携带HuIFN－β cDNA的重组逆转录病毒载体的构建及在人肝癌细胞中的特异表达

目的：研究逆转录病毒介导干扰素基因转移及在肝癌细胞中特异表达作用。方法：将人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＰＬ位点，分别构建了转录受ＳＶ４０启动子驱动的载体ＭＮＳＩＦＮＢ和转录受人甲胎蛋白增强子（ＡＦＰｅ）调控的载体ＭＮＡＩＦＮＢ。用脂质体转染法将载体分别转导ＰＡ３１７包装细胞，质粒转染率为每１０５ＰＡ３１７细胞（４～２５）×１０３ＣＦＵ／μｇ，病毒感染率（４．５～５００）×１０４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌、肾癌及黑色素瘤细胞。结果：ＮｅｏＲ克隆ＲＮＡ斑点杂交及ＩＦＮ活性分析证明，人ＡＦＰｅ可促进异源启动子启动ＨｕＩＦＮ－β基因在合成ＡＦＰ的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。结论：ＡＦＰ＂持家基因＂顺式调控序列在合成ＡＦＰ的肝癌细胞中特异驱动ＩＦＮ－β基因表达，该研究为肝癌特异性免疫基因治疗提供了资料。     

人γ干扰素基因真核表达载体pZip—γ干扰素的构建

为构建逆转录病毒载介导的人γ干扰素（ＩＮＦ－γ基因真核细胞表达载体，将质粒ｐＧＥＭ－１－ＩＦＮ－γ用ＢａｍＨＩ酶切，分离回收入ＩＦＮ－γｃＤＮＡ片段，再定向克隆入逆转录病毒载体ｐＺｉｐ、Ｎｅｏ、ＳＶ（Ｘ）１。经酶切鉴定证实该片段已被正确克隆入ｐＺｉｐ．Ｎｅｏ．ＳＶ（Ｘ）１的ＢａｍＨＩ酶切位点，构建成ＩＦＮ－γ基因真核表达载体ｐＺｉｐ－ＩＦＮ－γ。ｐＺｉｐ－ＩＤＮ－γ的构建成功。为开展ＩＦＮ－γ基因     

人B7—1,IFN—γ双顺反子逆转录病毒载体的构建和表达

目的：制备免疫基因修饰的卵巢癌肿瘤疫苗。方法：利用口蹄疫病毒的内在性核糖体插入位点（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅｓ,ＩＲＥＳ）,通过基因克隆技术构建人Ｂ７－１、ＩＦＮ－γ双顺反子逆转录病毒载体ＰＬＸＳＮ／Ｂ７－１ ＩＦＮ－γ。结果：将ＰＬＸＳＮ／Ｂ７－１ ＩＦＮ－γ转染逆转录病毒包装细胞,包装成病毒,经滴度测定后,转导卵巢上皮癌细胞系３Ａ０,筛选稳定表达克隆,ＲＴ－ＰＣＲ和免疫流式细胞测定均可证实Ｂ７－１、ＩＦＮ－γ在同一转导细胞的共表达。结论：口蹄疫病的ＩＲＥＳ可提供Ｂ７－１、ＩＦＮ－γ的共表达。     

逆转录病毒介导IFN-γ基因对胆管癌细胞株的影响

目的：研究人ＩＦＮ－γ基因对胆管癌细胞株免疫原性的影响。方法：构建携带人ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＩＦＮ－γ,导入人胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９,运用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法分析ＭＨＣ Ｉ类分子的表达,体外混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养（ＭＬＴＲ）和淋巴细胞杀伤试验研究导入ＩＦＮ－γ基因的ＱＢＣ９３９细胞免疫原性的变化。结果：Ｇ４１８阳性ＱＢＣ９３９－ＩＦＮ－γ细胞分泌ＩＦＮ－γ活性     

携带HuIL—3基因的人肝癌特异性逆转录病毒转体的构建

构建携带人白细胞介素ｃＤＮＡ的人肝癌特异性闻生转录病毒载体。将ＨｕＩＬ－３ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ的ＰＬ位点，构建ＳＶ４０早期启动子驱动的载体ｐＭＮＳ－ＩＬ－３；从质粒ｐＧＥＭ，７Ｚｆ－ＡＦＰｅ中游离人甲胎蛋白增强子核心序列，先克隆 到ｐＭＮＳＭ的ＰＬ位点上，     

噬菌体呈现技术研制特异性人抗骨肉瘤干扰素

目的 利用噬菌体表面呈现技术研制高活性、特异性抗骨肉瘤干扰素。方法 将干扰素ＩＦＮａｌｃ／８６Ｄ ＤＮＡ插入噬菌体质粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，并构建噬菌体ＩＦＮａｌｃ／８６Ｄ ＡＢ环变库；通过在ＯＳ７３２细胞上竞争性亲合洗脱、ＭＴＴ法对比检测抗肿瘤活性，筛选针对ＯＳ７３２细胞的高活性噬菌体－ＩＦＮ突变体。结果 获得２个噬菌体－ＩＦＮ突变体，其抗ＯＳ７３２细胞增殖活性较突变母体分别提高４倍和１６倍     

携带HSV—tk基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体。切除逆转录病毒病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ＰＭＮＭ；从真核表达载体ＰＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因启动子调控的ＨＳＶ－ｔｋ片段，克隆到ＰＭＮＭ的ＰＬ位点上，构建成普通型ＰＭＮＰ－ｔｋ逆转录病毒载体；从ＰＧＥＭ，７Ｚ－ＡＦＰｅ质粒中游离人甲胎蛋白基因增强子核心序列，克隆到ＰＭＮＰ－ｔｋ的ｐｇｋ启动子上游，构建     

转γ-干扰素基因大鼠肝细胞模型的建立

目的：使用多聚阳离子脂质体载体（ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ）在体外建立转γ干扰素（ＩＦＮγ） 基因的大鼠肝细胞模型。方法：利用ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ在体外将ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞。分别以ＲＴＰＣＲ 和ＥＬＩＳＡ方法检测所转ＩＦＮγ基因在大鼠肝细胞的转录和表达情况。结果：以ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ为载体的ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞后,可被有效的转录并产生具有生物活性的ＩＦＮγ。结论：ＩＦＮγ基因可被成功转染入大鼠肝细胞并可有效表达。这可能为细胞因子的免疫治疗提供一种新途径。     

TNF,IFN,MHCⅠ类分子基因“正反馈”式放大表达的重组腺病毒载体

目的：为使外源性 Ｔ Ｎ Ｆ, Ｉ Ｆ Ｎ 基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类（ Ｍ Ｈ ＣⅠ）分子基因表达呈现“正反馈”式放大效 应,构建在 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子调控、 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ连接下协同表达 Ｔ Ｎ Ｆα和 Ｉ Ｆ Ｎβ基因的重组腺病毒载体。方法和结果：从ｐ Ｇ Ｌ３ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｆ及ｐ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ中切下 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ和 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,先后插入ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓｋ （＋ ）, 构建成ｐ Ｂ Ｌ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ。回收 Ｔ Ｎ Ｆα Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｌｉｎｋ１ 中,构建成 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（＋ ）。回收 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入缺失 Ｅ１ 和 Ｅ３ 区及启动子的 Ａｄ ＢｇｌⅡ中, 构建成 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（－ ）。结论：此两种载体为“正反馈”式放大肿瘤免疫原性提供一条新途径。     

携带HSV－tk基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（ｐｇｋ）启动子调控的ＨＳＶ－ｔｋ片段，克隆到ｐＭＮＭ的ＰＬ位点上，构建成普通型ＰＭＮｐ－ｔｋ逆转录病毒载体；从ｐＧＥＭ．７Ｚ－ＡＦＰｅ质粒中游离人甲胎蛋白基因增强子核心序列，克隆到ｐＭＮｐ－ｔｋ的ｐｇｋ启动子上游，构建成人肝癌特异型ｐＭＮＡＰ－ｔｋ逆转录病毒载体。结论：该载体对肝癌特异性前药转换基因治疗有重要意义。     

人抗乙肝表面抗原抗体Fab片段/αA-干扰素融合蛋白原核表达载体的构建

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗，我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白原核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α。方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５端引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ表达载体ｐＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实重组片段已正确插入载体相应酶位点，片段与ＰＣＲ扩增片段大小相同，硷基序列正确。结论：ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ的成功构建，为人抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素融合蛋白在大肠杆菌的表达打下基础     

hIL-10基因转导抑制大鼠心肌细胞诱生炎症细胞因子

目的：观察人白细胞介素１０ （ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １０ ,ｈ Ｉ Ｌ１０） 基因转导对脂多糖（ Ｌ Ｐ Ｓ） 诱导大鼠心肌细胞（ Ｃ Ｍ Ｃ） 的炎症细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒载体ｐ Ｌ Ｘ（ Ｉ Ｌ１０） Ｓ Ｎ 将人 Ｉ Ｌ１０ 基因导入大鼠 Ｃ Ｍ Ｃ,应用 Ｐ Ｃ Ｒ, Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ：①检测 Ｉ Ｌ１０ 基因的整合和表达;②观察 Ｉ Ｌ１０ 基因转导对 Ｌ Ｐ Ｓ诱导的 Ｃ Ｍ Ｃ 肿瘤坏死因子α（ Ｔ Ｎ Ｆα） 的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达及白细胞介素１β（ Ｉ Ｌ１β） 和 Ｔ Ｎ Ｆα的蛋白质的产生的影响。结果：外源性 Ｉ Ｌ１０ 基因已整合到靶细胞染色体 Ｄ Ｎ Ａ 并有效地表达,并能抑制 Ｌ Ｐ Ｓ诱生 Ｃ Ｍ Ｃ 产生 Ｉ Ｌ１β, Ｔ Ｎ Ｆα。结论：逆转录病毒载体介导的人 Ｉ Ｌ１０ 基因转导能抑制 Ｃ Ｍ Ｃ 炎症效应中细胞因子的产生及其基因表达。     

逆转录病毒介导γ—干扰素基因修饰人肝癌细胞的建立

目的 建立γ－干扰素基因修饰人肝癌细胞。方法 以逆转录病毒载体ＬＸＳＮ将人原γ－干扰素基因转录入四种不同的人肝癌细胞株,经Ｇ４１８筛选均获得了抗性克隆。结果 基因组ＤＮＡ ＰＣＲ和细胞总ＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ结果均明显ＩＦＮ－γ基因已在染色体ＤＮＡ中整合并表达,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进一步证实了目的基因的正确整合和表达。ＩＦＮ－γ生物活性检测结果表明,在基因修饰的四种不同个体人肝癌细     

人抗惭肝表面抗原抗体Fab片段／αA—干扰素融合蛋白原核表达 …

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗。我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α，方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５；引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡＧ抗体Ｆａｂ表达载体ＰＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ＰＨＳ／ＩＦＮ－α，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实     

脐血单个核细胞IL—12和IFN—γ表达的观察

本文探讨新生和脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）白细胞介素１２（ＩＬ－１２）和γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）基因表达水平；观察重组ＩＬ－１２地ＣＢＭＣＩＦＮγ基因表达的影响。采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ＿ＰＣＲ）测定８例新生儿ＣＢＭＣＩＬ－１２ｐ４９ＲＮＡ和ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达，用ＥＬＩＳＡ法测新一儿ＣＢＭＣ细胞培养上清液中ＩＦＮ－γ浓度。结果显示：新生儿ＣＢＭＣ一外受刺激后表达的Ｉ国２ｐ４０ｍＲＮＡ、Ｉ     

人白细胞介素2,β干扰素基因逆转录病毒载体的构建和在人…

从ｐｃＤ－５．１质粒和ｐＳＰＧＮＨＩＦＮＢ１０质粒分别切下人白细胞介素２（ＨｕＩＬ－２）ｃＤＮＡ和人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ，分别克隆到ｐＮＭＳＭ逆转录病毒载体多克隆位点，经酶切鉴定确定正确插入方向。经ＰＡ３１７包装细胞包装成重组病毒，测转染效率。用ＮＩＨ／３Ｔ３细胞测重组病毒感染效率。在８μｇ／ｍｌ鱼精蛋白存在的条件下分别感染人新鲜肾透明细胞癌体外建株细胞以及人肾细胞癌肿瘤浸润性淋巴细     

IL－12对新生儿IFN－y产生的影响

白细胞介素１２（ＩＬ－１２）是一种重要的细胞因子，由单核／巨噬细胞、Ｂ细胞产生，通过诱导Ｔ细胞和ＮＫ细胞产生ｖ干扰素（ＩＦＮ－Ｙ）在细胞免疫反应中发挥多种作用。新生儿产生ＩＬ－１２的能力鲜见报道。本文用逆转录一聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测８例新生儿脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）ＳＩＬ－１２ＰｏｍＲＮＡ和ＩＦＮ－ｖｚａＲＮＡ表达：及ＥＩＬＩＳＡ法测新生儿ＣＢＭＣ培养上清ＩＦＮ－ｖ浓度；并观察重组ＩＬ－１２（ｒＩＬ－１２）对新生儿ＩＦＮ－ｙ产生的影响。结果显示：新生儿ＣＢＭＣＩ－Ｌ－２ＰｔｔｎｚＲＮＡ和ＩＦＮ－ｒｍＲＮＡ表达水平较成人ＰＢＭＣ低下，新生儿ＩＬＦＮ－ｖ水平明显低于成人。ｒＩＬ一１２能增强抗ＣＤ３和ＰＭＡ刺激的新生儿ＣＢＭＣ产生ＩＦＮ－ｖ。使其达成人水平。本文提示：新生儿ＩＬ一１２表达水平低下可能在新生儿细胞免疫功能暂时性低下中起重要作用     

CHANGES OF IMMUNE FUNCTIONS AFTER RADIATION，BURNS AND COMBINED RADIATION－BURN INJURY IN RATS

ＣＨＡＮＧＥＳＯＦＩＭＭＵＮＥＦＵＮＣＴＩＯＮＳＡＦＴＥＲＲＡＤＩＡＴＩＯ，ＢＵＲＮＳＡＮＤＣＯＭＢＩＮＥＤＲＡＤＩＡＴＩＯＮ－ＢＵＲＮＩＮＪＵＲＹＩＮ　ＲＡＴＳＹａｎＹｏｎｇｔａｎｇ（阎永堂）；ＲａｎＸｉｎｚｅ（冉新泽）ａｎｄＷｅｉＳｈｕｑｉｎｇ（...     

BENEFICIAL EFFECT OF CHROMIUM-RIGH YEAST ON GLUCOSE METABOLISM OF DIABETES

ＢＥＮＥＦＩＣＩＡＬＥＦＦＥＣＴＯＦＣＨＲＯＭＩＵＭ一ＲＩＣＨＹＥＡＳＴＯＮＧＬＵＣＯＳＥＭＥＴＡＢＯＬＩＳＭＯＦＤＩＡＢＥＴＥＳＹｕＸｕｅｍｅｉ（于雪梅）（Ｄｅｐｔ．ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＴａｉｓｈａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ）ＢＥＮＥＦＩＣＩ...     

一氧化氮与Ⅰ型辅助细胞因子在过敏性紫癜中的作用

用镉还原法测定血浆ＮＯ水平,用ＥＬＩＳＡ法检测血浆及外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ)培养上清中血细胞介素-2(ＩＬ-2)及干扰素-γ(ＩＦＮ-γ)水平。结果:ＨＳＰ急性期血浆ＮＯ水平较对照组明显增高,血浆ＩＬ-2及ＩＦＮ-γ与正常对照组比较无显著性差异,但患儿的ＰＢＭＣ培?..