下调XIAP表达增强化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的:观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响.方法:构建XIAP基因反义真核表达载体,稳定转染胃癌细胞株MKN-45,RT-PCR和Western blot法检测癌细胞XIAP基因表达.选用顺铂、丝裂霉素分别处理转染前后的胃癌细胞,采用MTT比色法、克隆形成抑制实验检测癌细胞体外生长活性:透射电镜、流式细胞术、TUNEL检测癌细胞凋亡及比率;Western blot和比色法检测细胞内caspase-3蛋白表达和活性水平.结果:RT-PCR和Western blot证实,稳定转染反义XIAP基因的胃癌细胞MKN-45的XIAP mRNA和蛋白表达水平分别降低84.75%(P<0.01)和89.75%(P<0.01),各浓度顺铂、丝裂霉素处理24 h后,转染反义XIAP基因的MKN-45细胞生长抑制率分别增加7.3%-25.3%(P<0.01),12.3%-16.3%(P<0.01).透射电镜下可见部分细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率分别为34.12%和32.5%,显著高于未转染对照组MKN-45细胞的凋亡率(14.2%,P<0.05).与MKN-45细胞比较,稳定转染反义XIAP基因的MKN-45细胞内caspase-3表达水平增高2.45倍(P<0.01),活性水平提高3.68倍(P<0.0 1).结论:通过反义RNA技术下调XIAP基因表达,能提高癌细胞中caspase-3的表达和活性,增强化疗药物对癌细胞的诱导凋亡作用.     

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的 探讨节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 构建针对Bmal1序列的shRNA,用脂质体介导转染入胃癌细胞BGC-823,G418筛选稳定细胞株(转染组),同时设对照组(空白组).用克隆形成率检测细胞生长,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测相关基因及蛋白表达.结果 转染组克隆形成率低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bmal1总凋亡率升高(P＜0.05),其细胞周期再分布出现G1期缩短(P＜0.05),G2期延长(P＜0.05),同时发现Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05),c-Myc mRNA表达上调(P＜0.05).结论 Bmal1可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖,促进细胞凋亡,有可能成为诱导胃癌细胞凋亡的新靶点.     

Stathmin对肝癌细胞HCCLM3增殖及其肿瘤相关基因表达的影响

目的 探讨人stathmin基因在肝癌发生、发展过程中的作用及其机制.方法 化学合成stathmin序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌细胞株HCCLM3细胞.采用RT-PCR和Western blot技术检测stathmin的RNA干扰效率;用细胞计数试剂检测干扰细胞的生长增殖情况;用膜联蛋白V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测细胞凋亡;并用荧光定量PCR检测肿瘤增殖凋亡的相关基因.均数两两比较用配对t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 RNA干扰HCCLM3细胞后,stathmin的表达被显著抑制(P＜0.05),抑制率达90%;在RNA干扰24、48 h和72 h时,HCCLM3细胞的增殖抑制率分别为13.04%±0.10%、28.10%±0.41%和37.36%±2.1 5%(F=4.21,P＜0.05); RNA干扰后,细胞凋亡比例从9.20%±0.64%上升至25.11%±1.62%(F=44.67,P＜0.01);且RNA干扰组细胞癌基因c-myc、c-fos和增殖相关基因ki-67的mRNA表达水平明显下降,促凋亡基因caspase-3、bax和p53的mRNA表达水平升高(P值均＜0.05).结论 stathmin可能通过调节肿瘤增殖相关基因的表达水平来促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,参与肝癌的发生和发展进程.     

45℃热能联合顺铂对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

[目的]观察45℃热能联合顺铂对人脑胶质瘤U251细胞增殖与凋亡的影响.[方法]将传代的U251细胞随机分为四组,A组置于37℃温箱中,B、C、D组分别置于45℃温箱、37℃温箱并加入顺铂0.01 mL、45℃温箱并加入顺铂0.01 mL,培养24h后,用甲基台盼蓝染色法行细胞形态学检测,用MTT法测算U251细胞增殖率,用流式细胞术及DNA断端原位末端标记(TUNEL)法检测U251细胞凋亡率.[结果]培养24、48 h时,细胞增殖抑制率D组＞C组＞B组＞A组(P均＜0.05).培养24、48 h时,流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡率均为D组＞C组＞B组＞A组(P均＜0.05).[结论]45℃热能联合顺铂可抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,并诱导其凋亡.     

靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞生长的影响

目的:观察携带shRNA的重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法:设计3对针对Pokcmon基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体,脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞.RT-PCR及Western blot检测转染前后Pokemon mRNA及蛋白质的 表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖及凋亡的变化,RT-PCR检测其可能的下游因子β-catenin及H-ras的表达.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pshRNA1、2、3.转染HepG2细胞后,Pokemon基因的mRNA及蛋白质表达水平明显下调,以pshRNA2最强,抑制率分别为75.2%(RNA水平)和72.6l%(蛋白质水平).MTT显示pshRNA2可明显抑制细胞增殖;流式细胞仪测定转染后细胞凋亡增加;RT-PCR显示下游因子H-ras的表达明显降低(P＜0.05),而β-catenin的表达没有变化(P＞0.05).结论:采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon 基因的表达;Pokemon基因有促进肝癌细胞株增殖及抑制其凋亡的作用,该效应可能与下调其下游因子H-ras的表达有关.     

人宫颈癌癌基因-2 促进SMMC 7721细胞分裂和增殖的机制

目的 建立稳定转染含人宫颈癌癌基因(HCCR)-2的SMMC 7721细胞株,探讨HCCR-2对肝癌细胞生物学特性的影响与在SMMC 7721细胞中HCCR蛋白表达的分子信号通路机制. 方法通过脂质体将HCCR-2的真核表达质粒稳定转染至SMMC 7721细胞,Western blot 检测转染后SMMC 7721细胞中HCCR及其下游基因bcl-2蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐法检测HCCR-2对转染后SMMC 7721细胞生长的影响;流式细胞仪检测转染后SMMC 7721细胞周期和细胞凋亡率的变化.用不同浓度表皮生长因子(EGF)处理SMMC 7721细胞24 h,以及用LY294002预孵育细胞1 h后用EGF(100 ng/m1)处理SMMC 7721细胞24 h,Western blot检测HCCR的表达变化.建立稳定转染缺陷型Akt质粒(DN-Akt-pcDNA3.1)的SMMC 7721细胞,Western blot 检测总Akt、磷酸化Akt、HCCR及其下游基因bcl-2的表达.数据以均数±标准差(-x±s)表示,进行单因素方差分析.结果 转染HCCR-2的SMMC 7721细胞较转染空载体的SMMC 7721细胞及亲本细胞的HCCR表达升高,HCCR下游基因bcl-2的表达也升高;四甲基偶氮唑盐法显示其增殖能力增强,从72 h开始转染组较空载体组增殖速度加快(P＜0.01);流式细胞仪检测其细胞凋亡率下降(7.72%±0.23%与1.28%±0.16%,P＜0.01),处于分裂周期的细胞比例明显增加(15.76%±0.73%与21.62%±1.33%,P＜0.01).EGF可促进SMMC 7721细胞中HCCR的表达,用LY294002处理细胞后EGF对其HCCR表达的促进作用被抑制.转染DN-Akt-pcDNA3.1的SMMC 7721细胞中HCCR的表达下降,其下游基因bcl-2的表达亦下降.结论 EGF可通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导人肝癌细胞SMMC 7721中HCCR蛋白的表达,HCCR可影响人肝癌细胞的细胞周期、凋亡和增殖能力.     

Periostin基因过表达对顺铂和5-氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的影响

背景：肿瘤细胞耐药性的产生是肿瘤化疗失败的主要原因之一。Periostin是一种基质特异性细胞黏附分子。既往研究发现,periostin除参与胃癌细胞的生长、侵袭、转移外,还能降低其对化疗药物的敏感性。目的：明确periostin基因过表达对顺铂和5-氟尿嘧啶（5．Fu）诱导人胃癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：将表达人periostin全长序列的重组质粒稳定转染人胃癌细胞株SGC7901,同时设置空载体稳定转染组和未转染对照组,加入不同浓度顺铂或5-Fu处理24h,以流式细胞术检测细胞凋亡。以蛋白质印迹法检测经5μmol／L顺铂或10μmol／L5-Fu处理的SGC7901细胞的凋亡相关蛋白表达。结果：顺铂和5-Fu均能剂量依赖性地诱导SGC7901细胞凋亡,促进细胞色素c由线粒体释放至胞质,同时easpase-3激活,easpase-3底物PARP剪切增强。periostin稳定转染组SGC7901细胞对顺铂和5-Fu诱导的细胞凋亡具有显著抗性,细胞凋亡率显著低于经相同剂量化疗药物处理的空载体稳定转染组（P〈0．05）,胞质细胞色素C、cleavedcaspase-3、cleavedPARP蛋白表达亦明显下调。结论：过表达periostin基因可增强SGC7901细胞对顺铂和5-Fu诱导的细胞凋亡的抵抗能力,其抗凋亡活性与抑制线粒体依赖性凋亡途径有关。     

稳定干扰Pin1基因的食管癌细胞株的筛选及其生物学特征

目的:筛选稳定干扰Pin1的食管癌细胞系,研究Pin1表达与食管癌细胞生物学特征的关系.方法:将针对Pinl1基因的shRNA(pmU6-Pin1)转染入EC1细胞,经G418加压筛选稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹法检测细胞中Pin1的表达,确定筛选细胞系的正确性.通过MTT实验以及流式细胞仪检测Pin1抑制对食管癌细胞增殖、凋亡的影响.结果:Western blot检测结果显示,Pinl蛋白表达被成功抑制,建立了稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株(shPin1).与正常EC1细胞比较,MTT实验和流式细胞术实验结果表明基因沉默Pin1抑制食管癌细胞增殖(抑制率为51.8%),诱导细胞凋亡(凋亡率为46.39%):并增加了食管癌细胞EC1对顺铂的敏感性,抑制食管癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的能力均有所增强,抑制率从23.5%上升到61.0%,凋亡率从26.10%上升到58.95%.结论:稳定干扰Pin1食管癌细胞系的建立为进一步研究Pin1在食管癌中的作用提供了研究平台:基因沉默Pin1增加了食管癌细胞对顺铂的敏感性.     

真核起始因子2α的磷酸化抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨真核起始因子2α (eIF2α)的磷酸化对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响. 方法 将肝癌细胞随机分为对照组和实验组,在用突变载体eIF2αS51A转染和小分子抑制剂salubrinal 改变实验组细胞在顺铂作用条件下eIF2α磷酸化的基础上,用流式细胞和Western blot分别检测细胞凋亡的百分率和细胞凋亡的分子标志物.多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验. 结果 顺铂诱导肝癌细胞eIF2 α发生51位丝氨酸磷酸化.在突变载体转染条件下,顺铂(10μg/m1)诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在24 h凋亡的平均百分率分别为21.7％±1.5％和50.7％±2.1％(t=19.454,P＜0.05);顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在24h凋亡的百分率分别为21.0％±1.0％和57.3％±2.1％ (t=27.250,P＜0.05).在抑制剂作用条件下,顺铂(15 μ g/ml)诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在36 h凋亡的百分率分别为50.3％±2.5％和16.3％±2.1％ (t=18.031,P＜0.05);顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在36 h凋亡的百分率分别为42.0％±2.6％和12.0％±2.0％ (t=15.667,P＜0.05).同时,Western blot检测显示eIF2α的磷酸化抑制顺铂诱导的凋亡蛋白抗多聚ADP-核糖聚合酶的剪切. 结论 eIF2α的磷酸化在肝癌细胞抵抗顺铂介导的凋亡中起重要作用.     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。     

双萘酰亚胺类化合物诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 观察双萘酰亚胺类化合物(C8)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC 7721细胞的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测Bcl 2蛋白表达量;流式细胞术分析细胞内Bcl 2蛋白量;酶联免疫法检测Caspase9和Caspase 3表达量. 结果 C8抑制SMMC 7721细胞增殖,半数抑制浓度为15 umol/L.C8作用浓度在10,15、20 umol/L时,SMMC 7721细胞的凋亡比例分别为16.8%、29.4%和35.8%,对照组为2.1%,SMMC 7721细胞的凋亡率明显高于对照组,P<0.01.细胞内Bcl-2蛋白表达水平下降.酶联免疫检测结果表明Caspase 9和Caspase 3被活化.结论 C8可诱导人肝癌SMMC 7721细胞的凋亡,为抗肿瘤药物的研究提供新的化合物.     

Docetaxel inhibits SMMC-7721 human hepatocellular carcinoma cells growth and induces apoptosis

AIM:To investigate the in vitro anti-hepatocellular carcinoma(HCC) activity of docetaxel against SMMC-7721 HCC cells and its possible mechanism.METHODS: The HCC cells were given different concentrations of docetaxel and their growth was measured by colony forming assay. Cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry and fluorescence microscopy (acridine orange/ethidium bromide double staining, AO/EB), as well as electronic microscopy. The SMMC-7721 HCC cell reactive oxygen species (ROS) and glutathione (GSH) were measured after given docetaxel.RESULTS: Docetaxel inhibited the hepatocellular carcinoma cells growth in a concentration dependent manner with IC50 5&#215;10^-10M. Marked cell apoptosis and G2/M phase arrest were observed after treatment with docetaxel ≥10^-8M.Docetaxel promoted SMMC-7721 HCC cells ROS generation and GSH deletion.CONCLUSION: Docetaxel suppressed the growth of SMMC-7721 HCC cells in vitro by causing apoptosis and G2/M phase arrest of the human hepatoma cells, and ROS and GSH may play a key role in the inhibition of growth and induction of apoptosis.     

XPD对SMMC-7721肝癌细胞中DNp73和GADD45β的调控及意义

目的:观察人剪切修复基因人类着色性干皮病D组基因(xeroderma pigmentosum group D,XPD)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721细胞后XPD、DNp73和GADD45β基因的表达变化以及对肝癌细胞生长的影响.方法:实验分4组:重组质粒SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD组)、空载质粒SMMC-7721-pEGFP-N2组(N2组),脂质体组和SMMC-7721细胞空白对照组.应用Lipofectamine2000脂质体瞬时转染,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法检测转XPD基因后,人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中DNp73以及GADD45β的mRNA和蛋白质的表达量变化,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果:荧光显微镜下,XPD组和N2组细胞中观察到绿色荧光蛋白表达,说明转染成功;RT-PCR检测显示:XPD组中DNp73 mRNA相对表达量较其他3组显著下调,XPD和GADD45βmRNA相对表达量较其他3组明显上调(均P<0.01);Western blot检测显示:XPD、DNp73以及GADD45β蛋白相对表达量在各组间的差异与其mRNA各组间差异一致;MTT检测示:SMMC-7721细胞空白对照组、脂质体组、N2组、XPD组的吸光度(A)值分别为0.633±0.012,0.623±0.009,0.628±0.016,0.384±0.011,XPD组低于其他3组,差异均有统计学意义(均P<0.01),表明转染XPD后SMMC-7721细胞的增殖能力减弱.流式细胞仪检测SMMC-7721肝癌细胞凋亡:转染XPD的SMMC-7721细胞凋亡显著,凋亡率达56.53%,而其他3组均未见明显凋亡.结论:XPD基因在肝癌的发生发展中起抑制作用,癌基因DNp73的表达随XPD表达增加而降低,抑癌基因GADD45β则随XPD表达增加而增加,提示两者可能在XPD抑制肝癌细胞的生长机制中起重要作用.     

血管内皮细胞生长因子反义核糖核酸对肝癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义RNA转染人肝癌细胞后对细胞体内外生物学性状的影响。方法 将含正义、反义VEGFcDNA序列的质粒PCMV—VEGF、PCMV—FGEV及空载体质粒pcDNA3.1,在脂质体介导下导入SMMC—7721肝癌细胞,分别称为正义、反义及对照组,并通过G418筛选获得阳性克隆。细胞原位杂交和免疫组织化学方法检测转染后VEGF在肝癌细胞内的表达情况;MTT法和FCM检测转染后细胞在体外的增殖和凋亡情况;并制备裸鼠动物模型,观察转染后细胞的体内生长情况。结果 转染PCMV—FGEV后肝癌细胞内VEGF的转录及其蛋白的表达水平显著下降,但转染后体外细胞的增殖与凋亡情况均无明显变化。转染PCMV—FGEV后细胞在裸鼠体内的生长缓慢,反义组成瘤时间为(25.0±1.8)d,明显长于正义组(15.7±2.5)d和对照组(18.5±2.1)d,F=19.455,P<0.01;而平均瘤重以反义组最轻,为(0.96±0.28)g,F=21.501,P<0.01;同时反义组裸鼠肿瘤细胞发生明显的凋亡。结论 VEGF反义RNA转染人肝癌细胞可抑制肿瘤细胞VEGF的表达,在体外对细胞增殖和凋亡无影响,而体内可显著诱导细胞凋亡并抑制肿瘤生长。     

牛蒡子苷元对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察牛蒡子苷元（ARG）对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的ARG作用于SMMC-7721细胞,并设不加ARG对照组。MTT法测算细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法检测细胞中的Bcl-2 mRNA。结果与对照组比较,随ARG浓度增加,SMMC-7721细胞增殖率逐渐降低（P均〈0.05）,G0/G1期细胞比例显著增加（P均〈0.05）,G2、M、S期细胞比例减少（P均〈0.05）;随ARG浓度增加、作用时间延长,SMMC-7721细胞凋亡率显著增加（P均〈0.05）,Bcl-2 mRNA表达量减少（P均〈0.05）。结论 ARG可明显抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡;可能与ARG下调细胞中Bcl-2基因的表达有关。     

肝癌细胞放射敏感性与survivin蛋白表达的关系

目的 探讨肝癌细胞放射敏感性与survivin表达的关系.方法 肝癌细胞HepG2和SMMC-7721在接受不同剂量γ射线照射后,分别采用克隆形成法、免疫细胞化学法、流式细胞术、比色法等检测细胞存活率、survivin蛋白表达、细胞周期变化和Caspase-3活性.结果 在2Gy照射下HepG2和SMMC-7721细胞的存活分数分别为0.43±0.01与0.70±0.02,SMMC-7721较HepG2放射抗拒.γ射线对SMMC-7721细胞的G2/M期阻滞时间较HepG2细胞长(48 h对24 h),在阻滞峰各剂量点SMMC-7721细胞的G2/M期比例也更高.γ射线可上调两株肝癌细胞survivin蛋白的表达,照射后48～72 h,SMMC-7721细胞的survivin蛋白表达水平显著高于HepG2细胞(t值为2.81～5.20,P值均＜0.05).而Caspase-3的活化水平在放射敏感的HepG2细胞中更高(t值为6.05～6.72,P值均＜0.01).结论 射线诱导的survivin表达上调及survivin对Caspase-3的负调控可能是SMMC-7721细胞较HepG2细胞放射抗拒的原因之一.     

Inhibitory effect of antisense vascular endothelial growth factor RNA on the profile of hepatocellular carcinoma cell line in vitro and in vivo

AIM:To evaluate the effect of antisense vascularendothelial growth factor(VEGF)RNA(PCMV-FGEV)transfection on the profile of hepatocellular carcinoma(HCC)SMMC-7721 cells in vitro and in vivo.METHODS:SMMC-7721 cells were transfectedwith PCMV-FGEV antisense,PCMV-VEGF sense andempty vector plasmid encapsulated by lipofectamineas antisense group,sense group and control grouprespectively.The positive cell clones were selectedwith G418.The stable transfection and expressionof VEGF in the cells were determined by RT-PCR andimmunohistochemistry.Cell proliferation was observedby MTT assay.FACS analysis was used to determine theeffect of PCMV-FGEV transfection on cell apoptosis.Thegrowth of transfected cells in Wvo was also observed innude mice.RESULTS:VEGF expression was reduced in SMMC-7721transfected with PCMV-FGEV,which was confirmed byRT-PCR and immunohistochemistry.No effect of PCMV-FGEV transfection was found on cell proliferation andcell apoptosis of SMMC-7721 in vitro.The growth of cellstransfected with PCMV-FGEV was slow in nude miceand accompanied with obvious apoptosis.The latenttime of tumors in the antisense group was 25.0±1.8d,which was longer than that in sense and controlgroups(F=19.455,P<0.01).The average tumor weightin antisense group(0.96 g±0.28 g)was the smallestamong the three groups(F=21.501,P<0.01).CONCLUSION:The expression of VEGF can be inhibitedby antisense PCMV-FGEV.Antisense PCMV-FGEV has no effect on cell proliferation and apoptosis of SMMC-7721in vitro but can inhibit tumor growth and induce cellapoptosis in vivo.     

Effect of Nimesulide on proliferation and apoptosis of human hepatoma SMMC—7721 cells

AIM:Cyclooxygenase-2(COX-2)has been suggested to be associated with carcinogenesis.We sought to investigate the effect of the selective COX-2 inhibitor,Nimesulide on proliferation and apoptosis of SMMC-7721 human hepatoma cells.METHODS:This study was carried out on the culture of hepatic carcinoma SMMC-7721 cell line Various concentrations of Nimesulide(0,200μmol/L,300μmol/L,400μmol/L)were added and incubated.Cell proliferation was detected with MTT colorimetric assay,cell proliferation was detected with MTT colorimetric assay,cell apoptosis by electron microscopy,flow cytometry and TUNEL.RESULTS:Nimesulide could significantly inhibit SMMC-7721 cells proliferation dose-dependent and in a dependent manner compared with that of the controla group.The duration lowerst inhibition rate produced by Nimesulide in SMMC-7721 cells was 19.06%,the highest inhibition rate was 58.49%,After incubation with Nimesulide for 72h,the most highest apotosis rate and apoptosis index of SMMC-7721 cells comparing with those of the control were 21.20%&#177;1.62%,vs2.24%&#177;0.26%and 21.23&#177;1.78vs2.01&#177;0.23(P&lt;0.05).CONCLUSION:The selective COX-2 inhibitor,Nimesulide can inhibit the proliferation of SMMC-7721 cells and increase apoptosis rate and apoptosis index of SMMC-7721 cells,The apoptosis rate and the apoptosis index are dose-dependent.Under electron microscope SMMC-7721 cells incubated with 300 μmol and 400μmol Nimesulide show apoptotic characteristics With the clarification of the mechanism of selective COX-2 inhibitors,Thtese COX-2 selective inhibitors can become the choice of prevention and treatment of cancers.     

去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。