伊尼奥小单孢菌绿色变株产生庆大霉素B

小单孢菌所产生的氨基环醇类抗生素已广泛地应用于临床。有关它们生物合成的研究也已展开,并提出了它们生物合成途径间相关性的轮廓,包括伊尼奥小单孢菌以庆大霉素A或X_2为前体生物合成西索米星的观点。 作者在诱变选育西索米星产生菌伊尼奥小单孢菌澄江变种(Micromonospora inyoensis var. denjiangensis)的过程中,原     

糖基转移酶-2基因silD在大肠埃希菌中的克隆与表达

从伊纽小单孢菌（Micromonospora inyoensis）扩增参与西索米星生物合成的糖基转移酶基因silD（1181bp），并分别将其克隆到pUC18和表达载体pET-30a上。其开放性阅读框长1173bp，编码含390aa（43．04ku）的多肽链，在大肠埃希菌BL21（DE3）：：pET-silD中实现表达。基因silD的碱基序列与gntD（来自M．echinospora）的碱基序列的同源性高达94％。预测的silD蛋白序列与GntD的同源性为98％。这是继从依纽小单孢菌克隆参与生物合成西索米星的抗性基因srml（AY661430）、西索米星2-脱氧蟹肌醇合成酶基因sisB（DQ250993）和糖基转移酶基因sisZ（DQ250994）后，克隆到的又一新基因。该基因在GenBank的接受号为DQ250992。基因silD的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

伊钮小单孢菌2-脱氧蟹肌醇氨基转移酶基因sisM的克隆与表达

从伊钮小单孢菌（Micromonospora inyoensis）中扩增到参与西索米星生物合成基因sisM，其开放阅读框长1263bp．编码含421个氨基酸残基（44.3ku）的蛋白质。经Blast比对，该蛋白与已报道的L-谷氨酰胺：2-脱氧蟹肌醇（DOI）氨基转移酶有很高的同源性，据此推测sisM是编码DOI氨基转移酶的基因。该基因在IPTG诱导下．在大肠埃希菌BL21（DE3）实现了表达，表达产物的分子量与推测的一致。这是从伊钮小单孢菌克隆到的又一参与西索米星核心基团2-脱氧链霉胺（DOS）生物合成的新基因，该基因在GenBank的登录号为EU074791。     

磷酸盐对西索米星发酵过程的影响作用研究

考察了无机磷酸盐对西索米星产生菌伊尼奥小单孢菌诱变菌株F0 0 3的菌体生长和产物合成的影响作用。研究结果表明 ,发酵培养基中较高的磷酸盐浓度 (3 .2～ 5 .3mmol/L)虽有助于菌体的生长 ,却抑制西索米星产物的合成 ,这与发酵过程中菌体胞内碱性磷酸酯酶和胞外淀粉酶活力受磷酸盐的调节作用有关。     

反相离子对色谱法测定发酵液中西索米星的含量

目的建立可快速准确测定伊尼奥小单孢菌发酵液中西索米星含量的HPLC。方法采用反相离子对色谱法,PDA检测器全波段扫描。结果西索米星浓度范围在0.125~2.5mg.mL-1线性良好,相关系数为0.9993;测得发酵液样品的平均回收率为101.3%,RSD为0.68%,发酵液中西索米星与主要杂质的分离度为1.52。结论方法准确可靠,可以用于西索米星发酵过程的含量测定。     

从产生西索米星的小单孢菌发酵液中发现了氨基糖苷类磷酸转移酶抑制剂

莫斯科苏联抗生素研究所的研究人员最近从产生西索米星的小单孢菌发酵液及菌丝中发现了一种能够抑制氨基糖苷-3′-磷酸转移酶活力的物质。小单孢菌培养液中此种抑制剂的数量同其产生西索米星的强度相关,在未达到生产抗生素的条件下,发酵液内无     

小单孢菌遗传研究进展

小单孢菌(Micromonospora)是新近崛起的具有巨大潜力的一群抗生素产生菌。在先后报道的近60种小单孢菌中,就有40多种产生抗生素,它们包括氨基糖苷类、大环内酯类、安莎类、多肽类和蒽环类等等~[1、2]。由于小单孢菌不仅能产生链霉菌所产生的抗生素,如放线菌素、新霉素、红霉素等,而且还产生西索米星(Sisomicin)、阿司米星(Astromicin,Fortimicin)、扁枝衣霉素(Everninomicin)等具有独特结构的抗生素;特别是以近年来找到的新抗生素的数目而言,小单孢菌已超过链霉菌而跃居首位。因此,小单孢菌日益受到了人们的重视和青睐。然而,由于小单孢分布奇特,生长缓慢,加之直到1963年分离到庆大霉素以后,才引起人们的注意,所以它的遗传研究领域尚是一块有待开垦的处女地。但是随着人们对小单     

Streptomyces sp.4353中3-氨基-5-羟基-苯甲酸（AHBA）合酶基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达

目的 克隆Streptomyces sp.4353中的3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因,并将其在大肠埃希菌中表达.方法参与AHBA生物合成的5个基因,即氨基奎尼酸脱水酶基因、氨基奎尼酸/莽草酸脱氢酶基因、AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因通常连锁,形成一个AHBA生物合成基因簇.本文通过分析、比较已知AHBA生物合成基因簇的基因组织结构特点和序列保守性,设计引物,以Streptomyces sp.4353的总DNA为模板,在已知737bp AHBA合酶基因部分序列的基础上,通过PCR扩增其上、下游DNA序列,克隆至pMD18-T载体上,测序、拼接并进行生物信息学分析.以pET24a(+)为表达载体,对克隆得到的AHBA合酶基因在大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL中进行表达和SDS-PAGE检测.结果从Streptomyces sp.4353中得到了一段2872bp大小的DNA片段(NCBI GenBank接受号EU734184),其中含有AHBA生物合成基因簇中的AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因(部分);AHBA合酶基因在大肠埃希菌中得到了成功表达,在SDS-PAGE上可见到清晰的、与预计大小(42.7ku)一致的蛋白表达特异条带.结论 Streptomyces sp.4353中的AHBA合酶基因的克隆以及在大肠埃希菌中的表达为进一步研究该基因的功能奠定了基础.本研究克隆得到的2872bp DNA片段还有可能用于AHBA的杂合/异源生物合成,以及安莎类抗生素的组合生物合成.     

ARTP诱变结合抗性筛选选育西索米星高产菌株

目的 利用等离子体诱变,结合抗生素抗性筛选,获得西索米星高产菌株。方法 首先通过链霉素抗性筛选,获得一株比出发菌株产抗能力高的S4;随后以S4为出发菌株,经等离子体处理40s,借助巴龙霉素抗性筛选,得到双重抗性菌株。最后对突变株进行再次诱变,并结合高浓度链霉素抗性筛选。结果 获得一株高产突变株M. inyoensis SAAP22,比出发菌株效价提高了38.18%,具有稳定的遗传性能。结论 通过等离子体诱变,结合抗生素抗性筛选,可有效提升伊尼奥小单孢菌的西索米星合成能力,所得高产菌株具有潜在应用价值。     

抗生素西索米星发酵过程中次要组分的调控

在西索米星产生菌橄榄星孢小单孢菌Ｍ－４１的发酵代谢与产物合成的研究中,发现通过控制种子期菌丝的生长形态、培养基中磷酸盐含量,并在发酵过程中添加合适的抑制剂,可有效地减少发酵液中次要组分ｖｅｒｄａｍｉｃｉｎ的生物合成,增加主要组分西索米星的含量。