贵州地区2017—2020年结核分枝杆菌卷曲霉素耐药与相关基因突变关系

目的 检测结核分枝杆菌(M.tb)对卷曲霉素(CM)耐药相关基因突变情况,探究基因型与表型的关联,为临床使用CM提供指导。方法 收集2017—2020年某院痰抗酸染色阳性的肺结核病患者痰标本,培养获得临床分离M.tb,药物敏感试验(DST)明确菌株耐药表型;提取DNA送全基因组测序(WGS),检测CM耐药相关基因tlyA、rrs、rpsL、eis、Rv0194及Rv1258C的突变情况,探索CM与利福平(RIF)表型耐药相关性。结果 共培养123株M.tb,WGS检出6个CM耐药相关基因共23个非同义突变位点;DST结果显示52例RIF耐药,4例CM、RIF均耐药。CM耐药菌株检出rrs基因A1401G、rpsL基因A128G以及Rv0194基因C3293T和T221C非同义突变位点;CM与RIF耐药相关性分析显示,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 M.tb CM耐药可能与rrs基因A1401G、rpsL基因A128G和Rv0194基因C3293T突变有关,CM存在与RIF交叉耐药可能,在制定抗结核治疗方案时可作参考。     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因的检测

目的 评估应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平（RFP）耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR0－SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株）和33例耐RFP肺结核病人痰标本rPOB基因突变进行检测,并对部分常规药敏试验耐药而用PCR－SSCP未检测到rPOB基因突变的PCR扩增产物阴性菌株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB基因PCR扩增产物258bp片段SSCP图谱正常;58株耐RFP分离株中,52株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为89．7％。SSCP图谱正常的5株耐RFP的PCR产物经测序证实,4株在531位密码子TCG→TTG,1株在526密码子CAC→TAC,1株未改变。33例耐RFP肺结核病人痰酝标本有30例PCR扩增阳性,23例SSCP图谱与H37RV株有差异,rPOB突变率为76．7％。结论 PCR－SSCP 以快速、准确地检测结核分支杆菌rPOB基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

产金属β-内酰胺酶IMP-4肺炎克雷伯菌调查分析

目的对1株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌(KPN)进行产金属β-内酰胺酶(MBLs)和产碳青霉烯酶(KPC)分析。方法 2010年4月2株KPN分别分离自天津市红桥医院1例住院患者的尿标本和痰标本,MIC法对分离菌株进行药物敏感试验,ESBLs确证试验检测其是否产ESBLs,PCR扩增blaI MP、blaVI M和KPC基因,扩增产物进行测序和分析。结果 2株KPN均为多药耐药菌,其中从尿中分离的KPN(HQU)对亚胺培南耐药,从痰中分离的KPN对亚胺培南敏感,均产ESBLs;从尿中分离的KPN携带MBLs基因blaI MP-4,且定位于质粒上;未检出blaVI M和KPC基因。结论产blaI MP-4型MBLs KPN的出现提示耐药性传播广泛,临床应加强耐药监测和严格药物使用。     

重症监护病房铜绿假单胞菌的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的 了解重症监护病房铜绿假单胞菌的耐药情况以及对氟喹诺酮类耐药的分子机制,为临床合理用药提供依据.方法 用E试验法测定83株铜绿假单胞菌对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),从中筛选28株氟喹诺酮类耐药菌,以标准敏感菌株ATCC 27853作为质控菌株,PCR扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),扩增产物片段进行直接测序分析.结果 83株铜绿假单胞菌在痰标本的阳性率最高71.08%;28株氟喹诺酮耐药菌株的gyrA基因在83位(ACC-ATC)有突变,导致氨基酸Thr-Ile的改变;有11株高耐药菌gyrA基因同时在87位(GAC-GGC)有突变,导致氨基酸Asp-Gly的改变;有14株耐药菌株的parC基因在87位有TCG-TTG突变,导致氨基酸由Ser-Leu的改变,未发现parC突变单独存在.结论 重症监护病房铜绿假单胞菌对美罗培南保持较高的抑菌活性;而亚胺培南和氟喹诺酮类药物的滥用,已造成细菌对其耐药率急剧升高,gyrA和parC基因突变与铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物密切相关.     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的：探讨耐异烟肼结核分支杆菌KatG基因突变在结核分支杆菌耐异烟肼耐药性测定中的应用价值。方法：采用PCR和PCR－SSCP方法对72株结核分支杆菌临床分离株和30例耐INH肺结核病人痰标本KatG基因突变进行检测。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照，30株药物敏感株的KatG基因PCR扩增产物282bp片段28例SSCP图谱正常，2例异常。42例耐INH分离株中，38株KatG基因扩增阳性，其中24株SSCP图谱异常，其敏感性为63．1％，30例耐INH肺结核病人痰标本有18例PCR扩增阳性，10例SSCP图谱与H37RV株有差异，KatG突变率为55．6％，结论：结核分支杆菌INH耐药的产生可能是由于其KatG基因完全缺失或KatG基因突变所致，PCR－SSCP技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

泛耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶与16SrRNA甲基化酶基因检测研究

目的研究泛耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类的耐药机制,以指导临床合理使用抗菌药物,降低细菌耐药性的产生。方法收集2010年1-12月浙江绍兴第二医院住院患者痰液标本中分离到的泛耐药铜绿假单胞菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析14种氨基糖苷类修饰酶基因与7种16SrRNA甲基化酶基因。结果 20株铜绿假单胞菌均检测到aac(6′)-Ⅱ及rmtB基因,检出率100.0%;17株检测到aac(6′)-Ⅰb,检出率85.0%;18株检测到ant(2″)-Ⅰ,检出率90.0%;2株检测到ant(3″)-Ⅰ,检出率10.0%。结论 aac(6′)-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶与rmtB型16SrRNA甲基化酶基因流行是泛耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类耐药的重要原因。     

ICU分离鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究

目的调查医院重症监护病房(ICU)分离鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,为ICU鲍氏不动杆菌感染治疗的抗菌药物选择提供理论依据。方法收集2010年1月-2014年1月ICU住院患者分离到的135株非重复鲍氏不动杆菌,采用VITEK-2Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏分析,采用PCR法检测blaVIM、blaNDM、blaOXA-23/24、blaIMP、blaKPC及blaOXA-51/58等碳青霉烯酶耐药基因,采用PCR检测ISAba1基因并与碳青霉烯酶基因连锁检测。结果 4年ICU分离出鲍氏不动杆菌135株,年龄60岁患者分离的鲍氏不动杆菌最多52株,占38.52%;ICU患者痰液标本中检出鲍氏不动杆菌最多79株占58.52%,其次为分泌物及尿液,分别占20.00%及11.11%;鲍氏不动杆菌对氨苄西林耐药率最高为94.81%,对美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为32.95%和34.07%;对选取的46株碳青霉烯类耐药菌进行基因检测显示,46株均携带有blaOXA-51-like基因,46株菌携带ISAba1基因;40株携带blaOXA-23-like基因,对blaOXA-23-like基因测序,进行比对后确定为blaOXA-23基因,并同时检出ISAba1-blaOXA-23连锁基因;未检出blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaOXA-58-like、blaOXA-24-like及blaNDM基因。结论 ICU患者分离的鲍氏不动杆菌耐药性严重,以老年患者居多,主要分离自痰液标本,其中碳青霉烯耐药株常携带有OXA-23型碳青霉烯酶基因,并与ISAba1连锁携带。     

肺炎克雷伯菌江阴分离株抗菌药物耐药元件研究

目的:研究肺炎克雷伯菌江阴分离株抗菌药物耐药元件。方法:收集我院住院患者痰液标本中分离出的40株江阴地区各种耐药肺炎克雷伯菌,并检测菌株对抗菌药物的敏感性。结果:40株江阴地区各种耐药肺炎克雷伯菌对头孢类的耐药率为100%,但敏感率为0.00%;40株菌对于左氧氟沙星、环丙沙星等的敏感率为0.00%,但耐药率为100%。40株江阴地区各种耐药肺炎克雷伯菌均检测出β-内酰胺酶基因,总阳性率为100%。结论:本组40株肺炎克雷伯菌体携带有β-内酰胺酶基因,这也是对β-内酰胺类药物耐药的主要因素。     

耐喹诺酮类福氏志贺菌基因突变分析

目的研究福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因突变与其喹诺酮类药物耐药的关系.方法对临床收集的1株喹诺酮类药物敏感福氏志贺菌、2株喹诺酮类药物耐药程度不同的福氏志贺菌,对上述2个靶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增及核酸序列分析.结果首次发现临床分离喹诺酮类耐药福氏志贺菌parC基因突变,导致121,129,131,134,141,L51位5个位点氨基酸编码改变;耐药程度较高的菌株共发现gyrA、parC基因上6个突变位点,耐药程度较低的菌株发现gyrA基因1个突变位点.结论福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因和拓扑异构酶ⅣparC基因突变均与其喹诺酮类药物耐药有关,靶基因突变位点数量可能与喹诺酮类药物耐药程度有关,临床耐药株靶基因突变存在多态性.     

qacE△1-sull阳性多药耐药革兰阴性杆菌的临床分布特征

目的 了解携带耐消毒剂磺胺复合物基因qacE△1-sull的多药耐药革兰阴性杆菌临床分布状况,为多药耐药革兰阴性杆菌医院感染预防控制提供依据.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测多药耐药革兰阴性杆菌qacE△1-sull基因,分析其阳性菌株的分布特点.结果 182株qacE△1-sull基因阳性多药耐药革兰阴性杆菌临床分布以重症监护病房(ICU)最多(55株,30.22%),其次为普外科(38株,20.88%);标本分布以痰标本检出率最高(52.20%).结论 耐消毒剂基因qacE△1-sull多药耐药革兰阴性杆菌分布以ICU、普外科较高,应作为防范重点,加强医院环境微生物监测,防止感染携带耐消毒剂基因多药耐药菌感染的局部流行和暴发.     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白突变检测

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的表达,为临床治疗肺炎克雷伯菌致呼吸机相关性肺炎(VAP)提供理论依据和指导。方法收集医院2011年7月-2012年6月入住儿童重症监护病房(PICU)20例呼吸机相关性肺炎患儿下呼吸道痰液标本,通过药敏试验检测耐药率,PCR法及基因测序检测β-内酰胺酶和膜孔蛋白的表达。结果共20株肺炎克雷伯菌对头孢类抗菌药物均存在耐药,对头孢唑林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢西丁耐药率分别为100.0%、95.0%、70.0%、70.0%、55.0%、30.0%;共检出6种β-内酰胺酶基因,分别为A类SHV、TEM、CTX-M-1、LAP,C类DHA-1和D类OXA-1,ompK35膜孔蛋白基因检测10株为基因缺失和8株为基因突变,ompK36膜孔蛋白基因7株缺失和2株突变;6株非产ESBLs株均同时存在ompK35/36的突变或缺失,且伴有β-内酰胺酶基因的表达。结论 20株肺炎克雷伯菌均检出1³种β-内酰胺酶基因;ompK35/36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白几乎均有缺陷;提示该组耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK膜孔蛋白缺陷的双重作用,特别是非产ESBLs菌株。     

志贺菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性及耐药机制研究

目的检测志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ基因突变存在与志贺菌喹诺酮类药物耐药性的相关性。方法用琼脂稀释法对60株志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关基因gyrA、gyrB、parC、parE,并对其中20株PCR扩增所得的阳性产物进行测序分析;分析志贺菌gyrA、gyrB、parC基因突变与喹诺酮类药物耐药性的关系。结果 60株志贺菌对萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为90.0%、35.0%、28.3%和15.0%;测序结果显示gyrA、gyrB、parC基因突变率分别为85%、30%和100%,parE基因未发现突变。结论志贺菌对喹诺酮类耐药严重;靶基因突变是喹诺酮类药物耐药的主要机制之一,以DNA旋转酶GyrA基因突变为主,DNA拓扑异构酶IVparC基因突变次之。     

多药耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺类药物耐药机制的研究

目的探讨多药耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺类药物的耐药机制,为临床治疗提供参考依据。方法对2010年7-12月分离出的97株铜绿假单胞菌采用PCR方法进行检测,检测4种β-内酰胺类药物的耐药基因,即VIM-2、IMP-2、VIM-1、IMP-1的表达,数据采用SAS 9.1软件进行统计分析。结果β-内酰胺类药物的基因突变中,IMP-1基因的突变率最高,14株菌株存在突变,突变率为14.4%;其他3种IMP-2、VIM-1和VIM-2的基因突变菌株分别为9、6株和7株,突变率分别为9.5%、6.2%和7.2%;耐亚胺培南铜绿假单胞菌的4种β-内酰胺类药物基因突变率与敏感铜绿假单胞菌的突变率基本相同。结论亚胺培南耐药菌株的4种β-内酰胺类药物基因突变率分别高于敏感菌株,但两者之间差异无统计学意义。     

儿童感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA及parC基因突变分析

目的 了解湖南地区儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势,以及由染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA及parC的流行及变异情况,为治疗儿童肺炎克雷伯菌感染提供依据.方法 以VITEK-2Compact全自动微生物系统检测分离菌株的耐药性,采用PCR法对36株耐喹诺酮类肺炎克雷伯菌进行gyrA及parC基因检测,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析.结果 发现36株耐喹诺酮类肺炎克雷伯菌均发生了gyrA基因耐药决定区的突变,其中33株有第83位丝氨酸的改变,3株发现有第87位氨基酸的改变,而parC基因在所有耐药株中均有第80、91位氨基酸的改变.结论 儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA及parC基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要.     

泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因、膜孔蛋白基因及外排泵基因研究

目的全面了解泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺类耐药机制。方法收集2008年1-12月住院患者痰液标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌20株,用聚合酶链反应(PCR)法,分析33种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因以及外排泵adeB基因。结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出A类β-内酰胺酶基因TEM-1、C类β-内酰胺酶基因ADC-30、D类β-内酰胺酶基因OXA-23,三者阳性率均为100.0%;B类β-内酰胺酶基因未检出;膜孔蛋白carO基因突变率为100.0%,外排泵adeB基因阳性率为100.0%。结论泛耐药鲍氏不动杆菌株对β-内酰胺类药物耐药与产TEM-1、ADC-30、OXA-23β-内酰胺酶,膜孔蛋白carO基因突变和获得adeABC外排泵3种耐药的机制相关。     

耐药肺炎克雷伯菌湖北襄阳分离株获得性耐药元件研究

目的调查耐药肺炎克雷伯菌获得性耐药元件基因的携带情况及菌株间的亲缘关系,为临床治疗提供参考依据。方法收集2016年1-10月医院住院患者痰液标本分离15株耐药肺炎克雷伯菌,用K-B法测定9种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析35种β-内酰胺类获得性耐药基因,21种氨基糖苷类获得性耐药基因和10种可移动遗传元件遗传标记;阳性耐药基因测序后直接作BLAST比对,耐药基因检测结果作样本聚类分析。结果 15株耐药肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率高;15株菌每株均检出β-内酰胺酶基因,总阳性率达100.0%,共检出7种β-内酰胺酶基因,其中仅检出1种β-内酰胺酶基因1株,占6.7%,同时检出2种9株,占60.0%,同时检出3种5株,占33.3%;样本聚类分析可见有一定的聚集性,并可分为A与B二个群;除A群有2个菌株属克隆传播,其余菌株亲缘关系稍远。结论本组15株耐药肺炎克雷伯菌同时携带β-内酰胺类药物获得性耐药基因、氨基糖苷类药物获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记,是对β-内酰胺类和氨基糖苷类产生耐药的重要原因。     

耐药肺炎克雷伯菌湖北襄阳分离株获得性耐药元件研究北大核心CSCD

目的调查耐药肺炎克雷伯菌获得性耐药元件基因的携带情况及菌株间的亲缘关系,为临床治疗提供参考依据。方法收集2016年1-10月医院住院患者痰液标本分离15株耐药肺炎克雷伯菌,用K-B法测定9种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析35种β-内酰胺类获得性耐药基因,21种氨基糖苷类获得性耐药基因和10种可移动遗传元件遗传标记;阳性耐药基因测序后直接作BLAST比对,耐药基因检测结果作样本聚类分析。结果 15株耐药肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率高;15株菌每株均检出β-内酰胺酶基因,总阳性率达100.0%,共检出7种β-内酰胺酶基因,其中仅检出1种β-内酰胺酶基因1株,占6.7%,同时检出2种9株,占60.0%,同时检出3种5株,占33.3%;样本聚类分析可见有一定的聚集性,并可分为A与B二个群;除A群有2个菌株属克隆传播,其余菌株亲缘关系稍远。结论本组15株耐药肺炎克雷伯菌同时携带β-内酰胺类药物获得性耐药基因、氨基糖苷类药物获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记,是对β-内酰胺类和氨基糖苷类产生耐药的重要原因。     

国内首次从泛耐药铜绿假单胞菌中检出KPC型β-内酰胺酶基因

目的 调查一组泛耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因的存在情况.方法 收集2010年1-12月浙江绍兴第二医院住院患者痰液标本中分离到的泛耐药铜绿假单胞菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析15种A类β-内酰胺酶基因、10种B类β-内酰胺酶基因、2种C类β-内酰胺酶基因、4种D类β-内酰胺酶基因检测以及膜孔蛋白oprD2基因.结果 20株泛耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因检出率,TEM为90.0％、CARB为100.0％、KPC为5.0％(经测序和BLASTn比对,确认为KPC-2型)、OXA-10群为10.0％,膜孔蛋白oprD2基因均为缺失.结论 20株泛耐药铜绿假单胞菌均存在产β-内酰胺酶和膜孔蛋白缺失是对β-内酰胺类药物耐药的重要原因;从泛耐药铜绿假单胞菌中查出KPC型β-内酰胺酶基因是国内外首次报道.     

209株铜绿假单胞菌血清型及耐药分析

本文从病人、医护人员、院内周围环境中，分离出铜绿假单胞菌（PA），经血清学分型及耐药谱的试验分析，其结果表明，PA的检测，对临床诊疗、控制院内感染及进一步追踪传染源，提供了科学依据，现报道如下。1材料与方法1．1标本来源我院自1994～1996年间，从住院患者的伤口分泌物、痰、尿、血标本中共分离出PA190株；从呼吸科的部分医护人员鼻咽腔拭子中分离出PAS株；从外科病房的拖布、擦布、床头柜分离出PAll株。总共209株。1·2PA的鉴定与血清学分型时分离出的未知菌，按（诊断细菌学）川双歧索引法，详细进行规范化的鉴定。凡符合…     

201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因gyrA的分布,给临床用药提供依据.方法 收集2003-2009年临床分离的肺炎克雷伯菌201株,采用琼脂稀释法进行药敏检测;利用引物特异性PCR结合测序识别gyrA基因耐药基因.结果 201株肺炎克雷伯菌对甲氧苄啶和氨苄西林有很高的耐药性,但是对亚胺培南和阿米卡星较为敏感;同时,检测到60株占29.9％存在gyrA基因突变.结论 随着抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌耐药性较严重,易导致肺炎克雷伯菌产生多药耐药性,给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战.