立体定向大鼠C6脑胶质瘤动物模型的建立

目的通过立体定向在SD大鼠右尾状核区接种C6细胞,建立类似于人脑胶质瘤的动物模型.方法SD大鼠在立体定向条件下,左右尾状核区接种1×106个C6胶质瘤细胞,接种后观察实验大鼠的生成状态,分别于接种后1,2,3周时进行MRI检查.在实验三周时解剖标本,做组织病理学和GFAP免疫组化检查.结果该方法建立的胶质瘤动物模型在组织病理学上接近人脑胶质瘤,而且具有颅内生长稳定,成瘤率高,没有颅外种植生长,实验周期短,重复性好.结论该大鼠脑胶质瘤动物模型能够满足胶质瘤实验治疗研究的需要,而且在细胞接种后1～2周,为实验治疗较好的时机.     

大鼠脑内C6胶质瘤模型的建立

目的建立稳定可靠的大鼠脑内C6胶质瘤模型。方法取20只健康成年SD大鼠,用立体定向技术将含1×106个C6胶质瘤细胞的悬液15μl缓慢接种于大鼠左侧尾状核区;接种后3周时随机挑选其中10只大鼠麻醉后行MRI检查,观察肿瘤影像学表现,随后处死大鼠取出肿瘤组织,行免疫组化及HE染色检测肿瘤生长情况;另外9只(麻醉死亡1只)大鼠继续饲养直至死亡,观察其生存时间。结果1只接种肿瘤细胞后出现短暂体重下降,但未出现明显神经系统体征,饲养60 d后尸检未见肿瘤生长;其余18只大鼠颅内均有肿瘤生长且无颅外转移现象,病理学检查结果显示脑内肿瘤呈浸润生长,可见新生血管,胶质纤维酸性蛋白表达阳性。荷瘤鼠生存时间为25~47 d,平均(32.78±2.34)d。结论采用立体定向方法向大鼠尾状核区种植C6细胞可获得较为稳定、可靠的胶质瘤动物模型,能够满足胶质瘤动物实验研究的需要。     

立体定向法建立大鼠C6脑胶质瘤模型

目的 用不同接种体积立体定向建立大鼠C6脑胶质瘤模型，比较其生长特性。方法 配制浓度为1．0×10^6个／10μL C6单细胞悬液，分别取5、10、20、40、80、160μL立体定向接种于大鼠右侧大脑尾状核区，在四个水平对各组进行比较。结果实验大鼠成瘤率分别为60％（5μ/L）、93％（10μL）、100％（20μL）、93％（40μL）、87％（80μL）、33％（160μL），瘤细胞病理性核分裂像多见，C-erbB1和S-100B等神经胶质瘤常见蛋白强阳性表达。结论 建立大鼠C6脑胶质瘤模型，接种体积在10-80μL时，成瘤率高，颅内肿瘤生长稳定，肿瘤组织形态学及病理学特性与人脑胶质瘤相似，而且实验周期短、可靠性高，是临床胶质瘤基础研究的理想模型。     

大鼠脑胶质瘤模型建立与生长评估

目的建立SD大鼠脑胶质瘤动物模型,比较其生长评估方法。方法采用立体定向技术,将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞浓缩悬置,调制为浓度5×1011/L的无血清RPMI1640培养液,将20μl悬液接种于SD大鼠右侧尾状核区。接种后分时段观察与评估实验鼠的神经功能缺损、肿瘤的生长特性、MRI检查结果,并做组织病理学和胶质纤维酸性蛋白及S-100蛋白免疫组化检查。结果立体定向技术接种的大鼠脑胶质瘤动物模型具有颅内生长稳定,成瘤率高,未见颅外转移,实验周期短,可重复性好,组织学上接近人脑胶质瘤等特征。神经功能评分与荷瘤鼠的脑胶质瘤大小及生长进程具有相关性。结论建立的SD大鼠的C6脑尾状核胶质瘤模型,其肿瘤影像及病理特征与人脑胶质瘤相似,神经功能评分可作为其生长的间接评估方法。     

大鼠C6脑胶质瘤模型的建立

目的通过不同方法建立大鼠脑胶质瘤模型,观察其生长特性,比较各种方法的优劣。方法体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,分别取浓度为1.0×105个/10μl、1.0×106个/10μl、1.0×107个/10μl细胞悬液,立体定向接种于Wistar大鼠脑右侧尾状核区,观察不同接种量实验鼠的生存状态、成瘤情况及脏器转移灶,并采用免疫组织化学方法检测其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果各种接种量的实验组成瘤率均为100%,未见颅外转移病灶,在组织病理学上接近人脑胶质瘤,瘤细胞病理性核分裂像多见,GFAP蛋白呈散在阳性表达,VEGF蛋白呈强阳性表达,瘤组织内有出血和坏死以及丰富的微血管。实验周期短,重复性高。结论C6细胞接种Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型,肿瘤成瘤率高,颅内生长稳定,肿瘤组织病理学特性与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。实验范围内部分时段不同接种剂量肿瘤生长速度有显著性差异,可根据病因学、实验治疗或药效学等不同研究需要选择不同接种量。     

立体定向大鼠脑胶质瘤颅内接种生长情况的观察

目的通过建立类似于人脑胶质瘤的动物模型,观察颅内肿瘤生长特点。方法借助动物立体定向仪,将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个,悬浮于无血清DMEM培养液60μL中)接种于Wistar大鼠左侧尾状核区。接种后观察实验大鼠的生存状态及肿瘤的生长特性,分别于接种后5、14 d进行MRI检查。在实验3、6、9、121、5 d时解剖标本,做组织病理学和GFAP免疫组化检查。结果该方法建立的胶质瘤动物模型在组织病理学上接近人脑胶质瘤.而且颅内生长稳定,成瘤率高,未见颅外转移病灶,实验周期短,重复性好。结论C6大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤生长及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。     

三种鼠脑胶质瘤模型的建立与比较

目的 ;建立GL261胶质瘤细胞C57BL/6小鼠、C6胶质瘤细胞SD大鼠及BALB/c小鼠皮下动物模型,比较其肿瘤生长特点。方法借助动物立体定向仪,将体外培养小鼠GL261、大鼠C6胶质瘤细胞分别接种于C57BL/6小鼠及SD大鼠右侧尾状核区,C6胶质瘤细胞接种于BALB/c小鼠左前肢皮下。接种后观察不同种实验鼠的生存状态及肿瘤的生长特性,颅内模型于接种后7d、14d、21d、28d进行MRI检查,皮下模型测量体积,并绘制生长曲线。解剖标本,做组织病理学和胶质纤维酸性蛋(GFAP)免疫组化检查。结果 GL261胶质瘤细胞C57BL/6小鼠模型较之后两种模型在组织病理学上接近人脑胶质瘤,而且颅内生长稳定,成瘤率高,未见颅外转移病灶,实验周期短,重复性好。结论 GL261胶质瘤细胞C57BL/6小鼠模型,其肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。     

大鼠C6胶质瘤模型的建立及MRI影像学特征

脑胶质瘤是神经外科最常见的一种脑肿瘤,对胶质瘤的基础研究及实验性治疗迫切需要一种可靠、稳定的胶质瘤动物模型.     

立体定向^131I内放疗治疗脑深部胶质瘤

目的研究^131I内放疗治疗脑深部胶质瘤的临床效果及不良反应。方法采用立体定向方法将Omaya化疗囊植入瘤腔内，术后7天注入^131I药液30mCi，15～20天重复注入1次，二次给药为一个疗程。必要时行第二疗程治疗。结果56例脑深部胶质瘤中，显效21例(37．5％)，有效24例(42．8％)，微效7例(12.5％)，恶化4例(7.2％)。结论立体定向^131I内放疗对深部恶性胶质瘤治疗有一定疗效。     

大鼠脑干胶质瘤模型的建立

目的 建立大鼠脑干胶质瘤模型,为脑干胶质瘤的研究提供动物实验平台.方法 将1×10~6个大鼠C6胶质瘤细胞通过立体定向头架注射到大鼠脑桥,种植后2周对大鼠行磁共振扫描观察,然后行灌流固定取脑,HE染色.结果 磁共振检查均发现肿瘤生长,肿瘤为长T1和T2信号,经大鼠舌静脉注射Gd-DTPA信号明显增强.HE染色显示肿瘤为胶质母细胞瘤,呈浸润性生长,瘤内新生血管丰富,假栅栏样坏死明显.结论 大鼠C6胶质瘤细胞株可以建立脑干胶质瘤模型,成瘤率高,重复性好.     

Bone marrow stromal cell versus neural stem cell transplantation in a C6 glioma rat model

BACKGROUND:Embryonic neural stem cells (NSCs) have provided positive effects for the treatment of glioma. However, the source for embryonic NSCs remains limited and high amplification conditions are required. Bone marrow stromal cells (BMSCs) have been proposed for the treatment of glioma. OBJECTIVE:To investigate biological changes in NSCs and BMSCs following transplantation into rat models of glioma.DESIGN, TIME AND SETTING:A randomized, controlled, animal experiment was performed at the Embryonic Stem Cell Research Laboratory of Yunyang Medical College from February 2006 to August 2008.MATERIALS:The rat C6 glioma cell line was purchased from Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences; mouse anti-bromodeoxyuridine (BrdU) monoclonal antibody and Cy3-labeled goat anti-mouse IgG antibody was purchased from Upstate, USA. METHODS:A total of 95 Sprague Dawley rats were randomly assigned to three groups:NSC (n = 35), transplanted with > 6 × 106 NSCs via left medial hind limb; BMSC (n = 35), transplanted with > 1 × 106 BMSCs via left medial hind limb; model group (n = 25), injected with the same volume of 0.1 mmol/L phosphate buffered saline.MAIN OUTCOME MEASURES:Gliomal growth and size were assessed by nuclear magnetic resonance, and glioma morphological features were observed following hematoxylin-eosin staining and BrdU immunohistochemistry 3 and 4 weeks following transplantation.RESULTS:The average survival of rats in the BMSC, NSC, and model groups was 4.03, 4.28, and 3.88 weeks. At 3 weeks, there was no significant difference in the average glioma diameter between the BMSC and model groups (P > 0.05). However, gliomal diameter was significantly decreased in the NSC group compared with the model group (P < 0.05). At 4 weeks, there was no statistical difference between the groups (P > 0.05). BrdU immunohistochemistry revealed that BMSCs and NSCs appeared to migrate to the gliomas.CONCLUSION:NSCs inhibited glioma cell growth and prolonged rat survival. BMSCs did not significantly suppress glioma cell growth.     

大鼠C6脑胶质瘤模型的病理特征与MRI的观察

目的建立SD大鼠C6胶质瘤模型并对其病理特征及MRI进行观察。方法50只SD大鼠随机分成5组，每组10只，c6胶质瘤细胞悬液立体定向接种于大鼠的右侧尾状核，接种后观察大鼠的生活状态、生存期；分别于接种后不同时段进行MRI观察肿瘤生长特性及肿瘤体积的测量；取不同时段组大鼠脑标本行脑组织HE染色、透射电镜(transmission electron microscope，TEM)、脑组织含水量测量(与10只正常大鼠对照)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化检查。结果立体定向颅内接种成功率97．5％，未见远处及颅外转移，肿瘤在一定时期内牛长较快，脑水肿随肿瘤的生长明显加重，生存期观察组中7只荷瘤鼠死亡，3只肿瘤自发部分消退。结论立体定向建立大鼠C6胶质瘤模型成功率高，接种后颅内肿瘤呈浸润性生长，与人脑胶质瘤具有相似性，由于生存期观察组中有部分荷瘤鼠出现肿瘤自发部分消退，故应用该模型评价治疗效果时应慎重；TIWI增强扫描可清晰显示肿瘤影像，且能更早发现肿瘤；MRI联合病理可较好反映肿瘤生长方式及发展过程。     

神经胶质瘤C6/VP16多药耐药细胞株的建立

目的建立神经胶质瘤C6细胞对依托泊苷(VP16)耐药细胞株C6/VP16,探讨其耐药的可能机制。方法采用浓度递增和短期大剂量药物诱导相结合的方法建立大鼠C6/VP16耐药细胞株;光镜下观察C6/VP16细胞株的形态学变化;细胞计数试剂盒-8检测C6/VP16细胞株对VP16、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、环磷酰胺(CTX)、替莫唑胺(TMZ)的耐药敏感性;westernblot检测多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达量变化。结果经过65代诱导培养,成功建立可操作的、重复性好的C6/VP16耐药细胞株。C6亲代细胞形态规则、大小均一,生长迅速,紧密生长,每2～3d传代;C6/VP16细胞株,突起增多,生长周期受抑制,生长变缓,每10～12d传代。VP16、TMZ、CTX、ADM和VCR作用C6亲代细胞的半生长抑制浓度(IC50)分别为(0.105±0.043)、(27.284±0.529)、(5.800±0.317)、(6.636±0.315)和(19.146±0.526)μg/ml,而作用C6/VP16细胞株的IC50分别为(0.943±0.052)、(33.251±0.288)、(32.943±0.215)、(35.251±0.126)和(35.604±0.426)μg/ml;VP16、CTX和ADM作用C6/VP16细胞株IC50较C6亲代细胞差异显著(P<0.05)。C6/VP16细胞株MRP1的表达量较亲代C6细胞明显增加(P<0.05)。结论 C6/VP16细胞株对ADM和CTX存在明显交叉耐药,而对TMZ和VCR无明显交叉耐药;多药耐药性是多种机制相互作用的结果,MRP1可能参与其中。     

人恶性胶质瘤细胞株U251三种克隆的分化特性和胶质瘤干细胞的初步鉴定

目的 观测U251细胞的克隆在形态和分化上的差异,鉴定含胶质瘤于细胞的克隆.方法 克隆形成实验观察U251细胞克隆的形态并分类,免疫细胞化学染色观测不同克隆GFAP和nestin的表达差异.分离低分化克隆,检测其自我更新能力、多向分化潜能及CD133表达情况.结果 U251细胞可形成紧密型、中间型和松散型三种克隆类型.紧密型克隆分化程度最低,此克隆在无血清培养基内形成神经干细胞样细胞球,具有自我更新能力、多向分化潜能,并表达CD133.结论 U251细胞的克隆在形态和分化程度上存在差异,紧密型克隆可能富含胶质瘤干细胞.     

9L/Wistar大鼠脑胶质肉瘤模型的建立

目的建立稳定的9L／Wistar大鼠脑胶质肉瘤模型。方法构建稳定表达萤火虫荧光素酶PGL的9L细胞株9L^lvc，采用立体定向手术，在Wistar大鼠右侧尾状核接种DAPI荧光标记的9L^lvc细胞，分别于接种后第7，14，21天通过Xenogen活体动物体内成像系统检测肿瘤的生长情况，并断头取材，观察肿瘤的形态学变化，采用免疫组化的方法检测肿瘤细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（Vemintin）的表达。结果大鼠接种9L^lvc细胞后成瘤率100％。活体成像显示细胞接种后第7天到第21天肿瘤呈逐渐增大趋势。组织切片结果显示肿瘤与周围脑组织边界较清楚，未见包膜；瘤内新生血管丰富，可见出血。肿瘤组织免疫组织化学GFAP及Vemintin蛋白染色阴性。结论该方法建立的大鼠脑胶质肉瘤模型稳定可靠，符合恶性胶质肉瘤的生物学特征．是理想的脑胶质肉瘤实验研究材料。     

大鼠骨髓基质干细胞治疗C6胶质瘤实验研究

目的观察骨髓基质干细胞(BMSCs)在体内环境下对C6胶质瘤的治疗效果。方法流式细胞术检测培养的BMSCs表面标记;SD大鼠生存周期绘成Kaplan-Meier图,行Log-rank Test,HE染色和BrdU免疫组化染色观察BMSCs对胶质瘤的趋向性和治疗情况。结果流式实验显示所培养细胞为BMSCs;HE染色结果示呈瘤率为100%,实验组较对照组生存时间明显延长;BrdU免疫组化染色示BMSCs存在于肿瘤组织及其周边。结论侧脑室移植BMSCs后,BMSCs可向肿瘤组织迁移,并可改善荷瘤大鼠的生存质量,明显延长其晚期生存周期。