日本血吸虫大陆株26KDa基因重组蛋白保护性免疫力的研究

本文报道了ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ分别抗原可诱导宿主产生抗日本血吸虫感染的保护性免疫力，获得免疫的小鼠虫贡荷与肝、脾组织中虫卵负荷均下降，减虫率与肝、脾减卵分别为３０与５７．１１％、７９．９７％。ＥＬＩＳＡ测免疫鼠血清特异性抗体水平明显升高。提示ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ作为日本血吸虫病候选疫苗矍有广泛应用前景。     

树突状细胞抗日本血吸虫感染保护性免疫力的研究

目的 探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏树突状细胞抗血吸虫感染的保护性免疫力。方法 利用SEA分别致敏树突状细胞和巨噬细胞，将致敏树突状细胞和巨噬细胞分别免疫BALB／C小鼠3次，攻击感染6周后计数成虫和肝脏虫卵。结果 SEA致敏树突状细胞免疫小鼠诱导27．3％的减虫率和41．5％的减卵率，明显高于SEA致敏巨噬细胞组(22．0％和30．7％)和未致敏树突状细胞及巨噬细胞组(16．3％，27．3％和11．7％，17．0％)，血清抗体水平于第6周达高峰。结论 SEA致敏树突状细胞具有抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用。     

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白保护性免疫力的研究

采用纯化的日本血吸虫成虫31／32KD蛋白加福氏佐剂免疫小鼠，不仅可减少虫负荷(减虫率28．1％)，还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率71．4%)。抑制虫卵内芽肿的形成．结果提示，日本血吸虫成虫31／32KD蛋白具有较高的减卵率．可望作为混合多价疫苗的侯选组分．     

一种新型日本血吸虫疫苗(童虫活细胞)诱导小鼠产生有效保护性免疫力的研究

目的观察日本血吸虫童虫活细胞诱导小鼠产生的保护性免疫效果.方法采用日本血吸虫肝期童虫的活细胞和虫体组织碎片,在未加佐剂条件下分别接种昆明小鼠,每组10只,每2周接种1次,共4次,末次接种后第7天攻击感染血吸虫尾蚴30条/鼠,感染后第42天解剖小鼠,与对照组比较检测和分析虫体发育数、虫体大小、鼠肝病变及其组织内虫卵肉芽肿大小、血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1亚类比值.结果细胞接种组和虫体碎片接种组分别与PBS注射组比,虫体发育数分别下降67.6%%和46.3%;肝组织中虫卵数(LEPG)在细胞接种组和虫体碎片接种组中分别减少95.4%和64.8%;在细胞接种鼠组肝表面卵结节和虫卵肉芽肿及雄虫长度均显著小于其他两组者;特异性IgG2a/IgG1比值≥2,但总抗体水平低于虫体接种组.结论该研究首次建立了一种血吸虫细胞型疫苗研究模型,初步结果表明,在不加佐剂条件用血吸虫童虫活细胞可诱导小鼠产生显著的抗攻击感染免疫力,其机制可能主要为Th1介导的细胞免疫应答.     

日本血吸虫（大陆株）成虫基因表达谱的研究

报告作1998年至2000年有关日本血吸虫（大陆株）成早基因表达谱研究的结果，主要扬：已测定551条EST，其中519条EST已送入国际基因数据库（GenBank/dbEST），并获得了GenBank的登录号。经同源整合后，519长EST序列归类为388个基因序列，其中，24条（6.19％）为日本血吸虫已知基因序列；18条（4.64％）EST与曼长血吸虫已知基因序列同源，90条（23.19％）EST与其它生物的已知基因序列同源，同源基因包括精氮酸酶、酰胺酸酶、微纤维蛋白、肌动蛋白、细胞色素C氧化酶、二硫异构酶、加长因子、热激蛋白70、Y盒结合蛋白和抗凋亡因子等。其余的256条（65.98％）EST在Gen-Bank中未发现有已知基因的同源序列。将非日本血吸虫同源序列EST或未检索到同源序列的EST初步定义为日本血吸虫亲基因/未知基因序列EST，共364条。已克降日本血吸虫精氮酸酶基因、Y-盒结合蛋白基因和抗凋亡-1因子3个新基因的全长cDNA，其GenBank的登录号分别为AF402615、AF367371和AF333765。本研究结果丰富了血吸虫基因组数据，并为进一步筛选日本血吸虫疫苗候选基因或药物靶位提供了科学依据。     

重组日本血吸虫SjGST-Sj32蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

应用基因工程技术分别表达出ＳｊＧＳＴＳｊ３２,Ｓｊ３２和ＳｊＧＳＴ,用于保护性免疫的动物实验及其体液免疫机制的初步探讨。结果：与对照组相比,重组ＳｊＧＳＴＳｊ３２组,Ｓｊ３２组,Ｓｊ３２＋ＳｊＧＳＴ组均有明显的减虫效果（Ｐ＜０．０５）。上述三组及ＳｊＧＳＴ组的肝脏虫卵计数均较对照组为少（Ｐ＜０．０１）。提示重组Ｓｊ３２ｋＤ蛋白可诱导小鼠产生明显的抗日本血吸虫攻击感染的保护性免疫及抗生殖免疫效果,而ＳｊＧＳＴ仅表现出一定的抗生殖免疫效果。     

日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达

目的：克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白（sjSDISP）全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法：根据基因库中SjSDISP对应的EST（BU804141）以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgtl1多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果：获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL2．中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论：编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。     

PCR扩增日本血吸虫大陆株黏蛋白样蛋白(SjMLP)部分基因

目的 体外扩增日本血吸虫中国大陆株黏蛋白样蛋白(SjMLP)的部分基因序列。方法 利用PCGENE软件查找SjMLP的抗原决定簇；特定寡核苷酸引物的设计与合成；TROZOL抽提日本血吸虫成虫总RNA，RT—PCR扩增目的基因并进行DNA度列分析。结果 RT—PCR特异性扩增出SjMLP编码区部分基因序列，大小为756bp，测序结果显示与曼氏血吸虫MLP高度同源。结论 扩增到了SjMLP抗原编码区基因的部分序列，与Sm MLP高度同源。     

佐剂对日本血吸虫31／32kd蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋｄ蛋白（Ｓｊ３１／３２）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｉｅｆｉｎ（ＰＡＯ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２辅以福氏完全佐剂（ＦＣＡ）对小鼠保护性免疫力的影响。Ｓｊ３１／３２＋ＰＡＯ组小鼠减虫率为４３．１７％，肝减卵率为６７．０２％，Ｓｊ３１／３２＋ＦＣＡ组小鼠减虫率为２８．７４％，肝减卵率为６４．２４％，Ｓｊ３１／３２组小鼠减虫率为２６．９９％，肝减卵率为５１．     

日本血吸虫Rho GTPaseDNA及重组蛋白免疫保护效果研究

目的研究日本血吸虫中国大陆株Rho家族小分子G蛋白(Sj-Rho GTPase)DNA疫苗及重组蛋白疫苗免疫保护效果.方法将pcDNA3.1-SjRho GTPase DNA疫苗和pGEX-5X-3原核载体所表达的重组蛋白疫苗三次分别或联合免疫昆明鼠,3周后,每鼠感染40条尾蚴,42 d后剖杀小鼠,记数成虫和肝脏虫卵数. 结果与佐剂或空白质粒对照组相比,DNA疫苗、重组蛋白疫苗及联合免疫分别获得22.16%(P<0.01)、18.71%(P<0.05)和39.20%(P<0.001)的减虫率以及34.55%、20.07%和49.55%(P<0.001)的肝组织减卵率.结论 Sj-Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗均可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用,且联合免疫方案保护效果好于单一疫苗.     

Protective immunity induced by the anti-idiotypic monoclonal antibody NP30 of Schistosoma japonicum

Objective To investigate the protective immunity induced by the anti-idiotypic monoclonal antibody NP30 of Schistosoma japonicum in mice.Methods An orthogonal table L(16)(4×2(12)? was selected as the experimental de sign.Eight-week-old Kunming outbred mice (male and female) were randomly div ided into 16 experimental groups and 2 control groups.Control groups were i njected with SP2/0 ascites intraperitoneally. Mice from each group were infe cted with 100±2 cercariae of Schistosoma japonicum in the abdominal skin and were sacrificed on the thirtieth day postchallenge. Adult worms were r ecovered and counted by perfusion of the left ventricle-portal vein.The SP2 /0 ascites injected mice were used as controls and the percentage of protection was calculated.Results Active immunization of mice with NP30 could produce protection levels ranging f rom 22.36% to 50.46% depending on the different immunity protocols. The be st immunization protocol was established from the results.Conclusions Active immunization with NP30 can induce a degree of protection to infection wi th Schistosoma japonicum cercariae and NP30 is a potential vaccine ca ndidate against Schistosoma japonicum.     

小鼠日本血吸虫模型肝组织坏死形态学观察

建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型和自然感染模型，发现早期肝脏出现，片状或灶性凝固性坏死，后期发生纤维组织增生。提示肝组织凝固性坏死诱发肝纤维化，与虫卵肉芽肿引起的纤维化协同作用可能是血吸虫性肝硬化的又一发生机理。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠的免疫保护作用

目的观察日本血吸虫云南品系SIEA(未成熟卵可溶性抗原)免疫小鼠后产生的免疫保护效果.方法ICR小鼠经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染血吸虫尾蚴,感染后46 d剖杀,观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比.结果经SIEA免疫后感染血吸虫尾蚴的小鼠粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为33.25%,34.75%(P<50.05);肝表面虫卵结节密度下降47.76%(P<0.05);肝组织内虫卵总数下降,每雌肝卵减少率为41.83%(P<0.05);每雌成熟虫卵减少率为54.37%(P<0.05);肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加(P<0.05).结论日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原(SIEA)的抗原性较强,诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,可望作为血吸虫抗病疫苗候选抗原.     

重组日本血吸虫32kDa蛋白和铁蛋白联合免疫保护作用的研究

目的研究重组日本血吸虫32kDa蛋白和铁蛋白联合免疫对感染小鼠的免疫保护作用。方法大量制备重组日本血吸虫32kDa蛋白(rSjGST-Sj32)和铁蛋白(GMCSF-SjFer)。48只昆明小鼠随机分为A,B,C,D4组,每组12只。B组和C组分别为rSjGST-Sj32和GMCSF-SjFer免疫组,每鼠注射50μg重组蛋白加弗氏完全佐剂(FCA);D组为联合免疫组,每鼠注射50μg重组32kDa蛋白和50μg铁蛋白的混合物加FCA;A组为FCA对照组。分别于0、2、6w共免疫3次。第3次免疫后2w,每鼠经腹部皮肤攻击感染40±1条尾蚴,感染后第45天剖杀所有小鼠,比较各组间减虫率和鼠肝卵减少率。结果联合免疫组与FCA对照组相比,获得了36.53%的减虫率和68.44%的每条雌虫肝组织产卵减少率,而单独rSjGST-Sj32免疫组的减虫率及每条雌虫肝组织产卵减少率分别为22.80%和43.12%,均显著低于联合免疫组(P<0.05及P<0.001);单独GMCSF-SjFer免疫组分别为21.05%和41.91%,均显著低于联合免疫组(P<0.05及P<0.001)。结论rSjGST-Sj32蛋白和GMCSF-SjFer蛋白联合免疫可显著地提高这两种蛋白单独应用时的免疫保护作用。     

日本血吸虫多价DNA疫苗pBK-Sj26(Sj32)-Sj23免疫效果的观察

为了观察血吸虫病多价DNA疫苗的保护力,将小鼠分成5组空白对照组、空质粒对照组、单价抗原DNA疫苗pBK-CMV-Sj23组、多价抗原DNA疫苗pBK-CMV-Sj26-Sj23和pBK-CMV-Sj32-Sj23组.大量提取各组质粒DNA后,各组于0、3、5周在BALB/c小鼠股四头肌注射相应质粒DNA,9周用血吸虫尾蚴攻击感染,15周剖杀小鼠计算减虫率及减卵率.结果显示与对照组比较,实验组小鼠减虫率及减卵率有极显著性差异(P<0.01);与单价pBK-CMV-Sj23组比较,多价DNA疫苗组的减虫率及减卵率有显著性差异.提示血吸虫多价DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单价DNA疫苗.     

曼氏血吸虫与日本血吸虫交叉免疫原性的血清学实验研究

以曼氏血吸虫的虫卵和成虫免疫家兔后所产生的特异性抗体,可用以日本血吸虫虫卵、尾蚴和成虫为抗原分别进行的COP,CHR和ELACIEP测出,表明两种人体血吸虫存有显著的交叉抗原成分。应用此种血清交叉反应性,以检测抗异种人体血吸虫的抗体,似有效而可取的,可用以辅助诊断援外回国人员是否感染国外人体血吸虫病。     

日本血吸虫Calpain的DNA疫苗诱导小鼠免疫保护性研究

目的　研究日本血吸虫中国大陆株Calpain的DNA疫苗对Balb/c小鼠的免疫保护性作用。方法　大量制备pVAC质粒DNA和pVAC -CalpainDNA疫苗 ,Balb/c小鼠 5 0只 ,随机均分为对照组和实验组 ,对照组每只小鼠的股四头肌注射接种 10 μgpVAC质粒DNA ,实验组以同样方式注射 10 μgpVAC -CalpainDNA疫苗 ,第 3周加强免疫一次。第 4周每只小鼠经腹部皮肤感染 ( 2 5± 1)条尾蚴 ,感染 6周后剖杀 ,从门静脉灌流收集计成虫数、碎脾计T淋巴细胞总数、从各鼠肝脏的同一部位切下小块肝组织 ,置 5 %KOH溶液消化后 ,计算每克肝组织虫卵数 ,比较减虫率、减雌率和减卵率。于免疫前、第一次免疫后 2周和感染后 2周分别从尾静脉采血 ,用ELISA测定抗体水平。结果　与对照组相比 ,实验组获得 36.84%的减虫率、36.36%的减雌率和 43.31%的减卵率 ,感染后实验组小鼠IgG抗体水平升高幅度大于对照组 ,对照组T淋巴细胞数显著多于实验组。结论　CalpainDNA疫苗可诱导小鼠产生较好的免疫保护作用 ,具有较大的发展潜力     

血清酸溶性蛋白定量在日本血吸虫病研究中的应用

本文研究动物感染日本血吸虫及毗喹酮治疗过程中血清酸溶性蛋白(ASP)浓度的动态变化。结果显示:家兔感染早期,血清ASP浓度明显升高,中期降至正常水平,末期再次明显升高,感染小鼠经吡喹酮治疗,血清ASP降低程腰与疗效、减虫率、病变消退等相符合。本文提示:血清ASP浓度测定可作为监护病情、判定药物疗效的指标,有一定的临床实用价值。