不同浓度臭氧在不同时间对体外培养家兔椎间盘细胞作用的实验研究

目的观察不同浓度的臭氧在不同作用时间对家兔椎间盘细胞的作用影响。方法首先建立家兔椎间盘细胞的体外培养系统,其中,第一组给予纯氧,另外3组给予不同浓度的臭氧：30μg/ml,60μg／ml和80μg／ml,然后于15min及30min后,采用台盼蓝细胞排斥试验计算椎间盘细胞的活细胞率;结果低浓度组活细胞率为80％左右,高浓度组活细胞率10％左右。15min时,不同浓度组之间台盼蓝细胞排斥试验结果差异都具有统计学意义;30min时,对照组与低浓度组差异无统计学意义,其他组之间存在统计学意义;不同时间只有中浓度组存在统计学意义。结论随着臭氧浓度的增加,作用时间的延长,椎间盘细胞活细胞率呈降低趋势。     

椎间盘组织工程种子细胞的选取、鉴定及培养难点

目的对椎间盘组织工程种子细胞的选取、鉴定及培养难点做一综述。方法应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1988/2012关于组织工程纤维环支架的文章,在标题和摘要中以"组织工程;椎间盘;种子细胞;细胞鉴定;细胞培养;综述"为检索词进行检索。结果共检索到112篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,保留42篇文章进行综述。结论目前组织工程椎间盘研究目的是治疗椎间盘退变性疾病。但在研究和治疗过程中仍存在很多难点,还需要进一步研究。     

阿仑膦酸钠对机械应力下大鼠成骨细胞骨架修复的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对机械应力下大鼠成骨细胞骨架修复的作用。方法将原代培养的sD大鼠颅骨成骨细胞分为空白组、阿仑膦酸钠组和雌激素组。施加应力后阿仑膦酸钠组和雌激素组分别用相应药物的含药血清培养,空白组给予常规血清培养。培养1,24h后采用激光共聚焦显微镜检测细胞的形态学变化及荧光强度变化。结果应力施加后培养1h,各组细胞的荧光强度差异无统计学意义（P〉0．05）;各组细胞的形态变得不规则,细胞骨架松散,有少许细胞死亡脱落。培养24h,阿仑膦酸钠组的荧光强度[（103．7±5．1）]明显高于雌激素组[（94．2±8．4）]和空白组[（78．7±2．4）],差异均有统计学意义（均P〈0．05）。阿仑膦酸钠组的细胞形态趋于规则,边缘清晰,细胞骨架趋于整齐。结论阿仑膦酸钠和雌激素能修复机械应力对大鼠成骨细胞的损伤,以阿仑膦酸钠作用更为明显。     

Fas及其配体在腰椎间盘组织中的表达及意义

目的了解Fas与FasL在正常椎间盘及椎间盘突出症患者椎间盘组织中的表达情况。方法收集20例腰椎间盘突出症患者的椎间盘组织(破裂型与非破裂型各10例)及8例脑死亡者的正常椎间盘组织,通过免疫组织化学观察FasL,Fas的表达情况。结果正常髓核组织中仅有FasL的表达,突出的椎间盘组织中存在FasL,Fas的表达,而且表达程度在正常组与腰椎间盘突出症患者组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常髓核组织中存在FasL的表达,提示FasL是使髓核组织产生免疫豁免效应的一个重要因素。当椎间盘突出时(纤维环破裂),则会在局部激发炎症反应,引起髓核细胞凋亡,而髓核细胞通过自分泌或旁分泌途径导致FasL表达增高是可能的机制之一。     

牵张微应变对人退变髓核与纤维环细胞增殖的影响

摘要 目的：探讨循环牵张微应变对体外培养的人退变髓核与纤维环细胞增殖的影响。方法：人退变椎间盘组织来源于1例29岁腰椎间盘突出症患者的手术取材,病理学诊断评估其退变程度,无菌条件下酶消化法分别原代培养髓核与纤维环细胞,并对细胞系进行鉴定。将第3代细胞接种于硅橡胶膜载体上,利用EF3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,对其施加频率为0.25 Hz,应变为0、5万、10万和15万με的加载3 h,应用流式细胞仪检测不同微应变环境下2种细胞的增殖活性。结果：退变髓核与纤维环细胞应力加载后生长状态良好。随着微应变的增加,髓核细胞S期细胞比例在10万με、15万με时均高于纤维环细胞,差异有统计学意义（P<0.01）;纤维环细胞PI值在各微应变加载组均高于髓核细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：微应变刺激对人退变髓核与纤维环细胞的增殖总体效应是一致的,但是相同的微应变刺激对纤维环细胞增殖的促进效应明显高于髓核细胞。 关键词 椎间盘移位 流式细胞术 椎间盘退变 髓核细胞 纤维环细胞 牵张微应变 增殖指数     

长期异常应力下家兔颈肌和颈间盘细胞凋亡的观察

临床流行病学调查显示:长时间低头位造成的颈部异常应力负荷是颈椎病发生的主要因素之一[1].生物力学和病理学研究证实,长时间模拟人低头屈曲姿势可增加家兔颈椎局部应力负荷,促使椎间盘和椎旁软组织退变[2,3].     

大鼠髓核自身免疫反应的研究

目的 探讨动物模型中将自身髓核埋置在皮下腔隙,是否能引起T、B淋巴细胞的激活.方法 从12只大鼠的椎间盘巾取得自身髓核组织,放置在有孔的钛笼内,植入皮下.在每只大鼠的皮下还植入一个空的肽笼作为对照.7 d后处死大鼠并取出钛笼.使用流式细胞术检测钛笼内外周组织叶的辅助T细胞(CD4+),细胞毒性T细胞(CD8+),CD45RC+高表达的T细胞以及IgG+的B细胞.结果 与空的钛笼作比较,装有自身髓核组织钛笼的周围组织中,活化的T细胞(CD4+/CD8+)、B淋巴细胞(IgG+)以及CIM5RC+高表达的T细胞的比例明显增高.结论 大鼠自身髓核组织暴露于自身免疫系统中.可激活T、B细胞,引起自身免疫反应.     

骨髓间充质干细胞治疗退变椎间盘的研究进展

腰腿痛是骨科临床常见的疾患,绝大多数与椎间盘退变有关.目前,腰腿痛的临床治疗都只能缓解疼痛等症状,而不能阻止、逆转椎间盘退变的发生.随着对退变椎间盘病理生理认识的深入,及组织工程和细胞治疗学的兴起,利用骨髓间充质干细胞(bonemesenchymal stem cells,BMSC)治疗退变椎间盘已成为可能.BMSC是一群存在于骨髓中的非造血干细胞,其作为组织工程的种子细胞在来源,分化潜能,免疫学等方面具有诸多优势.本文就BMSC及其治疗椎间盘退变的研究进展作一综述.     

苦杏仁苷对IL-1β诱导后大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响

目的观察不同浓度的苦杏仁苷对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响,并进一步探讨其作用的可能机制。方法从1月龄SD大鼠椎间盘中分离软骨终板并培养,经鉴定后,随机分为正常组、诱导组、苦杏仁苷10-2、10-3、10-4、10-5mol·L-1给药组,采用流式细胞仪检测大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡,Real-time PCR(RT-PCR)检测凋亡相关基因的表达情况,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果不同浓度的苦杏仁苷能够拮抗IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡。流式分析显示各浓度的苦杏仁苷可以降低IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例;RT-PCR结果提示苦杏仁苷各浓度组可拮抗IL-1β上调Bax mRNA的表达,下调Bcl-2 mRNA的表达,各组与诱导组相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示苦杏仁苷10-4mol·L-1给药组能够拮抗IL-1β上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论苦杏仁苷能够拮抗IL-1β诱导大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡,起到延缓椎间盘退变的作用。     

软骨细胞在机械力刺激下细胞骨架及细胞形态改变的体外研究

目的探讨周期性的机械应力对大鼠的关节软骨细胞的形态与骨架的刺激作用,为软骨细胞的内力学信号传导机制的临床研究提供参考。方法将体外培养传代至第三代的大鼠软骨细胞置于四点弯曲加力装置周期性机械应力体系中(4000μ strain)培养30min,连续3d。对照组静态培养。3d后检测细胞基质合成情况以及微管、微丝、中间纤维的免疫荧光染色,用Western Blot及RT-PCR方法测量cofilin蛋白基因含量。结果加载应力组软骨细胞氨基多聚糖和蛋白多糖的合成与对照组无明显差异(P>0.05);但细胞微管、微丝及中间纤维发生重排,细胞形态和取向趋于一致。实验组cofilin蛋白含量明显高于对照组(P<0.05)。结论周期性机械应力改变软骨细胞的形态和细胞骨架,cofilin蛋白在软骨细胞内力学-生物学信号转导中发挥着重要作用。     

微环境影响椎间盘组织工程修复的研究进展

椎间盘退变是骨科常见病。椎间盘自我修复能力非常有限，目前临床治疗主要是将椎间盘摘除或进行融合。新兴的组织工程技术应用生物支架及干细胞再生进行椎间盘修复，但由于椎间盘结构和功能特殊、组织缺乏血运以及承受巨大的应力负荷，且退变的椎间盘纤维环破裂等，使得植入椎间盘的干细胞面临巨大生存挑战。良好的外部环境是组织工程修复的前提和基础，近年来有关椎间盘所处微环境的相关研究逐渐增多。本文综述微环境影响椎间盘组织工程修复的研究进展，为临床治疗提供可能思路。     

白花蛇舌草细胞悬浮培养的建立与条件优化

目的利用白花蛇舌草茎尖的愈伤组织建立细胞悬浮培养系,并通过实验研究不同条件对白花蛇舌草细胞悬浮培养细胞生长的影响。方法采用单因素试验对不同种类、不同浓度的激素及其组合、碳源的种类以及碳源浓度、起始的pH值对白花蛇舌草细胞悬浮培养细胞生长的影响作用进行研究。结果最适pH=6.5,激素以NAA效果最好,其中NAA最佳浓度为1.5mg·L-1。组合激素对细胞的生长的促进作用和单种激素相比,没有明显增强。蔗糖比葡萄糖更适合作为碳源,蔗糖的最佳浓度为30g·L-1。结论本试验建立了白花蛇舌草的细胞悬浮培养系,提出了培养的最优条件,可以用以大量生产。     

TGF-β1、 CTGF在脊髓型颈椎病椎间盘退变组织中的表达及意义

目的 探讨转化生长因子岛(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)在脊髓型颈椎病(CSM)椎间盘退变组织中的表达及意义.方法 将手术切除的30例CSM的椎间盘组织(病变组)和10例来源于颈椎骨折患者的椎间盘组织(对照组)作TGF-β1及CTGF免疫组化半定量检测及ELISA定量检测,对结果进行分析.结果 病变组中TGF-β1及CTGF的表达量及含量均高于对照组(18.456±2.321 vs.1.901±0.018和16.695±1.267vs.1.013±0.012)(P＜0.05).结论 TGF-β1及CTGF在颈椎间盘组织表达增高对促进颈椎间盘的退变可能发挥重要作用.     

六味地黄丸对兔退变椎间盘髓核及纤维环的保护作用

目的探讨六味地黄丸对兔退变椎间盘髓核及纤维环细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔6只利用异常应力负荷及椎间失稳法建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型,病理切片确认模型成功后,取椎间盘分离软骨终板,将髓核及纤维环组织进行细胞培养,将生长良好的细胞随机分为对照组、损伤组与含药组。对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为0.01的DMEM培养基;损伤组给予体积分数为0.01的胎牛血清与浓度为5μg/L的TNF-a混合的DMEM培养基;含药组为体积分数为0.01的六味地黄丸含药血清加体积分数为0.01的胎牛血清与浓度为5μg/L的TNF-a混合的DMEM培养基。使用细胞增殖—毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组兔退变椎间盘细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-13基因的表达差别。结果对照组椎间盘细胞初期正常生长,增殖良好,随着时间延长,细胞数量减少,凋亡细胞数量增多,细胞外基质胶原减少,细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软细胞的增殖,细胞及细胞外基质胶原数量减少明显,同时间点比较,细胞凋亡数量增多,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),而含药组细胞增殖缓慢,细胞数量下降缓慢,细胞凋亡数量减少,细胞外基质胶原成分下降不明显,3组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组椎间盘细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达下调增加,基质金属蛋白酶-13基因表达上调明显。与损伤组比较,而六味地黄丸含药血清组椎间盘细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达上调,基质金属蛋白酶-13基因表达下调,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-a诱导的兔退变椎间盘细胞损伤,起到延缓椎间盘损伤的作用。其机制可能与上调蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达及下调基质金属蛋白酶表达有关。     

机械牵张诱发肺泡Ⅱ型上皮细胞黏附相关的抗损伤机制研究

目的通过对大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮(ATⅡ)细胞进行机械牵张研究,探讨在牵张过程中黏附相关的抗损伤机制。方法采用活性荧光染色测定机械牵张所致ATⅡ细胞的死亡率,采用黏着斑染色相对定量法测定细胞的黏附水平,通过改变细胞外二价阳离子及黏附中和抗体调节细胞的黏附水平后,测定牵张后细胞死亡率。结果过度牵张导致细胞的死亡发生在牵张的早期(P<0.05),且不随时间的延长而累积(P>0.05),同时在牵张早期细胞黏着斑快速解聚,细胞表现出明显的回缩,黏附水平下降,推测牵张后细胞的黏附改变可能是细胞的抗损伤机制;通过调节细胞的黏附状态发现细胞黏附增强,牵张后细胞死亡率明显增加(P<0.01),而一定程度的黏附降低,牵张后细胞的死亡率明显下降(P<0.01)。结论黏附与细胞外基质的应力传递密切相关,牵张后ATⅡ细胞利用脱黏过程卸载应力以避免细胞应力损伤。     

椎间盘退变的生物力学机制研究进展

椎间盘是由富含Ⅰ型胶原蛋白且排列紧密呈层状环绕的纤维环和富含蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白及髓核细胞等组成的髓核共同构成的一个复杂结构。髓核内的蛋白多糖具有极强的亲水性,给髓核提供充足的水分,这是椎体能够承受较大负荷的原因之一,椎体承受的负荷可通过液体静水压被平均地分配到髓核的每一个部位。在正常情况下,纤维环适合抵抗液体静水压产生的环向应力,生物应力性能的退行性变化能分别发生在髓核和纤维环,体现在椎间盘的组织结构属性发生改变,然而,椎间盘结构的退行性变化需要通过结构参数分析才能评估。本文主要对整个椎间盘结构的改变与生物力学的关系以及椎间盘退行性变化导致的运动节段的不稳定性与生物力学的关系进行综述。     

大鼠退变椎间盘中缺氧诱导因子-1表达的意义

目的研究在大鼠退变椎间盘中缺氧诱导因子-1(HIF-1α)表达及意义。方法建立大鼠椎间盘退变动物模型,根据不同的时间点获得椎间盘标本,腰段手术干预椎间盘为模型组,无手术干预腰椎间盘为对照组。用免疫组化染色方法对模型组与对照组的椎间盘组织中HIF-1α的阳性表达进行定性、定位阳性检测,结果模型组免疫组化染色观察结果:第4周在椎间盘免疫组化切片中可以看到一些细胞具有HIF-1α表达,单因子表达细胞较少,细胞周围基质中可见散在阳性表达;第8周至第12周的模型组免疫组化染色切片中HIF-1α表达在逐渐增加。结论 HIF-1α表达增加和椎间盘退变的加剧呈正相关联系。     

破裂型椎间盘突出动物模型形态结构及自身血管化的研究

目的探讨破裂型椎间盘突出组织重吸过程中形态结构的变化趋势及自身血管化反应。方法选择20只SD雄性大鼠,经手术切除尾椎椎间盘,埋植在背部硬膜外,制作破裂型椎间盘突出模型。30d后处死动物,取埋植的髓核组织,进行HE染色,免疫组化检测。结果30d后椎间盘组织的形态结构发生明显改变,椎间盘组织中新生血管免疫组化染色均呈阳性。结论破裂型椎间盘突出的髓核组织经过一段时间后形态结构发生明显变化,其中确实有新生血管的长入,其可能在椎间盘突出重吸收过程中发挥重要作用。     

全胚胎培养在环磷酰胺致畸与细胞凋亡研究中的应用

哺乳动物植入后全胚胎培养排除了母体等因素对胚胎发育的影响 ,并可人为控制实验条件 ,与组织、细胞培养及动物整体实验相比 ,具有许多明显的优点 ,可动态观察和研究药物致畸作用及机制。细胞凋亡是多细胞生物体内环境稳定和发育精确控制的基本条件 ,也是胚胎发生和发育过程中一定结构和功能器官形成的必要条件 ,过多的细胞凋亡或不适当的细胞凋亡最终导致先天性畸形的发生[1 ] 。本研究利用小鼠全胚胎培养方法观察了抗肿瘤药物环磷酰胺致畸作用 ,在获得畸形胚胎的基础上 ,对环磷酰胺致畸作用与细胞凋亡的关系进行了探讨。1　材料与方法1 1…     

椎间盘的营养及退变因素

众所周知,椎间盘突出症正在威胁着中老年人的健康生活,轻者颈腰腿痛,重者截瘫致残,给家庭和社会造成极大的痛苦和负担,椎间盘突出是由其退变造成的[1],所以研究椎间盘退变,揭示其退变机理对防治椎间盘突出症具有重要的意义。现对椎间盘的一些基本问题做一概述。1　椎间盘的结构和功能椎间盘是由软骨终板、纤维环和髓核三部分构成。正常的椎间盘由该三部分共同构成了起着对抗压力和张力的闭合缓冲系统,使椎间盘既有弹性亦能稳定脊柱,还能参与构成椎管,保护其内走行的神经血管[2]。2　椎间盘的成份椎间盘由细胞及细胞外基质形成,后者的主要成…