神经干细胞立体定向脑内移植治疗大鼠重型颅脑损伤

目的探讨神经干细胞立体定向脑内移植对颅脑损伤大鼠的治疗效果。方法采用Feeney等人的方法制成大鼠脑损伤模型,伤后24h将体外培养的胚胎神经干细胞经立体定向移植到脑损伤灶内。伤前24h、伤后24h及伤后1、2周行动物神经学缺损评分。结果移植后1和2周,接受神经干细胞移植的大鼠神经学缺损评分明显低于对照组（P〈0.05）;且其脑组织切片中的神经元数量较对照组明显增多（P〈0.01）。结论经立体定向移植到脑内损伤灶的神经干细胞可存活、增殖、分化、并可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能。     

Nogo-6受体基因沉默神经干细胞立体定向移植治疗重型脑损伤

Inhibition of neurite growth, which is mediated by the Nogo-66 receptor (NgR), affects nerve regeneration following neural stem cell (NSC) transplantation. The present study utilized RNA interference to silence NgR gene expression in NSCs, which were subsequently transplanted into rats with traumatic brain injury. Following transplantation of NSCs transfected with small interfering RNA, typical neural cell-like morphology was detected in injured brain tissues, and was accompanied by absence of brain tissue cavity, increased growth-associated protein 43 mRNA and protein expression, and improved neurological function compared with NSC transplantation alone. Results demonstrated that NSC transplantation with silenced NgR gene promoted functional recovery following brain injury.     

经枕大池移植神经干细胞治疗重型颅脑损伤大鼠的实验研究

目的探讨胎脑皮质来源的神经干细胞(NSC)用于重型颅脑损伤模型大鼠的治疗作用。方法用电子颅脑损伤仪制备重型颅脑损伤大鼠模型(n=46),随即分为神经干细胞治疗组(NSC组,n=23)和对照组(DMEM/F12组,n=23)。将胎鼠皮质来源的NSC经体外培养、扩增后用BrdU标记,经枕大池移植到模型大鼠的脑脊液中,于移植后24h,3d,7d,14d,21d,28d对大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS)的评估。对照组用相同体积的DMEM/F12代替NSC,mNSS评估时间和方法同NSC组。4w后NSC组取5只大鼠脑组织行免疫组化法染色检测BrdU表达。结果 NSC组大鼠在移植后第7d、14d、21d和24d,其mNSS评分与DMEM/F12组相比,均有显著性差异。对脑组织行BrdU免疫荧光染色,发现移植后第4w脑损伤灶及周围脑组织中有BrdU阳性细胞的表达。结论经枕大池移植后,NSC可在大鼠脑组织内存活、增殖,并能促进脑损伤大鼠神经功能的恢复。     

加强神经干细胞移植治疗研究

脑内移植是指选择供体神经组织或细胞植入宿主的脑内，以代替受损或变性的神经元，重建神经环路或分泌神经递质，达到调控神经功能和改善症状的目的。动物实验已证实，未成熟的神经细胞移植到宿主脑内不仅可存活，而且可以保持其原有神经功能的特性。90年代初期神经干细胞(neural stem cell，     

立体定向神经干细胞移植治疗脑出血后遗症疗效分析

目的观察应用神经干细胞移植治疗脑出血后遗症的临床疗效。方法2000年6月至2006年12月我们对16例脑出血患者采用立体定向技术，选取病变侧基底节区作为靶点进行神经干细胞移植术，于治疗前、治疗后1月、6月进行神经功能评分，应用国际通用的功能独立性测量评定其运动及生活能力。结果接受神经干细胞移植的脑出血患者无严重手术并发症。手术后6个月内临床症状改善有效率达81．25％（13例／16例），本组16例术前FIM评分为90．21±2．32，术后1个月为92．76±1．89，术后6个月为96．37±3．83，差异有显著性意义。治疗1个月后功能独立性评分高于治疗前（P〈0．05），而治疗6个月后高于1个月（P〈0．05）。结论神经千细胞移植治疗可以一定程度地改善脑出血患者的后遗症，可提高脑出血患者的运动功能，提高患者生活质量，但其长期疗效仍需进一步观察。     

大鼠骨髓间充质干细胞静脉移植治疗大鼠脑损伤

目的了解大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）经鼠尾静脉移植后在脑内的表达情况及对大鼠脑创伤后神经运动功能的影响。方法将溴脱氧尿苷（BrdU）标记培养的BMSCs分别在大鼠脑创伤后第1天（实验组1，n=6）、第3天（实验组2，n=10）、第7天（实验组3，，F7）经大鼠尾静脉注射移植，另取6只脑创伤大鼠（实验组4）在伤后第3天经尾静脉移植BrdU标记的全骨髓，尾静脉注射仅．MEM脑创伤大鼠作为对照组（n=6）。应用免疫组化染色，了解移植细胞在脑内的表达情况。脑创伤后第1、3、7、14天评价移植对大鼠神经运动功能的影响。结果脑创伤后14d时神经运动功能评分分别为实验组1：31．83±1．60，实验组2：31．10±1．79，实验组3：28，43±1．72，实验组4：28．67±1．37，对照组：26．00±1．00．各组间差异有显著性（P=0．000）。在移植各组的创伤侧脑组织，可见BrdU染色阳性细胞，并以脉络丛、脑室周围、血管周围分布较多。对实验组2进行免疫组化双染色，未发现BrdU＋神经元特异性烯醇化酶（NSE1、BrdU＋胶质纤维酸蛋白（GFAP）双染色细胞。结论大鼠BMSCs经鼠尾静脉移植．在一定时期内能改善大鼠脑创伤后神经运动功能；脑内可以发现移植细胞存活．但移植细胞是否转化为神经元仍然需要进一步的实验证实。     

立体定向神经干细胞移植治疗难治性癫

目的神经干细胞脑移植在治疗顽固性癫的作用效果。方法2组均行立体定向性杏仁核等靶点毁损后,移植组在此基础上并行神经干细胞移植,随访6～31个月。结果15例中对照组8例,满意率12.5%,总有效率62.5%;移植组7例,满意率42.9%,总有效率85.7%。均无严重并发症及后遗症。结论初步观察移植组优于非移植组,立体定向干细胞移植安全有效,是治疗难治性癫的有效方法。     

立体定向移植神经干细胞治疗局灶性大鼠脑缺血损伤的研究

目的观察大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内的迁移和分化。方法实验于2003年5月~2004年10月在哈尔滨医科大学附属二院动物实验中心完成。孕龄8~10d Wistar大鼠仔鼠神经干细胞体外扩增后用免疫组织化学的方法分别检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志蛋白-巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达,健康Wistar大鼠大脑中动脉闭塞后40只随机分成A、B、C、D四组,A组为梗塞后24小时脑室内移植神经干细胞组,B组为梗塞后24小时梗塞中心移植神经干细胞组,C组为梗塞后4周脑室内移植神经干细胞组,D组为梗塞后4周梗塞中心移植神经干细胞组,各实验组均有仅移植生理盐水的空白对照。比较神经干细胞不同移植部位和不同移植时间神经干细胞存活、增殖和迁移的差异。结果实验大鼠40只均进入结果分析。从胎鼠中成功培养出悬浮生长的可表达巢蛋白的神经球,含血清条件下可分化为表达胶质纤维酸性蛋白的胶质细胞和神经元特异性烯醇化酶的神经元,移植后可见移植细胞存活至少8周以上,A组可见移植细胞大量存活,穿过室管膜向脑组织迁移,特别是向缺血周边区迁移;B组细胞主要聚集在梗塞中心移植区域,也有大量细胞存活,充填梗塞区,少量细胞可穿过胼胝体向健侧迁移;C组仅见少量Brdu阳性细胞存活,但细胞增殖分裂较A组不明显,且存活细胞主要仍在移植部位;D组存活移植细胞也较B组明显减少。结论大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内可长期存活并广泛迁移,不同移植部位不影响细胞存活,脑室内移植细胞向脑缺血区域迁移,缺血后24小时移植较缺血后4周移植其迁移趋向性更强。     

不同时间移植神经干细胞治疗颅脑损伤的对比研究

目的通过观察不同时间颅脑损伤后遗症患者接受神经干细胞移植治疗后的临床疗效,探讨颅脑损伤后进行干细胞移植的最佳时机。方法将我院治疗过的30例颅脑损伤患者根据不同的移植时间分为3组:A组:神经干细胞移植时间在损伤后6个月以内;B组:移植时间在损伤后6个月到1年;C组:移植时间在损伤后1年以上,分别进行腰椎穿刺蛛网膜下腔注入神经干细胞,并于第1次术前和第4次术后3个月进行功能独立性评定(FIM)。结果神经干细胞移植后患者的各项指标较移植前均有改善,颅脑损伤6个月以内患者的功能改善情况更为明显。结论颅脑损伤6个月以内是进行神经干细胞移植的适宜时间,随着损伤时间的延长,患者的神经功能恢复能力减弱。     

经枕大池神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的研究

目的 将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中并观察其存活、迁移和分化,从而为神经干细胞的体内存活、迁移和分化机理研究和临床应用提供实验依据.方法 体外培养BrdU标记的胚胎神经干细胞并应用免疫荧光细胞化学染色对BrdU、神经干细胞标记物nestin的表达进行鉴定:采用Feeney自由落体撞击法制做大鼠脑损伤模型,伤后24 h将BrdU标记的胚胎神经十细胞经立体定向注射移植到蛛网膜下腔;制作大鼠脑绢织石蜡切片,应用免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;伤前24h、伤后24 h及1、2周行动物运动神经功能评分.结果 免疫荧光检测显示神经球的表面细胞表达nestin及BrdU:免疫组织化学染色检测到脑内损伤灶存在BrdU阳性神经干细胞、MAP2阳性神经元和GFAP阳性胶质细胞;接受神经十细胞移植的大鼠神经运动功能评分的恢复较对照组有明显提高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 经枕大池移植到脑损伤大鼠蛛网膜下腔中的神经干细胞能存活且具有远距离迁移能力,并明显有助于脑损伤大鼠神经运动功能的恢复.     

大鼠脑损伤后经枕大池及立体定向脑内移植神经干细胞的对比研究

目的 探讨大鼠脑损伤后,将神经干细胞（neural stem cells,NSCs）经枕大池移植到蛛网膜下腔及立体定向移植到脑内,观察神经功能恢复情况。方法 体外培养的NSCs取自胎鼠皮层,采用Feeney自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型,伤后24小时将NSCs经枕大池移植到蛛网膜下腔及经立体定向移植到脑内。伤前24小时、伤后24小时及1、2周行动物运动神经功能评分。结果 接受NSCs移植的两组大鼠神经运动功能评分均较损伤对照组明显提高（P〈0．05）,两移植组大鼠神经运动功能评分无明显差别。结论 经枕大池移植的NSCs具有远距离迁移能力,并能像脑内移植一样明显有助于大鼠神经运动功能的恢复。     

干细胞移植救治颅脑创伤的再思考

近十多年来有关干细胞移植救治脑创伤的临床与基础研究方兴未艾。在取得一系列成果的同时，也带来了诸多问题。在临床应用之前，充分认识其内在规律和本质、完善移植条件、规范移植程序，以及客观合理评价治疗效果显得尤为重要。本文就该领域的研究予以简单回顾和讨论。     

神经干细胞在创伤性脑损伤中的治疗作用

长期以来,人们一直认为中枢神经系统的神经细胞没有再生能力,损伤后死亡的细胞不能像上皮组织那样由再生的细胞替补.但是,近年来的研究发现,在中枢神经系统中也存在有干细胞,即神经干细胞(neural stem cells, NSCs).     

颅脑创伤动物血清预处理诱导型神经干细胞移植对补体活化的影响

目的研究颅脑创伤（TBI）动物血清预处理诱导型神经干细胞（iNSCs）立体定向移植对TBI后补体活化的影响。 方法采用自由落体脑打击装置制备雄性成年C57BL/6小鼠TBI模型，将48只神经功能缺损评分（NSS）为4~8分的小鼠纳入TBI组，按照随机数字表法选取24只用于制备TBI小鼠血清和热灭活TBI小鼠血清，余下24只按照随机数字表法分为TBI小鼠血清预处理iNSCs（TBI-iNSCs）移植组（6只）、热灭活TBI小鼠血清预处理iNSCs（HITBI-iNSCs）移植组（6只）、磷酸盐缓冲液（PBS）预处理iNSCs（PBS-iNSCs）移植组（6只）和对照（Control）组（6只）。同时设置假手术（Sham）组（6只）。于TBI后12 h，用脑立体定向仪分别将含1×10⁶个TBI-iNSCs、HITBI-iNSCs、PBS-iNSCs单细胞悬液或等体积PBS移植到TBI小鼠脑内。于TBI后14 d处死动物，取脑组织行Western blot检测补体活化产物（C3d和C9）、补体调节因子Crry和细胞凋亡标记物active Caspase-3等蛋白表达水平；取脑组织行免疫荧光染色和原位末端标记（TUNEL）染色，观察TBI-iNSCs、HITBI-iNSCs和PBS-iNSCs移植对TBI小鼠脑内NeuN抗体阳性和TUNEL阳性细胞数量的影响。 结果Western blot检测示：相比Sham组，PBS-iNSCs组、HITBI-iNSCs组、TBI-iNSCs组和Control组C3d、C9和active Caspase-3表达水平明显增高；而相比Control组，PBS-iNSCs组、HITBI-iNSCs组和TBI-iNSCs组C3d、C9和active Caspase-3表达水平明显降低；相比PBS-iNSCs组和HITBI-iNSCs组，TBI-iNSCs组C3d、C9和active Caspase-3表达水平明显降低，组间差异具有统计学意义（P<0.05）。此外，相比Control组，PBS-iNSCs组、HITBI-iNSCs组、TBI-iNSCs组和Sham组Crry表达水平明显增高；相比Sham组，PBS-iNSCs组、HITBI-iNSCs组和TBI-iNSCs组Crry表达水平明显增高；相比PBS-iNSCs组和HITBI-iNSCs组，TBI-iNSCs组Crry表达水平明显增高，组间差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光染色和TUNEL染色示：PBS-iNSCs组和HITBI-iNSCs组NeuN抗体阳性和TUNEL阳性的细胞数量差异无统计学意义；然而，与PBS-iNSCs组和HITBI-iNSCs组相比，TBI-iNSCs组NeuN抗体阳性和TUNEL阳性的细胞数量明显减少，组间差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论TBI小鼠血清预处理iNSCs立体定向移植可上调TBI小鼠脑内Crry水平，抑制补体活化，减轻脑损伤。     

骨髓基质干细胞治疗创伤性脑损伤实验研究

目的观察移植于脑内的骨髓基质干细胞(BMSCs)对创伤脑组织的神经修复作用。方法流式细胞术鉴定原代培养的大鼠BMSCs,免疫荧光技术检测5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记BMSCs的比例;建立大鼠颅脑创伤模型后在创伤灶周边进行BMSCs移植,免疫组织化学方法检测BMSCs在脑创伤灶内的分布和神经分化情况;实验动物予以神经功能评分。结果流式细胞术检测结果符合大鼠BMSCs特征,体外BrdU标记的BMSCs呈现强的红色胞核荧光;体内移植显示BMSCs在脑内成功存活,主要分布于创伤灶内或其边缘,并部分表达神经标志蛋白;BMSCs移植组实验动物神经功能评分明显优于对照组。结论脑内移植的BMSCs经过短距离迁移定位于创伤灶区域,并通过向神经细胞方向的分化实现部分神经修复和功能代偿。     

挫伤脑组织对人胚神经干细胞影响的体外研究

目的 建立人胚胎来源的神经干细胞体外培养方法，初步研究挫伤脑组织提取液(TBITE)对人胚神经干细胞(HNSCs)存活、增殖能力和分化的影响。方法 10周龄左右的胎儿大脑皮层细胞体外培养，神经干细胞增殖2～3代后，剔除生长因子，分别加入不同浓度的脑外伤病人的挫伤脑组织提取液，培养2～3周后，免疫细胞化学方法鉴定细胞分化后的类型。用Laemrnli凝胶电泳法分析培养液上清。结果成功获得以神经球形式生长的人胚神经干细胞，Nestin表达阳性；与空白对照相比，TBITE组中的神经干细胞有明显的增殖，并分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。随着TBITE含量的增加，星形胶质细胞的比例增加。结论 脑外伤的局部微环境可促进神经干细胞增殖和分化。     

诱导型神经干细胞移植抑制颅脑创伤后补体活化的影响

目的研究诱导型神经干细胞（iNSCs）移植对颅脑创伤（TBI）后补体活化的影响。 方法采用自由落体脑打击装置制备雄性成年C57BL/6小鼠TBI模型，将30只神经功能缺损评分（NSS）为4~8分的小鼠纳入TBI组，按照随机数字表法选取10只用于制备TBI小鼠血清和热灭活TBI小鼠血清，余下20只按照按照随机数字表法分为：iNSCs移植组（10只）和磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理组（10只）。同时设置假手术（sham）组（10只）。于TBI后12 h，分别将含5×10⁶个iNSCs单细胞悬液或等体积PBS经尾静脉注射到TBI小鼠体内，于移植后7 d处死动物，取脑组织行双重免疫荧光染色，观察iNSCs移植对TBI小鼠脑内C3d和NeuN抗体双阳性、C5b-9和NeuN抗体双阳性、C3d和Map2抗体双阳性以及C5b-9和Map2抗体双阳性的神经细胞的影响。于TBI后12 h，制备TBI小鼠血清和热灭活TBI小鼠血清，分别处理iNSCs后用流式细胞仪检测iNSCs表达补体调节分子Crry、Cd46、Cd59a和Cd55水平。 结果双重免疫荧光染色示：相比sham组，TBI小鼠脑组织中明显可见C3d和C5b-9沉积于NeuN和Map2抗体阳性的神经细胞；相比PBS处理组，iNSCs移植组TBI小鼠脑内C3d和NeuN抗体双阳性、C5b-9和NeuN抗体双阳性、C3d和Map2抗体双阳性以及C5b-9和Map2抗体双阳性的神经细胞数量均明显下降，2组差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测示：相比热灭活TBI小鼠血清组，TBI小鼠血清组中iNSCs补体调节分子Crry表达水平明显上调，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论经静脉移植iNSCs可抑制TBI后补体活化，减轻神经损伤。     

Isolation of neural stem cells from damaged rat cerebral cortex after traumatic brain injury

Nestin-positive cells were seen around the damaged area at 24 h, 72 h and 7 days after rat traumatic brain injury. Tissue was isolated from around the damaged area at 72 h after injury and spheres were cultured with basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor. These spheres could not be isolated at 24 h and 7 days after injury. Isolated spheres consisted of nestin-positive neural stem cells. Neurospheres differentiated into Tuj1-positive, glial fibrillary acidic protein-positive and O4-positive cells after 4 days in culture without basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor. These results indicate that isolated and cultured neurospheres can differentiate into neurons and glia. An increase in nestin-positive cells around a cerebral cortical damaged area might contribute to neurogenesis and neuroplasticity.