食管鳞状细胞癌p53基因突变与p53蛋白过度表达的关系

p53基因是各种人类肿瘤包括食管癌中最常见有突变的基因之一。我们应用激光显微切割,聚合酶链反应（PCR）-杂合性缺失（LOH）,PCR-单链构象多态性分析（SSCP）,p53测序及免疫组织化学方法,检测了食管癌高发区中国山西省的56例患者食管鳞状细胞癌（ESCC）中p53基因缺失、突变及p53蛋白表达情况,旨在更好理解p53基因突变等变化在食管癌发生发展过程中的作用。     

食管鳞状细胞癌p53基因突变及其蛋白表达

食管鳞癌常伴有ｐ５３基因突变和（或）ｐ５３蛋白积聚。文献报道ｐ５３基因改变与ｐ５３蛋白积聚常出现不一致的现象〔１，２〕。我们应用ＰＣＲＳＳＣＰ及免疫组化方法探讨食管鳞癌ｐ５３基因突变与ｐ５３蛋白表达的关系。１　材料和方法１１　材料　取食管癌新鲜组织３０例，同一标本分为２份，１份按常规方法提取ＤＮＡ，另１份经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。１２　ＰＣＲＳＳＣＰ〔３〕　ＰＣＲ常规扩增反应后，取１０μｌＰＣＲ产物与等量电泳缓冲液混合，９６℃变性５ｍｉｎ后立即置冰浴，电泳后，凝胶经固定、银染、…     

广东省潮汕地区食管鳞状细胞癌中p53蛋白的表达

采用ＣＭ－１和ＤＯ－７一抗的免疫组化法，检测了广东省潮汕地区５５例食管鳞状细胞癌中的ｐ５３蛋白 表达的现象。ｐ５３蛋白阳性细胞不但可在呈浸润生长的肿瘤细胞中见到，而且在已具有浸润癌巢ｐ５３蛋白表达的肿瘤癌旁浸润前病变如上皮高度增生，异型增生和原位癌中可出现。     

人卵巢癌P53基因突变与缺失的研究

采用聚合酶链式反应－单链构型多态分析，对１７例原发性卵巢癌组织Ｐ５３基因外显子４－８进行了检测。结果检出突变５例，等位基因丢失５例，各占２９．４％。对１例突变测序分析发现单个碱基置换，导致提前产生１个终止密码。     

肝细胞癌病人中p53基因突变状况探讨

目的 了解肿瘤抑制基因p53在肝细胞癌中的突变情况,探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染与p53基因突变之间的关系。方法 提取50例有乙型肝炎病毒感染史肝癌患者手术样本中的DNA,用聚合酶链式反应（PCR）扩增5－9外显子,作单链构象多态性（SSCP）分析。结果 p53基因突变率超过26％,突变主要分布于5－8外显子,5、6、7、8外显子分别有3、3、4、3例,另仍4个可疑突变。结论 p53基因突变可能是肝细胞癌的病因之一,而乙型肝炎病毒感染在中国肝癌患者p53基因突变中可能起到比较重要的作用。     

胃癌p53基因突变与微卫星DNA不稳定性关系的研究

目的 探讨术前不同分期的胃癌ｐ５３基因突变与微卫星ＤＮＡ不稳定性（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ,ＭＳＩ）的变化及其相互关系。方法 应用超声内境（ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｙ,ＥＵＳ）对７３例胃癌患者行术前分期,同时采用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测仙镜活检组织标本ｐ５３基因突变及ＭＳＩ。结果 ｐ５３基因总突变率为５４．８％;Ｔ３期（６４．３％）和Ｔ４期     

吸烟与肺癌p53、K-ras基因突变关系及性别差异的研究进展

吸烟与肺癌p53、K-ras基因突变密切相关,基因突变以G→T颠换为主。性别差异在吸烟所诱导的肺癌p53和K-ras基因突变是否存在易感性的不同,存在不同的观点,但多数人从基因水平上认为女性更容易易感吸烟所致肺癌。对吸烟与肺癌基因突变关系及性别差异的研究,可筛选出易感者,以利于劝其戒烟并可对其进行重点随访,达到降低肺癌发病率的目的。     

p53蛋白结构和生物功能

ｐ５３具有抑癌和致癌的两种作用，关键在于生物功能得失。野生型ｐ５３限制细胞增殖，与细胞凋亡相关，能与病毒癌蛋白结合，抑制转化细胞和癌细胞的恶性表型。肿瘤细胞的ｐ５３基因点突变、缺失、重排或插入。突变型ｐ５３基因与其它癌基因合作转化细胞，而野生型ｐ５３基因能够抑制细胞转化。     

不同年龄段食管鳞状细胞癌中p53蛋白表达及预后意义

目的 探讨在不同年龄段食管鳞状细胞患者中p53蛋白表达与预后的相关性.方法 收集2007～2010年复旦大学附属中山医院未接受新辅助放、化疗的食管鳞状细胞癌根治标本536例,制作组织芯片检测p53的表达,分析其在不同年龄段患者中的预后意义.结果 536例食管鳞状细胞癌中,57.3％的患者≥60岁,男女比为4.5:1.p...     

肝癌组织中N—ras基因突变和p53蛋白表达

目的：研究Ｎ－ｒａｓ和ｐ５３基因与肝癌发生，发展的关系。方法：应用多聚酶链反应－单链构象多态性分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和免疫组化法，检测２９例肝癌中的Ｎ－ｒａｓ基因突变和ｐ５３蛋白的表达。结果，１３例肝癌ｐ５３蛋白阳性（４４．８％），表明广西地区肝癌中曾普遍存在ｐ５３基因的突变，肝癌及癌旁组织中Ｎ－ｒａｓ基因在第２～３７密码子间的突变率分别为７９．３１％和８０．７７％，２２例有２个以上突变位点（     

p^53基因与Rb基因在卵巢癌组织中突变的初步分析

为了解卵巢癌组织中抗癌基因Ｐ＾５３与Ｒｂ基因的突变情况，我们把ＰＣＲ单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术及ＰＣＲ－ＤＮＡ直接测序方法应用于５７例卵巢癌组织细胞的检测，结果发现ｐ＾５３基因可能的突变率为３２％，Ｒｂ基因可能的突变率为２１％，不同分化程度肿瘤的Ｐ５３及Ｒｂ基因突变率未见明显区别，结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ角染技术是筛查基因突变简便，敏感，无核素污染的最佳方法，而ＰＣＲ－ＤＮＡ直接测序仪     

胃癌及胃液中p53、ras基因突变与临床病理的关系

目的：探讨胃良性病变向恶性转化过程中p53、ras基因突变的规律，并分析胃癌无损伤基因检测的可行性。方法：应用PCR－SSCP及免疫组织化学方法对比研究。结果：异型增生p53基因突变率10％（3／30）、ras基因突变率10％（3／30）、ras基因突变率16．7％（5／30）（二者总突变率26．7％）；早期胃癌p53基因突变率35％（7／20）、ras基因突变率60％（12／20）（二者总突变率85％，其中2例重复突变）； 中晚期胃癌p53基因突变率60％（18／30）、ras基因突变率43．3％（13／30）（二者总突变率90％，其中4例重复突变）；胃息肉ras基因突变仅1／10。30例胃溃疡边缘正常黏膜均未发现p53、ras基因突变。p53基因突变的25例胃癌的胃液中其相应的突变率32％（8／25）。19例胃癌患者的胃液中9例有ras基因突变47．1％（9／19）。异型增生p53蛋白过度表达阳性率13．3％（4／30),p^21ras蛋白阳性率16．7％（5／30）。胃癌p53蛋白阳性率56％（28／50），p^21ras蛋白阳性率60％（30／50）。正常胃黏膜上皮、溃疡边缘正常黏膜及胃息肉均呈p53及ras蛋白阴性表达。结论：胃癌的发生发展与癌基因ras与抑癌基因p53的突变有关，且两种基因同时检测，可覆盖绝大多数胃癌病例，提高了本项技术的可靠性，提供了胃癌无损伤基因检测的可行性的实验证据。     

肺鳞状细胞癌中p53蛋白表达及p53基因突变的检测

目的 通过检测肺鳞状细胞癌及癌旁组织中Ｐ５３蛋白积聚及相同癌组织中Ｐ５３基因的突变，探讨Ｐ５３蛋白积聚及Ｐ５３基因突变在肺鳞癌发病中的意义。方法 采用免疫组化和银染－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测１２０例肺鳞癌及癌旁肺组织中Ｐ５３蛋白的状况及相同鳞癌组织中，Ｐ５３基因５、６、７、８外，显子突变的情况。结果 Ｐ５３蛋白了性率为５２．５％，Ｐ５３基因突变率为５６．７％，突变便数在第５、６、７、８外显子的分布     

大肠腺癌p53基因cDNA突变与突变型p53基因蛋白表达的相互关系和意义

目的：探讨大肠腺癌突变型ｐ５３基因蛋白表达与ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变间的相互关系和意义。方法：对１００例新鲜大肠腺癌组织采用ＰＡｂ２４０单克隆抗体免疫组织化学染色（ＬＳＡＢ法）检测突变型ｐ５３基因蛋白表达、ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变，并比较它们间相互关系。结果：１００例大肠腺癌中，７６例ＰＡｂ２４０单抗阳性（７６％），５１例ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变阳性（５１％）；ＰＡｂ２４０单抗反应与ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变比较，两者皆阳性４９％，两者中一者阳性２９％，两者皆阴性２２％（Ｐ＜０．０００１）。结论：ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变与其基因蛋白产物结构改变高度吻合，大肠腺癌ｐ５３基因ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ）突变是参与和影响突变型ｐ５３基因蛋白结构改变和生物学行为的主要因素     

Ⅲ期鼻咽癌p53蛋白表达与生物学行为及预后的关系及其与p53基因突变、潜伏膜蛋白-1表达的相关研究

目的：探讨Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中P53蛋白的表达与生物学行为及预后的关系,以及P53蛋白表达与P53基因突变和潜伏膜蛋白（LMP）－1蛋白表达的关系。方法：应用免疫组织化学EnVison法和聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测58Ⅲ例鼻咽分化型非角化性鳞癌标本。结果：58份Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌中,P53蛋白总阳性率为65．5％（3858）,生存期在5年以下的患者阳性率为82．1％（32／39）,5年以上患者31．6％（6／19）,两组间P53蛋白表达差异有显著性意义（P＜0．05）,P53蛋白表达在有预底侵袭组为74．4％（29／39）,无颅底侵袭组为47．4％（919）,两组间差异有显著性意义（P＜0．05）,PCR－SSCP检测15例P53蛋白阳性的病例,P53基因5－8外显子突变率为0（0／15）,LMP－1蛋白免疫组织化学总阳性率为72．4％（42／58）,与P53蛋白表达呈正相关关系（r=0.504)。结论：本组Ⅲ期鼻咽分化型非角化性鳞癌患者中P53蛋白表达与P53基因突变无相关关系。与LMP－1蛋白的表达相关,P53蛋白的表达阳性率随着患者生存期的延长而降低,有颅底侵袭组P53蛋白表达阳性率高于无颅底侵袭组。     

食管和贲门癌原发病灶和淋巴结转移灶p53蛋白聚集变化的相关性研究

目的：通过对食管和贲门癌原发病灶和淋巴结转移病灶肿瘤抑制基因ｐ５３变化规律的研究，加深对食管和贲门癌转移发生的分子学基础的了解。方法：采用组织病理学和免疫组织化学（ＡＢＣ）方法，对３１例手术切除的食管和贲门癌原发病灶和转移病灶肿瘤抑制基因ｐ５３蛋白聚集进行比较研究。结果：３１例手术标本中，病理检查发现２４例食管鳞状细胞癌，７例为贲门腺癌。研究表明：２４例食管原发和转移鳞癌中，１１例原发和转移病灶中均出现ｐ５３蛋白聚集的变化，原发和转移病灶的一致性变化发生率为６１％（１１／１８）；在６例原发病灶ｐ５３免疫组化阴性患者中，其淋巴结转移病灶也同时出现免疫阴性反应。在７例胃贲门腺癌中，３例原发和转移病灶同时出现ｐ５３免疫阳性表达的一致率为５０％（３／６）；１例原发病灶ｐ５３免疫组化阴性患者，其淋巴结转移病灶也出现阴性反应。结论：肿瘤抑制基因ｐ５３在食管和贲门癌癌变和转移中起一定的作用。可能是食管和贲门癌侵袭与转移过程中值得重视的生物学指标之一。     

胃腺癌伴神经内分泌分化的幽门螺杆菌感染与p53蛋白表达

目的：探讨幽门螺杆菌（HP）感染、p53蛋白表达与胃腺癌伴神经内分泌（NE）分化之间的关系。方法：应用免疫组织化学EnVision法和组织化学方法,对60例胃腺癌的NE分化、HP感染和p53蛋白表达结果作对照研究。结果：60例胃腺癌中,NE分化伴发率为58．3％,HP感染率为35．0％,p53蛋白阳性率为68．3％。在胃癌肠型组中,HP感染率和p53蛋白阳性率高于弥漫型组（P＜0．05）。在伴NE分化的胃癌组中,HP感染率高于不伴NE分化组（P＜0．05）。结论：胃腺癌伴NE分化与HP感染有关：HP感染和p53基因高表达在肠型胃癌的发生中起重要作用。     

Single-step DGGE-based mutation scanning of the p53 gene: Application to genetic diagnosis of colorectal cancer

We present a simple nonradioactive assay based on polymerase chain reaction (PCR) in combination with denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), which allows comprehensive mutation scanning of the entire coding sequence and splice junctions of the p53 gene in one analytical step. The key features of the present method are (1) all fragments can be amplified using one common PCR protocol; (2) all fragments can be scanned for mutations on a single “broad-range” denaturing gradient gel; and (3) all fragments were tailored by the attachment of appropriate GC clamps and otherwise manipulated to consist of only two melting domains in order to maximize resolution of mutations by DGGE. The entire procedure starting with a sample of genomic DNA can be completed within 6 hr and has the potential to detect any sequence variation, irrespective of its location in the p53 gene. The mutation detection sensitivity was demonstrated by the analysis of 26 constructed control mutations distributed over the whole of the p53 gene. We have applied the method to genetic diagnosis in 43 cases of colorectal cancer. Overall, a point mutation, microdeletion, or microinsertion was found in 26 (61%) of the tumors. In addition to missense and frameshift mutations within exons 4–8, a 20-bp insertion in exon 11 was found in one sample, illustrating the importance of comprehensive gene scanning for reliable diagnosis. Hum Mutat 9:348–355, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

胃癌p53、nm23和EGF-R蛋白表达与临床病理特征的关系

目的：探讨ｐ５３、ｎｍ２３和ＥＧＦ－Ｒ蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系。方法：运用免疫组织化学方法研究５７例胃癌、２０例异型增生和２０例肠上皮化生和１０例正常胃粘膜ｐ５３、ｎｍ２３和ＥＧＦ－Ｒ蛋白的表达。结果：正常胃粘膜三种蛋白均阴性，肠上皮化生ｐ５３和ｎｍ２３均未表达，而ＥＧＦ－Ｒ阳性率为５％。异型增生和胃癌组织中ｐ５３阳性率分别为１５％和５４．４％；ｎｍ２３阳性率分别为５％和６３．２％；ＥＧＦ