七氟醚预先给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠海马脑区NMDA受体的影响

 目的 观察七氟醚对心肌缺血再灌注损伤大鼠海马脑区N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDA受体）亚单位NR1和NR2B mRNA表达的影响。方法 32只老年Wistar大鼠随机分为4组：对照组（A组）、假手术组（B组）、急性心肌缺血再灌注组（C组）和七氟醚预先给药组（D组）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法定量大鼠海马脑组织NMDA受体亚单位NR1和NR2B的基因表达。结果 与A相比,C、D组NR1亚单位mRNA和NR2B亚单位mRNA基因的表达明显增加,与C相比,D组NR1亚单位 mRAN的表达降低。结论 七氟醚对老年心肌缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用可能与海马脑区NMDA受体NR1基因下调有关。     

铅暴露大鼠脑不同区域NMDA受体亚基(NR1、NR2A、NR2B)表达的研究

目的：观察铅暴露大鼠中不同脑区NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）和NMDAR2B（NR2B）亚基蛋白和mRNA水平的表达情况。方法：采用Western Blot及RT-PCR技术,测定NR1、NR2A和NR2B亚基蛋白和mRNA在铅暴露大鼠脑中额叶皮质、新小脑、海马及纹状体中的表达情况。结果：铅暴露大鼠中NR1、NR2A和NR2B亚基的蛋白水平和mRNA表达在各个脑区均有不同程度的下调。结论：在铅暴露大鼠的额叶皮质、海马、新小脑和纹状体中,NMDA受体亚基NR1,NR2A和NR2B的表达在mRNA水平就已经发生了改变。     

Bcl-2、Bax蛋白在NRs抗体预处理后缺氧缺糖海马脑片CA1区的表达变化

目的 :观察用NMDA受体亚单位抗体预处理后再缺氧缺糖的海马脑片CA1区Bcl -2和Bax蛋白的表达变化。方法 :将体外培养至 2周的海马脑片分为正常对照组 (HOTC组 ) ,实验对照组 (仅分别预加NR1抗体、NR2A抗体、NR2B抗体不缺氧缺糖 ) ,实验组 (分别预加NR1抗体、NR2A抗体、NR2B抗体后再缺氧缺糖 1hr)。作HE染色 ,Bcl-2、Bax免疫组化反应染色。结果 :Bcl -2蛋白在NR1+OGD组、NR2A +OGD组和NR2A +NR2B +OGD组区的表达均明显弱于OGD组 (3组均P <0 .0 5 ) ;其在NR2B +OGD组和HOTC组的表达则强于OGD组 (两者P <0 .0 5 )。Bax蛋白在NR1+OGD组、NR2A +OGD组和NR2A +NR2B +OGD组的表达均强于OGD组 (NR2A +OGD组P <0 0 5 ) ;在NR2B +OGD组和HOTC组其表达则明显弱于OGD组 (后者P <0 .0 5 )。结论 :单纯缺氧缺糖可引起海马脑片CA1区锥体细胞的损伤同时引起Bcl -2蛋白和Bax蛋白的表达变化 ;预加NMDA受体亚单位NR1、NR2A抗体和NR2A +NR2B抗体可以加重缺氧缺糖性海马脑片CA1区细胞损伤程度 ;预加NR2B抗体则可减轻其损伤程度     

氧化槐定碱对氧糖剥夺再灌注损伤后大鼠海马神经元Glu含量及NMDA受体亚单位NR1表达的影响

目的研究氧化槐定碱（OSR）对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后Glu含量与NR1表达的影响。方法以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象,建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。采用化学比色法测定神经细胞培养液中谷氨酸（Glu）的含量,Western blot方法和实时荧光定量PCR技术检测大鼠海马神经细胞NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达。结果与氧糖剥夺再灌注损伤组比较,OSR治疗组（20、5、1.25 mg·L-1）可减少神经细胞培养液中Glu的含量（P〈0.05）;OSR治疗组（20μg·L-1）可明显抑制NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达（P〈0.05）。结论 OSR通过降低Glu含量和减少NR1表达,减轻兴奋性氨基酸毒性,对新生大鼠海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用。     

丙泊酚对大鼠的空间学习记忆和海马NMDA受体NR2A亚基表达的影响

目的观察丙泊酚单次麻醉对成年大鼠空间学习记忆能力的影响以及海马NMDA受体NR2A亚基的变化。方法 30只SD大鼠随机分成丙泊酚组（n=15）和对照组（n=15）。给予丙泊酚50mg/kg腹腔注射作为诱导剂量,待翻正反应消失后在腹腔追加50mg/kg丙泊酚加深麻醉。对照组不予任何处理。待翻正反应恢复12h后应用Morris水迷宫评价丙泊酚对于大鼠空间学习记忆的影响。同时通过免疫荧光技术检测海马NMDA受体NR2A亚基的表达变化。结果丙泊酚组平均学习潜伏期较对照组显著缩短（P〈0.05）,靶象限活动时间百分比明显延长（P〈0.05）,丙泊酚组NMDA受体NR2A亚基的表达增加。结论丙泊酚单次麻醉后成年大鼠的空间学习记忆能力提高,这种学习记忆能力的提高可能和NMDA受体NR2A亚基的表达上调相关。     

细胞外信号蛋白调节激酶5在异氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的探讨异氟醚后处理大鼠海马脑片缺氧无糖（OGD）损伤神经保护机制中细胞外信号蛋白调节激酶5（ERK5）的作用。方法使用雄性SD 大鼠,将其麻醉后取出海马组织,制成离体脑片,然后随机进行正常对照组（Con 组）、损伤组（OGD 组）和药物处理组的处理。采用花粉活力染色（TTC）法评价各组脑片损伤程度,采用碘化丙啶（PI）染色法检测海马CA1 区神经细胞凋亡程度,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定细胞外调节蛋白激酶信使核糖核酸（ERK5 mRNA）的表达,采用Western blot 法检测ERK5蛋白的表达与磷酸化水平。结果与Con组比较,OGD组脑片损伤程度升高、海马CA1区凋亡细胞增多,海马组织内ERK5 mRNA和p-ERK5表达升高（p <0.05）;XMD组阻断ERK5 mRNA和p-ERK5表达,脑片损伤程度升高、海马CA1区凋亡细胞增多（p <0.05）。与OGD、1.5%ISPOC和4.5%ISPOC组比较,3.0% ISPOC 组脑片损伤程度减轻、海马CA1 区凋亡细胞减少,海马组织内ERK5 mRNA和p-ERK5表达升高（p <0.05）。与3.0%ISPOC组比较,XMD阻断ISPOC海马组织内ERK5 mRNA 和p-ERK5 表达,脑片损伤程度升高、海马CA1 区凋亡细胞增多（p <0.05）。结论一定浓度的异氟醚后处理大鼠海马脑片对抗OGD损伤的保护性机制可能与上调ERK5 mRNA和ERK5 磷酸化水平有关。     

异氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用及PKCγ机制

目的利用离体海马脑片缺氧无糖（oxygen and glucose deprivation，OGD）损伤模型，探讨异氟醚预处理对神经细胞的保护作用及与蛋白激酶Cγ（protein kinase Cgamma，PKC7）的关系。方法将脑片随机分为分4组（n=8）：空白对照组（CON组）、PKCγ抑制剂Bisindolylmaleimide Ⅰ组（BIS组）、异氟醚预处理组（ISO组）、异氟醚加抑制剂组（ISO＋BIS组）。采用脑片灌流及电生理技术，记录海马CA1区的顺向群锋电位（orthodromic populationpike，OPS）作为评价脑片不同阶段的活性指标；采用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TYC）染色定量比色方法分析脑片损伤程度。采用Western bolt方法，观察PKCγ在不同组别中的表达。结果异氟醚预处理能明显提高脑片的抗缺氧能力，增加OPS恢复率，组织损伤百分率明显低于其他各组，促进PKC向胞膜转位；而抑制PKC7后脑片活性降低，OPS恢复率下降。结论PKCγ的激活参与异氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用。     

Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用

目的：探讨Humanin （HN）通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法：利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801（MK-801）组和NMDA+HN（HN）
组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达,Western blotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果： 倒置相差显微镜观察,NMDA组中的神经元胞体肿胀,个别细胞变成圆形,胞体周围光晕模糊,神经元突起大部分消失,表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测,与对照组比较,NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变;与对照组比较,NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平（P<0.05）。 结论： NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用;HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。     

七氟醚后处理对氧糖剥夺/复氧复糖诱导HT22细胞DNA损伤及SIRT1表达的影响

目的 探讨七氟醚后处理对HT22细胞氧糖剥夺/复氧复糖后DNA损伤及沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响.方法 随机将对数生长期的HT22细胞分为7组:空白对照组(CON),氧糖剥夺/复氧复糖4 h组(OGD/R 4 h),氧糖剥夺/复氧复糖4 h+1％七氟醚后处理组(OGD/R 4 h+1％SEVO),氧糖剥夺...     

血晶素对缺氧缺糖海马脑片的保护作用及其分子机制

目的观察血晶素（Hemin）对海马脑片氧糖剥离（OGD）模型的保护作用并探讨其机制。方法取新生8～10dSD大鼠,制备厚约400μm海马脑片,培养2周后筛取完好无特异荧光着色的脑片,分为正常培养对照组（HOTC）、缺氧缺糖组（OGD）、预加Hemin再缺氧缺糖组（Hemin＋0GD）和预加血红素加氧酶-1（Heme oxygenase-1,HO-1）抑制剂锌原卟啉（Znpp）再缺氧缺糖组（Znpp＋OGD）。除HOTC组外,其余各组在5％C02、95％N2的混合气体中培养1．5小时,其后恢复培养24小时。海马脑片冰冻连续冠状切片,应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片脑红蛋白（Neuroglobin,Ngb）和HO-1表达变化,并观察神经元形态学改变。结果海马脑片发生缺氧缺糖时,神经元中Ngb蛋白和HO-1蛋白表达增加,血晶素促进神经元Ngb蛋白和HO-1蛋白表达,并减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤。Znpp抑制神经元Ngb蛋白和HO-1蛋白表达,并加重海马脑片缺糖缺氧性损伤。结论血晶素可减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤,其机制可能通过诱导HO-1表达从而增加神经元Ngb表达发挥作用。     

米诺环素对大鼠原代神经元和海马脑片缺氧缺糖及NMDA损伤的保护作用

目的:建立神经元和海马脑片缺氧缺糖(OGD)及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)损伤模型,观察抗炎药米诺环素的神经元保护作用及其特点.方法:体外培养大鼠脑皮层神经元,以OGD和NMDA(50 μmol/L)处理,观察损伤前后神经元形态变化,并以MTT检测神经元活性;以透光法检测OGD和NMDA处理引起的大鼠海马脑片透光度(LT)改变;在上述模型中同时观察米诺环素及NMDA受体拮抗剂MK-801的作用.结果:在OGD过程中米诺环素1、10 μmol/L能浓度依赖地提高神经元的活性,改善神经元形态改变;米诺环素10、100 μmol/L对NMDA损伤有保护作用;MK-801 1 μmol/L对两种损伤模型均有保护作用.米诺环素1或10 μmol/L对OGD和NMDA引起的海马脑片LT增加无明显影响;MK-801 1 μmol/L则能显著抑制LT增加.结论:米诺环素对神经元OGD损伤具有保护作用,可能是通过对NMDA受体介导的兴奋性毒性的间接抑制;但对海马脑片OGD和NMDA即刻损伤无保护作用.     

TRPM7在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡和炎症反应中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道M7 (TRPM7)在七氟烷(Sev)预处理抑制大鼠氧糖剥夺(OGD)海马神经元凋亡和炎症反应中的作用.方法选择出生1d的SD大鼠50只,提取海马神经元,将其分为5组,包括对照组、Sev预处理组(Sev组)、OGD组、Sev预处理+OGD组(Sev+OGD组)和Sev预处理十缓激肽+OGD组(联合组).缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24 h后制备OGD模型.对照组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2％ Sev预处理1 h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;Sev+OGD组神经元行2％ Sev预处理1h,24 h后制备OGD模型;联合组神经元Sev预处理同时在培养基中加入缓激肽(终浓度200 μmol/L),其余处理同Sev+OGD组.正常培养24 h时后,检测海马神经元TRPM7 mRNA和蛋白表达水平、存活率和凋亡率、IL-1β、TNF-α的mRNA及上清蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OGD组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率明显降低(P＜0.05).与OGD组比较,Sev组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而存活率明显升高(P＜0.05).与Sev组比较,联合组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率显著降低(P＜0.05).结论 Sev预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻OGD后海马神经元凋亡和炎症反应.     

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。     

静脉麻醉药物联合使用对大鼠脑缺血离体损伤的影响

目的研究静脉麻醉药物依托咪酯联合芬太尼或氯胺酮对大鼠脑缺血损伤离体实验模型———皮层和海马脑片缺氧缺糖损伤的影响。方法制备大鼠皮层和海马脑片 ,随机分为对照组 (C)、损伤组 (I)、依托咪酯组 (E)、芬太尼组 (F)、氯胺酮组 (K)、依托咪酯 芬太尼组 (E F)和依托咪酯 氯胺酮组 (E K) ,每组脑片 10片。脑缺血损伤离体模型采用脑片缺氧缺糖损伤孵育10min和恢复正常孵育 2h方案 ,通过三苯基氯化四唑氮 (TTC)染色光密度测定法观察脑片损伤程度 ,Fluo 3荧光染色定量和激光共聚焦扫描显微镜定性观察脑片细胞内Ca2 浓度变化。结果与对照组比较 ,损伤组脑片TTC染色光密度显著降低 ;细胞内Ca2 浓度显著增高 (P <0 .0 1)。与损伤组比较 ,使用麻醉药物的各组皮层和海马脑片TTC染色光密度显著增加 ,细胞内Ca2 浓度也明显降低 (P <0 .0 1) ,但单独药物组和联合药物组比较TTC染色光密度和细胞内Ca2 浓度无差异 ,激光共聚焦扫描显微镜定性观察结果与Fluo 3荧光染色比色结果一致。结论依托咪酯联合芬太尼或氯胺酮对大鼠皮层和海马脑片的离体脑缺血损伤具有保护作用 ,但这种联合作用与它们各自单独保护作用比较无差异     

猪胆酸对体外缺血再灌注大鼠脑微血管内皮细胞ICAM-1的影响

目的观察大鼠脑微血管内皮细胞缺血再灌注损伤细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨清开灵有效组分猪胆酸阻抑脑缺血炎症反应的作用途径。方法体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法半定量检测ICAM-1蛋白和mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组ICAM-1蛋白和mRNA的表达明显增高(P<0.01);与模型组比,猪胆酸显著降低ICAM-1的表达(P<0.05)。结论猪胆酸可能通过干预ICAM-1表达而阻抑脑缺血损伤炎症反应。     

Dual Isoflurane-induced Preconditioning Improves Neuroprotection in Rat Brain In Vitro and the Role of Extracellular Signal-regulated Protein Kinase

Objective To test the ability of isoflurane-induced preconditioning against oxygen and glucose deprivation (OGD) injury in vitro.Methods Rat hippocampal slices were exposed to 1 volume percentage (vol%),2vol% or 3vol% isoflurane respectively for 20 minutes under normoxic conditions (95% O2/5% CO2) once or twice (12 slices in each group) before OGD,with 15-minute washout after each exposure.During OGD experiments,hippocampus slices were bathed with artificial cerebrospinal fluid (ACSF) lacking glucose and pe...     

七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠T细胞死亡耦联基因8表达的影响

目的：观察七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带内T细胞死亡耦联基因8（TDAG8）表达的影响。方法：选取54只成年雄性SD大鼠,随机分为对照组、再灌注组和七氟醚组,每组18只。采用大脑中动脉内线栓阻断法（middle cerebral artery occlusion,MCAO）制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。缺血2h后再灌注48h。七氟醚组在造模前吸入最低肺泡有效浓度（MAC）为1的七氟醚30min,对照组和再灌注组则吸入O2。大鼠行神经行为学评分后处死。取大脑行2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TFC）染色,计算脑梗死容积百分比,采用蛋白印迹法和RT—PCR法检测脑缺血半暗带内的TDAG8蛋白和mRNA的表达变化。结果：①与对照组相比,再灌注组和七氟醚组脑梗死容积百分比均显著升高（P均〈0．05）;七氟醚组脑梗死容积百分比较再灌注组显著降低（P〈0．05）。②与对照组相比,再灌注组和七氟醚组TDAG8蛋白和mRNA表达均显著升高（P均〈0．05）;七氟醚组较TDAG8的表达再灌注组明显降低（P〈0．05）。结论：七氟醚预处理可降低TDAG8的表达,对脑缺血再灌注损伤具有一定保护作用。