兰索拉唑对幽门螺杆菌诱导人胃上皮细胞产生IL-1β和IL-8的影响

目的：探讨兰索拉唑对幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）感染的胃上皮细胞的体外抗炎效应。方法体外培养胃上皮细胞系AGS,加入兰索拉唑和培养的Hp感染不同时间。ELISA检测IL-1β和IL-8的产生,Western blot检测NF-κB p 65亚基的核转位以及红素氧合酶1（Heme oxygenase-1, HO-1）蛋白表达水平。结果兰索拉唑孵育8 h后,能显著抑制Hp诱导的IL-1β和IL-8。同时,兰索拉唑能抑制NF-κB p 65亚基的核转位,并能上调HO-1蛋白的表达。结论兰索拉唑可能通过抑制NF-κB的激活,上调HO-1的表达而发挥对胃上皮细胞的抗炎作用。     

姜黄素对铜绿假单胞菌诱导人肺上皮细胞产生细胞因子的影响及其分子机制研究

目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应.方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间.Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生.同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响.结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为（87.52±7.96）pg/mL和（205.63 ±34.25） pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8h后,其含量分别降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL,处理前后差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍（P＜0.05）.HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高.结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用.     

幽门螺杆菌及其相关细胞因子对胃上皮细胞凋亡的调控及相关机制

目的研究幽门螺杆菌（Hp）及其相关细胞因子对胃上皮细胞凋亡的影响,以探讨Hp的致病机理。方法以人胃永生化上皮细胞株（GES-）和人胃癌细胞株（AGS）作为研究对象。流式细胞术检测Hp毒力菌株（NCTC11637）单独及分别联合Hp相关细胞因子[白细胞介素（IL）-1β、IL-8及IL-10]对两种细胞系凋亡的影响;检测IL-1β、IL-8及IL-10对外源性Fas配体（FasL）诱导的两种细胞系凋亡的影响。逆转录-聚合酶链反应检测Hp及其相关细胞因子（IL-1β、IL-8及IL-10）对两种细胞系FasmRNA基础表达水平的影响。结果（1）Hp能诱导GES-1和AGS细胞凋亡增加113．0％和47．0％（均P〈0．05）;IL-1β、IL-10能抑制Hp诱导的GES-1（29．6％、25．8％）和AGS（19．7％、21．1％）细胞凋亡（均P〈0．05）;IL-8能增强Hp诱导的GES-1细胞凋亡（19．9％,P〈0．05）。（2）Hp能上调GES-1和AGS细胞FasmRNA基础表达水平（89．0％和36．0％,P〈0．05）;IL-1β、IL-10对两种细胞FasmRNA基础表达无显著影响（P〉0．05）;IL-8能上调GES-1（33．0％）细胞FasmRNA基础表达（P〈0．05）。（3）IL-1β、IL-10能抑制FasL诱导的GES-1（30．3％、32．5％）和AGS（44．2％、51．5％）细胞凋亡（P〈0．05）;IL-8能增强FasL诱导的GES。1细胞凋亡（100％,P〈0．05）。结论Hp可通过上调Fas受体表达直接介导胃上皮细胞凋亡。Hp相关细胞因子IL-8可能通过上调Fas受体表达来增强Hp诱导的胃上皮细胞凋亡;IL—1β和IL-10可能通过其他机制来抑制Hp诱导的胃上皮细胞凋亡。     

兰索拉唑抑制幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞表达COX-2

目的探讨兰索拉唑(Lansoprazole,LPZ)对幽门螺(杆H菌licobacteprylori,Hp)感染的胃上皮细胞的体外抗炎效应。方法体外培养胃上皮细胞系AGS,加入LPZ和培养的Hp感染不同时间分。别采用Realtime PCR和Western blot检测AGS细胞中环氧化酶(cyclooxygenase-C2O,X-2)mRNA和蛋白的表达,ELISA分别检测PGE2的产生。结果 LPZ处理后,COX-2表达显著降低,同时也能降低PGE2的产生。结论 LPZ能抑制COX-2的表达及PGE2的产生,提示LPZ可预防Hp感染的胃上皮细胞炎症。     

埃索美拉唑联合EGFR抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的：探讨埃索美拉唑联合表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、迁移、凋亡、自噬的影响与分子机制。方法：实验分为空白对照组、埃索美拉唑组、AG1478组和埃索美拉唑联合AG1478组,采用CCK-8法、EdU增殖实验、Transwell、划痕实验、流式细胞术、细胞免疫荧光法分别检测各组人胃癌AGS、SGC-7901细胞活力、增殖、迁移、凋亡和自噬变化。Western blotting检测EGFR、c-MYC、P53、cleaved-PARP、LC3B、PI3K、AKT、P-AKT蛋白的表达情况。结果：AG1478抑制胃癌细胞活力和EGFR表达呈浓度依赖性。埃索美拉唑和AG1478能够明显降低胃癌细胞活力、抑制其增殖和迁移,诱导细胞凋亡和自噬（P<0.05）,且两者联合有协同作用（P<0.05）。埃索美拉唑和AG1478均能降低AGS和SGC-7901细胞PI3K、AKT、P-AKT蛋白的表达（P<0.05）,两者联合对降低P-AKT的表达有协同作用（P<0.05）。结论：埃索美拉唑联合EGFR抑制剂AG1478对胃癌细胞增殖、迁移有抑制作用...     

液体培养VacA 幽门螺杆菌上清液粗提蛋白对胃上皮细胞增殖/凋亡的影响

[摘要] 背景：幽门螺杆菌感染可以导致胃上皮慢性炎症、粘膜萎缩、上皮细胞增殖与凋亡的失衡,从而引起慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌等不同临床结局。然而,幽门螺杆菌导致胃癌发生的确切机制还不十分清楚。本研究通过体外实验探讨液体培养幽门螺杆菌上清液粗提蛋白（BCF-P）对人胃永生上皮细胞株（GES-1）和胃癌上皮细胞株（AGS）增殖与凋亡的影响。 方法：以人胃永生上皮细胞株（GES-1）和胃癌细胞株（AGS）作为研究对象,进行了下述研究：1）应用MTT方法分析BCF-P对GES-1和AGS细胞增殖的影响。2）应用流式细胞术分析BCF-P对GES-1和AGS细胞凋亡的影响。3）应用RT-PCR技术检测BCF-P和EGF对GES-1和AGS细胞Fas /COX-2 mRNA表达水平的影响。4）免疫沉淀和酶联法检测BCF-P对GES-1和AGS细胞EGFR酪氨酸激酶活性的影响。 结果：1）BCF-P抑制GES-1和AGS细胞增殖,具有浓度依赖性。2）在与抑制增殖相同的剂量和作用时间下,BCF-P未能诱导出GES-1和AGS细胞凋亡。3）BCF-P作用使GES-1和AGS细胞Fas mRNA表达下调（P<0.05）;与EGF的作用一致。BCF-P使AGS细胞COX-2 mRNA表达下调（P<0.05）;与EGF作用相反（P<0.05）。4）BCF-P作用使GES-1和AGS细胞EGFR酪氨酸激酶活性提高3倍以上。 结论： BCF-P体外抑制AGS和GES-1细胞增殖,其增殖抑制作用与凋亡无关。BCF-P体外对胃上皮细胞的作用不完全等同于EGF。     

幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)体外诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的状况.方法:逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IL-8在Hp诱导的胃上皮细胞的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-8表达产物的量.结果:经Hp标准菌株CCUG17874刺激后,在胃上皮细胞株MKN 45、MKN 28、SGC 7901均检测到IL-8 mRNA;共同培养60 min 开始明显表达(P<0.05),120～180 min时表达最强(P<0.01).刺激24 h后, MKN 45分泌IL-8蛋白最高,为(1 480±360) pg/ml,SGC7901为(1 120±290) pg/ml, MKN 28最低,为(710±220) pg/ml,而未刺激对照组为(63±21 )、(52±16)和(30±18)pg/ml, 刺激组与各自未刺激对照组间有显著差异(P＜0.01),其相差倍数分别为23.5、 21.5、23.7倍,不同细胞株间的无统计学意义.结论:Hp能体外诱导胃上皮细胞株表达分泌IL-8,该作用可能与Hp感染后胃黏膜的炎症损伤机制有关.     

祖师麻醋酸乙酯提取物体外抗炎作用及其机制

目的 研究祖师麻醋酸乙酯提取物（EAEDGC）的体外抗炎作用及其机制。方法 用γ-干扰素（IFN-γ）和脂多糖（LPS）协同制备小鼠RAW264.7细胞炎症模型,Griess反应测定细胞上清液中NO生成量,MTT法测定细胞活力,三价铁还原抗氧化能力测试（FRAP assay）测定细胞总抗氧化能力,RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达;Western blotting检测iNOS、COX-2、HO-1、p-ERK蛋白表达水平。结果 EAEDGC以剂量依赖方式抑制细胞上清液中NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA及iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1 mRNA和蛋白表达,同时不影响细胞生长;但对COX-2 mRNA和蛋白表达影响不大。结论 EAEDGC部分通过丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）中的细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达,从而抑制NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,同时下调IL-1β、IL-6、TNF-α炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达,进而发挥抗炎作用。     

埃索美拉唑对胃溃疡患者炎性状态、细胞免疫和红细胞免疫的影响观察

目的探讨埃索美拉唑对胃溃疡患者炎性状态、细胞免疫和红细胞免疫的影响。方法选取2010年4月～2012年2月于军事医学科学院附属医院进行治疗的84例胃溃疡患者为研究对象,将其随机分为对照组（奥美拉唑组）和观察组（埃索美拉唑组）,每组各42例,后将两组患者治疗前及治疗后3、7 d的血清炎性因子及细胞免疫、红细胞免疫指标进行检测及比较。结果观察组治疗后3 d及7 d的血清C反应蛋白（CRP）、白介素6（IL-6）、白介素8（IL-8）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及人转化生长因子β1（TGF-β1）水平均低于对照组,CD3＋、CD4＋及CD4/CD8均高于对照组,而CD8＋则低于对照组,RBC-C3bR、RBC-TRR及RFER均显著高于对照组,而RFIR和RBC-ICR则低于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论埃索美拉唑对胃溃疡患者炎性状态、细胞免疫和红细胞免疫的影响更为明显,可从一个方面肯定其在本病治疗中的效果。     

脂多糖及前炎症细胞因子诱导人原代气道上皮细胞β防御素-2表达的实验研究

目的观察脂多糖（LPS）及前炎症细胞因子白细胞介素1w（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导人原代气道上皮细胞人β防御素-2（hBD-2）的表达,探讨呼吸道先天性病原体防御机制。方法LPS、IL-1β及TNF-α刺激培养人原代气道上皮细胞后,RT-PCR法检测hBD-2mRNA的表达,Westernblot和免疫组化法检测hBD-2mRNA蛋白的表达。结果正常人原代上皮细胞有微量hBD-2mRNA表达,不同质量浓度的12S、IL-1β及TNF-α刺激细胞后,hBD-2mRNA表达呈剂量依赖性增加,与对照组差异显著。0．1μg／mL的LPS、1ng／mL的IL-1β和10ng／mL的TNF-α刺激上皮细胞4h后,细胞均可见hBD-2蛋白表达。结论一定剂量的12S及前炎症细胞因子可诱导人气道上皮细胞hBD-2表达,且诱导hBD-2表达时间较短,hBD-2的表达可能是气道最初的防御反应。     

莱菔硫烷对TNF-α诱导bEnd.3鼠脑血管内皮细胞产生IL-1β的影响

目的研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对TNF-α诱导bEnd.3鼠脑血管内皮细胞IL-1β的影响。方法体外培养脑血管内皮细胞系bEnd.3,TNF-α刺激前先用30μg/mL SFN处理2 h,MTT法检测细胞的活性,ELISA检测IL-1β和血红素氧合酶(heme oxygenase,HO-1)的产生。结果 (0～30)μg/mL SFN对bEnd.3细胞无明显毒性作用。TNF-α能显著诱导bEnd.3细胞产生IL-1β,并能表达一定量的HO-1。经SFN处理后,HO-1表达量增高,且IL-1β产生明显降低。此外,HO-1激动剂CoPP处理能协同SFN降低TNF-α诱导的IL-1β产生,HO-1抑制剂ZnPP能减弱SFN对IL-1β的抑制作用。结论 SFN通过上调HO-1的产生从而抑制TNF-α诱导bEnd.3细胞分泌IL-1β。     

幽门螺杆菌对胃癌上皮细胞株AGS细胞的生长抑制作用及其分子机理探讨

目的 观察体外实验中幽门螺杆菌(Hp)对胃癌上皮细胞株AGS细胞生长的影响,探讨Hp致病的分子机理。方法 胃癌细胞系AGS细胞体外培养,加入Hp活菌后,通过形态观察、细胞计数了解细胞生长情况;通过细胞核荧光染色、细胞DNA电泳检测细胞凋亡;通过流式细胞技术观察Hp对AGS细胞周期的影响,并进一步检测相应的细胞周期素。结果 Hp对AGS细胞生长有抑制作用。加入Hp后细胞凋亡增加,并导致G1／S细胞周期阻滞,伴有细胞周期素D1表达上调。结论 Hp急性感染可抑制AGS细胞生长,此作用可能与其诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。提示Hp感染能够破坏正常细胞周期调节。     

Effects of broth culture filtrate protein of VacA+ Helicobacter pylori on the proliferation and apoptosis of gastric epithelial cells

Background Infection with Helicobacterpylori (H.pylori) may lead to chronic inflammation of the stomach epithelium,mucosal atrophy,imbalance of proliferation and apoptosis of epithelial cells; resultin...     

肾上腺髓质素在幽门螺杆菌感染中的表达调控及其功能的初步研究

目的 探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)在幽门螺杆菌感染中的表达调控及其对CD3+T细胞增殖的影响.方法 建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染C57小鼠及胃上皮细胞模型,运用定量PCR、免疫组织化学染色和Western blot检测ADM的表达;并在细胞模型中探讨H.pylori感染诱导ADM上调的机制;利用ADM刺激CD3+T细胞,检测其对T细胞增殖的影响.结果 H.pylori感染可诱导胃上皮细胞AGS和HGC-27上调ADM的表达,并具有时间和感染菌量依赖性(P＜0.05);PI3 K/AKT信号通路阻断可显著抑制H.pylori感染诱导的ADM上调表达(P＜0.05);相对于未感染组,H.pylori感染小鼠胃组织中的ADM水平也显著增高;而相对于野生型全毒株,敲除cagA基因后,H.pylori感染诱导ADM上调的能力则显著下降(P ＜0.05);ADM能够以剂量依赖的方式诱导CD3+T细胞的增殖并促进IFN-y的表达(P＜0.05).结论 幽门螺杆菌感染可经PI3K/AKT信号诱导肾上腺髓质素的表达上调,后者则可能通过影响CD3+T细胞的增殖和分化而发挥免疫调节作用.     

胃型上皮Fas表达的调节：幽门螺杆菌致病的自身免疫机制之一

OBJECTIVE: To investigate the pathogenic mechanism of Helicobacter pylori (H.pylori)-mediated gastric epithelial cell damage. METHODS: Fas expressions in gastric epithelial cell lines and freshly isolated gastric epithelial cells with or without H.pylori infection were evaluated by flow cytometry. The modulation of Fas expression in gastric epithelial cells by H.pylori or by Th1 cytokines present in H.pylori-infected gastric mucosa was assessed in vitro. The function of Fas expressed by the gastric epithelial cells to induce cell apoptosis was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) after incubation of the cells with anti-Fas antibody. RESULTS: All of the three gastric epithelial cell lines, AGS, N87 and kato-III, expressed detectable Fas protein when examined by flow cytometry. The percentage of positive cells and the amount of Fas protein on cell surface were larger in freshly isolated gastric epithelial cells with H.pylori infection than in uninfected cells (P<0.05). H. pylori alone or in combination with Th1 cytokines (IFN-gamma and TNF-alpha) significantly increased the expression of Fas in gastric epithelial cell lines in vitro. After incubation with IgM anti-Fas mAb, Fas-bearing gastric epithelial cells underwent apoptosis, and this effect of Fas was enhanced by IFN-gamma. CONCLUSION: Th1 cells accumulated in the gastric mucosa during H.pylori infection is involved in the damage of gastric epithelium through the modulation of Fas/Fas ligand interaction.     

幽门螺杆菌对CCAAT增强子结合蛋白α和Cx43表达的影响及其在胃癌发生中的作用

目的：探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein α,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达改变在H. pylori致胃癌中的作用。方法：扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集H. pylori感染慢性非萎缩性胃炎患者6例、胃癌前病变和胃癌患者各12例胃黏膜组织;采用real-time PCR法检测上述细胞和组织中C/EBPα和Cx43 mRNA的表达;同时将东亚型CagA+H. pylori与GES-1细胞共培养24和48 h为实验组,以不加H. pylori的GES-1细胞株为对照组,培养24和48 h;采用real-time PCR法和Western印迹检测C/EBPα和Cx43 mRNA和蛋白的表达。结果：C/EBPα和Cx43 mRNA在AGS细胞、SGC-7901细胞中的表达均显著低于GES-1细胞(均P<0.05),且两者在SGC-7901细胞中的表达量较AGS细胞更低(均P<0.05);C/EBPα和Cx43 mRNA在胃癌胃黏膜组织中的表达明显低于慢性非萎缩性胃炎(均P<0.05)和胃癌前病变(均P<0.05),C/EBPα与Cx43表达呈正相关(胃癌前病变：r=0.679;胃癌：r=0.792,均P<0.05);实验组24,48 h的 C/EBPα和CX43表达量在转录及蛋白水平均低于对照组(均P<0.05),且48 h表达量均低于24 h(均P<0.05)。结论：H. pylori感染可下调胃黏膜上皮细胞C/EBPα和CX43的表达,这可能与胃癌发生有关。