小檗碱对结肠炎小鼠Th17/Treg细胞分化及IL-35的影响

目的研究Th17、Treg细胞分化及白细胞介素-35(IL-35)在小鼠结肠炎发病中的作用,探讨小檗碱对小鼠结肠炎的治疗作用和作用机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和小檗碱组,每组10只。正常组未行造模,其余3组均采用三硝基苯磺酸进行结肠炎造模。造模24 h后,小檗碱组小鼠给予小檗碱腹腔注射,地塞米松组小鼠给予地塞米松腹腔注射,模型组和正常组小鼠均以生理盐水腹腔注射,均1次/d,共7 d。第8天处死各组小鼠,观察小鼠结肠黏膜大体形态及组织病理评分,用流式细胞仪检测小鼠脾脏Th17、Treg细胞分化情况,ELISA法检测小鼠结肠组织中IL-35表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠脾脏Th17细胞比例显著升高(P 0. 05),Treg细胞比例显著降低(P 0. 05),结肠组织中IL-35表达水平显著降低(P 0. 05);与模型组比较,小檗碱组、地塞米松组小鼠脾脏Th17细胞比例显著降低(P均0. 05),而Tregs细胞比例显著升高(P均0. 05),且结肠组织中IL-35表达水平显著升高(P均0. 05)。结论脾脏Th17/Treg细胞失衡,促炎细胞Th17细胞分化增加、免疫抑制细胞Treg细胞降低及结肠IL-35分泌减少参与了结肠炎的发生发展过程,而小檗碱可以通过抑制小鼠脾脏Th17细胞分化,促进Treg细胞分化和IL-35表达,起到减轻结肠黏膜炎症的作用。     

平喘方对哮喘模型小鼠气道平滑肌内TLR4mRNA和蛋白及相关炎症因子水平的影响

目的:通过研究平喘方对哮喘模型小鼠支气管平滑肌Toll样受体4(Toll-likereceptors,TLRs) mRNA及蛋白和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BA LF)中白介素6(Interleukin 6,IL-6)、白介素10(Interleukin 10,IL-10)、白介素17(Interleukin 17,IL-17)因子水平的影响,进一步探索平喘方治疗哮喘和干预气道炎症的作用机制。方法:对40只BALB/c雄性小鼠用卵蛋白(ovalbumin,OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型。40只小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组4组,每组10只。给药期间记录并观察各组小鼠基本情况,给药28天后取材,运用逆转录PCR法(Realtime-PCR)及蛋白质印迹法法(Western Blot)检测哮喘模型小鼠支气管平滑肌TLR4的mRNA和蛋白水平表达,酶联免疫吸附法(Elisa)检测BALF中IL-6、IL-17、IL-10的因子水平。结果:治疗28d后,哮喘模型组TLR4mRNA水平高于明显高于其他各组(P 0. 01);空白组水平与平喘方组mRNA水平无差异(P 0. 05)。哮喘模型组TLR4蛋白WB灰度值高于平喘方组(P 0. 05);平喘方组TLR4蛋白WB水平高于地塞米松组(P 0. 05)。哮喘模型组IL-6、IL-17因子水平明显高于其他组(P 0. 01);平喘方组IL-6、IL-17因子水平明显高于地塞米松组(P 0. 01)。哮喘模型组IL-10因子水平明显低于其他组(P 0. 01);空白组IL-10水平明显高于其他组(P 0. 01);平喘方组IL-10与地塞米松组因子水平无差异(P 0. 05)。结论:平喘方可以减少气道平滑肌内TLR4mRNA的表达,以降低TLR4蛋白水平,进而影响肺内炎症因子IL-6、IL-17、IL-10的分泌,缓解哮喘模型小鼠的气道炎症。     

小檗碱通过下调miR-1290缓解高糖诱导的足细胞损伤研究

目的探究小檗碱对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其对miR-1290的调控作用。方法采用高糖诱导小鼠肾足细胞MPC5建立细胞损伤模型,给予不同浓度(1.0、2.5、5.0μmol/L)小檗碱进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-1290 mRNA表达情况。将阴性对照(mi R-NC)和mi R-1290模拟物(miR-1290mimics)分别转染至MPC5细胞,给予5μmol/L小檗碱进行干预,考察miR-1290对小檗碱抑制高糖诱导的细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与小檗碱+miR-NC组比较,小檗碱+miR-1290 mimics组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05)。结论小檗碱能够通过下调mi R-1290表达抑制高糖诱导的足细胞凋亡及炎性反应,从而减轻细胞损伤。     

丹参-苦参对免疫抑制小鼠的免疫调节功能探讨

目的:通过使用环磷酰胺所致免疫抑制小鼠模型探讨丹参-苦参提取物对免疫缺陷小鼠的免疫调节作用的机制。方法:采用环磷酰胺造免疫抑制动物模型,空白组,模型组,丹参-苦参提取物低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg~(-1)),采用小鼠脏器指数评价脏器功能,采用小鼠碳粒廓清模型评价小鼠吞噬细胞功能,采用luminex法检测血清中相关细胞因子水平,流式检测辅助性T细胞数量。体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264. 7,给予丹参-苦参提取物后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测丹参-苦参提取物对RAW264. 7细胞增殖的影响,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对其增殖的影响及其可能机制进行探讨。结果:与空白组比较,模型组显著抑制肝指数(P 0. 01)和脾脏指数(P 0. 05),动物血清白细胞介素-6(IL-6)的分泌明显降低(P 0. 05),吞噬指数显著下降(P 0. 01),同时50 mg·L~(-1)环磷酰胺显著抑制RAW264. 7细胞的增殖(P 0. 01);与模型组比较,丹参-苦参提取物中、高剂量均可以显著提高肝脏指数(P 0. 01),并显著促进趋化因子C-X-C配体1(CXCL1)的分泌(P 0. 01),丹参-苦参提取物高剂量可以显著促进IL-6的分泌(P 0. 01),丹参-苦参提取物中、高剂量能够明显提高小鼠腋下以及颈部淋巴结中辅助性T细胞的数量(P 0. 05,P 0. 01),显著性升高吞噬指数的趋势(P 0. 01),显著性促进RAW264. 7细胞的增殖(P 0. 01),且促进IL-6信号传导与转录激活因子(STAT3)调控下游B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2样蛋白1(Bcl-2L1)以及细胞周期蛋白D1(CCND1) mRNA的表达,起抗凋亡作用。结论:丹参-苦参提取物可对抗环磷酰胺所导致的免疫抑制,增强动物免疫功能。     

补阳还五汤对类风湿关节炎小鼠MPO，NE mRNA表达及TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-17的影响

目的:观察不同剂量的补阳还五汤对类风湿关节炎模型小鼠膝和踝关节滑膜中性粒细胞标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidas,MPO),中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE) mRNA表达及血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL~(-1)β),白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6),白细胞介素-17(interleukin-17,IL~(-1)7)的影响。方法:将小鼠随机分为正常组,模型组,甲氨喋呤组(0. 001 5 g·kg~(-1)),补阳还五汤2. 5,1. 25,0. 625 g·kg~(-1)组。采用胶原诱导的方法制备类风湿关节炎小鼠模型,连续灌胃给药28 d后使用病理学方法分析小鼠治疗效果,使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清及关节液中炎性因子的表达,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测膝和踝关节滑膜中性粒细胞标志物蛋白MPO及NE mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠关节明显肿胀(P 0. 01),关节病理积分、血清及关节液中炎性因子水平,膝及踝关节中MPO,NE mRNA表达水平较明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,补阳还五汤组(2. 5 g·kg~(-1))治疗28 d后小鼠小鼠关节肿胀明显减轻(P 0. 05,P 0. 01),关节病理积分、血清及关节液中炎性因子水平,膝及踝关节中MPO,NE mRNA表达水平较明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:适宜剂量的补阳还五汤可下调小鼠膝和踝关节滑膜中性粒细胞标志物蛋白MPO及NE mRNA表达水平,从而抑制中性粒细胞活性,降低血清和关节液中炎性因子TNF-α,IL~(-1)β,IL-6和IL~(-1)7的水平。     

盐酸青藤碱治疗性给药对胶原诱导性关节炎小鼠的保护作用

目的探讨盐酸青藤碱治疗性给药对胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠的保护作用。方法采用尾根部注射 鸡II 型胶原建立C57BL/6 小鼠关节炎模型。于第2 次免疫注射后第7 天,将造模成功小鼠随机分为模型组、 盐酸青藤碱组（100 mg·kg-1）、地塞米松组（2 mg·kg-1）,同时设置正常组。给药组小鼠分别腹腔注射相应治疗药 物,每天1 次,连续治疗33 d,正常组和模型组小鼠腹腔注射等体积无菌生理盐水。给药周期内,每3 d进行 1 次小鼠足趾关节炎指数评分;采用ELISA 法检测外周血中TNF-α、IL-6 炎症因子水平;采用HE 染色法观 察关节滑膜炎性细胞浸润情况;采用Micro-CT 扫描分析骨质破坏情况。结果与正常组相比,模型组小鼠足 趾关节炎指数评分显著升高,血清中TNF-α 和IL-6 炎症因子水平显著升高（P＜0.001）;关节滑膜部位炎性细 胞浸润明显增多、骨质破坏明显,膝、踝关节病理总评分均显著升高（P＜0.001）。与模型组相比,盐酸青藤碱 干预治疗后,能显著降低足趾关节炎指数评分及血清中TNF-α、IL-6 炎症因子水平（P＜0.05,P＜0.01）,并 能阻止关节滑膜部位炎性细胞浸润,减轻骨质破坏,降低膝、踝关节病理总评分（P＜0.01）。结论盐酸青藤 碱治疗性给药可阻止CIA 小鼠的关节骨质破坏,其作用机制与减轻关节滑膜炎症有关。     

霍山石斛对肾阴虚小鼠血清IL-2、IL-6及抗氧化作用的实验研究

目的:研究霍山石斛对肾阴虚小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、IL-6及抗氧化作用的影响。方法:96只昆明雄性小鼠适应性喂养7 d后随机分为正常组,模型组,铁皮石斛组,六味地黄丸组,霍山石斛(0. 33、1、2、3 g/kg) 4个剂量组,给药14d。除正常组外,其余各组小鼠每天下午给予甲状腺素溶液160 mg/kg,建立小鼠肾阴虚模型,观察霍山石斛对肾阴虚小鼠体质量、胸腺和脾脏指数,血清IL-2、IL-6含量及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平的影响。结果:霍山石斛各给药组均能明显缓解小鼠的阴虚状态,增加体质量(P 0. 01,P0. 05),1、2、3 g/kg剂量组霍山石斛能提高阴虚小鼠胸腺指数和脾脏指数(P 0. 01),降低血清IL-6 (P 0. 05,P 0. 01),升高IL-2(P 0. 01),升高阴虚小鼠肝组织SOD、GSH-Px、CAT水平(P 0. 01),降低肝组织MDA水平(P 0. 05,P0. 01),且与铁皮石斛比较,其升高SOD、CAT和降低MDA作用明显增强(P 0. 01,P 0. 05)。结论:霍山石斛具有增强阴虚状态下机体免疫调节作用和增强抗氧化能力的作用,其免疫调节作用与铁皮石斛相当,抗氧化性优于铁皮石斛。     

青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3（MMP-3）mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞，分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组，经青藤碱干预后，用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况，用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3mRNA的表达。结果经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制（P〈0．05），其中高剂量组的改变差异尤为显著（P〈0．01）。MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降（P〈0．05），且高剂量纽的差异尤为显著（P〈0．01）。结论青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达，推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理。     

酸枣仁汤通过抑制APP/PS1双转基因小鼠海马神经炎症发挥神经保护作用

目的:观察酸枣仁汤对APP/PS1小鼠海马神经炎症的影响,并探讨其神经保护的可能机制。方法:将小鼠随机分为空白组,模型组,多奈哌齐组(0. 92 mg·kg-1),酸枣仁汤低、高(12. 96,25. 92 g·kg-1)剂量组。各组连续给药30 d后,采用尼氏染色观察各组小鼠海马齿状回(DG)区病理形态的变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠海马中TNF-α,IL-1β的mRNA表达水平,采用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠海马中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合蛋白(IBA1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠海马DG区颗粒细胞排列不均匀,细胞丢失明显,部分神经元胞内尼氏体消失或固缩,血清中TNF-α,IL-1β含量显著升高(P 0. 01),小鼠海马中TNF-α,IL-1βmRNA表达显著升高(P 0. 01),海马DG区中GFAP,IBA1蛋白表达显著上调(P 0. 01);与模型组比较,多奈哌齐组、酸枣仁汤低、高剂量组小鼠海马DG区颗粒细胞排列稍整齐,神经元丢失减轻,且胞内尼氏体消失或固缩情况好转,小鼠血清中TNF-α,IL-1β含量明显降低(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马中TNF-α,IL-1βmRNA表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马DG区中GFAP,IBA1蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:酸枣仁汤能改善APP/PS1双转基因小鼠神经元丢失,其机制可能与其调节小鼠海马神经炎症有关。     

青藤碱对骨质疏松性压缩骨折家兔血清白细胞介素-1β及白细胞介素-17和骨生长分化因子2的影响

目的观察青藤碱对骨质疏松性压缩骨折家兔血清白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-17和骨生长分化因子2(GDF2)的影响,探讨其作用机制。方法先将36只雌性家兔去卵巢建立骨质疏松模型,4周后再采用剪断L1-5椎体前缘的方法建立骨质疏松性压缩骨折模型,成模后分为模型组、青藤碱A组和青藤碱B组。青藤碱A组和青藤碱B组分别用10%青藤碱按2 m L/(kg·d)和4 m L/(kg·d)剂量灌胃,模型组灌等体积生理盐水,均1次/d,连续灌胃1个月。于灌胃10,20,30 d拍摄骨痂X射线片对骨痂生长情况进行评分;灌胃前后采用双抗体夹心法检测耳缘静脉血IL-1β、IL-17水平;灌胃结束后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测骨折处骨痂组织中GDF2表达水平,采用RT-PCR法检测骨折处骨痂组织中GDF2 mRNA表达水平。结果灌胃20,30 d后,青藤碱A组和青藤碱B组骨痂生长良好,断层边缘逐渐模糊或消失,骨密度增大,综合评分均明显高于同期模型组(P均0.05),青藤碱A组和青藤碱B组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。灌胃结束后,青藤碱A组和青藤碱B组血清IL-1β、IL-17水平均明显低于模型组(P均0.05),GDF2、GDF2 mRNA表达水平均明显高于模型组(P均0.05),青藤碱A组和青藤碱B组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论青藤碱可通过抑制IL-1β、IL-17介导的炎性反应,提高GDF2诱导成骨分化和骨形成能力,从而促进骨痂生长而加速骨折愈合。     

基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制

目的:探讨抗纤益心方干预自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制,及其与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞平衡的关系。方法:将60只SPF级BALB/c健康8周龄雄性小鼠按1∶5的比例随机分为正常组和造模组,在第0,7,28天于造模组小鼠腹股沟、腋下、背部多处皮下注射猪心肌肌球蛋白乳化液0.2 m L(含猪心肌肌球蛋白0.1 mg)以制备心肌免疫损伤小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组,抗纤益心方组(KYP),缬沙坦组(Valsartan),抗纤益心方组给予抗纤益心方20.4 g·kg^-1·d^-1灌胃,缬沙坦组给予缬沙坦12 mg·kg^-1·d^-1灌胃,正常组和模型组给予同计算量的生理盐水灌胃,连续灌胃4周后取材,苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色检测心肌组织中病理损伤情况,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中B型钠尿肽(BNP),抗心肌抗体,白细胞介素-17(IL-17)和白细胞介素-10(IL-10)的表达,流式细胞术检测脾脏Th17,Treg细胞的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠脾脏转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt),叉头框蛋白P3(Fox P3)m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠心肌病理损伤增加,血清BNP,抗心肌抗体,IL-17升高,IL-10降低(P<0.05),脾脏Th17细胞表达水平升高,Treg细胞的表达水平降低(P<0.05),心肌组织Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax/Bcl-2值升高,脾脏RORγt m RNA表达升高,Fox P3 m RNA表达降低,RORγt/Fox P3升高(P<0.05);与模型组比较,抗纤益心方组及缬沙坦组心肌病理损伤减轻,血清BNP,抗心肌抗体,IL-17降低,IL-10升高(P<0.05),脾脏Th17细胞表达水平降低,Treg细胞的表达水平升高(P<0.05),心肌组织Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Bax/Bcl-2降低,脾脏RORγt m RNA表达降低,Fox P3 m RNA表达升高,RORγt/Fox P3值降低(P<0.05)。结论:抗纤益心方可能通过调节Th17/Treg细胞平衡改善心肌免疫损伤。     

双藤汤醇提取物对寒痹型胶原诱导大鼠关节炎的抗炎作用

目的:观察双藤汤(昆明山海棠、黑骨藤)醇提取物对寒痹型胶原诱导关节炎大鼠抗炎作用的影响。方法:取雄性SD大鼠,除空白组外,其余动物采用胶原诱导关节炎模型。成模动物随机分为模型组、双藤汤60、40、20g生药/kg组、青藤碱0. 028g/kg组,每组10只。连续给药4周后测量动物足跖厚度; HE染色观察踝关节和脾脏病理变化; Western-blotting检测脾脏和关节滑膜IKB-α、TAB-2、IKK-α蛋白表达; ELISA检测细胞因子TNF-a、IL-6、IL-1β。结果:与模型组比较,空白组、双藤汤60g、40g生药/kg组和青藤碱0. 028g/kg组能够显著抑制足跖肿胀程度;脾脏和踝关节病理显示双藤汤60g、40g生药/kg组和青藤碱0. 028g/kg组抑制脾小体萎缩减少和保持踝关节面光滑完整,软骨细胞整齐排列; Western-blotting显示双藤汤60、40、20g生药/kg组、青藤碱0. 028g/kg组IKB-α、TAB-2、IKK-α蛋白表达量受到不同程度抑制; ELISA显示双藤汤60g、40g生药/kg组、青藤碱0. 028g/kg组TNF-α、IL-6、IL-1β表达量下降。结论:双藤汤可能通过抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、IKB-α、TAB-2、IKK-α蛋白的过表达起到对寒痹型胶原诱导关节炎大鼠炎症的抗炎作用。     

蝙蝠葛碱对阿尔茨海默病模型小鼠海马的影响

目的探讨蝙蝠葛碱对阿尔茨海默病模型小鼠的影响及其机制。方法雄性小鼠随机分成对照组、模型组、吡拉西坦组(0.62g·kg~(-1)·d~(-1))、蝙蝠葛碱组(1.17g·kg~(-1)·d~(-1))。采用Aβ1﹣42(80pmol·μl~(-1))双侧脑室注射小鼠诱导阿尔茨海默病模型。所有小鼠灌胃给予等体积的药物或者生理盐水,每天灌胃1次,持续28d。采用Morris水迷宫测试行为学指标并观察小鼠的学习记忆能力,观察小鼠海马镜下形态结构、脑和脾脏的脏器指数,检测小鼠脑组织含水量,采用双抗体夹心法测定脑组织Aβ和IL-6水平。结果与对照组比较,模型组小鼠潜伏期延长,游泳距离增加(P0.05),神经元数量减少、变性,脑和脾脏的脏器指数明显降低(P0.05),脑组织含水量明显升高(P0.05),Aβ和IL-6水平明显升高(P0.05);与模型组比较,蝙蝠葛碱能明显改善模型小鼠学习记忆能力(P0.05),海马神经元细胞形态明显改善,脑和脾脏脏器指数明显升高(P0.05),脑组织含水量明显降低(P0.05),Aβ和IL-6水平明显降低(P0.05)。结论蝙蝠葛碱能改善阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆功能及海马神经元的正常形态结构、脏器指数,蝙蝠葛碱通过抑制Aβ和IL-6蛋白在阿尔茨海默病治疗中发挥重要的作用。     

芍药甘草汤对呼吸道合胞病毒诱发哮喘急性加重小鼠相关炎症因子、Bcl-2和Bax表达及免疫功能的影响

目的观察芍药甘草汤对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘急性加重小鼠相关炎症因子、Bcl-2和Bax表达及免疫功能的影响。方法将50只Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、西药组(地塞米松组)、中药组(芍药甘草汤组)和联合组(地塞米松+芍药甘草汤)。除空白组外,建立RSV诱发哮喘急性加重小鼠模型;空白组给予等量生理盐水。于建模完成后第2日给药,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,剂量为10 mL/(kg·d);西药组给予地塞米松灌胃,1 mg/(kg·d);中药组给予芍药甘草汤灌胃,5 g/(kg·d);联合组给予地塞米松和芍药甘草汤灌胃。每日灌胃1次,连续治疗10 d。于建模后第60日,分别对各组小鼠进行肺组织病理切片观察,ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-13(IL-13)、白细胞介素-17(IL-17)水平、免疫球蛋白E(IgE)含量,Envision法免疫组化检测Bcl-2及Bax蛋白表达。结果与空白组比较,模型组IL-6、IL-13、IL-17、IgE水平显著升高(P 0.05);与模型组比较,各治疗组小鼠IL-6、IL-13、IL-17、IgE水平均显著降低(P 0.05);与西药组比较,中药组小鼠IL-6、IL-13、IL-17、IgE水平明显偏高(P0.05);西药组与联合组小鼠IL-6、IL-13、IL-17、IgE水平无明显差异(P 0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织及气道Bcl-2阳性面积明显增高、Bax阳性面积明显降低(P 0.05);与模型组比较,各治疗组小鼠的肺组织及气道Bcl-2阳性面积均显著降低、Bax阳性面积均显著升高(P 0.05);与西药组比较,中药组小鼠肺组织及气道Bcl-2阳性面积明显偏高、Bax阳性面积明显偏低(P 0.05);西药组与联合组小鼠肺组织及气道Bcl-2阳性面积、Bax阳性面积相比无显著性差异(P 0.05)。结论芍药甘草汤可降低RSV诱发哮喘急性加重模型小鼠的IL-6、IL-13、IL-17水平等炎症因子水平,减轻气道炎症反应;能有效提升Bax蛋白、降低Bcl-2蛋白表达,促进嗜酸粒细胞凋亡,阻止气道重塑;降低LgE水平,提升免疫功能,从而缓解RSV诱发的哮喘急性发作。     

断藤益母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MEKK2及CIA小鼠关节炎的影响

目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制。方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1 000,800,600 mg·l~(-1)),甲氨蝶呤(MTX)组(20μmol·l~(-1))组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(MEKK2)的蛋白和mRNA表达进行分析。将42只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组7只,分别为正常组,模型组,MTX组(2 mg·kg~(-1)),DTYMD低、中、高剂量组(6. 25,12. 5,25 mg·kg~(-1))。除正常组外,其他5组均采用二次免疫法构建胶原诱导型关节炎(CIA)模型。给药结束后,取小鼠后肢踝关节行苏木素-伊红(HE)染色并进行关节病理评分。结果:与模型组比较,DTYMD以浓度依赖方式抑制成纤维样滑膜细胞活性(P 0. 01);与空白组比较,模型组细胞增殖率升高(P 0. 01)。与模型组比较,DTYMD高、中质量浓度组降低MEKK2蛋白及mRNA的表达(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,DTYMD不同剂量组均降低细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的表达(P 0. 01);与空白组比较,模型组MMP-1,IL-6,TNF-α表达明显上升(P 0. 05,P 0. 01)。在动物实验中,与模型组比较,DTYMD高、中剂量组可以降低CIA小鼠关节肿胀度(P 0. 05,P 0. 01);与正常组比较,模型组小鼠二次免疫后关节明显肿胀(P 0. 05)。在CIA小鼠踝关节HE染色中,与空白组比较,模型组小鼠病理学评分升高(P 0. 01);与模型组比较,DTYMD高、中剂量小鼠关节病理评分明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:DTYMD可能通过下调MEKK2对细胞因子IL-6,TNF-α,MMP-1负性调控,从而缓解类风湿关节炎的炎症反应。     

双藤汤醇提取物对寒痹型胶原诱导大鼠关节炎的抗炎作用北大核心CSCD

目的:观察双藤汤(昆明山海棠、黑骨藤)醇提取物对寒痹型胶原诱导关节炎大鼠抗炎作用的影响。方法:取雄性SD大鼠,除空白组外,其余动物采用胶原诱导关节炎模型。成模动物随机分为模型组、双藤汤60、40、20g生药/kg组、青藤碱0. 028g/kg组,每组10只。连续给药4周后测量动物足跖厚度; HE染色观察踝关节和脾脏病理变化; Western-blotting检测脾脏和关节滑膜IKB-α、TAB-2、IKK-α蛋白表达; ELISA检测细胞因子TNF-a、IL-6、IL-1β。结果:与模型组比较,空白组、双藤汤60g、40g生药/kg组和青藤碱0. 028g/kg组能够显著抑制足跖肿胀程度;脾脏和踝关节病理显示双藤汤60g、40g生药/kg组和青藤碱0. 028g/kg组抑制脾小体萎缩减少和保持踝关节面光滑完整,软骨细胞整齐排列; Western-blotting显示双藤汤60、40、20g生药/kg组、青藤碱0. 028g/kg组IKB-α、TAB-2、IKK-α蛋白表达量受到不同程度抑制; ELISA显示双藤汤60g、40g生药/kg组、青藤碱0. 028g/kg组TNF-α、IL-6、IL-1β表达量下降。结论:双藤汤可能通过抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、IKB-α、TAB-2、IKK-α蛋白的过表达起到对寒痹型胶原诱导关节炎大鼠炎症的抗炎作用。     

灰树花提取物对脾虚小鼠脾脏Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨灰树花提取物对脾虚小鼠脾脏凋亡相关基因Bcl-2和Bax的影响.方法:健康雄性清洁级昆明种小鼠48只随机分为6组,即空白组、脾虚组、阳性药组(香菇多糖,2 mg·kg-1)、灰树花提取物低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),每组8只.采用番泻叶-劳倦过度复合因素法造模14 d,之后灰树花提取物和香菇多糖溶液滤菌后ip 10 d,第11天处死动物.免疫组化法观察脾脏凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定脾细胞凋亡相关基因Bcl-2,Bax mRNA的表达情况.结果:给予灰树花提取物后,Bcl-2阳性产物平均灰度值比脾虚组明显降低(P＜0.01),Bax阳性产物平均灰度值比脾虚组明显升高(P＜0.01).给予灰树花提取物后,Bcl-2 mRNA表达显著升高(P＜0.01),Bax mRNA表达显著降低(P＜0.01).结论:灰树花提取物可以通过促进Bcl-2蛋白与mRNA的表达、抑制Bax蛋白与mRNA的表达,提高Bcl-2/Bax的比值,可以通过影响线粒体途径来抑制脾淋巴细胞凋亡的发生.     

生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠下丘脑区生物钟基因Bmal1及海马IL-6，TNF-α的影响

目的:通过观察生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠学习记忆、下丘脑区生物钟基因Bmal1及海马白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探索生慧汤改善学习记忆和睡眠障碍的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为模型组、正常组、褪黑素组、生慧汤高剂量组和生慧汤低剂量组。采用自主活动分析系统检测各组小鼠自主活动;采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习能力及空间记忆能力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠下丘脑区钟基因Bmal1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Bmal1蛋白表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠海马区IL-6,TNF-α含量;采用皮尔森(Pearson)分析方法分析IL-6,TNF-α与Bmal1的相关性。结果:自主活动结果显示,与正常组比较,模型组小鼠活动次数和活动路程显著减少(P 0. 01);与模型组比较,各给药组小鼠活动次数和活动路程均明显增加(P 0. 05,P 0. 01),生慧汤低剂量组无显著性差异。Morris水迷宫结果显示,与正常组比较,模型组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程显著延长(P 0. 01),穿越平台次数与目标象限时间显著减少(P 0. 01),第1次抵原平台时间明显增加(P 0. 05);与模型组比较,各给药组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程明显减少(P 0. 05,P 0. 01),穿越平台次数与目标象限时间明显增加(P 0. 05,P 0. 01),第1次抵原平台时间明显减少(P 0. 05,P 0. 01)。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组小鼠Bmal1 mRNA表达上调;与模型组比较,各给药组小鼠Bmal1 mRNA表达下调。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠Bmal1蛋白表达显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高、低剂量组Bmal1蛋白表达显著降低(P 0. 01)。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组小鼠IL-6,TNF-α含量显著升高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组IL-6,TNF-α含量显著降低(P 0. 01)。Pearson分析结果显示,IL-6,TNF-α与Bmal1具有相关性,且呈负相关关系。结论:生慧汤可能通过上调下丘脑区Bmal1基因的表达来降低海马区炎症因子IL-6,TNF-α蛋白含量,从而改善阿尔兹海默症(AD)和昼夜节律紊乱。     

艾灸对类风湿关节炎小鼠Treg/Th17细胞及其信号通路的影响

目的:观察艾灸对类风湿关节炎(RA)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞(Th17)失衡及相关信号通路的影响,探讨艾灸治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:24只雄性DBA/1J小鼠随机分为正常组、模型组、假治疗组和艾灸组,每组6只。将正常组之外的小鼠用Ⅱ型胶原加佐剂于尾部皮下注射,建立类风湿关节炎模型。艾灸组小鼠在"足三里""肾俞"穴予以1 mg/壮的艾灸治疗,每只小鼠每穴灸6壮,连续治疗6 d为一疗程,共治疗2个疗程,疗程间休息2 d。假治疗组仅进行与艾灸组一样的抓取。采用胶原诱导的关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA)多发性关节炎指数评分标准观察艾灸对关节肿胀的影响,病变关节矢状面切片苏木素伊红(HE)染色观察关节炎症病理表现,流式细胞术分析小鼠脾脏Th17、Treg细胞数量,酶联免疫分析(ELISA)检测相关细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、转化生长因子-β(TGF-β)及半乳糖凝集素9(Galectin-9)的含量,实时定量荧光PCR(Real-time PCR)及Western blotting方法分析基因Foxp3、Galectin-9、RORγt、CARMA1、核转录因子(NF-κB)mRNA及蛋白表达。结果:二次免疫后10~12d,小鼠1~2个后足踝关节及脚掌、足趾关节出现红肿,类风湿关节炎模型成功建立。艾灸治疗开始后第15天,艾灸组和假治疗组小鼠关节肿胀均有所好转,艾灸组疗效优于假治疗组(P0.05)。病理形态上,RA模型小鼠关节面较正常小鼠粗糙,滑膜层变薄,假治疗组小鼠上述变化有一定程度的自行恢复,而艾灸组小鼠关节面恢复平整,滑膜层较治疗前变厚,与正常组表现较为接近。流式细胞术检测显示,RA模型小鼠脾脏中Treg细胞数量较正常组下降、Th17数量细胞上升(均P0.01);艾灸治疗能使Treg细胞数量显著上升(P0.05),而对Th17细胞数无显著影响(P0.05)。ELISA检测发现艾灸治疗与假治疗对RA小鼠脾脏中含量增加的IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β及含量减少的IL-10的影响差异无统计学意义(均P0.05),但艾灸能使RA小鼠减少的Galectin-9升高(P0.05)。RT-PCR及Western blotting结果显示,模型小鼠Foxp3、Galectin-9 mRNA及蛋白表达下降(均P0.01),艾灸能使之上调(P0.05,P0.01);RORγt、CARMA1、NF-κB mRNA及蛋白明显上升(均P0.01),艾灸能使之下调(P0.05,P0.01)。结论:艾灸能改善RA小鼠关节肿胀及关节滑膜炎性反应,其机制可能与影响Treg细胞的数量,调节Foxp3、Galectin-9、RORγt、CARMA1、NF-κB mRNA及蛋白表达有关。     

双氢青蒿素对两种类风湿关节炎模型的影响及机制

目的:研究双氢青蒿素(DHA)对佐剂性关节炎(AIA)和胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的保护作用,探讨DHA抗炎机制。方法:将Wistar大鼠随机分为8组,分别为AIA正常组,AIA模型组,AIA DHA组,AIA甲氨蝶呤组; CIA正常组,CIA模型组,CIA DHA组,CIA甲氨蝶呤组。佐剂性关节炎(AIA)的建立:除正常组外,各组大鼠右后足趾皮内注射0. 1 m L弗式完全佐剂;胶原诱导性关节炎(CIA)的大鼠模型的建立:除正常组外,各组大鼠尾根部注射1 g·L~(-1)二型胶原乳化剂0. 2 m L,并在7 d后,在大鼠相同部位注射相同体积的胶原乳化剂加强免疫。造模成功后,并分别给予DHA(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗后,并考察DHA抗AIA/CIA大鼠关节炎作用,包括关节炎指数(AI),足趾肿胀度,以及DHA对AIA/CIA大鼠免疫器官指数,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)水平和AIA/CIA大鼠踝关节病理切片的影响。体外培养RAW264. 7巨噬细胞系,分别以0. 5,1,2,4,8μmol·L~(-1)DHA处理24 h,设立正常,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测DHA对RAW264. 7细胞活力的影响;设立正常组,脂多糖(LPS)组,LPS+DHA(0. 5,1,2μmol·L~(-1))组,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清IL-6含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞核内核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠足肿胀度,AI,脾脏指数,IL-6水平显著增高(P 0. 05,P 0. 01),DHA可明显减轻AIA/CIA大鼠的足肿胀度(P 0. 05),降低关节炎评分指数(P 0. 05),降低AIA大鼠脾脏指数(P 0. 01)和胸腺指数(P 0. 05)以及AIA大鼠血清中IL-6水平(P 0. 05);但是对CIA大鼠脾脏指数并没有降低作用,而对胸腺指数和IL-6水平虽有降低作用但不具有统计学意义。此外DHA能够明显改善AIA/CIA大鼠踝关节病变情况,并能降低病理评分(P 0. 01)。与正常组比较,DHA 4,8,16μmol·L~(-1)组对RAW264. 7细胞活力明显抑制作用(P 0. 05,P 0. 01),DHA体外安全用药范围≤2μmol·L~(-1)。与正常组比较,LPS模型组IL-6含量明显高于正常组(P 0. 01),与LPS模型组比较,DHA能够抑制IL-6的产生(P 0. 05),Western blot结果显示,LPS能够上调RAW264. 7细胞核内NF-κB p65水平,而DHA能够抑制p65的入核。结论:DHA能够改善类风湿关节炎大鼠踝关节病变情况,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。