幽门螺杆菌rdxA基因突变与耐药性关系的研究

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）临床菌株rdxA基因变异与甲硝唑耐药性的关系。方法：从患者胃粘膜活检标本中分离培养Hp。采用纸片扩散法初筛和二倍平皿稀释法确定Hp菌株对甲硝唑的耐药性。提取21株Hp基因组DNA进行PCR扩增，T-A克隆后测序，与文献报道的Hp26695株及134株临床分离株rdxA基因序列进行比较。结果：76.1％（15/21）的Hp菌株对甲硝唑耐药。PCR可扩增出886bp的rdxA基因的片段。与Hp26695株rdxA基因序列比较，扩增产物核苷酸序列的同源性为90.1％-95.1％。甲硝唑耐药菌株rdxA基因出现碱基插入/缺失及碱基替换而引起的突变。结论：rdxA基因突变是Hp对甲硝唑耐药的重要因素。     

具有CagA基因的幽门螺杆菌感染与胃肠道疾病

幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）为革兰染色阴性微需氧菌，Ｈｐ感染是慢性胃炎及消化性溃疡的重要致病因子，与胃癌的发生也有密切关系。目前世界范围内成人Ｈｐ感染率达５０％～８０％，但Ｈｐ感染人群大多没有症状，仅少数人出现症状，主要由...     

幽门螺杆菌CagA基因的克隆

目的 为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌ＣａｇＡ蛋白,建立ＥＬＩＳＡ法检测ＣａｇＡ抗体,克隆幽门螺杆菌ｃａｇＡ基因片段。方法 根据ｃａｇＡ基因序列,设计引物ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段,用Ｔ－Ａ克隆的方法将ＰＣＲ产物克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－Ｔ,并转化大肠杆菌ＪＭＩ１０９。结果 经蓝白斑筛选,ＰＣＲ及限制性内切酶酶切分析,获得ｃａｇＡ基因片段的克隆,序列测定结果与文献报道一致。结论 ＰＣＲ产物可采用Ｔ－Ａ法克     

CagA Gene Expression in Helicobacter pylori and Its Relationship with Metronidazole Resistance in Guizhou Province

目的:探讨贵州地区上消化道疾病患者幽门螺杆菌(H pylori)细胞毒素相关蛋白(CagA)基因的表达及其与甲硝唑( MTZ)耐药的相关性.方法:从上消化道疾病患者胃黏膜分离50株H pylori,经聚合酶链反应(PCR)检测CagA基因,E-test法检测MTZ耐药情况,测序并应用BLAST分析MTZ敏感株(MTZS)与耐药株(MTZR) CagA基因的分子差异.结果:50株H pylori中有92％的菌株表达CagA,其阳性表达率在消化性溃疡患者与慢性胃炎患者无差异;50株H pylori对MTZ总耐药率为54％,CagA阳性及阴性菌株耐药率分别为54.3％及50.0％(P>0.05);基因测序结果显示MTZS及MTZR两组间CagA基因突变无统计学差异.结论:贵州地区CagA阳性菌株与上消化道疾病密切相关,但与疾病的严重程度无明显关系,CagA基因表达及基因变异与MTZ耐药性之间无明显关系.     

幽门螺杆菌细菌毒素VacA和CagA研究进展

<正>幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,HP)感染很常见,大约一半以上的世界人口感染了HP。HP被认为是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病因,且与胃癌的发生密切相关,WHO将HP列为第1类致病因子。空泡细胞毒素(Vacuolating Cytotoxin,VacA)和细胞毒素相关蛋白(Cytotoxin associated Protcin A,CagaA)是HP的两个重要的毒力因子,在HP的致病过程中起重要作用。重视HP细菌毒素的研究,对消化性溃疡和胃癌的防治都有十分重要的意义。     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药相关基因片段的筛选及克隆分析

目的:筛选幽门螺杆菌(Hp)对甲硝唑耐药相关基因片段。方法:以5株临床分离的耐药株作为被检菌,1株敏感株作为参考菌,采用抑制差减杂交技术进行基因组差异研究,获取Hp对甲硝唑耐药相关的基因片段,并以斑点杂交方法对所获的基因片段进行了杂交鉴定。结果:在获得的差减阳性克隆中,经斑点杂交筛选后共有37个基因片段的拷贝数在耐药和敏感菌株中存在差异(2倍以上),而其中17个片段其拷贝数存在明显差异(3倍以上)。对以上17个差异片段进行单向测序,根据最高同源性比对结果,分别代表二肽ABC载体渗透酶(dppB)、二肽ABC载体结合蛋白(dppA)等10个基因的同源基因片段在耐药株中存在高拷贝数。结论:所获得的10个差异基因片段可能与幽门螺杆菌对甲硝唑耐药相关。     

幽门螺杆菌甲硝唑诱导耐药的研究

目的通过甲硝唑诱导耐药这一方法来分析rdxA基因突变情况的可行性.方法用非混合感染、敏感的H.pylori菌株进行甲硝唑诱导实验,使其由敏感型转变为耐药型;再提取DNA,PCR扩增诱导前后rdxA基因并测序.结果甲硝唑诱导菌株12株,4株获得成功,诱导前后的M IC值增加了16~64倍;连续传代3次后,M IC值保持不变.诱导前后敏感型与耐药型菌株rdxA基因序列仅有0.2%~0.8%的差异,而不相关菌株间则有2.2%~2.7%的差异.结论甲硝唑诱导实验可以在较短时间内获得稳定的甲硝唑耐药性,并能排外不同菌株间存在差异的影响,有望成为一种研究甲硝唑耐药机制的好方法.     

耐甲硝唑幽门螺杆菌的差异蛋白质组学

目的建立敏感幽门螺杆菌（Hp）和耐甲硝唑Hp差异蛋白质的信息。方法诱导耐甲硝唑Hp,与敏感Hp利用二维电泳串联质谱的蛋白质学技术,对二者蛋白质进行对比分析。结果建立敏感和耐甲硝唑差异蛋白质谱,质谱发现27个差异’蛋白。耐药菌株与敏感菌株相比,8个蛋白表达下降,19个表达上升。结论发现的差异蛋白质可以从中筛选抗药靶标,从而为临床和基础研究提供依据。     

奥美拉唑、阿莫西林、甲硝唑三联疗法根除幽门螺杆菌

幽门螺杆菌(HP)感染与多种胃部疾病相关，目前根除幽门螺杆菌的方法很多，各种疗法均有其优缺点，本研究旨在观察奥美拉唑、阿莫西林、甲硝唑1周与2周疗程对HP的根除率及安全性。     

CagA对幽门螺杆菌与宿主细胞相互作用影响的研究进展

在体外实验中,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)和宿主细胞相互作用后发生很多变化,而H.pylori细胞毒素相关蛋白(cytotoxin associated gene A,CagA)是H.pylori重要的毒力因子之一,在H.pylori与宿主细胞相互作用中起着非常重要的作用,包括CagA转运进入细胞、CagA磷酸化和断裂,以及引起胞内信号转导通路的改变.本文就CagA对H.pylori与宿主细胞的相互作用影响进行综述.     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药性及多重相关基因DNA和氨基酸序列分析

目的 了解幽门螺杆菌(Hrlicobacter pylori，Hp)对甲硝唑的耐药状况，研究相关的多重基因突变，为深入揭示Hp耐药的分子机制提供相关资料。方法 分离培养54株Hp，以琼脂稀释法检测Hp的甲硝唑最低抑菌浓度(deterimination of minimal inhibitory concentration，MIC)，用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因(rdxA、frxA、fdxB)，经分子克隆后DNA测序，分析敏感株和耐药株耐药基因的序列及其与耐药性的关系。结果 武汉地区人群Hp对甲硝唑的耐药率为67％；甲硝唑耐药基因序列分析表明，耐药临床株的rdxA和(或)frxA基因存在插入、缺失和点突变。结论 Hp对甲硝唑耐药不仅与rdxA有关，同时存在frxA、fdxB基因突变。frxA、fdxB基因的突变可能与rdxA在Hp耐甲硝唑中有协同作用。     

幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆、表达及抗原性检测

目的 克隆幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因，确定CagA蛋白与相应抗体亲和力最强的肽段。方法 根据幽门螺杆菌cagA全基因序列以DNAMAN软件设计5对引物，采用PCR方法扩增出5条门螺杆菌cagA基因片段。将PCR扩增产物插入原核表达载体pGEX－3X并转化至大脉杆菌Top10中，形成5种重组质粒。经PCR、双酶切和测序鉴定后，以异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导其表达CagA蛋白肽段。包涵体经8mol/L尿素初步纯化后，运用ELISA方法检测其抗原性并确定相应抗体亲和力量强的CagA蛋白肽段。结果 5条cagA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达，表达的蛋白均具有强弱不等的抗原性，其中66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。结论 66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。     

幽门螺杆菌CagA基因的原核表达及抗原性测定

目的：合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的 CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性。方法：选取前期研究确定的与胃癌相关的H.pylori CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-CagA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性。结果：设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列（AF289435）基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100%;含pET32a-CagA的BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后能表达CagA融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,融合蛋白相对分子质量大小与预期一致(45 kD);Western印迹检测结果显示该融合蛋白可与抗H.pylori全菌抗体结合反应。结论：本实验构建的原核表达系统表达的CagA融合蛋白具有良好的抗原性,为临床胃癌相关H.pylori菌株的筛选和针对性治疗奠定了基础。     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性相关性研究

目的 通过对临床分离的幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）进行培养和药敏试验,结合基因检测的方法,探讨Hp的毒力基因VacA多态性与其耐药性之间的关联。方法 采集120例消化道疾病患者的胃黏膜组织,进行Hp分离培养和药敏试验,同时对Hp阳性且有抗生素耐药结果的菌株进行核酸提取,PCR检测Hp毒力基因VacA s区和m区的基因型。采用χ²检验对Hp毒力基因的类型与其抗生素耐药性间相关性进行评价。结果 56例患者经Hp培养阳性,阳性率46.7%。其中克拉霉素耐药率达到了28.6%。s1/m2型的菌株中,克拉霉素耐药率为43.5%,而s1/m1型的菌株中,克拉霉素耐药率为18.2%,两者之间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论 s1/m2型菌株比s1/m1型菌株更容易产生克拉霉素耐药性,VacA基因可能与Hp对克拉霉素产生耐药性相关。     

幽门螺杆菌空泡毒素、毒素相关蛋白的表达及分型

目的 :分析分离自我国临床患者的幽门螺杆菌 (Hp)毒力因子空泡毒素 (VacA)和毒素相关蛋白 (CagA)的表达状况及其分型分布。方法 :从临床分离培养 19株Hp ,用细胞测毒法检测VacA ,用Westernblot法分析CagA ,根据毒力因子表达情况进行分型。结果 :VacA阳性率为 5 7 9% ,CagA表达阳性率为 89 48% ;Ⅰ型 ,Ⅱ型 ,中间型Hp分别占 5 2 6 3% ,5 2 7% ,42 10 %。结论 :所研究的临床分离Hp菌株的毒力因子属高表达。     

血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价

目的 评价通过检测血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的可行性.方法 采集福州地区临床门诊行胃镜检查的胃活检标本,行病理检查和幽门螺杆菌(Hp)培养;采集病人血清,PCR法检测分离所得的Hp cagA基因;EIA法测定血清CagA抗体,分析cagA基因的检出与消化性疾病的关系,比较CagA基因与CagA抗体的检测结果,评价应用CagA抗体检测Hp高毒株感染的可行性.结果 分离获得80株Hp,其中54株检出cagA基因,阳性率67.50%.各病理类型胃病患者cagA基因阳性率:浅表性胃炎77.42%,萎缩性胃炎62.86%,胃溃疡58.33%,胃癌50.00%,各组间差别无统计学意义(P＞0.05);CagA抗体阳性率55.00%,敏感度74.07%,特异度84.62%,约登指数58.69%,调整一致性77.68%.结论 检测血清CagA抗体用于诊断高毒力Hp感染存在局限性.     

胃十二指肠疾病患者感染幽门螺杆菌的cagA基因和血清CagA抗体状况

目的 :探讨幽门螺杆菌cagA基因和血清CagA抗体与胃十二指肠疾病的关系。方法 :用聚合酶链反应方法测定 62株由慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者感染HpcagA基因 ;用酶免疫方法测定同一患者血清CagA抗体。结果 :HpcagA基因阳性率为 5 6.45 %。慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者感染HpcagA基因阳性率分别为 5 5 .5 6%、5 4.17%和 63 .64 % ,三种疾病患者之间感染Hp的cagA基因阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者血清CagA抗体阳性率分别为 70 .3 7%、79.17%和 40 .0 0 % ,血清CagA抗体总阳性率为 68.85 %。慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者之间血清CagA抗体阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :HpcagA基因和血清CagA抗体与Hp感染个体发生的不同类型胃十二指肠疾病之间无关联     

幽门螺杆菌及其CagA基因感染与胃癌关系的研究

目的:通过检测胃癌和浅表性胃炎组织幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)和细胞毒素相关蛋白基因(CagA),探讨Hp 及CagA基因与胃癌相关性及Hp形成胃癌的可能机制.方法:应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色和血清Hp CagA抗体检测Hp,用PCR检测Hp CagA基因.结果:慢性浅表性胃炎、胃癌组织中Hp检出率分别为45.9%和54.8%,两者差异无显著性(P>0.05),两种组织中Hp CagA检出率分别为35.3%和77.5%,两者差异有显著性(P<0.005).结论:胃癌组织与浅表性胃炎组Hp感染相比差异无显著性,胃癌组织中Hp CagA基因检出率明显高于浅表性胃炎组,Hp CagA基因与胃癌有一定相关性,Hp CagA基因可能涉及胃癌的形成机制.     

幽门螺杆菌空泡毒素基因分型

目的：探寻幽默门螺杆菌（Hp）基因分理方法。方法：用自行设计的引物对16株临床分离Hp和2株标准菌的空泡毒素基因vaeA进行扩增,用7种限制性内切酶对基因扩增产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析;对18株Hp VacA活性进行检测。结果：18珠Hp的VacA扩增产物达2.7kb左右,但并不完全相同;HeaⅢ酶切电泳可将18株Hp的VacA基因分为12种谱型。未发现与VacA表达相关的谱型。结论：VacA基因的PCR产物经HeaⅢ酶切RFLP分型可作为Hp基因分型较理想的选择,但不能反映毒素活性的表达情况。