兔大脑中动脉梗死模型的建立

目的 :建立一种简单、实用的兔大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型。方法 :2 0只新西兰大白兔 ,随机分为A、B两组 ,A组为电凝阻断右侧大脑中动脉形成局灶性脑梗死模型 ,B组为结扎右侧大脑中动脉形成局灶性脑梗死模型。利用MRI、TTC染色和光镜评价MCA闭塞效果。A、B两组动物模型制成后 10小时进行SE序列冠状位检查 :T1WI和T2 WI。结果 :A、B两组动物MCAO后 10小时MRI、TTC染色和光镜检查均证实脑梗死存在。MCAO后 10小时脑MRI均显示MCA供血区脑组织呈长T2 信号。A组方法制备兔MCAO操作简单易学 ,手术时间短 ,1h ;B组方法操作复杂 ,手术时间长 ,2h。结论 :用电凝阻断法制备兔大脑中动脉阻塞模型是一种较理想的方法     

两种局灶性脑缺血再灌注模型的比较

目的比较两种大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,寻找一种更加理想、稳定和可靠的模型。方法将22只SD大鼠随机分为颈外动脉插线组和颈总动脉插线组,采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,MCAO2h再灌注24h,采用TTC染色和NF-κB免疫组化染色,并分别测定脑梗死体积和NF-κB表达量。结果两种插线方法都能造成大鼠局灶性脑梗死,颈外动脉插线组再灌注状态优于颈总动脉插线组,且脑梗死体积和NF-κB表达量均高于颈总动脉插线组。结论颈外动脉插线闭塞大脑中动脉是一种较为理想和可靠的大鼠MCAO局灶性脑缺血再灌注模型制作方法。     

兔MCAo型局灶脑缺血模型的建立

采用显微外科方法,经眶入路阻断兔大脑中动脉造成局灶脑缺血模型。经伊文思蓝和TTC染色,光镜、电镜病理形态学观察,脑组织水含量,Na~+、K~+含量等测定,证实模型成功。缺血后半小时即观察到神经元超微结构变化;缺血2小时脑H_2O、Na~+含量显著增加,脑水肿在48小时内持续发展。大脑中动脉阻断后4小时,TTC染色可见基底节尾核缺血苍白区,而反映血脑屏障破坏的伊文思蓝蓝染在缺血后12小时才出现。此模型能较好模拟脑缺血的病理发展过程     

不同动脉阻塞及阻塞时限对大鼠局灶性脑缺血模型的病理及行为学影响

目的通过采用不同的动脉阻塞和阻塞时限建立大脑中动脉(MCA)远端阻塞(d MCAO)的脑缺血模型,比较脑梗死体积及行为学评分的差异,并确定最佳的阻塞动脉方式和阻塞时限。方法第1阶段:在相同阻塞时限(90 min)下,采用不同动脉阻塞方法建立脑缺血模型:1电凝一侧大脑MCA远端(MCAO组,n=10);2电凝MCA+同侧颈总动脉(CCA)阻塞90 min(MCAO+1CCAO*90组,n=10);3电凝MCA+双侧CCA阻塞90 min(MCAO+2CCAO*90组,n=10);另设对照组(MCA和CCA皆不阻塞,n=8)。造模24 h后检测脑梗死体积和行为学评分。第2阶段:采用电凝MCA+双侧CCA阻塞法,阻塞时限分别为30 min(MCAO+2CCAO*30组,n=10)、60 min(MCAO+2CCAO*60组,n=10)、120 min(MCAO+2CCAO*120组,n=10)建立脑缺血模型,于造模24 h后检测梗死体积和行为学评分。结果在相同阻塞时限(90 min)下,MCAO+2CCAO*90组的脑梗死体积和运动功能缺损较MCAO组及MCAO+1CCAO*90组明显,且差异有显著统计学意义(P0.01)。MCAO组与MCAO+1CCAO*90组比较差异无统计学意义(P0.05)。在阻塞相同动脉(电凝MCA+双侧CCA阻塞)条件下,MCAO+2CCAO*120组死亡率高达60%;MCAO+2CCAO*60组的脑梗死体积和运动功能缺损与MCAO+2CCAO*30组比较,差异有显著统计学意义(P0.01)。MCAO+2CCAO*60组与MCAO+2CCAO*90组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论电凝一侧MCA+60 min一过性阻塞双侧CCA制作d MCAO模型可产生相对明显的梗死体积和运动功能损伤,且死亡率低、造模时间短,适用于缺血性脑卒中研究。     

大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型中Caspase-3的表达

目的 研究Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用，进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制。方法 用Belayev改良的Longa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血／再灌注模型，TTC染色观察梗死灶的形成，分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中Caspase-3 mRNA与活性蛋白的表达。结果 缺血2小时再灌注24小时，TTC染色见明显的梗死灶形成，正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的Caspase-3 mRNA表达，但活性蛋白几无表达；再灌注24小时后，缺血侧脑中Caspase-3 mRNA表达明显增强，蛋白质活化增多，再灌注48小时进一步增加。结论 细胞凋亡机制参与了缺血后迟发性神经元死亡，Caspase-3在其中起重要作用。     

社会交往对大鼠局灶性脑梗死灶周围SYN表达的影响

目的观察社会交往环境对局灶性脑梗死大鼠突触膜糖蛋白(Synaptophysin,SYN)表达的影响。方法SD大鼠75只。将实验动物随机分为假手术对照组(5只)和大脑中动脉阻塞组(MCAO)(70只)。MCAO组大鼠采用电凝法造成右侧大脑中动脉阻断(MCAO)模型后,再随机分为独居组(30只)、社会交往组(40只)。于不同时间点分批处死大鼠,用免疫组化染色观察梗死灶周围皮质SYN阳性表达。结果MCAO后梗死灶周围皮质SYN阳性表达均高于假手术对照组,并且随时间的推移,其表达进一步增高。社会交往组在1、2、3周SNY表达均明显优于独居组和对照组。结论社会交往能促进梗死灶周围SYN的表达。     

TLR4/NF-κB在糖尿病小鼠和非糖尿病小鼠脑缺血-再灌注损伤中的对比分析

目的探讨炎症信号在糖尿病与非糖尿病小鼠局灶性脑缺血-再灌注后脑组织中的表达变化及其作用。方法制备糖尿病模型,参照longa等方法制成小鼠局灶性大脑中动脉阻断(MCAO)模型,采用Longa法进行神经功能缺失评分,TTC染色测定梗死体积,Western blotting法检测TLR4/NF-κB蛋白表达。结果糖尿病小鼠局灶性脑缺血-再灌注后神经功能缺失评分、梗死体积较非糖尿病组明显严重(P<0.05),同时伴有脑组织TLR4/NF-κB蛋白表达上调(P<0.05)。结论糖尿病小鼠局灶性脑缺血-再灌注后TLR4/NF-κB表达增高,且与神经功能缺失一致,提示TLR4/NF-κB对糖尿病性脑梗死后增加了脑组织损伤的易感性。     

预防及超早期应用尼莫同对小鼠局灶性脑梗死的影响

目的观察尼莫同超早期给药对小鼠局灶性脑梗死的影响.方法经右侧颈总动脉将尼龙单丝线栓至大脑中动脉造成永久性缺血模型.经尾静脉及腹腔注射尼莫同,TTC染色、图像分析仪测定脑梗死体积.结果单纯缺血组各时间点脑梗死体积最大,缺血前预防给药组各时间点脑梗死体积最小,缺血后即刻给药组各时间点脑梗死体积介于二者之间.结论小鼠大脑中动脉闭塞后其局灶性脑梗死体积于术后第3天达高峰.缺血前预防给药组、缺血后即刻给药,尼莫同均可使梗死体积减少.     

大鼠短暂局灶性大脑中动脉缺血后calpain的表达

目的：研究calpain在缺血性脑损伤中的作用，进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制，为治疗研发提供理论依据。方法：用Belayev改良的Langa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血／再灌注模型，TTC染色观察梗死灶的形成，分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中calpain mRNA与活性蛋白的表达。结果：缺血2h再灌注24h,TTC染色见明显的梗死灶形成，正常脑组织、假手术组及：MCAO缺血对侧脑中有少量的calpain mRNA表达，但活性蛋白几无表达；缺血脑组织calpain mRNA表达及蛋白质活化均显著增加，呈双峰式，MCA缺血2h增加，再灌注4h减少，至24h更明显增高，而48h又有所下降。结论：Calpain参与了缺血性脑损伤过程，尤其在迟发性神经元死亡中起重要作用。     

建立大鼠可逆性大脑中动脉闭塞的局灶脑缺血模型

通过应用４－０单股尼龙外科线沿颈内动脉进入颅内阻断大鼠大脑中动脉血流，制成大鼠短暂性局灶脑缺血模型。大鼠大脑中动脉阻塞后，均出现各种神经病学征象。氯化三苯四氮唑染色能清楚地显示梗塞范围。光镜和电镜观察大鼠短暂性局灶脑缺血后的病理变化，结果显示细胞超微结构的病理损害在电镜下可被观察。该实验表明此模型是比较理想的短暂性局灶脑缺血模型。     

使用"夹心TTC染色法"可显著提高脑缺血模型中梗死灶的检测效率

目的 优化红四氮唑(TTC)染色法,以提高对脑缺血模型中梗死灶的位置及面积的精确判定程度.方法 采用线栓法建立Balb/c小鼠的大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血5h后断头取脑,利用"夹心TTC染色法"对梗死灶进行判定.结果 传统TTC染色仅有单侧脑片染色效果较好而另侧染色效果很差,相比之下,"夹心TTC染色法"染出的脑片整体颜色鲜红、均一,两侧染色程度均十分良好,能够明确判定出梗死灶.结论 优化后的"TTC夹心染色法"适合于梗死灶位置以及面积的精确判定,可显著提高脑缺血模型中梗死灶的检测效率.     

局部脑缺血预处理对大鼠脑梗死的影响和HSP70的表达及mRNA的变化

目的建立局灶性可重复性大鼠脑缺血动物模型,研究短暂性局部脑缺血后再灌注不同时间对大脑中动脉阻塞(MCAO)的影响。方法应用改进的Longa's法,建立阻断左侧中动脉的局部脑缺血预处理模型。各组大鼠均经两次处理预处理(PC)组大鼠20min短暂脑缺血,分别在再灌注12h、1d、3d、5d、7d、14d后,造成MCAO;脑梗死组大鼠只在第二次处理造成大脑中动脉闭塞;短暂缺血组只在第一次处理时缺血20min,各组大鼠均在第二次处理后24h断头处死,检测以下指标神经功能缺失评分;TTC染色测量梗死范围HE染色观察组织结构变化;免疫印迹(原位杂交)和免疫组织化学染色观察HSP70的表达。结果PC后1d、2d、3d、5d、7d组与脑梗死组相比较,脑梗死范围,梗死周边区脑组织的缺血性损伤明显减轻了;短暂性脑缺血引起了轻微的神经细胞结构的改变并使缺血区HSP70的表达增加,MCAO后24hHSP70蛋白在缺血周边区出现了广泛表达。结论短暂局部缺血预处理可以诱导脑梗死后脑组织产生缺血耐受性,其保护作用出现再灌注后l~7d;缺血预处理引起HSP70的变化与缺血耐受的产生有一定联系。     

短暂局部预缺血对脑梗塞大鼠的影响及HSP70的表达

目的 建立局灶性可重复性大鼠脑缺血动物模型，研究短暂性局部脑缺血后再灌注不同时间对大脑中动脉闭塞(MCAO)的影响。方法 应用改进的Longa's法局灶性脑缺血模型，建立阻断左侧大脑中动脉的局部脑缺血预处理模型。各组大鼠均经两次处理，预处理(PC)组大鼠经15min短暂预缺血，分别在再灌注6、12、24、72、168h后(n=15～16)，造成MCAO；脑梗塞组大鼠只在第二次处理造成大脑中动脉闭塞；短暂缺血组只在第一次处理时缺血15min。各组大鼠均在第二次处理后24h，检测以下指标：神经功能缺失评分；TTC染色测量梗塞范围；HE染色，观察组织结构变化；干湿法测量脑水含量；免疫组织化学染色观察HSP70的表达。结果 PC24h、PC72h和PC 168h组与脑梗塞组相比较，脑梗塞范围、脑水肿的严重程度、梗塞周边区脑组织的缺血性损伤明显减轻了；短暂缺血引起了轻微的神经细胞结构的改变并使缺血区HSP70表达增加，MCAO后24hHSP70蛋白在缺血周边区出现广泛表达。结论 短暂局部缺血预处理可以诱导脑梗塞后脑组织产生缺血耐受性，其保护作用出现在再灌注后1～7d；缺血预处理引起HSP70蛋白表达的改变与缺血耐受的产生有一定联系.     

L—NNA对兔大脑中动脉阻后脑梗塞灶范围的影响

电凝阻断兔大脑中动脉，造成兔局灶脑缺血。于缺血前后静脉注射一氧化氮合成酶抑制剂Ｌ－ＮＮＫ，２４ｈ后测量梗塞灶范围并与单纯缺血组比较，发现Ｌ－ＮＮＡ扩大兔大脑中动脉阻断后脑梗塞灶范围。另设一氧化氮合成底物Ｌ－精氨酸组等进行对照研究，结果证明该作用是由于减少了一氧化氮生成而产生。     

颈交感神经干离断对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马iNOS表达的影响

目的采用颈交感干离断（TCST）模拟星状神经节阻滞，观察其对局灶性脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠脑梗死容积及海马诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达等的影响，并探讨其脑保护作用的机制。方法将大鼠随机分成实验组（A组）、对照组（B组）和假手术组（C组）；采用线栓法行大脑中动脉栓塞（MCAO）制作大鼠局灶性CIRI模型，A组于TCST后即行MCAO，2h后再恢复灌注；B组为单纯CIRI组；C组仅完成与A组相似的手术步骤但不造成MCAO、不行TCST；再灌注24h后观察各组大鼠神经行为学评分、脑梗死容积及海马iNOs的表达变化。结果A组大鼠脑梗死容积和神经行为学评分均低于B组（P〈0．05）；与A组、C组相比，B组大鼠海马iNOS的表达增加（P〈0．05），而A组与C组间无显著差异（P〉0．05）。结论TCST可通过下调大鼠海马iNOS的表达而对局灶性CIRI发挥脑保护作用。     

不同时间兔短暂性局灶脑缺血MRI动态演变和病理组织学改变

目的研究兔不同时间短暂局灶脑缺血后MRI(包括DWI、PWI和T2WI)缺血改变的时程,并且评价其组织病理学改变。为短暂性脑缺血发作患者的临床诊断和治疗提供依据。方法60只新西兰白兔分为7、10和30min短暂大脑中动脉阻塞模型和假手术组,各组15只。在阻塞前、阻塞中和再灌注后0.5h、2h、6h、12h、24h、48h、72h对实验动物MRI检查(包括DWI,PWI和T2WI),在MRI检查后于72h时间点进行组织病理学评价。结果在假手术组,无MRI和组织学异常。在7、10和30min组,在阻塞时的灌注不足和DWI高信号于再灌注后消失。此后,在7min组,DWI,PWI和T2WI保持正常,而在15和30min组,于6～12小时观察点出现继发的DWI高信号和T2WI异常。组织学检查显示在三组均有神经元坏死,但是,坏死神经元数目在15和30min组显著高于7min组(P<0.001)。结论于再灌注后DWI信号异常的短暂或持久消失依赖于缺血持续时间。DWI信号异常的短暂消失动物有广泛的神经元坏死;然而,DWI信号异常持久消失并不不表明缺血损伤的脑组织完全恢复。这些结果有助于解释在有些脑缺血后DWI正常的患者神经功能缺失的表现,以及有些经历过TIA的患者表现认知功能改变。     

川芎嗪注射液治疗大鼠脑缺血/再灌注损伤的时间窗

目的探讨川芎嗪注射液治疗局灶性脑缺血/再灌注损伤的时间窗。方法40只SD雄性大鼠,随机分为5组(n=8),对照组(即生理盐水组)和川芎嗪注射液治疗组(T1、T2、T4和T6组),分别于缺血/再灌注后1h、2h、4h和6h腹腔注射川芎嗪注射液(20mg/kg),每24h一次,共3次。采用右侧颈内动脉单丝尼龙线栓塞致大脑中动脉阻闭(MCAO)120min建立局灶性脑缺血模型。再灌注后72h,评估神经功能缺陷评分(NDS)并处死动物,取大脑行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,以测量脑梗死容积。结果再灌注后72h测NDS,对照组明显高于T1组(P=0.001)、T2组(P=0.005)和T4组(P=0.002),T1、T2、T4和T6组间NDS无差异。再灌注后72h,对照组的脑梗死容积(205±72mm3)明显大于T1组(116±44mm3,P=0.001)、T2组(127±30mm3,P=0.003)和T4组(135±35mm3,P=0.007);在T1和T6组间也有统计学差异(P=0.035);其余各组的脑梗死容积无明显差异。结论川芎嗪治疗大鼠短暂局灶性脑缺血/再灌注损伤的有效治疗时间窗不宜超过4h。     

高压氧治疗对家兔实验性大脑中动脉闭塞后梗死灶周围巢蛋白表达的影响

目的 探讨高压氧(HBO)治疗对兔大脑中动脉闭塞(MCAO)模型梗死灶周围巢蛋白(nestin)表达的影响.方法 制备兔右侧MCAO模型.将动物分为3组,即MCAO+HBO治疗组(30只):MCAO后立即行HBO治疗,每天1次,连续20 d;MCAO对照组(30只):MCAO后不行HBO治疗;假手术组(10只):仅开颅不闭塞血管.分别于MCAO后10d、20 d观察其行为学、梗死体积变化.并用免疫组化法检测距梗死灶中心3 mm内皮层脑组织内nestin的表达.结果 MCAO后.MCAO+HBO治疗组行为学评分高于MCAO对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+HBO治疗组脑梗死体积小于MCAO对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MACO后10 d、20 dMCAO+HBO治疗组nestin免疫阳性细胞数05.88±1.2、20.03±1.6)高于MCAO对照组(6.63±1.6、6.82±0.8),差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期、连续20 d HBO治疗对兔MCAO后的神经行为学、梗死体积有明显的治疗效果,并促进兔MCAO后梗死灶周围脑组织内nestin的表达.     

大鼠短暂局灶性大脑中动脉缺血后calpain的表达

目的:研究calpain在缺血性脑损伤中的作用,进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制,为治疗研发提供理论依据.方法:用Belayev改良的Langa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血/再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的形成,分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中calpain mRNA与活性蛋白的表达.结果:缺血2 h再灌注24 h,TTC染色见明显的梗死灶形成,正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的calpainmRNA表达,但活性蛋白几无表达;缺血脑组织calpain mRNA表达及蛋白质活化均显著增加,呈双峰式,MCA缺血2 h增加,再灌注4 h减少,至24 h更明显增高,而48 h又有所下降.结论:Calpain参与了缺血性脑损伤过程,尤其在迟发性神经元死亡中起重要作用.     

亚低温和血糖对实验性局灶性脑梗死的影响

目的　研究亚低温和血糖对实验性局灶性脑梗死的影响。方法　采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌流模型 ,大脑中动脉阻塞 2小时 ,再灌流 4小时后观察梗死体积的变化。结果　亚低温组梗死体积较正常体温组减小 ,高血糖组梗死体积较正常血糖组增大 ,但血糖高时虽降低体温但梗死体积仍增大。结论　血糖和体温都影响脑梗死体积 ,但血糖对梗死体积的影响比体温明显。