抗人滋养细胞单克隆抗体的制备及其免疫生物学特性鉴定

研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠;用细胞ＥＬＩＳＡ法鉴定ｍＡｂ的特异性;用补体依赖的溶细胞作用测定ｍＡｂ的细胞毒性。结论利用细胞免疫法所获该组ｍＡｂ所针对的抗原表位,可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。     

抗IL-2受体单抗选择性保留的T抑制细胞

抗IL-2R 单抗是一种免疫抑制剂,体内作用可通过清除灭活IL-2R 阳性细胞来实现,并同时保留了部分抑制细胞。这类T 抑制细胞,可抑制混合淋巴细胞反应,抑制同种免疫排斥反应;协同抗IL-2R 单抗清除灭活IL-2R 阳性细胞的免疫抑制作用,阻止初次排异反应的发生。这类T 抑制细胞可为CD_4或CD_8表型,它们不表达IL-2R 或不表达为抗IL-2R 单抗所识别的表位,从而被选择性地保留下来。     

抗恶性疟原虫全虫单克隆抗体的制备和鉴定

为建立分泌抗恶性疟原虫全虫单克隆抗体杂交瘤细胞株，研制简易、敏感、特异的快速诊断恶性疟试剂盒。本用恶性疟原虫全虫抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，用ELISA法筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞克隆，测定单抗的效价和Ig亚类，并用SDS-PAGE、Western印迹、IFAT和IPA等方法对单抗进行鉴定。结果，获得4株(2H6，2A3，3B1和2C12)分泌抗恶性疟原虫单抗的杂交瘤细胞克隆，均属IgG类。其中2H6克隆产生的抗体滴度最高《腹水效价达1：32000)．属IgG1亚类。与伯氏疟愿虫、弓形虫无交卫反应；Western印迹分析显示2H6能被约：130、63、41、33和20kDa等抗原蛋白所识别,IFAT和IPA分析显示，2H6单抗的抗原主要定位于裂殖子、滋养体和裂殖体的表膜部分。从而提示所制备的抗恶性疟原虫全虫杂交癌细胞株能分越高滴度的抗体，其中2H6是针对恶性疟原虫裂殖于表面蛋白的特异性单抗，可用于怒性疟快速诊断试剂盘的研制。     

人类抗人CD40单克隆抗体免疫激活活性依赖于其Fc与FcγRⅡB相互作用

激动型抗CD40单抗能够激活APC表面CD40免疫共刺激信号,促进其成熟和交叉提呈抗原并激活抗原特异性CTL以杀伤肿瘤,多年来一直是肿瘤免疫治疗的研究热点。以鼠源抗体为基础的研究表明,激动型抗鼠CD40单抗的活性受到抑制性Fcγ受体(FcγRⅡB)的驱动,但尚不清楚这一调控机制是否影响人类抗人CD40(hCD40) IgG单抗。为此,作者研究了Fcγ受体(Fcγreceptor, FcγR)结合能力对人类抗hCD40单抗活性的影响,发现抗体恒定区(Fc)失去FcγR结合能力会严重削弱人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;同时,FcγRⅡB特异性阻断抗体可以显著抑制人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;此外,增强抗体Fc的FcγRⅡB结合能力能够提高抗体的激动活性。而且,多个抗原结合表位不同的人类抗hCD40单抗在实验中表现一致,说明抗CD40单抗的激动活性普遍依赖于FcγRⅡB。上述研究有助于探索激动型抗CD40单抗的活性调控规律,为设计更好的激动型抗hCD40抗体提供思路。     

DAF与CD3协同刺激人外周血T细胞活化的实验研究

目的：探讨人促衰变加速因子（decay-accelerating factor,DAF)作为共刺激分子参与T细胞活化的作用机制。方法：观察3株针对DAF不同SCR的单抗单独使用或者与抗人CD3单抗联合使用时，对人外周血T细胞增殖、IL－2分泌以及胞浆Ca^2 水平的影响。结果：所用3株抗人DAF单抗不能活化T细胞，而抗人DAF单抗与抗人CD3单抗可以协同刺激T细胞增殖，促进IL－2分泌以及提高胞浆Ca^2 水平。结论：抗人DAF单抗与抗人CD3单抗可协同刺激人外周血T细胞活化。     

抗精子抗体与生育

精子正常受血睾屏障所遮蔽,血睾屏障的破坏可导致精子凝集抗体和制动抗体产生。实验动物接种自身精子可发生上述情况;如果精子与弗氏佐剂一起接种,则引起细胞介导免疫应答伴有免疫性睾丸炎和变应性无精子发生。然而,有人对人类不育与上述实验产生的抗精子抗体的关联表示怀疑。如果已发表的著作都能清楚地区别男性的结果与女性的结果(两者可能反映不同的现象,无疑具有不同的临床意义),如果对生育的影响是与精液或宫颈粘液(而不是血     

一株中和人IL-17免疫活性的单克隆抗体的制备

目的制备抗人IL-17单克隆抗体,并鉴定其中和活性。方法用hIL-17作为免疫和检测抗原,用间接ELISA法筛选分泌抗人IL-17抗体的杂交瘤细胞株,并对抗体进行中和活性鉴定。结果获得1株稳定分泌抗人IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型重链为IgG2b,轻链为κ;该株杂交瘤细胞腹水效价为1∶8.192×105;传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;Western Blot检测证明该单抗与人IL-17蛋白特异地结合;单抗亲和常数为8.192×10-9 mol/L;ELISA及Real-time-PCR检测证明该单抗能够有效地阻断人IL-17刺激Hela细胞产生IL-6的作用。结论所制备的抗人IL-17单克隆抗体具有高度的特异性、稳定性及中和活性,为针对IL-17为靶点的抗体药物的开发奠定了基础。     

CD3AK细胞的诱导及其抗肿瘤作用机制的初步探讨

采用两种状态的IgG2型小鼠抗人CD3单抗,辅以小剂量外源性IL-2刺激诱导CD3AK细胞,测定其对K562,Raji及P815细胞的杀伤作用。结果发现,0.1μg/ml浓度的游离状态抗CD3单抗和10μg/ml浓度的粘附状态抗CD3单抗刺激人PBMC增殖达最强效果,其中粘附状态抗CD3单抗诱导的PBMC增殖活性明显强于激离状态抗CD3单抗;外源性IL-2能协同增强抗CD3单抗诱导PBMC增殖,但当粘附状态抗CD3单抗处于最强激活浓度时,其协同作用并不明显。实验结果显示,CD3AK细胞对三种不同性质的肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用,其杀伤活性既有效靶细胞直接接触杀伤,又有杀伤因子介导。     

ICOS/GL50信号在T细胞依赖性体液免疫应答中的作用

研究ICOS/GL5 0信号在T细胞体外增殖、细胞因子分泌以及B细胞抗体分泌中的作用 ,进一步探讨该信号途径在机体体液免疫应答中的作用机制。采用3 H TdR检测GL5 0 L92 9转染细胞和特异性鼠抗人GL5 0单抗对T细胞体外增殖的作用 ;ELISA法检测GL5 0 L92 9转染细胞和抗人GL5 0单抗对T细胞分泌IL 2、IL 10以及ICOS L92 9转染细胞和特异性鼠抗人GL5 0单抗对PWM介导的B细胞分泌抗体的效应。结果提示GL5 0 L92 9转染细胞能够促进经抗CD3单抗活化的T细胞增值和分泌IL 10 ,而抗GL5 0单抗可以阻断这些效应。ICOS分子与B细胞上GL5 0分子的结合上调PWM介导的B细胞分泌抗体而抗GL5 0单抗则下调这一效应。这些表明 ,ICOS/GL5 0信号途径在机体T细胞依赖的体液免疫应答反应中发挥着重要的调节作用     

抗菌膜单克隆抗体对志贺菌入侵HeLa细胞的影响

采用HeLa细胞入侵及其阻断试验 ,观察抗志贺菌菌膜蛋白和LPS的单抗对志贺菌入侵HeLa细胞的影响。并用免疫印迹法初步分析了感染细胞及其培养上清中的蛋白成分。结果抗菌膜蛋白的单抗 2 6C3不但没有阻断反而促进了细菌的入侵 ,在HeLa细胞胞浆内出现成堆的F2a菌 ,其绝对菌数远远超过未经该单抗处理的F2a菌感染的HeLa细胞组。免疫印迹显示单抗处理组细胞培养液中IpaB、IpaC蛋白明显比未经单抗处理组多。抗LPS的单抗对细菌入侵具有一定的阻断作用。提示抗菌膜蛋白单抗所识别的IpaB表位 ,具有调节F2a菌进入HeLa细胞的能力。其作用机制可能是通过细菌分泌器 ,使分泌IpaB、IpaC蛋白增多。     

小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响

目的 在体外用抗CD3单抗、抗CD28单抗和白细胞介素2（IL－2）扩增肿瘤特异性CTL,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法 采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。（1）抗CD3单抗刺激48h后,加入抗CD3单抗和20U／mlrIL－2（抗－CD3＋IL－2组）;（2）抗CD3单抗和抗CD28单抗同时刺激48h后,加入抗CD3单抗、抗CD28单抗和20U／ml rIL－2（抗－CD3＋抗－CD2＋IL－2组）。分别检测2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果 抗CD3＋IL－2组细胞的^3H－TdR掺入量在第6天、12天、20天分别为22126、52426、2072,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组细胞的^3H-TdR掺入量在第6天、12天、30天分别为32168、12922、3265,后者明显高于前者。在培养12d时,抗－CD3＋IL－2组细胞对FBL03的最大杀伤活性为66．4％,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组细胞对FBL－3的最大杀伤活性为77．8％。细胞表型FACS分析结果表明,抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组培养12d后的细胞90％以上为Thy1.2^ 细胞,且CD25^ 细胞在抗－CD3＋抗－CD28＋IL－2组、抗－CD3＋IL－2组分别为23．00％、8．15％。结论 抗CD3单抗、抗CD28单抗和低剂量IL－2同时非特异性刺激,可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。     

登革病毒血清型2 E蛋白Ⅲ区单克隆抗体的制备及其诊断特异性研究

本研究旨在制备抗登革病毒(dengue virus,DENV)血清型2 (DENV2)E蛋白Ⅲ区(envelope protein domainⅢ,EDⅢ)单克隆抗体(简称单抗)并研究其诊断特异性。合成编码DENV2-EDⅢ的基因并将其克隆入原核表达质粒pET21a;将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21;用重组表达的EDⅢ免疫小鼠;将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合;将可产生识别抗EDⅢ单抗的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔;采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化单抗;采用间接ELISA和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)评估所制备的单抗识别DENV血清型1～4 (DENV1～4)的能力。本研究成功表达了DENV2-EDⅢ,并制备出3株杂交瘤细胞,杂交瘤细胞所分泌的小鼠源性单抗既可识别DENV2,又可交叉识别DENV1、DENV3和DENV4。     

男性不育诸因素分析研究

为分析研究男性不育诸因素,应用细胞遗传学实验、放免及ELISA方法分别检测男性不育症的染色体、性腺激素、抗精子抗体(ASA)共156例。结果显示,染色体异常与无精症明显相关,而与少弱精子症无明显关系;性腺激素在生精功能受损时,出现明显变化,一般不是男性不育的直接原因;抗精子抗体与男性不育有一定关系。研究表明,染色体异常、抗精子抗体是造成不育的重要因素。性腺激素在男性不育的诊断及分类方面具有重要作用。     

单抗的荧光标记及其在竞争抑制试验中的应用

<正> 在鉴定抗细胞性抗原的单克隆抗体(单抗)时,不仅要与已知的单抗对比检查其组织的分布、细胞反应性等特异性,而且还要测定它所作用的相应的靶抗原分子是否相同。通常的办法是用免疫沉淀法,该法不仅需要同位素,而且常因抗原变性等情况,测不出相应抗原的分子量。即使测出了分子量,也还     

抗膜抗原的单抗对痢疾杆菌入侵HeLa细胞的影响

目的 观察抗痢疾杆菌膜蛋白和LPS的单抗对痢疾菌入侵HeLa细胞的影响。方法 采用不同膜抗原的单抗处理痢疾杆菌后进行HeLa细胞入侵及阻断实验，观察不同膜抗原单抗对痢疾杆菌入侵的作用。结果 观察到抗菌膜蛋白IpaB的单抗和LPS的单抗均不能阻断细菌的入侵且能促进细菌的入侵，在HeLa细胞胞浆内出现成簇的S．flexneri-2a菌，入侵菌数远远超过未经单抗处理的S．.flexneri-2a菌感染的HeLa细胞组。结论 提示痢疾杆菌的抗菌膜蛋白单抗和LPS单抗所识别的表位，均具有调节S．flexneri-2a菌进入HeLa细胞的能力。     

免疫组化技术分析人淋巴组织的多种分化抗原

用间接免疫过氧化物酶和PAP技术检测本室制备的31种抗人分化抗原单抗与淋巴组织的反应性.结果表明,CD3、CD5单抗与扁桃腺和淋巴结的T细胞、大部分成熟髓质胸腺细胞和脾白髓的中央动脉周围淋巴鞘呈非常强的反应.CD4~+细胞在扁桃腺的分布与CD3~+细胞类似,但数量稍少.只有少部扁桃腺和淋巴结T细胞与CD8单抗反应,CD8单抗主要染大部分胸腺皮质细胞,但抗CD8单抗与脾窦的内皮细胞呈强阳性交叉反应.Wu59单抗同时与扁桃腺、淋巴结和脾脏的T、B细胞呈非常强的膜染色,并与胸腺皮质和髓质细胞呈阳性反应,该单抗可能识别白细胞共同抗原或LFA-1.Wu 26.145单抗除与扁桃腺生发中心呈弱阳性反应外,还与脾红髓窦状结构内的血小板呈强阳性反应.此外,抗B细胞及其亚群单抗与扁桃腺、淋巴结、脾白髓生发中心呈强阳性反应.抗IL-2受体单抗与上述组织基本上呈阴性反应。     

在无血清培养液(CBSF)中制备单克隆抗体

<正> 将已建立能在CBSF培养液中生长传代的SP2/0骨髓瘤细胞与经TE-1单抗免疫的Wistar大鼠的脾细胞进行异种间细胞融合。TE-1单抗是抗天花粉蛋白IgE单抗,免疫用TE-1单抗是从TE-1小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株诱生的腹水,经过亲和层析分离得到。通过无血清HAT选择培养液筛     

淋巴瘤的单克隆抗体治疗

 淋巴瘤的抗淋巴细胞表面抗原单克隆抗体（单抗）靶向治疗是近年肿瘤特异性免疫治疗研究中进展较快并取得较大成功的一个领域。其中抗B淋巴细胞（B细胞）表面CD20抗原的利妥昔单抗（rituximab，美罗华）用于人类治疗已有10年之久，是治疗各种B细胞淋巴瘤的关键药物之一。单抗对淋巴瘤有高度敏感性且毒副作用较小，现正用于成千上万的淋巴瘤患者。它对免疫系统的调理作用使得它也被应用于其他血液系统疾病（如血小板减少性紫癜和冷球蛋白血症）以及非血液系统疾病（如风湿性关节炎和其他自身免疫病）。但关于其使用的最佳治疗方案，以及是否要与其他治疗方法联合使用，还没有定论。本文对单抗治疗淋巴瘤的原理和临床治疗方案的研究现状做一综述。...     

抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响

目的： 观察不同浓度抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响及时间效应，旨在探讨抗人CD134单抗延长T细胞存活的可能机制。 方法: 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测不同浓度（1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L）抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响，同时检测每种浓度作用不同时间（6 h、12 h、24 h、48 h）对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响。 结果: 不同浓度CD134单抗作用不同时间，对人外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达均有不同程度抑制作用，在 24 h 该作用达高峰。当CD134单抗浓度﹥5 mg/L时，这种抑制作用不再增强（P>0.05）。 结论: 抗人CD134单抗可在转录水平抑制穿孔素表达，该效应在 24 h 达高峰且会饱和，此乃抗人CD134单抗延长T细胞存活的主要机制。     

小鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学活性评价

目的制备鼠抗人PD-1单克隆抗体,并对其生物阻断活性进行评价。方法利用重组人源PD-1/PDCD1蛋白作为免疫蛋白,免疫接种Balb/c小鼠,分离并提取小鼠脾淋巴细胞,然后与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合培养,经过多次克隆化培养筛选出稳定分泌鼠抗人PD-1单抗的杂交瘤细胞株。鉴定单抗Ig G类别及亚类,并分析其特异性和细胞毒性;建立Hep G2细胞和Jurkat细胞共同培养体系,ELISA法检测PD-1单抗对Jurkat细胞分泌抗肿瘤细胞因子的影响,MTT法分析PD-1单抗对Jurkat细胞杀伤Hep G2细胞能力的影响。结果获得了1株新的小鼠抗人PD-1单克隆抗体,命名为2H7。单抗2H7能够特异性识别T细胞表面的PD-1蛋白;高浓度长时间处理对Jurkat细胞有一定毒性作用;低浓度单抗2H7可阻断PD-1/PD-L1信号通路,使Jurkat细胞对Hep G2细胞杀伤能力显著增强(P0.01),且Jurkat细胞分泌的IL-2和IFN-γ等细胞因子水平显著高于对照组(P0.01)。结论成功制备了1株具有良好生物阻断活性的小鼠抗人PD-1单克隆抗体2H7,该抗体能够显著提高T细胞对肝癌细胞Hep G2的杀伤能力。