．２００,０．１００）,ε２（０．０５０,０．０６０）,ε３（０．８５０,０．８４０）,ε４（０．１００,０．１００）。经χ２检验,ＡｐｏＥ基因型频率和等位基因频率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。上两种检测技术与既往两种检测技术（ＩＥＦ,ＷｅｓｔｅｒｐＢｌｏｔｉｎｇ）的结果经χ２检验,其ＡｐｏＥ等位基因频率的差异也无显著意义（Ｐ＞０．０５）,均符合中国汉族人ＡｐｏＥ基因频率分布。结论ＰＣＲＲＦＬＰ方法是一种稳定可靠的ＡｐｏＥ基因多态性分析方法,多重ＰＣＲＳＳＣＰ技术更加简便有效,使ＡｐｏＥ基因多态性的研究更加完善。     

范可尼贫血互补群 Ｄ２ 基因突变与卵巢上皮癌患者行 新辅助化疗疗效及预后的相关性

摘要：目的 分析范可尼贫血互补群 Ｄ２（ｆａｎｃｏｎｉ ａｎｅｍｉａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ２，ＦＡＮＣＤ２）突变与卵巢上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｖａｒ ｉａｎ ｃａｎｃｅｒ，ＥＯＣ）患者行新辅助化疗（ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ＮＡＣＴ）后的疗效及预后的相关性。方法 选取２０１７ 年４ 月至 ２０１９ 年 ４ 月兵器工业五二一医院收治的 １８４ 例 ＥＯＣ 患者为研究对象，取穿刺活检组织并提取 ＤＮＡ，采用实时荧光定量 ＰＣＲ 检测患者 ＦＡＮＣＤ２ 基因的突变情况，分析 ＦＡＮＣＤ２ 基因突变与 ＥＯＣ 患者临床病理参数的相关性；进一步分析 ＦＡＮＣＤ２ 突变 与 ＮＡＣＴ 治疗４ 周后的疗效及预后的关系。结果 实时荧光定量 ＰＣＲ 结果表明，ＦＡＮＣＤ２ 基因突变率为４２．３９％。ＦＡＮＣＤ２ 突 变型与野生型 ＥＯＣ 患者的肿瘤病灶直径、ＥＣＯＧ 评分、分化程度和病理分型比较的差异具有统计学意义（Ｐ 值分别为 ０．０２４， ０．０３７，＜０．００１，０．００２）。ＦＡＮＣＤ２ 突变型 ＥＯＣ 患者的疾病控制率（ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒａｔｅ，ＤＣＲ）显著低于 ＦＡＮＣＤ２ 野生型 ＥＯＣ 患者 （６６．６７％ ｖｓ ８３．９６％，χ２ ＝ ７．５０６，Ｐ＝ ０．００６）。１８４ 例 ＥＯＣ 患者的总体生存率为 ６５．２２％，ＦＡＮＣＤ２ 突变型 ＥＯＣ 患者的 ２ 年生存 率显著低于 ＦＡＮＣＤ２ 野生型（３２．０７％ ｖｓ ４２．３１％，ｌｏｇ ｒａｎｋ χ２ ＝ ４．１５２，Ｐ＝ ０．０４２）。Ｃｏｘ 风险比例模型多因素显示，分化程度和病 理分型是 ＦＡＮＣＤ２ 突变的独立影响因素（Ｐ＜０．０５）。运用 Ｋａｐｌａｎ Ｍｅｉｅｒ 法对患者进行单因素生存分析发现，肿瘤大小（Ｐ ＝ ０．０３１）、肿瘤病理分型（Ｐ＜０．００１）、分化程度（Ｐ＜０．００１）、突变型 ＦＡＮＣＤ２ 的表达（Ｐ＝ ０．０４２）与患者的总生存期密切相关。Ｃｏｘ 风险比例模型多因素分析显示，肿瘤病理分型、分化程度和 ＦＡＮＣＤ２ 突变是 ＥＯＣ 患者预后的独立影响因素（Ｐ 值分别为０．０１４， ０．０３５，０．０３６）。结论 ＦＡＮＣＤ２ 基因突变与 ＥＯＣ 患者 ＮＡＣＴ 疗效相关，肿瘤病理分型、分化程度、ＦＡＮＣＤ２ 突变是 ＥＯＣ 患者预 后的独立影响因素。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因型

目的建立一种简便、准确、实用的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因型的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ａｐｏＥ基因含编码１１２位和１５８位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＨｈａⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＩＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１１３名健康人ａｐｏＥ基因型，频率分别为ε３／３６９．０％，ε３／２１６．８％，ε４／３１１．５％，ε４／２１．８％，ε４／４０．９％；ε２、ε３和ε４等位基因频率分别是９．３％、８３．２％和７．５％。结论该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展及大规模人群调查     

应用CPR检测载脂蛋白E表型

为探讨壮族人群载脂蛋白（ａｐｏＥ）基因与冠心病之间的内在联系，应用ＰＣＲ方法检测１５８例壮族健康人群和５３例临床确诊的壮族冠心病患者ａｐｏＥ表型和等位基因频率分布，结果健康人群等位基因频率分布是ε０．１０８，ε０．８１３，ε０．０７９，冠心病组为ε０．０７６、ε０．７９２、ε０．１３２。冠心病患者中Ｅ４／３频率明显高于健康人群（Ｐ〈０．０１），提示ε４可能是冠心病的遗传易患因子。     

高血压病患者红细胞钙,钠离子变化与高血压关系的研究

应用原子吸收分光光度法测定４５例原发性高血压（ＥＨ）患者红细胞钙离子（Ｃａ＾２＋）及钠离子（Ｎａ＾＋），血清Ｃａ＾２＋、Ｎａ＾＋，并与２８例正常人进行比较。结果发现：①ＥＨ组红细胞Ｃａ＾２＋、Ｎａ＾＋明显高于对照组（Ｐ〈０．００１）；②红细胞Ｃａ＾２＋、Ｎａ＾＋之间呈正相关（Ｐ〈０．００１）；③红细胞Ｃａ＾２＋、Ｎａ＾＋与平均动脉压（ＭＡＰ）呈正相关（Ｐ〈０．０５，Ｐ〈０．０１）。提示ＥＨ患者存在     

ＦＴＯ 基因 ｒｓ９９３９６０９ 多态性与青少年肥胖及血细胞分 析参数的相关性

摘要：目的 探讨脂肪量与肥胖相关（ｆａｔ ｍａｓｓ ａｎｄ ｏｂｅｓｉｔｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ，ＦＴＯ）基因多态性与青少年人群肥胖及血细胞分析参数之 间的关系。方法 选取 ２０２０ 年 １ 月至 １２ 月于湖北中医药大学黄家湖医院体检的青少年人群 ５４１ 例作为研究对象，并进一步 分为体重过轻组（ＢＭＩ＜１８．５）、正常组（ＢＭＩ １８．５～ ２３．９）、超重组（ＢＭＩ ２４．０～ ２７．９）和肥胖组（ＢＭＩ≥２８）。应用 Ｓａｎｇｅｒ 测序法测 定各组 ＦＴＯ 基因 ｒｓ９９３９６０９ 位点的基因型，并分析 ＦＴＯ 基因多态性对肥胖及各血细胞分析参数的影响。结果 血细胞分析 参数中白细胞（ＷＢＣ）、单核细胞（ＭＯＮＯ）、中性粒细胞（ＮＥＵＴ）、淋巴细胞（ＬＹＭＰＨ）、嗜酸性粒细胞（ＥＯ）、红细胞（ＲＢＣ）、红 细胞压积（ＨＣＴ）、血红蛋白（Ｈｂ）、红细胞分布宽度（ＲＤＷ ＳＤ）、平均血红蛋白浓度（ＭＣＨＣ）、红细胞平均体积（ＭＣＶ）、血小板 （ＰＬＴ）和血小板压积（ＰＣＴ）数值在不同 ＢＭＩ 分组间的差异均具有统计学意义（Ｆ 分别为 １０．９３１、９．９４６、４．４１２、８．９８０、４．５８４、 ２４．６４６、１９．７４７、２０．４９８、５．１２２、６．９１４、３．４２７、４．２１５、３．０９４，Ｐ 均＜０．０５）。３ 种基因型频率在肥胖组与正常组之间比较差异有统计 学意义（χ２ ＝ １９．８４５，Ｐ＜０．０１）。ＡＡ 基因型个体的 ＷＢＣ、ＥＯ 和 ＰＬＴ 数值明显高于 ＴＡ 和 ＴＴ 基因型个体（Ｆ 分别为４．０８８、５．０８７、 ３．０４７，Ｐ 均＜０．０５），且 ＦＴＯ 基因 ｒｓ９９３９６０９ 位点 ＡＡ 基因型是影响 ＥＯ 数值的独立指标［ＯＲ ＝ ０．０９２ （０．０２０ ～ ０．１６５），ｔ ＝ ２．５０７， Ｐ＝ ０．０１３］。ＡＡ 基因型个体发生肥胖的风险是 ＴＴ 基因型携带者的 ８．２６１ 倍（χ２ ＝ １９．３４，Ｐ＝ ０．０００），Ａ 等位基因的肥胖风险是 Ｔ 等位基因的１．７２１倍（χ２ ＝ ７．６０３，Ｐ＝ ０．００６）。结论 ＦＴＯ 基因 ｒｓ９９３９６０９位点多态性与肥胖及血细胞分析参数之间存在相关性。     

高血压病患者淋巴细胞内腺苷脱氨酶与IL—2相关性的研究

采用分光光度法及双抗夹心法对２４例高血压病（ＥＨ）患者的淋巴细胞内膜苷脱氨酶（ＬＡＤＡ）活性及白细胞介素２（ＩＬ－２）水平进行检测，并与２０例正常人对照，结果表明：ＥＨ患者ＬＡＤＡ活性，ＩＬ－２水平均低于对照组（Ｐ均小于０．０１）；ＥＨ患者ＩＬ－２与血压呈负相关（ｒ＝－０．８２５，Ｐ〈０．０５）；ＥＨ患者ＬＡＤＡ活性与ＩＬ－２呈正相关（ｒ＝７．９９１，Ｐ〈０．０５）结果说明：ＥＨ患者存在免疫改变，     

载脂蛋白B基因位点多态性与冠心病关系的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增技术对载脂蛋白（ａｐｏ）Ｂ基因点３＇端可变数目串联重复位点（ＶＮＴＲ）作快速而准确分型。研究了该位点多态性与冠心病之间关系，与相关疾病及正常对照组作了比较。在２５３例中，各组的ａｐｏＢ基因位点呈现了不同的基因带型。扩增片段大小为５５２～１１２８ｂｐ。冠心病组发现有１５个ａｐｏＢ等位基因，正常人群组有１２个等位基因。ａｐｏＢ３＇端ＶＮＴＲ的基因频率分布为０．００１～０．４３，杂合度为４１．９％～８０．０％。急性心肌梗塞组中８０８ｂｐ等位基因的检出率明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。同时研究了冠心病组ａｐｏＢ基因与血清脂类、脂蛋白及载脂蛋白Ａ１、Ｂ水平之间的关系。     

ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点基因多态性与尤文肉瘤患者化疗耐药及肺部感染 的关系

摘要：目的 分析 ＡＴＰ 结合盒 Ｂ 亚家族成员 １ （ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｂ ｍｅｍｂｅｒ １，ＡＢＣＢ１）ｒｓ１０２７６０３６、Ｔｏｌｌ 样受体 ４ （Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ４，ＴＬＲ４）ｒｓ１１５３６８８９ 和白细胞介素１０（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０，ＩＬ １０）ｒｓ１５５４２８６ 基因多态性与尤文肉瘤患者化疗耐 药及并发肺部感染的关系。方法 选取 ２０１７ 年 １ 月至 ２０１９ 年 １ 月就诊的 ８０ 例尤文肉瘤患者为研究对象，采集各患者外周 血并提取 ＤＮＡ，定量 ＰＣＲ 检测 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点基因多态性。分别对 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ ＣＣ、ＣＴ 和 ＴＴ 基因型，ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 位点 ＣＣ、ＣＴ 和 ＴＴ 基因型以及ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点 ＧＧ、ＧＡ 和 ＡＡ 基因型进 行分析，并探究其与尤文肉瘤患者化疗耐药及并发肺部感染的关系。结果 ８０ 例尤文肉瘤患者的 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点分布符合 Ｈａｒｄｙ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ 平衡（χ２ ＝ ４．２５３，Ｐ＞０．０５），具有群体代表性。ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ 位点中 ＣＣ 基因型占比高于 ＣＴ 和 ＴＴ 基因型（χ２ ＝ ９３．８６３，Ｐ＜０．００１），ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 位点中 ＧＧ 基因型占比高于 ＧＣ 和 ＣＣ 基 因型（χ２ ＝ ６０．７８８，Ｐ＜０．００１），ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点中 ＧＧ 基因型占比高于 ＧＡ 和 ＡＡ 基因型（χ２ ＝ ４１．２１３，Ｐ＜０．００１）。依据化疗 耐药的界定，ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ 位点 ＣＣ 基因型和 ＣＴ／ ＴＴ 基因型的化疗耐药分别为７８．３３％和５５．００％，两组间差异有统计学意 义（χ２ ＝ ４．０９６，Ｐ＝ ０．０４３）。ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９ 位点 ＧＧ 基因型和 ＧＣ／ ＣＣ 基因型患者肺部感染发生率分别为 ５０．９４％和 ２５．９３％， 两组间差异具有统计学意义（χ２ ＝ ４．５８１，Ｐ＝ ０．０３２）。ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６ 位点 ＧＧ 基因型和 ＧＡ／ ＡＡ 基因型患者肺部感染发生率分 别为 ５８．３３％和 ２８．１３％，两组间差异具有统计学意义（χ２ ＝ ６．１２３，Ｐ ＝ ０．０１３）。连锁不平衡测试结果显示，ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６、 ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６位点之间存在连锁不平衡（Ｄ′：０．８８～０．９１，Ｐ＜０．０５）。结论 ＡＢＣＢ１ ｒｓ１０２７６０３６ 位点的多态性 影响尤文肉瘤患者的化疗耐药，ＴＬＲ４ ｒｓ１１５３６８８９位点和 ＩＬ １０ ｒｓ１５５４２８６位点的多态性则与尤文肉瘤患者并发肺部感染相关。