分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型细胞中水通道蛋白-4的表达

目的观察经分离纯化的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白-4(AQP4)的表达。方法对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化，绎过特殊染色及电镜鉴定，用免疫细胞化学及免疫电镜方法检测水通道蛋白-4存该单细胞上的表达。结果大鼠肺泡Ⅱ型细胞免疫细胞化学水通道蛋白1—4呈强阳性，免疫电镜结果细胞膜上可见高电子密度阳性反应。结论水通道蛋白-4存存于分离的大鼠肺泡Ⅱ型细胞膜上，对呼吸系统水转运可能起到重要作用。     

ARDS状态下大鼠肺泡Ⅱ型细胞水通道蛋白1表达的变化

目的观察大鼠ARDS状态下Ⅱ型细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的变化,为ARDS发病机制的研究提供新的实验和理论依据。方法运用免疫组化、Western bloting和图像分析技术,对正常大鼠和ARDS大鼠Ⅱ型细胞AQP1的表达水平进行对比观察,分析变化。结果Western blot分析显示ARDS大鼠肺泡Ⅱ型细胞AQP1蛋白条带较对照组明显减弱,免疫组化及Western blot经图像分析结果为ARDS状态下Ⅱ型细胞上水通道蛋白1的表达较对照组有明显的下降(P<0.05)。结论AQP1对呼吸系统水转运可能起到重要作用。     

ARDS状态下大鼠肺泡II型细胞水通道蛋白1表达变化的研究

[摘要] 目的　观察大鼠ARDS状态下II型细胞(水通道蛋白1)AQP1表达的变化,为ARDS发病机制的研究提供新的实验和理论依据。方法　运用免疫组化、Western Bloting和图像分析技术,对正常大鼠和ARDS大鼠II型细胞AQP1的表达水平进行对比观察,分析变化。结果　Western blot分析显示ARDS大鼠肺泡II型细胞AQP1蛋白条带较对照组明显减弱,免疫组化及Western blot经图像分析结果为ARDS状态下II型细胞上水通道蛋白1的表达较对照组有明显的下降。结论　ARDS状态下肺泡II型细胞AQP1的表达较对照组有显著的下降（P<0.05）,提示AQP1对呼吸系统水转运起到重要作用。     

急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA表达

目的 研究急性大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道各亚基的表达.方法 20只健康SD大鼠,对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测ENaC三个亚单位α、β、γmRNA水平.结果 急性分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞ENaC三个亚单化均有表达,其中α-业基mRNA表达最强,显著高于β-和γ-业基,β-和γ-亚基mRNA表达无显著性差别.结论 大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道在DNA水平上表达以α-亚基为主,α-亚基在肺水清除中起主要作用.     

大鼠眼组织中水通道蛋白-4的表达

目的:观察水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠眼虹膜睫状体及视网膜组织中的分布.方法:取6只正常 Wist-ar大鼠眼组织切片,行免疫组织化学染色,光镜下观察AQP4的分布.结果:睫状体上皮细胞AQP4呈阳性表达,睫状体及虹膜内血管内皮细胞均有AQP4阳性表达.视网膜内核层及神经节细胞层也可见AQP4阳性表达.结论:AQP4在大鼠睫状体上皮细胞及视网膜内核层、神经节细胞层分布,可能参与房水调节及神经节水代谢功能调节.     

ARDS大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化及电镜下特征

目的观察急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的改变。方法建立大鼠油酸性ARDS模型,对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,电镜鉴定并观察其超微结构的变化。结果电镜下ARDS大鼠Ⅱ型上皮细胞胞浆内板层小体排空明显而致空泡化,细胞分离后IgG免疫黏附方法纯化可使纯度提高15%。结论先分离纯化细胞再进行电镜观察更易观察到Ⅱ型细胞的形态学改变,从板层小体的变化最为突出可观察到肺泡Ⅱ型上皮细胞在ARDS中的重要作用。     

大鼠结肠中水通道蛋白4的表达与分布

目的: 研究水通道蛋白4(AQP4)在大鼠结肠中的蛋白表达和分布. 方法: 选用成年健康SD大鼠,采用免疫组织化学对结肠近段和远段中AQP4的表达进行定位检测. 结果: 结肠全段均有AQP4的表达,近段的表达水平高于远段;AQP4阳性细胞主要分布在黏膜的顶端,以吸收细胞为主,杯状细胞无表达;AQP4主要位于细胞膜上,以基底侧为主. 结论: AQP4在结肠中的表达及其空间上的分布提示其参与了结肠的水吸收功能.     

大鼠油酸性急性肺损伤初期水通道蛋白4在肺水代谢的实验研究

目的 测定油酸造成急性肺损伤(ALI)初期损伤程度及肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)上水通道蛋白4(AQP-4)的表达量以评估病理状态下ATⅡ细胞水通道水转运能力的状况.方法 血气分析、观察肺组织病理学、用重力法测定血管外肺水(EVLW)含量检测早期肺损伤的程度;急性分离纯化大鼠油酸ALI模型的ATⅡ细胞,显微镜及电子显微镜观察形态病理变化:免疫组化了解肺组织AQP-4的表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的m-RNA表达的情况.结果 血气分析、光镜下肺损伤评分及EVLW油酸组严重程度显著高于对照组,显微镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞的数量较对照组无明显减少,但电镜下细胞的超微结构改变,板层小体排空,线粒体损伤等改变;肺组织免疫组化观察到AQP-4明显表达增强,肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的m-RNA表达增多,AQP-4由胞浆向胞膜转运,胞膜的表达增多(P<0.05).结论 在肺损伤初期就有了肺损伤水肿的病理生理的改变,AQP-4在肺泡Ⅱ型上皮细胞上m-RNA及细胞膜的表达上调.很大程度调节肺泡腔及肺泡上皮细胞的水转运,在钠通道功能下降的情况下发挥了重要的代偿作用.     

急性分离的肺泡Ⅱ型细胞的钠转运及调节

目的观察急性分离的肺泡Ⅱ性细胞全细胞钠电流及调节特性。方法应用膜片钳技术全细胞记录模式记录分离后5h内的大鼠ATII的全细胞钠电流,并观察阿米洛利和特布他林对其的影响。结果可以记录到阿米洛利敏感性钠电流,应用特布他林后电流明显增大。结论可以利用急性分离的ATII细胞进行钠通道电生理研究,为病理状态下的研究开拓了新的视野。     

脑出血脑组织中水通道蛋白4的极性表达缺失

目的：观察脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）大鼠脑组织中水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的极性表达变化情况,以初步探讨其在出血性脑水肿中的作用。方法：SD大鼠随机分为sham组和ICH组,采用自体血注入法建立大鼠ICH动物模型,应用核磁共振成像检测血肿产生及发展情况,干湿重法检测脑水含量变化以及免疫荧光检测AQP4的极性表达变化情况。结果：ICH后1 d,血肿体积最大,脑水含量达到峰值,高达（79.769±0.710）%,差值具有统计学意义（P=0.000）;血肿周围组织中AQP4极性表达缺失,AQP4表达在星胶细胞胞体和突起上,而sham组中AQP4则极性表达在星胶细胞终足膜上。结论：ICH后血肿周围组织中AQP4极性表达缺失,后者可能促进了出血性脑水肿的发生。     

戊四氮点燃大鼠海马水通道蛋白4 和水通道蛋白9的表达

目的:观察戊四氮点燃癫(癎)大鼠海马中水通道蛋白4 (AQP4)和水通道蛋白9 (AQP9)表达的变化,探讨它们在癫(癎)发生发展中的作用.方法:SD大鼠35只,随机分为对照组5只、生理盐水组5只及实验组25只.实验组大鼠腹腔注射戊四氮,制备戊四氮点燃癫(癎)大鼠模型;生理盐水组腹腔注射相应剂量生理盐水;对照组未做处理.实验组大鼠分别于癫(癎)持续发作后3 h、6 h、12 h、24 h和3 d,各取5只大鼠脑组织,免疫组织化学SP法进行AQP4、AQP9检测.结果:实验组大鼠AQP4和AQP9蛋白主要分布于海马CA1、CA3区的锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层和多形细胞层;癫(癎)持续状态3 h时,实验组大鼠海马AQP4和AQP9蛋白表达降低,6 h时增大至正常水平,而后逐渐增强,至24 h达高峰,再逐渐降低,至3 d时恢复至正常水平.结论:AQP4和AQP9与癫(癎)的发生发展关系密切.     

肺泡Ⅱ型细胞凋亡在急进高原大鼠早期肺损伤中的作用

目的观察、探讨肺泡Ⅱ型细胞凋亡在急进高原大鼠肺损伤中的作用与意义。方法 60只wistar大鼠急进高原后,随机分高原1、3、7 d组,经处理,观察大鼠肺组织大体形态变化;H-E染色,显微镜观察肺组织学变化,电镜观察肺组织超微结构的变化。结果光镜下,大鼠肺组织出现了明显的炎症反应,肺泡壁毛细血管充血水肿,肺泡腔内有大量炎细胞;电镜下,肺泡上皮细胞凋亡明显。实验组形态学损伤重于对照组,且细胞凋亡率高于对照组,两者存在统计学差异（P〈0.05）。结论急进高原大鼠Ⅱ型细胞凋亡可能是引起高原急性肺损伤的原因之一,推测凋亡可能导致肺水转运障碍、钠水潴留而引发肺损伤。但其肺水转运障碍引发肺损伤的作用机制还有待于进一步研究。     

颅脑损伤后脑组织中水通道蛋白4表达的变化

目的研究颅脑损伤后水通道蛋白4（AQP-4）在脑组织中表达的变化及其临床意义。方法对27例颅脑损伤患者行开颅手术,将术中取得的挫伤水肿脑组织（损伤组）和颞极减压获得的相对正常脑组织（对照组）进行AQP-4的免疫组化和re-al- time PCR检测。结果损伤组各时点挫伤水肿脑组织AQP-4的表达量均明显高于对照组（均P＜0.05）;损伤24h后周围水肿脑组织中的AQP-4表达量显著升高。结论颅脑损伤后脑水肿的形成和发展与AQP-4的异常表达密切相关。     

脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的机制研究

目的 研究脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)凋亡的机制.方法 体外原代培养的AT-Ⅱ分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24 h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测.结果 LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P《0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P《0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P《0.0s).结论 Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-Ⅱ细胞凋亡的重要途径.     

水通道蛋白-4在大鼠消化器官的表达与分布

目的探讨水通道蛋白-4在SD大鼠消化器官的表达与分布。方法动物麻醉处死后取胃、空肠、回肠、结肠、直肠、胰腺和肝脏等器官,常规进行脱水、固定、石蜡包埋、切片（4μm）后以链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（SABC）检测水通道蛋白-4蛋白在上述组织中的表达。结果AQP4在正常SD大鼠消化道中的表达和分布具有选择性：食管和胃的上部基本不表达AQP4。从胃的中下部始见表达AQP4,集中于深部粘膜的基底部腺体。胃腺表达AQP4的细胞类型为壁细胞。十二指肠、空肠和回肠富舍AQP4,但少于胃部,AQP4在十二指肠、空肠和回肠出现的位置主要粘膜深部的腺隐窝。近端结肠的局部腺隐窝可见少量AQP4表达,远端结肠和直肠组未见AQP4表达。胰脏和肝胆亦可见微量AQP4表达。结论SD大鼠下段胃和小肠是AQP4主要表达的部位,近端结肠、肝胆和胰腺只微量表达AQP4。研究消化系统的疾病与AQP4的关系可能有助于我们进一步认识疾病的发病机制。     

地塞米松对小梁细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的 观察地塞米松对培养的牛眼小梁细胞水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响.方法 应用含浓度为5,25,50,250μg/L的地塞米松培养液作用体外培养的第3～4代牛眼小梁细胞.7d后,免疫组织化学方法检测牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平,与正常体外培养的细胞进行对照并进行定量分析.结果 正常牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白表达,其灰度值为184.83±1.52,在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松作用7d后,AQP-1蛋白表达灰度值分别为185.95±1.49,193.25±1.18,196.88±0.91,204.26±1.64.当地塞米松浓度≥25μg/L时出现抑制作用(P<0.05).结论 在体外培养条件下,地塞米松可抑制牛眼小梁细胞AQP-1的表达,这可能与糖皮质激素应用后房水流出阻力增加、眼压升高所继发的青光眼有关.     

正常妊娠过程中水通道蛋白的表达及意义

水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是一类促进水转运的低分子跨膜蛋白。在正常妊娠过程中,水通道蛋白表达于胎盘、子宫、附件、大脑、泌尿系统及泪腺组织中。水通道蛋白局部的暂时性的调节在正常妊娠、胎儿发育、羊水量的稳定及其他器官中的水调节中发挥重要作用。因此,研究水通道蛋白在正常妊娠过程中的表达,了解水通道蛋白对妊娠的影响具有重要意义。本文对水通道蛋白在正常妊娠过程中的表达及变化进行综述。     

Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离与简易标记研究

Ⅱ型肺泡上皮细胞与Ⅰ型肺泡上皮细胞在肺泡壁上掺杂存在,前者为肺泡上皮总数的14.5%,其覆盖面积只占肺泡总面积的3%。我们用Wistar大鼠,冲洗净肺内血液,尽量清除肺泡腔内巨噬细胞,向肺泡腔内灌注0.5%胰蛋白酶,制成匀浆,过滤离心,残渣涂片,用丹宁酸和巴氏染色变法标记,并用透射电镜、扫描电镜观察。     

水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达

目的 水通道蛋白作为细胞膜特异性水转运蛋白在脑内分布广泛,参与脑内水平衡调节,与脑肿瘤、脑创伤等多种疾病导致的脑水肿有关.本实验主要研究水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、人多形性胶质母细胞瘤系BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达情况.方法 应用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞.应用反转录PCR法检测GFAP、AQP1及AQP4在不同组织细胞中的表达.结果 实验中培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞GFAP免疫细胞化学染色阳性.体外培养大鼠星形胶质细胞、人胶质母细胞瘤组织及对照组标本均有GFAP表达,同时也有AQP1及AQP4表达.BT325细胞只有GFAP表达,无AQP1及AQP4表达.结论 AQP1、4在培养大鼠星形胶质细胞及胶质瘤组织中均有表达,可能对脑功能的维持及肿瘤性脑水肿的发生、消散有重要影响.     

糖尿病大鼠肾组织中水通道蛋白2的表达及意义

目的:检测水通道蛋白2(AQP2)在糖尿病大鼠肾脏表达的变化,探讨其意义.方法:Wistar大鼠随机分为对照组和模型组.模型组40只链脲佐菌素建模,成模后15d、30d、45d、60d取材,每次10只,对照组10只60d一次取材.观察大鼠的一般指标、肾组织病理改变、AQP2免疫组化染色、实时聚合酶链反应法检测肾髓质集合管AQP2的表达.结果:和对照组大鼠相比,模型组均出现多饮、多食、多尿、体重减轻;同时血糖、血肌酐、血渗透压值升高,而尿渗透压值下降(P<0.05).HE染色显示模型组在15d、30d、45d肾脏结构基本正常.而在60d时.部分开始出现肾小球肥大.系膜区增宽,系膜细胞增生、基质增多.AQP2免疫组化染色显示肾脏外髓质部分集合管管腔内壁细胞阳性染色,而肾小球和肾间质未见表达,并且模型组阳性率高于对照组.同样,RT-PCR 半定量显示模型组大鼠肾脏AQP2的表达高于对照组(P<0.05).结论:AQP2在糖尿病大鼠肾髓质集合管组织中的表达增强;AQP2的上调表达可能是糖尿病水代谢异常的机体代偿机制.