自制移植肝低温保存液对氧自由基的影响

背景：在肝脏移植过程中,低温保存和缺血可导致肝脏产生氧自由基而损伤肝组织。目的：研究自制器官保存液对低温保存大鼠肝脏氧自由基的影响,并与器官保存液的＂金标准＂UW液进行对比。方法：16只9周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组8只。建立SD大鼠肝脏灌注模型,分别用自制器官保存液组和UW液组灌洗肝脏,取出肝脏置于4℃保存液中,于保存24,48,72h后分别检测肝脏超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、总抗氧化能力和活性丙二醛水平。结果与结论：自制器官保存液对大鼠肝脏低温保存各时点超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、总抗氧化能力活性及丙二醛含量与UW液组比较差异均无显著性意义（P〉0.05）,表明自制器官保存液能够减轻缺血再灌注后氧自由基对大鼠肝脏的损伤。自制器官保存液对低温保存大鼠肝脏在减轻氧自由基损伤方面有较好的效果,与UW液相当。     

自制新型多器官保存液低温保存小型猪肾

背景:在前期实验的基础上,此次实验成功配制了含聚乙二醇的新型上海多器官保存液.目的:以普通器官保存液为对照,验证自制含聚乙二醇的上海多器官保存液低温保存小型猪肾的效果.设计、时间及地点:随机分组,对照实验观察,2006-05/2007-07在解放军器官移植研究所移植实验室完成.材料:健康成年实验用巴马小型猪12头.自制新型新帮上海多器官保存液,主要含聚乙二醇,相对分子质量20 000.pH7.43±0.10,渗透压825～900 kPa,UW液,购白美国Bristol-Myers Squibb公司.方法:巴马小型猪肾分别以4℃器官保存液或上海多器官保存液原位灌注后离体保存24,48,72 h.保存终点测保存液pH值及乳酸脱氢酶含量,左肾取标本行组织学检查,右肾采用体外非循环猪肝/肾灌注系统灌注30,60,120 min测灌注液乳酸脱氢酶含量.灌注终点取肾皮质标本测丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性.主要观察指标:光镜、电镜观察肾冷保存后的形态学变化;灌注液及保存液乳酸脱氢酶含量;肾皮质标本测丙二醛浓度和超氧化物歧化酶活性:肾组织细胞凋亡指数.结果:保存48,72 h后,器官保存液组保存液pH值高于上海多器官保存液组(P<0.05).保存72 h终点保存液及再灌注30,60,120 min灌注液中乳酸脱氢酶活性器官保存液组高于上海多器官保存液组(P<0.05).同时间点两组肾组织光镜、电镜下形态学改变、肾皮质凋亡指数、超氧化物歧化酶、丙二醛含量差芹均无显著性.结论:新型上海多器官保存液对小型猪肾脏低温保存效果与普通器官保存液基本一致,对缺氧代谢器官细胞内酸中毒的缓冲能力以及对低温和缺血再灌注损伤的保护作用优于普通器官保存液.     

低流量携氧液低温机器灌注保存供肝

目的:观察低温机器灌注氟碳携氧液保存供肝过程中低流量因素与再灌注损伤之间的关系.方法:成年Wistar雄性大鼠44只,随机数字表法分为正常组、对照组、实验组Ⅰ、实验组Ⅱ.切取不保存,采用Clavien方法行离体鼠肝循环再灌注;对照组、实验组Ⅰ、实验组Ⅱ切取的肝脏经门静脉以4.0～5.0℃的氟碳携氧灌注液持续灌注18 h,速度分别为0.4,0.2,0.1 mL/(min·g),后行离体鼠肝循环再灌注.再灌注10,30,60 min检测再灌注流出液中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性及内皮素质量浓度,光镜和电镜下观察供肝组织病理学改变.结果:与对照组比较,实验组Ⅰ丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性和内皮素质量浓度无明显差异(P>0.05),实验组Ⅱ丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性和内皮素质量浓度明显增高(P<0.05).光镜和电镜下观察对照组和实验组Ⅰ细胞病理形态学改变明显轻于实验组Ⅱ.结论:氟碳携氧液低温机器灌注保存离体大鼠肝脏过程中,当灌注液流量降至0.1 mL/(min·g)时肝细胞及肝窦内皮细胞掘伤严重以至于再灌注时损伤严重.     

高氧液对大鼠肝移植的保护作用

背景:目前可供移植的器官日益短缺,但因灌注冷保存所至的原发性移植物无功能仍然有一定的发生率,减少灌注保存所至的器官损伤有较大的临床意义.目的:观察高氧液对大鼠肝移植的保护作用.方法:选用Wistar大鼠40只,按随机数字表法分成2组,即高氧乳酸林格液组(高氧液组)和乳酸林格液(普通灌注液组),每组20只,各组供、受体各半,制备肝、肾、胰器官簇移植模型.高氧液组使用高氧液灌注,普通灌注液组使用普通林格液灌注,比较两组灌注末、肝移植后第1,3天透明质酸质量浓度、谷丙转氨酶活性、CD8+CD28-T细胞含量,以及移植后肝组织病理急性排斥评分.结果与结论:移植前两组透明质酸质量浓度、谷丙转氨酶活性、CD8+CD28-T细胞含量差异无显著性意义(P>0.05).移植后高氧液组透明质酸质量浓度、谷丙转氨酶活性均低于普通灌注液组(P<0.05),CD8+CD28-T细胞含量高于普通灌注液组(P<0.05),高氧液组Banff评分低于普通灌注液组(P<0.05).提示高氧液可减轻缺血再灌注损伤,对大鼠肝移植有一定的保护作用.     

丹参对原位肝移植大鼠供肝冷保存再灌注损伤的保护作用

目的:研究表明,丹参对心、脑、肝等重要器官的缺血再灌注损伤有保护作用.制备大鼠异体原位肝移植模型,验证丹参对大鼠肝移植缺血再灌流损伤的保护作用.方法:实验于2006-10/2007-08在南方医院中心实验室及动物实验中心完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验材料及分组:选用SD大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组、模型对照组和丹参注射液组,假手术组8只,模型对照组、丹参注射液组各8对(供体与受体).②实验方法:建立原位肝移植模型,在供肝灌注冷保存时,以4 ℃乳酸林格氏液为基液,丹参注射液组灌注保存液中加60 mL/L丹参注射液;模型对照组不加丹参.③实验评估:移植术后6 h处死各组大鼠取样,检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶及乳酸脱氢酶活性;测定肝组织中丙二醛含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,并对比观察移植肝病理形态学改变.结果:模型对照组和丹参注射液组16只受体大鼠及假手术组8只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①丹参注射液组和模型对照组移植肝再灌注后血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及乳酸脱氢酶活性均高于假手术组(P < 0.01);丹参注射液组低于模型对照组(P < 0.01).②丹参注射液组肝组织中丙二醛含量较模型对照组明显下降(P < 0.01),超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性则明显升高 (P < 0.01).③丹参注射液组较模型对照组肝组织肝细胞坏死程度减轻,炎性细胞浸润减少,肝组织再灌注损害程度减轻.结论:丹参对原位肝移植肝脏的缺血再灌注损伤有保护作用,从而减轻氧自由基及脂质过氧化,保护细胞膜,改善肝功能.     

丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶1表达的影响

背景：器官移植前使用丹参预处理能够保护组织缺血-再灌注损伤,改善移植器官存活率。目的：观察含丹参的冷灌注液对同种异体大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1表达的影响,以及对供体肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用。方法：将SD雄性大鼠随机分成UW液组（术中使用UW液灌注保存）、丹参＋UW液组（术中使用丹参＋UW液灌注保存）、ZnPP预处理组（移植前24h腹腔内注射ZnPP,术中使用丹参＋UW液灌注保存）,建立稳定的大鼠同种异体肝移植模型。同时取10只正常大鼠作为正常对照。结果与结论：丹参＋UW液组和UW液组血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平明显低于ZnPP预处理组（P〈0.01）。血红素氧合酶1mRNA及其蛋白在丹参＋UW液组中较UW组表达更明显,在ZnPP预处理组中表达明显受到抑制（P〈0.05）。丹参＋UW液组肝脏Suzuki标准评分明显低于ZnPP预处理组及UW液组（P〈0.05）。表明丹参能上调同种异体的大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1mRNA及其蛋白的表达,减轻供肝缺血-再灌注损伤,保护移植大鼠肝脏。     

丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶1表达的影响

背景:器官移植前使用丹参预处理能够保护组织缺血-再灌注损伤,改善移植器官存活率。目的:观察含丹参的冷灌注液对同种异体大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1表达的影响,以及对供体肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:将SD雄性大鼠随机分成UW液组(术中使用UW液灌注保存)、丹参+UW液组(术中使用丹参+UW液灌注保存)、ZnPP预处理组(移植前24h腹腔内注射ZnPP,术中使用丹参+UW液灌注保存),建立稳定的大鼠同种异体肝移植模型。同时取10只正常大鼠作为正常对照。结果与结论:丹参+UW液组和UW液组血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平明显低于ZnPP预处理组(P<0.01)。血红素氧合酶1mRNA及其蛋白在丹参+UW液组中较UW组表达更明显,在ZnPP预处理组中表达明显受到抑制(P<0.05)。丹参+UW液组肝脏Suzuki标准评分明显低于ZnPP预处理组及UW液组(P<0.05)。表明丹参能上调同种异体的大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1mRNA及其蛋白的表达,减轻供肝缺血-再灌注损伤,保护移植大鼠肝脏。     

肾上腺髓质素基因注入大鼠骨骼肌对肢体缺血再灌注肝脏的影响

背景:以往研究直接采用肾上腺髓质素药物来研究多种器官缺血再灌注损伤后肾上腺髓质素的保护作用,但转肾上腺髓质素基因对肢体缺血再灌注后引起的肝脏损伤是否有保护作用却少见报道.目的:探讨大鼠肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的作用.方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分成4组,假手术组、缺血再灌注模型组、转肾上腺髓质素基因组和空载体组,每组8只,除假手术组其余各组大鼠制成缺血再灌注模型.转肾上腺髓质素基因组和空载体组采用直接注射法于腓肠肌分别注射肾上腺髓质素真核表达载体和肾上腺髓质素(700 μg/kg)盐水溶液1 mL;假手术组和缺血再灌注模型组注射生理盐水1 mL心脏采血测定血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶的活性,测定肝组织总超氧化物歧化酶、丙二醛的含量;免疫组化检测术侧腓肠肌中肾上腺髓质素的表达情况;显微镜观察肝组织的形态学变化.结果与结论:与假手术组比较:缺血再灌注模型组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶水平及肝组织丙二醛含量均明显升高(P＜0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显降低(P＜0.01),显微镜下可见肝细胞水肿、结构紊乱等组织损伤明显;与缺血再灌注模型组比较:转肾上腺髓质素基因组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶及肝组织丙二醛含量明显降低(P＜0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显升高(P＜0.01),显微镜下可见肝细胞水肿等组织损伤有所改善.免疫组化结果显示转肾上腺髓质素基因组腓肠肌中肾上腺髓质素表达上调.结果表明,转肾上腺髓质素基因对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化能力、降低肝酶渗出相关.     

自制多脏器保存液对大鼠睾丸一氧化氮合酶的影响

背景:在睾丸移植过程中,低温保存和缺血可导致睾丸产生氧自由基而损伤睾丸组织.目的:观察自制多脏器保存液对低温保存大鼠睾丸一氧化氮合酶的影响.方法:采用自制多脏器保存液和UW液低温保存大鼠睾丸,分别于保存24,48,72 h时切取睾丸,测定睾丸组织内的总抗氧化能力和一氧化氮合酶活性.结果与结论:自制多器官保存液低温保存各时点大鼠睾丸一氧化氮合酶活性和总抗氧化能力与UW液组比较差异均无显著性意义(P > 0.05).表明自制多脏器保存液能明显减轻低温保存大鼠睾丸氧自由基损伤,其作用与经典的美国威斯康星大学UW保存液基本相当.     

口服绿茶多酚对离体心脏的保护作用

目的:探讨口服绿茶多酚对离体心脏的保护作用。方法:16只SD大鼠,随机分为两组,实验组每天经胃管灌服5%绿茶多酚溶液40mL,对照组灌服生理盐水,20d后分别摘取心脏行离体灌注(Langendorff模型),测定心功能,然后灌注并保存于4℃UW保存液中,8h后取出,再行Langendorff灌注,再次测定心功能参数。测定再灌注后冠脉流出液中的乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;观察心肌超微结构。结果:除心率外,实验组各项心功能参数均优于对照组(P<0.05),心肌含水量、MDA低于对照组(P<0.05),冠脉流出量、心肌组织中SOD活性优于对照组(P<0.05),冠脉流出液中LDH、CK活性低于对照组(P<0.05);实验组心肌超微结构的损伤较对照组显著减轻。结论:口服绿茶多酚对大鼠离体心脏具有保护作用。     

Protection against liver injuries induced by low-temperature preservation with ulinastatin]

OBJECTIVE: To study whether ulinastatin has a protective role in cold preservation of liver and its mechanism. METHODS: To study the role of ulinastatin in protection of liver after cold preservation, the isolated rat liver with perfused either with cold perfusion fluid or perfused with cold perfusion fluid with ulinastatin. Liver tissue was harvested at 0, 12 and 24 hours after cold perfusion, and morphological changes were examined, alanine aminotransferase (ALT), lactate dehydrogenase (LDH), thoperoxidase (MPO), malondialehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) contents were also determined. RESULTS: ALT, LDH, MPO and MDA contents were significantly lower in ulinastatin group than those in the control group at 12 and 24 hours, and levels of ALT, LDH, MDA and MPO were increased along with prolongation of preservation time (all P<0.01), but SOD was higher in ulinastatin group than the control group and it was increased along with the prolongation of time (all P<0.01). Compared with ulinastatin group, the control group showed obvious pathological changes. CONCLUSION: Protective effect of UW solution used in clinic weakens gradually as cold preservation time is prolonged. Ulinastatin has protective effect on liver against cold preservation injury, and its effect is better than the simple UW solution. Its mechanism is related to inhibition of anti-oxidation and aggregation neutrophil's accumulation effect of ulinastatin.     

肝损伤酶活性联合检测在肝胆疾病诊断中的相关分析

目的探讨肝损伤酶活性联合检测在肝胆疾病诊断中的临床意义。方法对健康对照组36例和各类肝胆疾病组204例患者的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、腺苷脱氨酶、线粒体天门冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、5′-核苷酸酶活性进行测定与分析。结果肝胆疾病组丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、腺苷脱氨酶、线粒体天门冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、5′-核苷酸酶活性均高于健康对照组（P〈0．01）。结论肝损伤酶活性联合检测有利于肝胆疾病的鉴别诊断及疗效观察。     

缺血预处理大鼠自体肝移植后剩余肝细胞的凋亡和增殖

背景:肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞受到增殖和凋亡的双重调控.肝大部切除后,余肝经历缺血再灌注损伤,其肝再生受到明显抑制,缺血预处理可减轻此损伤,促进肝再生,其机制是否也与这有关,目前未见相关报道.目的:探讨缺血预处理对大鼠自体肝移植后余肝肝细胞凋亡和增殖的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-09/2007-07在中南大学湘雅医学院实验动物中心完成.材料:雄性SD大鼠144只,随机分为3组:单纯肝叶切除组、自体肝移植组、缺血预处理组,48只/组.方法:单纯肝叶切除组大鼠只行肝左、中叶切除,不阻断肝右、尾叶血流.自体肝移植组大鼠结扎切断肝后与食管腹段之间的静脉交通支,游离liberate尾状叶,游离第一肝门、肝上及肝下下腔静脉后,阻断并经门静脉持续低温灌注保存液,同时进行无血肝切除(切除肝左、中叶),肝脏在体持续低温灌洗15 min.解除肝门阻断,完全恢复肝脏血流.快速复温肝脏表面,并冲洗腹腔,缝合关腹.缺血预处理组大鼠在门静脉灌注前先阻断肝右、尾叶血流10 min,然后开放血流10 min,余步骤同自体肝移植组.各组大鼠分别于肝叶切除后0,1,3,6,12,24,48,72 h时取材.主要观察指标:生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶及天冬氨酸氨基转移酶的水平,流式细胞仪检测肝细胞凋亡指数,通过Ki-67抗原的表达检测肝细胞增殖情况.结果:与自体肝移植组比较,除肝叶切除后0 h 外,其余各时间点单纯肝叶切除组、缺血预处理组血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平均明显降低(P < 0.05).各组在肝叶切除后0 h(即正常肝组织)基本不存在凋亡细胞;单纯肝叶切除组肝大部切除后余肝肝细胞凋亡指数稍有升高;自体肝移植组复灌注后肝细胞凋亡指数急剧升高,约在12 h达到高峰,而后逐渐下降;与自体肝移植组比较,缺血预处理组肝细胞凋亡指数明显降低(P < 0.05).各组Ki-67表达率在肝叶切除后均明显升高,约在24 h达高峰,而后逐渐下降.与单纯肝叶切除组比较,自体肝移植组Ki-67表达率明显降低(P < 0.05);与自体肝移植组比较,缺血预处理组Ki-67表达率明显增高(P < 0.05).结论:缺血预处理可减轻自体肝移植后肝缺血再灌注损伤所致肝细胞凋亡,促进肝细胞增殖,这可能是其促进肝再生的机制之一.     

HTK液及Celsior液对长时间低温保存心肌保护作用的对比研究

目的比较不同种类心脏保存液对长时间低温保存心肌的保护作用。方法将36只雄性Wistar大鼠随机分成4组,即KH组、常规停搏液组（RCP组）、HTK组及Celsior组,每组9只,制作大鼠离体工作心脏模型。RCP组、HTK组及Celsior组分别采用常规心脏停搏液、HTK液及Celsior液低温保存心脏8h后,检测冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶同功酶含量及心肌组织形态学改变;KH组即刻恢复做功。结果低温保存心脏8h后,Celsior组冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶同功酶含量低于HTK组,HTK组明显低于RCP组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论细胞外液型心脏保存液Celsior液心脏保存效果优于HTK液及常规心脏停搏液。     

供肝灌洗液中内皮素-1与供肝质量关系的实验研究

目的探讨供肝冷保存后灌洗液中内皮素-1（ET-1）水平与供肝质量之间的关系，为供肝植入前评价供肝质量寻求一种可能的方法。方法建立大鼠肝移植的供肝切取的动物模型，切取供肝后0～4℃冷保存，测定冷保存0、4、8、12、16和20h后，肝脏灌洗液中ET-1、丙氨酸氨基转移酶（ALT）及天门冬氨酸氨基转移酶（AST）含量，取少许肝左中叶组织做病理学检查，观察供肝肝窦内皮细胞（SEC）超微结构变化。结果（1）在热缺血时间相同的情况下，大鼠供肝灌洗液中ET-1含量随冷保存时间延长逐渐升高，但是冷保存早期变化不明显（冷保存4h与冷保存0h组相比，P〉0.05），冷保存8h后有显著差异（与冷保存0h组相比，P〈0.01）。（2）ALT及AST水平随着冷保存时间的延长逐渐升高，但是冷保存早期上述指标变化不明显（冷保存8h、4h与冷保存0h组相比，P〉0.05），冷保存中晚期12h后有显著差异（与冷保存0h组相比，P〈0．01）。（3）随着保存时间的延长，肝窦内皮细胞发生明显的形态学的改变。结论大鼠供肝灌洗液中ET-1含量变化与肝窦内皮细胞形态学的改变明显相关，肝脏冷保存末期灌洗液中ET-1的含量可反映移植前肝窦内皮细胞的损伤程度及肝脏质量，对早期评价大鼠供肝质量有重要的价值。     

C3A细胞与L-02永生化肝细胞低温保存条件下的生物学特性比较

背景:获得大量功能良好的肝细胞是生物人工肝的核心。探索出一种可靠的肝细胞低温保存方法进而构建一个肝细胞库是目前生物人工肝研究的热点。目的:比较用UW液在4℃条件下保存已经进入Ⅲ期临床试验的C3A细胞与国内构建的永生化肝细胞株L-02细胞的生物学特性。方法:贴壁培养C3A与L-02细胞,胰酶消化,制备成细胞悬液,UW液保存。4℃低温保存0,24,48及72h后,采用流式细胞术分别测定细胞存活率与凋亡率,测定谷草转氨酶与乳酸脱氢酶释放、尿素合成功能及白蛋白分泌功能。结果与结论:随低温保存时间延长,C3A与L-02细胞存活率呈下降的趋势,但C3A细胞的存活率明显高于L-02细胞(P<0.01);细胞凋亡率呈上升趋势,但48h后C3A细胞同L-02细胞无差异(P>0.05)。谷草转氨酶及乳酸脱氢酶释放呈现上升的趋势,但C3A细胞明显低于L-02细胞(P<0.01)。白蛋白分泌功能呈下降的趋势,但C3A细胞明显优于L-02细胞(P<0.01)。尿素合成功能呈下降的趋势,但是L-02细胞明显优于C3A细胞(P<0.01)。结果提示,UW液4℃保存C3A细胞与L-02细胞时间不易超过48h。以C3A细胞为材料的人工肝可能更适用于肝功能衰竭合并低白蛋白血症,以L-02细胞为材料的人工肝更适用于肝功能衰竭合并肝性脑病。