pcDNA3.1(+)TPA构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达活性研究

目的建立TPA基因在人脐静脉内皮细胞外源性表达的方法，为缺血性心脏疾病的基因治疗及防止血管再狭窄提供理论依据和新方法。方法构建真核表达载体pcDNA3．1( )TPA，并采用脂质体法将其转入体外培养的人脐静脉内皮细胞，并现察外源性TPA表达情况。结果真核表达载体pcDNA3．1( )TPA在人脐静脉内皮细胞中获有效表达，酶联免疫吸附法TPA蛋白表达定量检测结果为568．6ng／10^6细胞／24h，未转pcDNA3．1( )TPA的人脐静脉内皮细胞测得为17．8ng/10^6细胞／24h；发色底物法测得外源性TPA活性为108．8IU／10^6细胞／24h，未转pcDNA3．1( )TPA的人脐静脉内皮细胞测得为5．6IU／10^6细胞／24h。结论pcD．NA3．1( )TPA转入人脐静脉内皮细胞后，外源性TPA基因荻有效表达，为缺血性心脏病的TPA基因治疗提供了理论依据和新方法。     

TRPC6介导DU145细胞条件培养液诱导人脐静脉内皮细胞增殖的研究

目的探讨瞬时受体势C6（TRPC6,transient receptor potential canonical6）在人前列腺癌细胞（DU145）的培养上清液诱导人脐静脉血管内皮细胞（hUVEC）增殖中的作用。方法以DU145细胞培养上清液和DMEM培养基的不同比例混合液培养的hUVEC细胞。MTF法检测细胞增殖情况的变化;PCR和Western-blot法分别检测TRPC6基因和蛋白的表达情况。结果hUVEC经前列腺癌细胞培养上清液作用48h后,细胞增殖明显增加,TRPC6基因和蛋白的表达上调。结论前列腺癌细胞培养上清液能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖,其机制可能是通过上调TRPC6来介导。     

砷和硒对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究不同浓度硒、砷对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞增殖率的影响,为硒拮抗砷的毒性作用提供理论依据.方法 人脐静脉血管内皮细胞体外培养,当细胞处于对数生长期时进行实验.分为加砷组、加硒组和加砷加硒组.加砷组和加硒加砷组As3+浓度分别为0、0.05、0.1、0.5、1.5、3、6、12μmol/L.加硒组硒的浓度分别为0.05、0.1、0.5、1、2μmol/L.加硒加砷组硒的浓度为0.1μmol/L.采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活性.结果 HUVEC给予As2O3处理48h后,随着As3+浓度的增加,对细胞生长的抑制作用逐渐增强.硒浓度为0.1μmol/L时,细胞活性高于正常对照组(P<0.05);硒浓度为1、2μmol/L时,细胞活性降低.当As3+浓度为0.1μmol/L时,适量硒(0.1μmol/L)对低浓度的砷起拮抗作用(P<0.05).结论 砷可以抑制内皮细胞的生长,适量浓度的硒可以拮抗砷对细胞增殖的影响.     

阿魏酸钠对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及p53蛋白表达的影响

[目的]探讨阿魏酸钠(SF)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞株(HUVECCRL1730)凋亡的抑制作用及可能机制.[方法]体外ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤,用阿魏酸钠进行干预.采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率;Hoechst33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率:Western-blot检测内皮细胞p53蛋白表达.[结果]ox-LDL可明显抑制人脐静脉内皮细胞生长和增殖,诱导细胞发生凋亡,上调p53蛋白表达水平;阿魏酸钠干预后细胞存活率明显上升(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05),p53蛋白表达水平明显下调(P<0.05).[结论]ox-LDL可通过上调p53蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,阿魏酸钠可通过下调p53蛋白表达抑制内皮细胞凋亡.     

氟对体外培养的血管内皮细胞增殖的影响

目的 观察不同浓度的氟对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响.方法 利用二甲基噻唑二苯基四唑溴(MTT)比色法、流式细胞仪及免疫组织化学法观察不同浓度的(120、240、360、480、600、720、840、960 μmol/L)氟化钠染毒24 h对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞增殖活性的影响.结果 氟化钠的浓度在120～240 μmol/L时,增殖细胞核抗原表达阳性率高于正常对照组(P＜0.01),240 μmol/L时的阳性率最高约为80%;吸光度(A)值和细胞分裂增殖指数(PI)值也高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01);360～480 μmol/L氟化钠染毒组上述指标与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05);当氟化钠的浓度增加到600 μmol/L以上时,增殖细胞核抗原的表达、A值及PI值均低于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),以960μmol/L时增殖抗原表达阳性率最低(约为20%),并且随着浓度增高上述指标呈下降趋势.结论 低浓度的氟化钠能促进脐静脉血管内皮细胞增殖活性,高浓度时抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖活性,且随着氟浓度的增加,抑制作用逐渐增强.     

人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定

人脐静脉（Human Umbilical Vein,HUV）是培养血管内皮细胞的常用来源之一,与动物血管内皮细胞相比,人脐静脉内皮细胞（HUVEC）可使实验条件更符合人体情况,结果更具有意义;而与人动脉内皮细胞相比,其取材方便,操作简单,混有杂细胞少,因此,HUVEC的培养日益为广大研究所重视.本在诸多研究HUVEC培养经验的基础上,改进并建立了一套操作性强、成功率高、细胞获得多的人脐静脉内皮细胞培养方法.报告如下.     

人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定

对血管内皮细胞体外培养的常规方法进行了改进 ,采用胰蛋白酶 胶原酶 (1∶1)混合酶液消化方式分离人脐静脉内皮细胞 ,简化完全培养液的组成成分 (不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子 ) ,机械刮擦法分离单层细胞进行传代培养。培养细胞用形态学、超微形态学和免疫组织化学染色法进行鉴定 ,证实培养的细胞是血管内皮细胞。     

富含anthocyanin的水果提取物对血管内皮细胞产生PGE2的影响研究

目的研究富含anthocyanin的水果提取物对血管内皮细胞产生PGE2的影响。方法将人类正常的血管内皮细胞CRL-2606在Kaighn’s F12K培养基中（补加有10％FBS，0．1mg／ml肝素，0．03mg／ml的ECGS，50μg／ml链霉素和500U／ml青霉素）37℃、5％CO2的条件下培养至接近融合，然后在含有从水果中提取出的anthocyanin的F12K培养基中添加或不添加100ng／mlLPS，继续培养18小时，测定细胞生存率，并将培养液离心，收集上清液，用STAT-Prostaglandin E2 EIA Kit试剂盒测定培养基上清液中的PGE2浓度。结果当CRL-2606细胞暴露于300μg／ml或以上的Chokeberry提取物中时，细胞的生存率低于60％，且表现出一定的剂量效应关系。而50～400μg／ml的蓝莓提取物和100～700μg／ml的黑醋栗提取物未显示细胞毒性。LPS刺激可使细胞PEG2释放量增加一倍以上，蓝莓提取物可明显抑制由于LPS刺激引起的PGE2释放增加，100μg／ml的蓝莓提取物可完全抑制此作用而使其含量维持于正常水平。700μg／ml的黑醋栗提取物对处于LPS刺激下的CRL-2606细胞具有一定的抑制PGE2释放作用。而对于处于LPS刺激下的细胞，500tμg／ml以上的Chokeberry提取物能抑制PGE2的释放。结论富含anthocyanin的黑醋栗、蓝莓以及Chokeberry提取物可以抑制由LPS刺激引起的血管内皮细胞释放PEG2增加的作用，具有一定的抗炎、抗氧化作用。     

重度妊娠高血压综合征患者血清诱导的脐血管内皮细胞凋亡失衡与肿瘤坏死因子的关系

目的：探讨重度妊娠高血压综合征(简称妊高征)患者血清对体外培养的脐血管内皮细胞(HUVEC)凋亡和对抑／促凋亡基因Bcl-2／Bax表达的影响以及与肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系。方法：体外培养HUVEC，加入重度妊高征患者血清和TNFa作为处理因素，免疫细胞化学检测Bcl-2／Bax蛋白表达；流式细胞仪做凋亡细胞记数；扫描电镜观察细胞变化。结果：轻重度妊高征患者血清处理后的HUVEC Bcl-2／Bax表达失衡，凋亡细胞数增加，扫描电镜可见经TNFα处理后的内皮细胞变圜，微绒毛消失，密度增高，可见凋亡小体。结论：TNFα可诱导体外培养的脐血管内皮细胞凋亡，并可引起凋亡相关基因Bcl-2／Bax表达失衡，可能是引起妊高征血管内皮细胞损伤的原因之一。     

重组人内皮抑素的表达纯化及对内皮细胞增殖的影响

目的探讨融合表达的重组人内皮抑素对人脐带静脉血管内皮细胞（ECV304）增殖的影响。方法将pTRX—endo质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,经纯化后加入ECV304细胞培养,MTT法检测对内皮细胞增殖的影响。结果经SDS—PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,纯化后得到纯度在95％以上的重组人内皮抑素蛋白,明显抑制ECV304的增殖。结论内皮抑素可明显抑制内皮细胞增殖,存在剂量效应关系,本实验为探索内皮抑素抑制血管生成的机制及应用研究打下基础。     

SENSITIVITY of human populations to human and avian tuberculins

In reviewing the development in veterinary practice of comparative testing with tuberculins prepared from different types of mycobacteria for the purpose of separating cattle with specific and non-specific tuberculin sensitivity, it appeared that similar methods might be useful for the analogous problem of separating specific and non-specific tuberculin sensitivity in human populations. The results of a preliminary investigation along this line are reported in the present paper.Working in several parts of India, a special TRO research team tested more than 3,000 persons with serial doses of both a human and an avian PPD tuberculin corresponding to 1, 10, and 100 TU. An additional 6,000 were tested only with serial doses of human tuberculin.Presumptive evidence of non-specific sensitivity in some of the populations was found from the results of the tests with human tuberculin. Discrepancies in the frequencies of weak-dose and strong-dose reactors in different geographic areas, together with evidence from previous studies, suggested that most of the persons with strong-dose reactions could be regarded as having non-specific tuberculin sensitivity.RESULTS OF COMPARATIVE TESTS WITH HUMAN AND AVIAN TUBERCULINS FURTHER INDICATED THAT THE TUBERCULIN SENSITIVITY IN THE POPULATIONS STUDIED MUST BE CAUSED BY DIFFERENT SENSITIZING AGENTS: one producing a high degree of sensitivity brought out more effectively by the human than by the avian tuberculin, the other producing a low degree of sensitivity brought out more effectively by the avian than by the human tuberculin. The groups with high-grade sensitivity-those who react to the weak-dose test-can undoubtedly be regarded as having specific sensitivity, the kind caused by infection with virulent tubercle bacilli; the group who react only to the 100 TU test have apparently been sensitized by a different agent (or agents). Though the identity of the non-specific agent is still unknown, its antigenic properties would seem to be more closely related to avian than to human tuberculin.     

人才资源向人才资本转变在我院的实践

大型综合性医院面对我国加入WTO的严峻挑战，必须转变观念，形成创新机制。总结四川大学华西医院在实施人才资源向人才资本转变战略中的原则、做法及取得的成效，可以看出，华西医院主要从调整人才增量和人才存量两方面进行实践，保证了医院可持续发展。     

Double immunoelectron microscopic labelings of human chorionic gonadotropin and human placental lactogen in human chorionic villi

Simultaneous immunoelectron microscopic localization of human chorionic gonadotropin (HCG) and human placental lactogen (HPL) was examined on the same ultrathin section of human chorionic villi by means of the double labeling technique. Using specific rabbit antisera against HCG and HPL followed by goat anti-rabbit IgG-coated colloidal gold of different sizes (15 nm and 5 nm), immunoreactions of HCG were concentrated on middle-sized secretory granules of 200-300 nm and large dense bodies of 500-1000 nm, while those of HPL were exclusively located on small secretory granules of 80-180 nm. The present experiment provides direct evidence for our previous data that HCG and HPL seem to be stored in different granular components in the syncytiotrophoblast.     

人皮肤成纤维细胞来源诱导性多潜能干细胞的建立和鉴定

目的建立和鉴定人皮肤成纤维细胞（HSF）来源的诱导性多潜能干细胞（iPS）。方法利用逆转录病毒将Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因导入原代HSF细胞,将其编程为iPS细胞。检测细胞内源、外源基因表达量,鉴定外源基因是否插入iPS细胞,分析细胞核型,细胞碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色,体内分化畸胎瘤,体外分化拟胚体实验,对建立的iPS细胞进行鉴定。结果（1）iPS细胞形态类似于胚胎干细胞（ES）。（2）iPS细胞内源多能基因（Nanog、Oct4、Rexl、Sox2）表达量增高,外源编程基因（Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc）表达量降低。（3）琼脂糖凝胶电泳实验证实外源基因插入iPS细胞核内。（4）iPS细胞核型正常,碱性磷酸酶活性增高,表达ES细胞特异性蛋白。（5）iPS细胞在体内能分化为畸胎瘤,在体外能分化为拟胚体。结论新建立的iPS细胞类似于ES细胞具有多向分化潜能。     

二(噁)英对星形胶质细胞和神经母细胞瘤细胞线粒体的影响

目的 探讨2,3,7,8-四氯二苯并二(噁)英(TCDD)的神经毒性.方法 选择人星形胶质细胞和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),4个染毒组和对照组分别暴露于1、10、50、100 nmol/L TCDD和二甲基亚砜(DMSO)24 h.用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,用RT-PCR检测细胞的线粒体相关基因mRNA表达水平.结果 透射电镜观察到TCDD染毒组细胞线粒体嵴数目减少,出现空泡化.RT-PCR结果显示,与对照组相比,染毒组两种细胞HSPD1、MFN1、MFN2、SLC25A10mRNA的表达水平下降,TSPO和SLC25A 27 mRNA的表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TCDD对星形胶质细胞和SH-SY5Y细胞具有损伤作用,可以影响神经细胞线粒体的正常形态、正常转运功能和动力学过程.