湿疹患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞和血清IL-4，IL-10，TGF—β检测及临床研究

目的通过对湿疹患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录调节因子3（FOXP3）阳性的天然调节性T细胞（nTreg,CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋）表达率及其血清白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）、转化生长因子β（TGF—β）水平的检测结合心理评定并与对照组进行对比分析,探讨其在湿疹发病过程中的作用及患者发病的可能机制。方法应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）和ELISA法对湿疹患者（n=32）、对照组（n=32）分别进行PBMC中nT表达率及血清IL-4,IL-10,TGF-β水平进行检测,同时应用症状自评量表（SCL-90）进行心理评定。结果湿疹患者PBMC中nTreg细胞表达率（％）为4．86±1.69,明显低于对照组6．10±2．21;血清IL-4（96．21±20．07pg／ml）,IL-10（12．6±1．95pg／ml）含量高于对照组相应检测值53．93±13．10,9．82±1．34pg／ml;TGF-β 15．76±3．11ng／ml含量明显低于对照组（24．39±4．44ng／ml）,各项检测指标两纽之间比较差并均有统计学意义（P〈0．01）,患者心理健康状态与对照组比较也有显著性差异。结论nTreg数量降低减弱了对Th2细胞的抑制作用是湿疹患者发病的关键环节,Th1／Th2失衡、细胞因子分泌异常在疾病的发生发展中起重要作用,是湿疹发病和慢性化的重要原因,加强对湿疹患者的心理疏导以减少对患者精神、躯体造成的伤害,提高疗效具有重要临床意义。     

CD4+CD25+调节性T细胞和白介素10在反复自然流产中的作用探索

目的 对CD4+D25+调节性T细胞和IL-10在反复自然流产的作用进行初步探索.方法 选择早孕妇女34例为对照组,反复自然流产患者34例为实验组,应用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞和ELISA法检测IL-10,同时对实验组患者进行淋巴细胞直接免疫治疗,观察CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10变化.结果 CD4+CD25+调节性T细胞实验组(10.55±2.65)%、对照组(12.71±3.58)%、免疫后(12.44±3.02)%;IL-10实验组(150.45±45.80)pg/l、对照组(358.6±82.86)pg/l、免疫后(171.23±31.73)pg/l.组间比较,除免疫治疗后CD4+CD25调节性T细胞与对照组差异无显著性外(P>0.05),其余各组间差异均具有显著性(P<0.05);CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10水平与反复流产次数差异无显著性.结论 CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10参与了母胎免疫调节,检测CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10水平有助于反复自然流产患者的免疫学诊断与治疗.     

CD28/CTLA-4共刺激分子在再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

目的 研究CD28、CTLA-4在再生障碍性贫血（AA）免疫发病机制中的可能作用。方法 以流式细胞术分别分析23例发病期AA、10例恢复期AA患者和15名正常人骨髓细胞中CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、CTLA-4表达率，Th1、Th2细胞比例，评价CD28、CTLA4表达与Th1／Th2、中性粒细胞绝对值（ANC）之间的关系。结果 ①正常对照组CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、cTLA4表达率及CD28^＋／CTLA-4^＋比值分别为（31．40±10．83）％、（2．45±1．30）％、17．02±13．44，AA患者发病期分别为（39．84±10．89）％、（1．43±0．67）％、43．04±37．61，AA患者恢复期分别为（22．00±9．08）％、（3．46±2．26）％、10．49±7．80；与正常对照组比较，AA患者发病期CD28显著升高（P〈0．05），CTLA-4显著下降（P=〈0．01），CD28^＋／CTLA4^＋比值相应地亦显著升高（P〈0．05），而恢复期上述数值与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。②正常对照组Th1、Th2细胞、Th1／Th2比值分别为（4．21±2．11）％、（1．99±1．27）％、2．46±1．28，AA发病期为（11．13±4．96）％、（2．46±1．65）％、5．20±1．98，恢复期分别为（5．39±4．29）％、（2．53±2．41）％、2．87±1．43；与正常对照组比较，AA发病期Th1增高，Th1、Th2平衡向Thl偏移（P值均〈0．01），恢复期与正常对照组比较，差异无统计学意义。③AA患者CD28^＋／cTLA4^＋比值与Thl／Th2比值呈正相关（P〈0．05），ANC与CD3^＋CD4^＋CD28^＋T细胞数呈负相关（P〈0．01），与CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋T细胞数呈正相关（P〈0．01）。结论 ①AA发病期患者骨髓CD4^＋T细胞表面共刺激分子表达异常，CD28升高，而CTLA-4下降，AA患者骨髓T细胞处于“预激活”状态；②CD28／CTLA-4比值与Th1／T12．比值呈正相关提示：CD28、CTLA-4表达失衡可引起Th细胞格局偏移，Th1型细胞增多。③ANC和CD28、CTLA-4间相关分析进一步说明CD28、CTLA-4与AA的发生、发展有关。     

支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19~+CD23~+和CD4~+CD25~+的表达及意义

目的探讨支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋的表达及意义。方法采用流式细胞分析技术及免疫化学发光法分别检测34例哮喘发作期（哮喘发作组）和32例哮喘缓解期（哮喘缓解组）外周血CD19＋CD23＋表达率、CD4＋CD25＋表达率和血清总IgE水平,并与25例体检儿童（对照组）进行比较。结果哮喘发作组外周血CD19＋CD23＋表达率为（19.31±9．08）％分别高于哮喘缓解组（8．63±3．54）％和对照组;哮喘发作组CD4＋CD25＋表达率为（2．79±1．69）％和哮喘缓解组为（3.36±1．17）％均低于对照组;哮喘发作组IgE水平为（177．01±90．38）IU/ml和哮喘缓解组为（160．76±77．54）IU／ml均高于对照组．三组的差异均有统计学意义（F分别=36．62、24．67、24．35,P均〈0．05）。CD19＋CD23＋表达率与IgE呈正相关,CD4＋CD25＋表达率和IgE呈明显负相关,CD19＋CD23＋表达率和CD4＋CD25＋表达率亦呈明显负相关,差异均有统计学意义（r分别：0．22、-0．41、-0．34,P均〈0．05）。结论哮喘急性发作时外周血CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋改变明显。     

CD4+CD25+调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜患者中的变化

目的探讨CD4^＋CD25^＋T细胞在特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者发病机制中的作用。方法应用流式细胞术检测ITP患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋FOXP3^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞的数量；实时荧光定量PCR检测外周血FOXP3 mRNA的表达水平。将ITP患者和正常人CD4^＋CD25^highT细胞与自身CD4^＋CD25^-T细胞混合培养，检测CD4^＋CD25^high T细胞免疫抑制功能。结果ITP患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞约占CD4^＋T细胞的（15．64±5．82）％，明显高于正常对照组（9．30±3．95）％（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞比例为（1．53±0．66）％，与对照组[（1．36±0．55）％]比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4^＋FOXP3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞分别为（1．82±1．42）％和（1．25±0．94）％，均明显低于对照组[（3．90±1．37）％和（2．65±0．92）％]（P值均〈0．01）。ITP患者外周血FOXP3 mRNA表达水平较正常人明显下调（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞的抑制活性较正常人减弱（P〈0．01）。结论ITP患者中CD4^＋CD25^＋T细胞FOXP3表达水平降低，抑制活性减弱。     

隐球菌性脑膜炎患者外周血中TLR4的表达以及血清中TNF-α,IL-10的水平研究

目的探讨Toll样受体4（TLR4）在隐球菌性脑膜炎患者外周血中的表达,以及研究血清中TNF—α,IL-10的变化情况。方法收集25例隐球菌性脑膜炎患者和25例健康体检者全血,采用荧光定量PCR（FQ—PCR）检测TLR2,TLR4的mRNA表达。ELISA法检测血清中TNF—α,IL-10的表达。结果隐球菌性脑膜炎患：者TLR4 mRNA的表达显著低于对照组（0．35±0．18）（P〈0．05）,TLR2均无显著变化（0．87±0．23）（P〉0．05）。血清中的IL-10显著升高（4．25±1．30）pg／ml（P〈0．05）,TNF—α的变化不显著（1．49±0．87）pg／ml（P〉0．05）。结论隐球菌性脑膜炎患者TLR4 mRNA表达显著下降,可能在隐球菌性脑膜炎的发病过程中起一定的作用。     

登革热患者外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞及IL-10的检测分析

目的：观察登革热患者外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞及白介素-10（IL-10）的变化，探讨其在登革热疾病的发生和发展中的作用。方法：12例健康人和18例登革热患者于治疗前后采静脉血。采用流式细胞仪检测CD4^＋、CD8^＋T细胞并计算CD4^＋／CD8^＋比值，ELISA法检测血清IL-10水平，同时作外周血白细胞、血小板计数。结果：与正常健康人和治疗后相比，登革热患者治疗前外周血CD4^＋细胞百分比、CD4^＋／CD8^＋比值明显降低（P〈0．01）。CD8^＋细胞百分比和血清IL-10显著增高（P〈0．01），白细胞、血小板计数均明显下降（P〈0．01）；治疗后患者以上指标均与健康人无明显差异。结论：CD4^＋、CD8^＋ T细胞在登革热病毒感染后异常激活，CD4^＋／CD8^＋比值明显降低，IL-10分泌增高，可能在登革热的发病中起重要作用。     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎CD4^＋,CD8^＋的改变及意义

目的：观察实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠外周血CD4^＋，CD8^＋的改变及免疫调节剂左旋咪唑的作用。方法：实验于2005—05／07在遵义医学院附属医院神经科实验室和贵州省细胞工程重点实验室完成。取Wistar大鼠23只单纯随机分为4组：①正常组（n=5）：不干预。②模型组（n=8）：每只大鼠一次性注入0．5mL豚鼠脊髓匀浆（相当髓鞘碱性蛋白3．5mg）和完全福氏佐剂混合乳剂，其中0．4mL注入双后足掌皮下，0．1mL注入尾近端。在注入抗原乳剂后即刻、24，48h共3次腹腔注射左旋咪唑10mg／kg。③完全福氏佐剂组（n=5）：注射无豚鼠脊髓匀浆生理盐水＋完全福氏佐剂混合液0、5mL，用法同模型组，不注射左旋咪唑。④左旋咪唑组（n=5）：每间隔24h腹腔注射左旋咪唑，用法同模型组。将注射日规定为第0天，每日观察2次记录大鼠神经体征变化，所有大鼠于注射第16天取材，流式细胞仪检测外周血CD4^＋，CD8^＋的变化，苏木精一伊红染色观察病理变化，Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果：23只大鼠全部进入结果分析。①神经体征变化：正常组、完全福氏佐剂组和左旋咪唑组均未出现症状，模型组8只大鼠中有7只于第14天出现症状，发病率为87．5％。②CD8^＋的变化：左旋咪唑组和模型组低于正常组[（31．24&;#177;7、01）％，（20．64&;#177;5．52）％，（41、73&;#177;7．28）％，P〈0．05，0．01]，且模型组低于左旋咪唑组（P〈0、05）。③CD4^＋的变化：左旋咪唑组和模型组高于正常组[（45、21&;#177;5．35）％，（43、30&;#177;5．47）％，（34．44&;#177;7．01）％，P〈0．05]，但前2组比较差异不显著。④CD4＇／CD8^＋：左旋咪唑组和模型组高于正常组（1．53&;#177;0、49，2．33&;#177;1．04，0．86&;#177;0．32，P〈0．05．0、01）。⑤模型组苏木精-伊红染色见大脑自质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润；Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变。结论：①大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎是通过降低CD8^＋、增高CD4^＋及CD4^＋／CD8^＋介导的免疫性疾病。②左旋咪唑破坏了机体的免疫平衡，是诱导实验性变态反应性脑脊髓炎发生的重要免疫凋节剂。     

腹腔镜下直肠癌手术对免疫平衡及CD4^＋CD45RA^＋和CD4^＋CD45RO^＋T细胞的影响

目的通过分别测定腹腔镜手术和开腹手术直肠癌患者Th1／Th2平衡偏移情况及CD4^＋CD45R细胞的比例变化,以比较两种术式对直肠癌患者免疫功能的影响。方法分别采用流式细胞学和酶联免疫吸附法方法检测行腹腔镜下直肠癌手术和常规开腹手术2组患者术前1d、术后2、7d的外周血中CD4^＋IFN-γ^＋T和CD4^＋IL4^＋T细胞比率及IFN-γ和IL-4血清浓度,同时检测CD4^＋CD45RA^＋T细胞和CD4^＋CD45RO^＋T细胞在不同手术影响下的比例变化。结果开腹组术后2、7d的Th1细胞[（4．51±1．52）％,（7．26±2．59）％]与术前[（12．06±1．82）％]相比明显减少（P均〈0．05）,Tha2细胞[（6．70±2．41）％,（6．70±2．41）％]与术前[（4．47±1．90）％]相比明显增加（P均〈0．05）;开腹组术后2、7d的IFN-γ[（57．15±23．64）ng／L,（72．70±27．31）ng／L]与术前（123．47±32．52）ng／L相比明显下降（P均〈0．05）,而术后2、7d的IL-4[（55．55±7．29）ng／L,（57．56±7．13）ng／L]与术前[（41．87±5．83）ng／L]相比明显升高（P均〈0．05）;腹腔镜组Th1细胞、Th2细胞、IFN-γ和IL-4手术前后数量无明显变化（P均〉0．05）;术后7d开腹组CD4^＋CD45RA^＋T细胞（35．11±7．82）与术前（31．11±6．72）相比明显增加（P均〈0．05）,开腹组术后CD4^＋CD45RO^＋T细胞（61．21±9．13）较术前（68．11±11．42）减少（P〈0．05）。结论腹腔镜下直肠癌手术较开腹手术对机体免疫平衡影响较小,有利于保护直肠癌患者的细胞免疫功能。     

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞的表达及意义

[目的]探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞在炎症性肠病（IBD）发病中的作用及其与疾病活动性的关系。[方法]采用三色流式细胞术检测40例IBD患者，其它肠病患者30例和健康对照者30例。IBD患者中活动期患者25例，缓解期患者15例，使用和未使用激素和／或免疫抑制剂活动期IBD患者分别为16例和9例。对以上各组外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞亚群的百分率进行测定。[结果]疾病活动期IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例明显低于其他肠病和正常对照组（P〈0．01），疾病活动期IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例明显低于疾病稳定期患者（P〈0．01）。活动期IBD患者中使用激素和／或免疫抑制剂与未使用激素和／或免疫抑制剂结果差异有统计学意义。IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达率与疾病活动指数评分呈负相关性。[结论]IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞异常表达，可能参与疾病的发生发展，与疾病的活动性密切相关。     

哮喘患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞与细胞因子的表达及意义

目的 探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞与细胞因子在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义。方法分离哮喘患儿和正常人外周血单个核细胞（PBMC）,用流式细胞仪分析CD4＋CD25＋调节性T细胞在外周血单个核细胞中的比例;酶联免疫吸附法（ELASA）检测外周血TGF—p和IL-10水平。结果急性发作期组患儿外周血CD＋CD25＋Tr及细胞因子水平明显低于缓解期组和正常对照组（P〈0．05）,而缓解期患儿与对照组无显著性差异（P〉0．05）。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞和细胞因子可能参与了哮喘的发生与发展。     

慢性再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群和粒-单核细胞集落形成单位的检测

目的探讨慢性再生障碍性贫血（CAA）发病的免疫因素，为CAA的临床治疗提供依据。方法采用骨髓细胞半固体集落培养法检测粒一单核细胞集落形成单位（GM—CFU），同时用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果CAA骨髓细胞培养GM—CFU产率明显少于正常对照组，（7．9±0．5）个／ml vs （88．7±2．7）个／ml（P〈0．01）；CAA骨髓细胞加正常血清培养GM-CFU的产率与正常对照组比较差异无统计学意义，（82．4±2．6）个／ml vs （88．7±2．7）个／ml（P〈0．05），其中有21例的GM-CFU的产率（60．1±2．1）个／ml与对照相比较明显减少；CAA血清与正常骨髓细胞培养的GM—CFU为（105．6±3．2）个／ml，显著高于正常组。CAA组的CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋／CD8^＋均比对照组降低，分别为（49．8±0．6）％ vs （64．3±0．9）％、（29．7±0．4）％ vs （38．6±0．3）％和（1．2±0．1）％ vs （1．7±0．1）％（均P〈0．01）；CD8^＋细胞明显高于正常，（28．9±0．3）％ vs （24．5±0．3）％（P〈0．01）。结论CAA患者普遍存在着T细胞亚群失衡的免疫异常；CAA患者骨髓细胞中可能有抑制患者GM—CFU形成的因素，而血清中存在着升高的粒一单核细胞集落刺激因子等，其临床意义尚需进一步观察。GM-CFU体外培养联合T细胞亚群检测，可作为CAA异常免疫机制的诊断指标。     

婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变

目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率，CD4^＋与CD8^＋细胞百分率，CD4^＋／CD8^＋比值及CD19^＋和CD19^＋CD23^＋的表达水平，以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况。结果上呼吸道感染的患儿的外周血Th1，Th2的细胞百分率（13．15%±6．23%及4．57％±3．10％）均显著高于对照组（7．14％±5．09％及2．03％±0．95％），患儿组CD4^＋细胞百分率亦较对照组为高（P〈0．05）；CD8^＋，CD4^＋／CD8^＋比值均与正常对照组之间无统计学差异（P〉0．05），CD19^＋与CD19^＋CD23^＋的表达阳性率无明显升高。结论婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群，表现为Th1扫Th2细胞百分率均增加，Th1和Th2细胞免疫反应增强，而B淋巴细胞状况无明显改变。     

IL-22在原发性胆汁性肝硬化中的表达及其临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）外周血中IL-22的表达水平及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测PBC患者血清中IL-22水平;全自动生化仪检测TBIL,γ-GT;并以健康体检者为对照组。结果40例PBC患者血清中IL-22水平（810．36±30．52pg／m1）明显高于健康对照组（361．51±30．52pg／ml,P〈0．05）,且IL-22水平与TBIL和γ-GT呈显著正相关（r=0．386,P〈0．05;r=0．356,P〈0．05）。结论IL-22可能参与了PBC的发病机制,并可能成为一个潜在的治疗靶点。     

骨髓增生异常综合征患者外周血树突细胞数量、亚群及其表面协同刺激分子表达的研究

目的 检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血树突细胞（DC）总量、亚群（pDC和mDC）比例及其表面协同刺激分子（CD80、CD86和CIMO）表达，探讨MDS患者细胞免疫异常的形成机制。方法 选取38例MDS患者及19名正常对照，采用荧光素单克隆抗体标记法和流式细胞术检测MDS患者外周血中Lin1^—HLA-DR^＋细胞（DC）、Lin1^-HLA—DR^＋CD123^＋细胞（pDC）、Lin1—HLA—DR^＋CD11c^＋细胞（mDC）的数量以及CD80、CD86和CIMO在DC膜上的表达。结果低危MDS组、高危MDS组和正常对照组外周血DC总量分别为（33．7±7．0）×10^6／L、（56．3±29．0）×10^6／L和（12．1±1．4）×10^6／L（P〈0．05），pDC数量分另U为（12．6±4．1）×10^6／L、（3．6±1．0）×10^6／L和（6．6±0．7）×10^6／L（P〉0．05），mDC数量分别为（16．7±6．3）×10^6／L、（28．7±17．6）×10^6／L和（5．5±0．9）×10^6／L（P〈0．05）。低危MDS组、高危MDS组和正常对照组DC占外周血单个核细胞（PBMNC）百分比分别为（2．37±0．53）％、（3．58±1．39）％和（0．68±0．08）％（P〈0．05），pDC占PBMNC百分比分别为（0．82±0．29）％、（0．31±0．06）％和（0．37±0．04）％（P〉0．05），mDC占PBMNC百分比分别为（0．96±0．35）％、（1．51±0．70）％和（0．32±0．05）％（P〈0．05）。低危MDS组、高危MDS组和正常对照组外周血中CD80^＋DC分别为（30．6±11．8）×10^6／L、（2．3±0．9）×10^6／L和（2．3±0．6）×10^6／L（P〈0．05），CD86^＋DC分别为（25．1±7．4）×10^6／L、（12．4±6．3）×10^6／L和（6．2±3．2）×10^6／L（P〈0．05），CD40^＋DC分别为（2．8±1．0）×10^6／L、（1．5±0．9）×10^6／L和（3．2±2．3）×10^6／L（P〉0．05）。结论 MDS患者外周血中DC数量增多、比例异常；以mDC增多为主，pDC无明显增多；MDS患者DC高表达CD80和CD86，CD40表达不增高。提示MDS患者诱导抗肿瘤细胞免疫的抗原呈递细胞（pDC）数量及功能不足；而与正常造血克隆炎性损伤有关的抗原呈递细胞（mDC）却增多。这可能是导致MDS患者细胞免疫异常的重要机制之一。     

BMP-4与VEGF促进拟胚体中原始造血干细胞发生的实验研究

本研究旨在探讨骨形态发生蛋白-4（BMP-4）和血管内皮生长因子（VEGF）在诱导胚胎干细胞（ESC）形成拟胚体（EB）过程中促进原始造血干细胞形成的作用。将小鼠E14ESC在半固体培养基中诱导为EB，根据培养体系中有无添加因子分组：未添加因子的自然分化组、含不同浓度（5、15、25、50ng／ml）的BMP-4组，在BMP-4单因子实验的基础上联合10ng／ml VEGF组及单因子VEGF组。分别于3,6,9,12、15天时收获EB，用流式细胞术检测Flk-1^＋细胞含量。结果表明：随着添加BMP-4因子浓度的逐渐升高，EB中Flk-1^＋细胞形成比例也逐渐增加，在第3天（D3）和第6天（D6）两个时点，25ng／ml BMP-4作用组Flk-1^＋细胞达到峰值，分别为（6．51±1．02）％和（7．70±1．12）％，与无BMP-4对照组及5ng／ml组比较有统计学意义的差异（P〈0．05）。然而在BMP-4浓度升高至50ng／ml条件下Flk-1^＋细胞形成比例有减少趋势。在BMP-4单因子实验的基础上，以25ng／ml BMP-4联合10ng／mlVEGF共同作用于ESC→EB诱导过程，Flk-1^＋细胞百分比明显提高，在9天达到峰值，为（27．53±8．14）％，与自发分化组[（8．77±2．35）％]及VEGF单因子组[（11．21±2．23）％]相比均有显著性差异（P〈0．05）。结论：BMP-4和VEGF联合使用可促进EB中胚层原始造血干细胞的形成，为进一步模拟造血微环境定向诱导ESC造血分化提供了实验依据。     

高强度超声对荷U14宫颈癌小鼠脾细胞Th1/Th2亚群的影响

目的探讨高强度超声（HIU）对荷U14宫颈癌小鼠脾细胞Th1／Th2亚群的影响。方法将32只雌性BALB／c小鼠随机分为HIU治疗组、手术治疗组、荷瘤对照组及正常对照组，每组8只。各组于种植肿瘤或生理盐水后第7天，分别接受相应治疗；于第17天制备并培养小鼠脾淋巴细胞，收集上清液，应用双抗夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组小鼠脾淋巴细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-4的浓度。结果受刀豆球蛋白A（Con A）刺激时，HIU治疗组IL-2浓度为（1110．13±338．10）pg／ml，较手术治疗组[（641．50±93．29）pg／ml]、荷瘤对照组[（215．75±62．54）pg／ml]明显增高（P〈0．05）；HIU治疗组IFN-γ浓度为（64984．86±9778．80）pg／ml，较荷瘤对照组[（42613．75±4050．75）pg／ml]明显增高（P〈0．05）；HIU治疗组IL-4浓度为（224．94±55．89）pg／ml，较手术治疗组[（330．56±94．63）pg／ml]、荷瘤对照组[（418．13±104．78）pg／ml]明显减少（P〈0．05）。未受ConA刺激时，HIU治疗组IL-2浓度为（1099．25±233．51）pg／ml，较手术治疗组[（241．00±35、44）pg／ml]、荷瘤对照组[（136．75±37．52）pg／ml]、正常对照组[（277．50±57．59）pg／ml]明显增高（P〈0．05）；HIU治疗组IFN-γ浓度为（45390．00±9961．26）pg／ml，较荷瘤对照组[（33662．50±14111．99）pg／ml]明显增高（P〈0．05）。结论HIU固化的U14肿瘤细胞可能激活机体免疫功能，促使其由Th2占优势向Th1占优势逆转，从而提高小鼠抗肿瘤免疫功能，抑制肿瘤生长。     

CD4+CD25+和CD8+调节性T细胞的作用机制

调节性T细胞（Treg）主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用,既能抑制不恰当的免疫反应,又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间,对CD4^＋和CD8^＋效应性T淋巴细胞的增殖起抑制作用,因此在移植物抗宿主病、自身免疫病、过敏性疾病等的发病机制和临床治疗中有潜在的应用价值.本文重点介绍CD4^＋CD25^＋Treg和CD8^＋Treg的作用机制,并简述调节性T细胞研究面临的挑战与展望.     

卡介苗免疫大鼠的抗结核发病和CD4^＋CD8^＋双阳T细胞

目的：探讨卡介苗（BCG）对大鼠结核感染及CD4^＋CD8^＋双阳（DP）T细胞的影响。方法：60只PPD皮试阴性SD大鼠随机分成（1）卡介苗免疫（BCG）组、（2）BCG免疫后结核分枝杆菌（Mtb）攻击（BCG-TB）组、（3）Mtb攻击后不化疗（TB）组。BCG组、BCG-TB组于观察开始接种BCG。BCG-TB组、TB组于3个月末接受Mtb攻击。比较全部大鼠接种Mtb后的死亡率；实验开始和其后3、4、5、6、8个月末检测外周血中T细胞亚群。结果：BCG组、BCG-TB组无死亡；TB组感染后5个月内死亡率45％（9／20）。TB组死亡率高于BCG组和BCG-TB组，P〈O．01。实验开始时3个组组间对应参数比较差异均无显著性（P〉0．05）；3个月末BCG组、BCG-TB组之间各对应参数比较差异均无显著性（P〉O．05）；BCG组和BCG-TB组第3个月末与接种前比较，CD8^＋、DP升高，且显著高于TB组（Mtb干预之前），P〈0．01或P〈0．05。BCG组DP细胞于接种BCG后第6个月后开始回落，但仍显著高于接种前；BCG-TB组于Mtb攻击1个月后CD8^＋、DP继续升高，观察的第8个月CD8^＋、DP回落，但仍显著高于BCG接种前；TB组Mtb攻击后1个月末CD8^＋、DP有升高但低于BCG组和BCG-TB组，同时伴有CD3^＋、CD4^＋降低，差异均有显著性，P〈0．05或P〈0．01，此后维持在相近水平。Mtb攻击2个月末BCG-TB组DP高于BCG组和TB组，P〈0．05或P〈0．01。Mtb攻击5个月后3个组间DP差异无显著性（P〉0．05）。结论：BCG预防接种可保护Mtb感染宿主免于发病和死亡，增强抗结核保护性细胞免疫力表现之一为DP细胞升高，DP细胞是抗结核保护性免疫相关T细胞。DP细胞的形成与CD4^＋SP细胞上CD8^＋抗原表达有关。     

CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞在重型乙型肝炎发病中的作用

目的探讨CD4＋、CD25＋调节性T细胞（CD4＋、CD25＋ Tr）在重型乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测重型乙型肝炎病人及对照组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的水平及应用PCR测定重型乙型肝炎病人及对照组外周血中HBVDNA滴度。结果重型乙型肝炎组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的百分率为（2.63±0.83）%,较慢性乙型肝炎组的（4.15±1.17）%差异有显著性（P〈0.05）,较无症状HBV携带者组及健康对照组差异有非常显著性（P均〈0.01）;重型乙型肝炎组外周血HBVDNA滴度为1.2×10^4copies/ml,较慢性乙型肝炎组（2.3×10^6copies/ml）和无症状HBV携带者（7.8×105copies/ml）差异有非常显著性（P均〈0.01）;不同乙型肝炎病人外周血CD4^＋、CD25^＋ Tr的百分率与HBVDNA滴度正相关。结论CD4^＋、CD25＋^ Tr能抑制T细胞对HBV的免疫反应;重型乙型肝炎患者发病与CD4^＋、CD25^＋ Tr表达过低有关。