非特异性T细胞疫苗对空肠弯曲菌诱导的SLE样综合征小鼠免疫功能的影响

目的探讨非特异性T细胞疫苗(TCV)对空肠弯曲菌诱导的系统性红斑狼疮(SLE)样综合征小鼠免疫功能的影响：方法采用甲醛化空肠弯曲菌CF-1株辅以佐剂诱导近交系BALB／c小鼠SLE样自身免疫综合征病理模型，然后用非特异性TCV对该病理模型进行治疗。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清抗dsDNA抗体、抗空肠弯曲菌CF-1外膜蛋白(CF-OMP)抗体水平，并检测特异性迟发型超敏反应(DTH)，用苏木素一伊红(HE)染色检测肾脏病损。结果①非特异性TCV一方面使模型鼠抗dsDNA抗体水平升高，另一方面却使血清抗CF-OMP抗体水平一定程度的降低：②非特异性TCV明显抑制CF-1模型鼠对空肠弯曲菌特异性的DTH反应：③非特异性TCV能部分减轻模型鼠的肾脏病损：结论非特异性TCV对模型鼠的体液免疫和细胞免疫均有抑制作用。     

空肠弯曲菌多价DNA疫苗的免疫保护效应

目的研究空肠弯曲菌多价DNA疫苗的免疫保护效应。方法以壳聚糖包裹含空肠弯曲菌主要结构蛋白cadF和peb1A编码基因的重组质粒pcDNA3.1(+)-cadF和pcDNA3.1(+)-peblA,制备空肠弯曲菌多价DNA疫苗。以含60μgDNA的不同效价的DNA疫苗于实验开始的0、7、14和21d滴鼻免疫BALB/c小鼠4次,检测其诱导特异性免疫应答的效应。末次免疫后8w,分别采用空肠弯曲菌HS∶19或HS∶2单次和HS∶19重复攻击的方式进行灌胃攻击。攻击后,对该疫苗的免疫保护作用进行评价,包括该疫苗阻止空肠弯曲菌肠道定植和肠外扩散的效力,以及防御空肠弯曲菌感染导致周围神经、小肠和肝脏组织损伤的效应。结果空肠弯曲菌多价DNA疫苗滴鼻免疫小鼠后,不仅诱导了高水平的血清IFN-γ、IL-4和IgA、IgG,而且诱导了高水平的粘膜IgA抗体,末次免疫后第4w其P/N值分别达4.82、4.61、20.58、30.13和6.87;其免疫小鼠外周血CD+4、CD+8T细胞数也显著性升高,分别达56.46%和12.84%;同时,伴有肠壁SIgA的同步性分泌增强。并且,其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击,明显减少该细菌的肠道定植和血行扩散,其抑制空肠弯曲菌肠道定植效应为99.3%,其抵御感染向肝脏扩散的效力高达100.0%;显著降低被攻击小鼠周围神经、小肠及肝脏组织的病变发生率。结论空肠弯曲菌多价DNA疫苗在抗空肠弯曲菌感染的过程中具有明显的免疫保护作用。     

空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位分析及功能鉴定

目的 从生物信息学角度了解空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的跨膜结构、B细胞抗原表位及其抗原性、基因序列保守性等特征,并鉴定空肠弯曲菌主要外膜蛋白优势B细胞抗原表位,为后续抗体检测和疫苗研究提供实验依据。方法 使用NCBI/Blast,TMHMM Server V2.0,DNA Star等生物信息学分析软件对空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18进行蛋白跨膜结构预测、线性B细胞抗原表位及其抗原性分析、并对不同空肠弯曲菌OMP18蛋白的氨基酸序列同源性进行比较。采用空肠弯曲菌全菌抗体IgG为一抗,基于ELISA技术对优势线性B细胞抗原表位进行筛选鉴定。结果 生物信息学预测结果表明外膜蛋白OMP18定位于空肠弯曲菌外膜且不存在跨膜结构。蛋白序列保守存在于各空肠弯曲菌株中,序列同源性达95%以上。同时,我们发现该外膜蛋白中存在3个明显的B细胞线性表位,且具有很强的抗原性。ELISA检测鉴定结果表明3个B细胞抗原表位都能有效识别空肠弯曲菌全菌抗体。结论 空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18保守存在于细菌表面,存在3个重要的B细胞线性抗原表位,可用于后续的抗体检测和疫苗开发研究。     

淋病奈瑟菌候选外膜蛋白的免疫原性及膜定位的初步研究北大核心CSCD

目的对淋病奈瑟菌FA1090全基因组外膜蛋白进行免疫原性和膜定位的初步分析,以评价其作为候选疫苗的潜力。方法采用基因合成的方法构建重组质粒,转化感受态细胞,利用大肠杆菌表达系统对重组蛋白进行诱导表达,通过镍柱层析法纯化重组蛋白;用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,通过间接ELISA检测抗体效价初步评价蛋白的免疫原性及其在外膜的定位。结果构建了15个重组质粒,获得了相应的纯化蛋白,通过免疫小鼠获得了免疫血清。免疫原性分析蛋白WP_003689500.1诱导小鼠产生相应IgG抗体的能力较强,膜定位分析显示有4个蛋白在外膜表达的可能性较高。结论蛋白WP_003689500.1诱导产生的抗体效价较高,与全细胞抗原的结合能力较强,可作为淋病奈瑟菌候选疫苗。     

抗淋病奈瑟菌外膜蛋白I多克隆抗体的制备及其ELISA双抗夹心法的建立

目的 制备抗淋病奈瑟菌外膜蛋白I多克隆抗体,建立检测外膜蛋白I的双抗夹心法。方法 以淋病奈瑟菌及其外膜蛋白I作为抗原,分别免疫健康雄性家兔及雌性BALB/C小鼠,制备兔抗淋病奈瑟菌和鼠抗外膜蛋白I多克隆抗体,并采用 ELISA法检测抗体效价。结果与讨论 经ELISA证明兔抗淋病奈瑟菌多抗可与淋病奈瑟菌外膜蛋白I呈高效价反应,以此建立的ELISA双抗夹心法检测外膜蛋白I可获满意结果。     

抗淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ多克隆抗体的制备及其ELISA双抗夹心法的建立

目的制备抗淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ多克隆抗体,建立检测外膜蛋白Ⅰ的双抗夹心法.方法以淋病奈瑟菌及其外膜蛋白Ⅰ作为抗原,分别免疫健康雄性家兔及雌性BALB/C小鼠,制备兔抗淋病奈瑟菌和鼠抗外膜蛋白Ⅰ多克隆抗体,并采用ELISA法检测抗体效价.结果与讨论经ELISA证明兔抗淋病奈瑟菌多抗可与淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ呈高效价反应,以此建立的ELISA双抗夹心法检测外膜蛋白Ⅰ可获满意结果.     

抗淋病奈瑟菌外膜蛋白I多克隆抗体的制备及其ELISA双抗夹心法的建立

目的 制备抗淋病奈瑟菌外膜蛋白I多克隆抗体,建立检测外膜蛋白I的双抗夹心法。方法 以淋病奈瑟菌及其外膜蛋白I作为抗原,分别免疫健康性家兔及雌性BALB/C小鼠,制备兔抗淋病奈瑟菌和鼠抗外膜蛋白I多克隆抗体,并采用ELISA法检测抗体效价。结果与讨论 经ELISA证明兔抗淋病奈瑟菌多抗可与淋病奈瑟菌外膜蛋白I呈高效价反应,以此建立的ELISA双抗夹心法检测外膜蛋白I可获满意效果。     

空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备

目的为获得空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体,用于空肠弯曲菌的检测和研究。方法用空肠弯曲菌ATCC29428株灭活全菌作为抗原,免疫BALB/c小鼠,待抗体水平达到1∶51 200时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0进行融合。同时以粗提天然鞭毛蛋白和人工表达重组鞭毛蛋白包板,用间接ELISA方法筛选,多次克隆化培养后获得的单抗用Western blot进行生物学特性鉴定。结果获得3株持续、稳定分泌抗空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G8、1G9和3F2。结论获得的空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体为建立空肠弯曲菌的蛋白检测及后续研究奠定基础。     

布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。     

马立克氏病毒单克隆抗独特型抗体间接ELISA方法的建立

目的用马立克氏病毒(Marak's Disease Virus-MDV)阳性鸡血清提纯IgG和MDV制备抗原,免疫BALB/c鼠,建立间接ELISA法检测MDV抗独特型抗体的方法.方法采集琼扩检出MDV羽囊阳性鸡血清,提纯制备IgG抗原和用MDV制备的抗原,免疫接种6～8周龄BALB/c小鼠,不同时期采集血样,用间接酶联免疫吸附试验和竞争抑制试验方法进行动态血清学观测.结果各个时段都出现MDV抗独特型抗体效价,效价可达10 000×以上.结论建立了MDV抗独特型抗体的间接ELISA方法.