CTHRC1基因在人肝癌中高表达并促进MHCC97L肝癌细胞的转移

目的：分析CTHRC1基因在人肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况及其对MHCC97L肝癌细胞转移能力的影响。方法：采用northem blot、RT—PCR和荧光定量PCR分析人肝癌组织和肝癌细胞株中CTHRC1 mRNA水平。构建包含CTHRC1基因编码框的真核表达载体pCMV-3Tag-CTHRC1，通过体外实验分析CTHRC1在MHCC97L细胞中过表达对MHCC97L细胞迁移、侵袭等转移能力的影响。结果：Northern blot、RT—PCR和荧光定量PCR结果显示，14例肝癌患者中11例存在癌组织CTHRC1 mRNA表达水平高于癌旁组织，8种肝癌细胞株中5种肝癌细胞株存在着CTHRC1的高表达。当CTHRC1过表达后，MHCC97L细胞的迁移及侵袭能力显著增强（P〈0．001）。结论：CTHRC1基因在人肝癌组织和人肝癌细胞株中存在着高表达，同时该基因可使肝癌细胞MHCC97L的转移能力明显增强，提示CTHRC1基因可能在肿瘤转移中起重要作用。     

肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达

背景与目的:NET-1是最近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道。本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度。用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达。结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达;肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28)。肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P<0.05)。(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆。(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P<0.05)。(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P<0.05)。结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值。     

Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析

目的:检测dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT-PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果:肝癌组织检测RT-PCR,10/15肝癌中高表达;Real-time PCR方法检测,8/8肝癌中高表达;Western blot方法检测,5/8肝癌中高表达。酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达,蛋白质表达量波动于5~210 ng/mL之间;10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到。结论:DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系,提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。     

肝细胞肝癌hTERT和PTEN基因表达与临床病理特征关系的研究

目的:研究hTERT和PTEN基因在肝细胞肝癌中的表达情况,探计其在肝细胞肝癌发生发展中的作用及意义.方法:应用免疫组化(SP法)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),同步检测78例肝细胞肝癌及对应癌旁组织和12例正常肝组织中hTERT蛋白和mRNA、PTEN蛋白和PTEN mRNA表达情况.分析hTERT和PTEN基因表达及肝细胞肝癌临床病理参数的关系.结果:hTERT蛋白主要定位于肝癌细胞胞质内,偶见核内染色.hTERT蛋白和mRNA在肝细胞肝癌中的阳性率分别为84.62％(66/78)和78.21％ (61/78),均高于癌旁肝组织的阳性率10.26％(8/78)和8.97％ (7/78),差异有统计学意义,P＜0.01.hTERT蛋白及其mRNA在12例正常肝组织均未见表达.PTEN蛋白明确定位于肝细胞胞质内.PTENmRNA和蛋白在肝细胞肝癌中的阳性率分别为41.03％ (32/78)和43.59％(34/78),明显低于癌旁肝组织的阳性率100.00％ (78/78),差异有统计学意义,P＜0.01.统计学分析显示,在肝细胞中hTERT基因的表达与肿瘤分期分级、门静脉有无癌栓、血清中甲胎蛋白表达水平、是否合并HBV感染等因素有关,P＜0.05;与患者年龄、性别、肿瘤大小等因素无关.相关分析显示,PTEN与hTERT在肝细胞肝癌中的表达呈负相关,P＜0.05.结论:hTERT和PTEN表达呈负相关,提示PTEN可能在肝细胞肝癌的发生发展过程中对hTERT的活化起着调控作用,其表达有望成为肝细胞肝癌的重要分子生物学指标.     

新基因pp3774的亚细胞定位以及在肝癌细胞系和组织中的表达谱研究

目的探讨新基因pp3774在肝癌细胞系、人肝癌及癌旁肝、肝硬化以及正常肝组织中的表达差异及其生物学功能.方法脂质体转染-荧光观察pp3774-GFP融合蛋白的亚细胞定位;合成新基因pp3774特异性多肽,制备兔源性多克隆抗体;用RT-PCR、蛋白印迹、免疫细胞化学及免疫组化方法检测pp3774基因在7个肝癌细胞系及214例肝细胞癌、18例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异.流式细胞术检测转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡率.结果 pp3774蛋白主要定位于细胞质(内质网为主);RT-PCR检测结果表明pp3774 mRNA在肝癌细胞系BEL-7402、Huh-7、MHCC-97L及HepG2中高表达,SMMC-7721、MHCC-LM3及人永生化肝细胞系L-02中度表达,而在Hep3B中低表达;肝癌及癌旁组织中pp3774 mRNA的表达表现为癌旁高于癌(P<0.05);免疫组化结果显示pp3774蛋白表达程度依次为正常肝≥肝硬化≥癌旁肝组织>肝癌.转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡发生率高于对照组约10%.结论 pp3774基因是一个具有抑制肝癌细胞生长功能的新基因.     

肝细胞癌组织中β-Catenin的表达与第三外显子突变的关系

背景与目的:广西南部是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)高发地区,也是粮食受黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)污染较重的地区.β-Catenin 的异常表达与多种肿瘤有关.而AFB1是诱发HCC的重要因素.本研究旨在探讨AFB1高暴露地区HCC患者癌组织中β-Catenin基因突变及表达情况.方法:用基因直接测序、RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测52例来自广西南部AFB高暴露地区HCC患者癌、癌旁组织和18例非肝癌肝组织中β-Catenin基因的表达.结果:癌组织中未见β-Catenin基因第三外显子的突变.β-Catenin mRNA 在癌、癌旁和正常肝组织中的表达分别为0.42±0.24、0.20±0.16和0.23±0.12,癌组织中的表达显著高于癌旁组织或正常肝组织(P＜0.01);免疫组化染色癌组织中阳性率为55.8%(29/52),显著高于癌旁组织[36.5%(19/52)](P＜0.05).β-Catenin蛋白表达与肝外转移、术后复发、门静脉癌栓和临床分期有关(P＜0.05),而mRNA的表达与上述临床参数均无明显关系(P＞0.05).结论:β-Catenin在HCC组织中高表达,但其异常表达不是由基因第三外显子上GSK-3β磷酸化位点的突变引起.     

肝细胞肝癌中T细胞转录因子4基因表达及突变

目的 :研究人T细胞转录因子 4(hTcf 4 )基因在肝细胞肝癌中表达及突变和肝癌发生发展的关系。方法 :用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 32例肝癌组织及癌旁组织中hTcf 4基因表达 ,并用聚合酶链反应 -单链构像多态性分析 (PCR SSCP)方法检测了肝癌组织中hTcf 4外显子 1、4、9、15的突变情况。结果 :hTcf 4mRNA在癌组织及癌旁组织中表达率分别为 90 .6 %和 71.9%。且癌组织中表达水平明显高于癌旁组织 [(0 .71±0 .13)vs (0 .2 9± 0 .0 5 ) ,P <0 .0 0 1]。同时 ,此基因在包膜不完整及有转移的癌组织表达增高更为显著。 32例肝癌中仅检测到 2例hTcf 4基因外显子 15突变 ,突变率为 6 .2 5 %。结论 :hTcf 4基因在肝细胞肝癌 ,尤其伴转移肝癌组织中表达增高 ,并与肝癌侵袭转移有关 ,而该基因突变与肝癌关系不密切。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂-1基因在卵巢肿瘤中的表达及突变的检测

目的:研究基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissueinhibitorsofmatreixmetalloproteinases,TIMP1)在卵巢肿瘤中的表达及突变情况。方法:RTPCR方法检测48例卵巢癌、21例良性卵巢肿瘤及22例正常卵巢组织中TIMP1mRNA的表达情况;利用人卵巢癌组织构建人TIMP1真核表达质粒并测序;聚合酶链反应单链构象多态性(PCRSSCP)分析技术检测卵巢恶性肿瘤、良性肿瘤和正常卵巢组织中TIMP1基因的突变。结果:TIMP1在各种卵巢组织中mRNA的表达并无差异;构建的真核表达质粒经测序含人TIMP1全长cDNA,于第6外显子处发生错义突变;卵巢恶性肿瘤中TIMP1基因的突变率为16.7%。结论:卵巢恶性肿瘤组织中有TIMP1基因突变存在;构建的TIMP1真核表达质粒,为下一步研究TIMP1在卵巢癌侵袭转移中的作用打下了物质基础。     

DFF45在肝细胞肝癌中的低表达及其临床意义

背景与目的:研究表明DNA裂解因子45(the DNA fragmentation factor 45,DFF45)在肿瘤细胞中表达异常与肿瘤细胞凋亡、分化、恶性表型密切相关.本研究探讨DFF45在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织、癌旁肝组织、正常肝组织、3种不同的肝癌细胞株、永生化的肝细胞株L02中的表达,并分析其与肝癌患者临床参数的相关性.方法:采用免疫组化、Western blot及RT-PCR检测35例HCC组织及相应癌旁组织、10例正常肝组织中DFF45蛋白及mRNA表达;Western blot、RT-PCR检测肝癌细胞株QGY-7701、SMMC-7721、HepG2及永生化的肝细胞株L02中DFF45蛋白及mRNA表达.结果:免疫组化显示DFF45在HCC组织、癌旁组织、正常肝组织阳性率分别为48.6％ (17/35)、77.1％(27/35)和90％ (9/10),HCC组织中DFF45蛋白表达明显低于癌旁及正常组织(P＜0.05).DFF45蛋白的表达与肿瘤大小、病理分级相关.Western blot检测进一步验证了该免疫组化结果.RT-PCR结果显示,DFF45 mRNA在HCC组织中表达(0.453±0.111)同样低于癌旁组织(0.518±0.094)及正常肝组织(0.535±0.112),差异有统计学意义(P＜0.05).DFF45蛋白及mRNA在3种肝癌细胞株中表达均低于永生化的细胞株.结论:DFF45在HCC组织及肝癌细胞系中呈低表达,可能参与了肝癌的发生发展,并有可能成为肝癌治疗的新靶点.     

PNMA5基因在肝癌组织中的表达及功能研究

目的:研究功能未知基因PNMA5在肝癌组织中的表达及其与肝癌细胞生长的关系;方法:利用肝癌基因表达谱数据研究发现PNMA5基因在肝癌组织中高表达.采用RT-PCR及实时荧光定量-PCR(real-time fluorescemt quantitative PCR,RFQ-PCR)方法检测PNMA5在人类正常组织以及肝癌组织和癌旁组织中的表达水平;利用RNA干扰技术沉默肝癌细胞株(Focus和PLC)内PNMA5基因的表达;CCK-8实验定量分析内源性PNMA5基因被沉默前后的Focus和PLC细胞生长曲线的变化.结果:在14种人正常组织中,PNMA5只在睾丸、卵巢和脑组织中高表达,PNMA5基因在42%(5/12)的肝癌组织中有明显的上调(与癌旁组织比大干2倍以上,P＜0.05).沉默肝癌细胞株Focus和PLC中内源性PNMA5基因表达后.2种肝癌细胞的生长均受到明显的抑制(P＜0.01),同时,从G1期进入S期细胞明显减少(P＜0.01).结论:PNMA5在维持肝癌细胞恶性表型过程中可能起到重要的作用,可能是一个新的肿瘤一睾丸相关基因.进一步研究其功能有可能发现肝癌发病的新机制,成为肝癌治疗的新靶点.     

The Clinicopathologic Significance of BAF250a (ARID1A) Expression in Hepatocellular Carcinoma

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common and lethal human cancers. Recently, exome sequencing has revealed that mutation of ARID1A is frequent in HCC. Herein, we determined the clinicopathologic significance of ARID1A expression in HCC. We detected the level of mRNA and protein expression of ARID1A in 12 paired HCC tumors and adjacent non-cancerous tissues by quantitative real-time PCR and immunohistochemistry (IHC). In addition, we determined the expression of BAF250a on 121 HCC tumors by IHC and assessed the association between BAF250a expression and clinicopathologic and prognostic features. The levels of ARID1A mRNA were significantly elevated in 10 of 12 HCC tumors compared with adjacent non-cancerous tissues. The level of BAF250a protein expression was higher in 10 of 12 HCC tumors compared with adjacent liver tissues. IHC indicated that 12.17 % of HCC tumors (14/115) were BAF250a-negative. Loss of BAF250a was significantly associated with larger tumor size, but not associated with other clinicopathologic features. There was no significant difference in disease-free or overall survival between BAF250a-positive and BAF250a-negative patients. Most HCCs had an increased level of ARID1A mRNA and BAF250a expression. Loss of BAF250a was significantly more frequent in larger HCC tumors, but had no prognostic significance.     

MiR 142 5p通过靶向IGF2BP3调控多柔比星诱导的肝癌细胞凋亡

目的:探讨miR-142-5p对多柔比星诱导的原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:收集广西医科大学附属肿瘤医院88例HCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织(距癌灶组织边缘2～5cm)标本.采用实时荧光定量PCR检测人HCC组织和癌旁组织、人正常肝细胞以及HCC细胞系中miR-142-5p的表达量.向HCC细胞SMMC-7721中转染miR-142-5p mimics,流式细胞术检测过表达miR-142-5p后SMMC-7721细胞在多柔比星(doxorubicin)(1 μg/ml)诱导下凋亡的变化;生物信息学方法预测miR-142-5p可靶向结合胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(in-sulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证.采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测过表达miR-142-5p的SMMC-7721细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达情况.结果:与癌旁组织和正常肝细胞相比,HCC组织(-6.91±2.61vs-11.59±2.59,P＜0.01)和多种HCC细胞系中miR-142-5p呈明显低表达(均P＜0.01);过表达miR-142-5p可显著促进多柔比星诱导的HCC细胞SMMC-7721的凋亡[(49.40±3.47)％ vs (19.50±1.74)％,P＜0.01];过表达miR-142-5p可明显降低HCC细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达水平(P＜0.01),敲减IGF2BP3表达可进一步促进多柔比星诱导的SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01).荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-5p能够抑制IGF2BP3的3'UTR荧光素酶报告基因的活性.结论:miR-142-5p在HCC组织标本和体外培养细胞系中的表达水平均显著降低,转染miR-142-5p mimics后能够促进多柔比星诱导的HCC细胞的凋亡,其机制可能与miR-142-5p靶向作用IGF2 BP3从而促进HCC细胞凋亡有关.     

RhoC基因的过量表达与肝细胞癌的侵袭转移

目的　研究探讨RhoC基因mRNA和蛋白的过量表达与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹法 ,检测 2 5例HCC及其癌旁肝组织、4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA和蛋白的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SSCP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果　HCC组织和癌旁肝组织中均可检测到RhoC基因mRNA和蛋白的表达 ,RhoCmRNA在HCC组织中的表达较癌旁肝组织高 ,其吸光度(A)比值分别为 1.8± 1.1和 1.0± 0 .7,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;RhoC蛋白在HCC组织中的表达同样高于癌旁肝组织 ,其A比值分别为 33992± 10 384和 17342± 9998,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoC基因mRNA和蛋白的表达量分别为 3.3± 0 .5和 6 386 5±9116 ,较HCC肝内病灶高 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;RhoCmRNA和蛋白在分化较差、结节数较多、有静脉浸润或伴有肝外转移灶的HCC中过量表达 (P <0 .0 5 )。全部HCC经PCR SSCP银染法分析均未发现异常泳动条带。结论　RhoC基因的过量表达与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过过量表达而非突变发挥作用。     

金属蛋白酶抑制基因RECK在肝细胞癌中的表达及生物学意义

目的探讨金属蛋白酶抑制基因RECK在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达及其临床意义。方法用实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）技术和免疫组化方法分别检测61例HCC、癌旁组织及18例正常肝组织中RECK mRNA和蛋白表达情况。结果 RECK mRNA在HCC中表达水平（0.0269±0.0026）低于癌旁肝组织（0.0378±0.0031,P〈0.05）。RECK蛋白在HCC组织中阳性表达率（59.0%）也显著低于癌旁肝组织（78.7%,P〈0.05）。RECK在HCC组织中的阳性检出率与肿瘤大小、是否复发、有无门脉癌栓、肿瘤有无完整包膜等临床因素显著相关（P〈0.05）,而与年龄、性别、有无肝硬化、乙肝表面抗原、AFP水平等无关。对61例患者的随访资料进行生存分析显示,RECK阳性组3年生存率83.9%,明显高于RECK阴性组52.1%（P〈0.05）。结论 RECK可能参与HCC的发生发展,有可能成为预测HCC浸润与转移的参考指标。     

Talin1, a valuable marker for diagnosis and prognostic assessment of human hepatocelluar carcinomas

Background/Aims: Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most lethal and prevalent cancers in the human population. Despite its significance, there is only limited understanding of pathological mechanisms and therapeutic options. Talin1, a focal adhesion complex protein that is required for cell adhesion and motility, regulates integrin interactions with extracellular matrix (ECM). In the present study, we aimed to study the possible role of Talin1 in diagnosis and prognosis of HCC. Methods: Expression of Talin1 protein was detected in normal liver tissues (n=10), HCC tissues (n=32) and adjacent non-cancerous tissues (n=32) by immunohistochemistry and real time PCR. Results: While Talin1 was observed in all tissues, the protein and mRNA expression of Talin1 in HCC tissues was significantly lower than that in the adjacent non-cancerous tissues and normal liver tissues(P<0.05). In addition, the expression of Talin1 in HCCs was significantly correlated with pathological differentiation, integrity of the tumor capsule, portal vein tumor thrombus and tumor size (P<0.05). Conclusions: Talin1 is possibly involved in the process of the carcinogenesis, infiltration and metastasis of HCC and has potential as a marker for diagnosis and prognostic assessment.