携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒微球的构建

目的 构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)基因的重组腺病毒微球并进行理化性质的鉴定,以用于肝癌多药耐药的基因治疗研究.方法 采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制成微球,体外测定微球的粒径、载病毒量、包封率及释放规律,并用其转染人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM,48 h及120 h后检测转染细胞荧光强度.结果 成功地构建了携带反义MRP基因的重组腺病毒微球,直径约1.765 μm,包封率为52.4%,载病毒率为5.5× 108 efu/mg,在120 h内释放病毒量为49.2%,总的释放时间长于240 h.释放出的病毒保持活性,10 mg微球48 h释放病毒滴度为1.0× 108 efu/ml,对HepG2/ADM细胞株转导效率町达90%以上.结论 聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)包载反义RNA重组腺病毒制备的微球,包封率较高,载病毒量较大,能保持病毒活性,较长时间释放,转导效率高,可望有效地将反义MRP导人人肝癌耐药细胞株,为进一步研究肝癌耐药机制及其逆转方式提供实验基础.     

重组人p53腺病毒联合肝动脉化疗栓塞治疗肝癌患者的护理

对20例肝癌患者采用重组人p53腺病毒注射联合肝动脉化疗栓塞治疗,总有效率65.0%.指出术前做好心理护理、完善术前准备,术中注意药物的使用事项、观察患者反应,加强药物不良反应观察和对症治疗,可保证预期治疗效果.     

重组人p53腺病毒联合肝动脉化疗栓塞治疗肝癌患者的护理

对20例肝癌患者采用重组人p53腺病毒注射联合肝动脉化疗栓塞治疗,总有效率65．0％。指出术前做好心理护理、完善术前准备,术中注意药物的使用事项、观察患者反应。加强药物不良反应观察和对症治疗,可保证预期治疗效果。     

~(32)磷玻璃微球治疗肝癌的实验研究

以家猪４只行３２磷玻璃徽球（３２ＰＧＭ）肝动脉灌注。实验猪分别处死后病理观察，见肝脏早期有散在的沿小动脉分布的坏死区，３月内坏死区逐渐修复，为新生肝细胞取代。治疗实验用植有Ｈ２２肝癌ＢａｌＢ／Ｃ小鼠４０只作瘤内注射：Ａ组３２ＰＧＭ／甘油混悬液０．２ｍｌ；Ｂ组，无活性玻璃微球／甘油混悬液０．２ｍｌ。两组小鼠平均生存时间分别为２４．８天和１１．８天。Ａ组有５只小鼠存活超过４０天，其中２只小鼠处死时肿瘤已消失。本实验结果提示３２ＰＧＭ对实验性肝癌具有较好的治疗作用。灌注后肝组织损伤与微球不规则分布有关，且可在３月内恢复正常。     

^32P-玻璃微球肝动脉灌注治疗晚期肝癌的初步应用

^32P-玻璃微球(^32P—GMS)是一种新的内放射栓塞荆，作者在动物实验的基础上，自1994．3～1995．4月用该微球治疗晚期肝癌24例。平均年龄44．5岁(21～60岁)。经AFP、酶学、CT或MRI、B超、血管造影及手术活检证实的原发性肝癌22例(其中胆管细胞癌2例)，转移性肝癌2例(结肠恶性淋巴瘤、直肠癌)。Ⅱ期5例，Ⅲ期19例。巨块型13例(瘤体直径均大干10cm，平均12.3cm)，弥漫型4例，结节型7例。     

应用海藻酸钠微球联合碘化油经导管 肝动脉化疗栓塞治疗肝癌

目的探讨海藻酸钠微球联合碘化油在经导管肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗肝癌中的应用价值。方法应用海藻酸钠微球联合碘化油,采用TACE治疗136例原发性肝癌患者。结果TACE后,38例肿瘤完全消失,65例肿瘤缩小〉50%,25例肿瘤缩小25%～50%,8例肿瘤无明显变化。TACE后腹痛发生率47.79%（65/136）,其中80.00%为轻、中度,术后发热为41.18%（56/136）。术后肝功能损害轻微,无严重并发症。结论应用海藻酸钠微球联合碘化油TACE治疗原发性肝癌使用方便,能够克服碘油流失,增强栓塞血管的效应,提高治疗效果。     

三氧化二砷联合载药微球经导管肝动脉化疗栓塞对中晚期肝癌的疗效分析

目的探讨三氧化二砷联合载药微球经导管肝动脉化疗栓塞对中晚期肝癌的疗效。方法选取郑州大学第一附属医院2017-03—2018-01间收治的90例中晚期肝癌患者作为研究对象。根据随机数表法分为2组,每组45例。2组患者均接受奥沙利铂经肝动脉灌注化疗。研究组使用三氧化二砷与载药微球混悬液栓塞肿瘤供血动脉,对照组使用表柔比星与载药微球混悬液栓塞肿瘤供血动脉。比较2组治疗前及治疗后1个月的肝肾功能、AFP、疾病缓解率(CR+PR)、疾病控制率(CR+PR+SD)。结果 2组患者术前、术后1个月的肝肾功能指标及术前的AFP水平等指标比较,差异均无统计学意义(P0.05)。研究组术后AFP水平明显低于对照组,术后1个月CR+PR和CR+PR+SD均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论三氧化二砷联合载药微球经导管肝动脉化疗栓塞,是治疗中晚期肝癌效果较好的方案。     

华蟾素微球联合顺铂及阿霉素经肝动脉化学栓塞治疗肝癌的效果及预后

目的:探讨选用华蟾素微球联合顺铂以及阿霉素经肝动脉化学栓塞对肝癌患者进行治疗的效果及预后.方法:选取2018年10月—2019年10月本院收治的60例肝癌患者,按随机数字表分为两组,给予对照组(30例)患者顺铂联合阿霉素经肝动脉化学栓塞治疗,给予观察组(30例)患者华蟾素微球+顺铂+阿霉素经肝动脉化学栓塞治疗,观察患者...     

明胶海绵颗粒与海藻酸钠微球经动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌对比研究

目的比较明胶海绵颗粒与海藻酸钠微球经动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌的远期疗效。方法回顾性分析我院不可手术切除的原发性肝癌接受经动脉化疗栓塞治疗的75例患者的临床资料,按照所用栓塞剂不同分为实验组和对照组,实验组(n=39)采用海藻酸钠微球+碘化油,对照组(n=36)采用明胶海绵颗粒+碘化油。比较两组术后常见并发症发生率、术后肝功能变化值及1、2、3年累积生存率。结果两组术后常见并发症发生率差异无统计学意义;治疗前后谷丙转氨酶变化值对照组高于实验组,但谷草转氨酶、总胆红素、血清白蛋白、前白蛋白治疗前后变化值两组差异均无统计学意义;两组1、2、3年累积生存率差异无统计学意义。结论采用海藻酸钠微球经动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌安全、有效,有望作为明胶海绵颗粒的替代品在临床进一步推广应用。     

肝动脉化疗栓塞对原发性肝癌患者树突状细胞的影响

目的探讨原发性肝癌患者肝动脉化疗栓塞（TACE）前后肝癌组织和外周血液中树突状细胞（DCs）的变化及其意义。方法选取经TACE治疗后二期手术切除的原发性肝癌患者标本17例（TACE＋手术组）和未经TACE单纯手术切除的原发性肝癌患者标本30例（单纯手术组），用免疫组织化学方法检测肝癌组织中的DCs含量。另选经TACE治疗的原发性肝癌患者37例，分别于治疗前、治疗后第1，7，15天采集周围静脉血，用流式细胞仪检测治疗前后外周血DCs的含量。结果TACE＋手术组肝癌组织中DCs数量明显少于单纯手术组（P〈0．05）；经TACE治疗后第7，15天，患者外周血DCs数量明显少于治疗前（均为P〈0．05）。结论TACE治疗后，患者肝癌组织和血液中DCs数量的减少可能是TACE后肝癌易复发、转移的重要原因之一。     

16 肝细胞癌合并脉管系统癌栓的外科治疗

目的:探讨肝细胞癌（HCC）合并脉管系统癌栓的外科治疗效果。方法:回顾性分析1993年1月—2002年1月采用肝切除和癌栓取出术治疗HCC合并脉管系统癌栓68例的临床资料，其中门静脉癌栓63例，肝左静脉癌栓1例，肝中静脉癌栓合并门静脉左支癌栓1例，肝右静脉、下腔静脉合并门静脉右支癌栓1例，下腔静脉癌栓2例。HCC合并门静脉癌栓患者中6例术后行门静脉化疗。结果:6例术后3个月内死于肝肾功能衰竭， HCC合并脉管系统癌栓患者术后1，3，5年生存率分别为41.7%，20.8%，4.1%。结论:肝切除并癌栓取出术是HCC合并脉管系统癌栓有效的治疗方法，术后辅助治疗能提高治疗的效果。     

肝细胞癌中SFRP1和APC基因启动子甲基化与其mRNA的表达

目的探讨肝细胞癌（HCC）中SFRP1和APC基因启动子甲基化状态及其mRNA表达的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测30例肝细胞癌（HCC组）及相应的癌旁组织（癌旁组）和10例正常肝组织（正常对照组）中SFRP1及APC基因启动子甲基化状态和mRNA的表达水平，分析甲基化与某些临床参数与mRNA表达的关系。结果HCC组、癌旁组及正常对照组中的SFRP1和APC基因启动子甲基化率分别是11／30，4／30，0／10和14／30，5／30，0／10；HCC组明显高于其余两组（P〈0．05）。SFRP1基因启动子甲基化与临床资料无关（P〉0．05）；APC基因启动子甲基化与年龄（〈60）岁和癌肿无假包膜有关（P〈0．05）。HCC组SFRP1基因mRNA表达明显低于其余两组（P〈0．05），各组APC基因mRNA表达差异无显著性。两基因甲基化之间无相关性。结论SFRP1和APC基因启动子甲基化与HCC的形成和进展有关，但HCC组织中基因甲基化与mRNA表达的关系尚不明确。     

善宁联合乌司他丁对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的保护作用

目的探讨大鼠重症急性胰腺炎（SAP）合并肺损伤的发病因素和善宁联合乌司他丁对大鼠SAP合并肺损伤模型的保护作用.方法80只SD大鼠随机均分为5组：假手术组（S）,SAP组,善宁处理组（O）,乌司他丁处理组（U）,善宁＋乌司他丁处理组（O＋U）;每组再分为术后6h和12h亚组.检测血淀粉酶（AMY）,TNF-α,MDA和肺MPO的浓度,并对胰、肺组织进行病理评分,比较各组给药后上述指标的变化.结果（1）O组,U组,O＋U组血AMY,TNF-α,MDA和肺MPO的浓度及胰病理评分与同时点SAP组相比明显降低（P＜0.05）;12h O＋U组肺组织病理评分比同时间SAP组明显下降（P＜0.05）.（2）O＋U组MPO降低较O组更显著（P＜0.05）,O＋U组MDA降低较U组也更显著（P＜0.05）.（3）SAP组,TNF-α在12h比6h明显下降（P＜0.05）.（4）血AMY,TNF-α,MDA和肺MPO浓度与胰、肺病理评分呈正相关（r=0.343～0.781,P＜0.01）.结论（1）TNF-α,MDA和肺组织MPO是引起SAP合并肺损伤的重要因素.（2）善宁和乌司他丁均能减轻SAP合并肺损伤,联合用药效果更佳.     

重组Akt腺病毒的构建及其在肝硬化大鼠肝脏中的表达

目的:探讨持续活化Akt且带有HA标签(myr-HA-Akt)基因的重组腺病毒在肝硬化大鼠肝脏中的表达特性。方法:酶切正向插入目的基因的真核表达载体pcDNA3.1-myr-HA-Akt,获得myr-HA-Akt cDNA后，将其定向克隆到穿梭质粒pDC316中,然后将重组质粒与病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染293 细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt,并进行扩增、纯化。通过观察腺病毒感染293细胞后是否出现细胞病变效应;PCR和基因测序方法对所构建病毒进行鉴定，并采用TCID50法检测病毒滴度。自尾静脉注射重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt感染肝硬化模型大鼠。免疫印迹法检测大鼠肝组织内Akt 和p-Akt蛋白的表达。结果:感染的293 细胞出现明显的细胞病变效应，PCR产物电泳证实重组腺病毒的存在，基因测序证实myr-HA-Akt的cDNA正确插入穿梭质粒且与pBHGloxΔE1,3Cre正确同源重组;病毒滴度为5.5×1011 vp/mL。从蛋白水平证实感染病毒的肝硬化模型大鼠有外源性Akt基因的表达。结论:构建的重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt能有效地感染肝硬化模型大鼠,并可在模型大鼠中正确转录和翻译，为进一步研究腺病毒介导的Akt基因对肝硬化的治疗奠定了实验基础。     

skp2,C-myc在肝细胞肝癌中的表达及其意义

目的: 研究skp2和C-myc在肝细胞肝癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系。方法:用免疫组化PV9000二步法检测skp2和C-myc蛋白在48例肝细胞肝癌、20例肝硬化患者和16例正常肝组织中的表达。结果:肝细胞肝癌组织中skp2的阳性表达率（33.3%）显著高于肝硬化组织(均为阴性表达)(P=0.008)和正常肝组织(均为阴性表达)（P=0.020）。skp2在肝细胞肝癌中的表达与组织分化程度及转移有关（P<0.001及P=0.017）,但与肿瘤大小无关(P=0.058)，skp2在高分化肝细胞肝癌中无表达。肝细胞癌组织中C-myc 蛋白的的阳性表达率为58.3%，显著高于肝硬化组织的15%（P=0.001）和正常肝组织(阴性表达)（P<0.001）。C-myc 蛋白阳性表达与组织分化程度、转移及肿瘤大小有关，组间差异依次为P<0.001,=0.023及=0.007。肝细胞癌中skp2蛋白的表达与C-myc的表达呈正相关（r=0.508,P<0.001）。 结论:C-myc可能与肝细胞肝癌的发生发展有关。Skp2的表达提示预后不良。C-myc可能对skp2的表达起正性调节作用。     

Survivin反义寡核苷酸对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法30只裸鼠建立人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机分3组，每组10只。分别于瘤周及瘤体注射阳离子脂质体（1ipofectin，Lip），ASODN／Lip及NODN／Lip，每5天1次，共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和裸鼠体重的变化。用TUNEL法，透射电镜观察体内瘤体的细胞调亡情况；用Western—blot检测各组肿瘤的survivin蛋白表达情况。结果成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型。ASODN／Lip治疗组的肿瘤体积在治疗期内减少，抑瘤率达70．10％；而NODN／Lip治疗组和Lip对照组肿瘤体积增加。各组裸鼠体重无明显变化。ASODN／Lip组细胞凋亡率为38．6％明显高于其他两组，差异有显著性（P〈0．05）。ASODN／Lip组肿瘤的survivin蛋白表达明显降低。结论survivin反义寡核苷酸可有效地抑制人乳腺癌裸鼠皮下肿瘤的生长速度，并促进诱导肿瘤细胞的凋亡。     

他克莫司及阿霉素对肝癌细胞抑制作用的实验研究

摘要：目的:探讨他克莫司(FK506)及阿霉素（ADM）对肝癌细胞的影响。方法:培养HepG-2肝癌细胞株，将其分成对照组、FK506组、ADM及FK506加ADM组，分别处理24~48h。采用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡。结果:肝癌细胞增殖能力在FK506作用48h后明显受到抑制；FK506对肝癌细胞有促进凋亡作用，在5~100μｇ/L浓度范围内，凋亡率随浓度增加而增加，超过100μｇ/L时,凋亡率减低。FK506及ADM均使G2期显著延长;FK506联合ADM对G2/M期的阻滞有协同作用。FK506与ADM有协同促凋亡作用。结论:FK506对肝癌细胞的增殖有抑制作用,能使G2期阻滞,促凋亡。FK506与ADM体外联合应用对肝癌细胞有协同抑制作用。     

急性腹主动脉骑跨栓塞21例的治疗

目的总结腹主动脉骑跨栓塞（abdominal aorta saddle embolism，ASE）的治疗经验和教训。方法回顾性分析近6年来采用双股动脉Fogarty导管取栓等方法，治疗的腹主动脉骑跨栓塞21例的临床资料。结果血流再通后早期死亡4例，主要原因为高血钾引起的心搏骤停；迟发死亡6例，主要原因为急性肾功能衰竭为首发器官衰竭的多器官功能不全综合征；治愈11例，其中，5例保存了双侧肢体，6例截去单侧或双侧下肢。随访10例，存活肢体血运良好。结论早期诊断，早期取栓治疗是降低腹主动脉骑跨栓塞病死率和截肢率的关键。术中预防高钾血症引起的心搏骤停、术后预防和及早治疗ARF是降低病死率的重要环节。