外源性神经生长因子对血肿灶周神经元再生的影响

目的：观察神经生长因子作用下血肿灶周神经元再生状况。 方法：实验于2003-03／2004-04在河北医科大学第二医院影像科分子影像学实验室完成。健康家犬21只，随机分为3组：神经生长因子组（n=9）：注血后0．5h，将神经生长因子2000AU立体定向导入血肿灶周区。脑出血对照组（n=6）：只注血，不注药。对照组（n=3）：只进针，不注血和注药。3组动物进入实验程序后前3d进行BrdU标记，在脑出血后3，10，28d3个时间点进行激光共聚焦显微镜检测，观察血肿灶周BrdU荧光单标和BrdU-NSE及BrdU-GFAP荧光双标细胞的数目和所在位置（BrdU为新生神经元的标记物，NSE为成熟神经元的标记物，GFAP为成熟星形胶质细胞的标记物）。 结果：实验动物21只均进入结果分析。①新生神经元数目：神经生长因子组3，10，28d时BrdU单标阳性细胞数多于脑出血对照组（2．31&;#177;0．24，9．52&;#177;1．87，4．43&;#177;0．56：0．12&;#177;0．14，3．85&;#177;1．87，1．41&;#177;0．32，P〈0．05）．10和28d时BrdU-NSE和BrdU-GFAP双标阳性细胞数明显多于脑出血对照组（BrdU-NSE：3．84&;#177;0．24和6．23&;#177;1．92，1．35&;#177;0．71和1．39&;#177;0.24；BrdU-GFAP：4．51&;#177;9．08和10．53&;#177;9．47，1．65&;#177;0．08和1．37&;#177;0．13，P〈0．05）：神经生长因子组10d时BrdU单标阳性细胞数最多，28d时BrdU-NSE和BrdU-GFAP双标阳性细胞数明显增多。②新生神经元分布：神经生长因子组双标细胞的分布多位于血肿靠近额叶皮质面，在皮质与皮质下移行区内可见双标细胞，而脑出血对照组极罕见。 结论：外源性神经生长因子立体定向导入血肿灶周区，能够通过刺激额叶皮质内源性神经干细胞再生、迁徙和分化的机制，促进血肿灶周神经功能的修复。     

神经生长因子对脑出血血肿灶周神经元和神经胶质细胞的影响

目的 探讨神经生长因子（NGF）对脑出血血肿灶周神经元和神经胶质细胞的影响。方法 健康家犬28只．随机分为两组：NGF组（n=20）：注血后0．5h，将NGF 2000 AU立体定向导入血肿灶周区；脑出血（ICH）组（n=8）：只注血，不注药。在ICH后1、3、10、28d四个时间点进行以下检测：①采用Purdy评分观察临床神经功能恢复情况。②采用免疫组化SP法，检测外源性NGF在血肿灶周脑组织中的有效表达。③激光共聚焦显微镜检测血肿灶周神经元烯醇化酶（NSE）、神经纤维酸性蛋白（GFAP）荧光单标阳性细胞的数目。结果 ①1～3d Purdy评分两组比较无显著性差异（P〉0．05），但10～28d评分NGF组显著好于ICH组（P〈0．05）。②NGF组血肿灶周免疫阳性细胞3d时大量出现，染色较深。持续10d，而ICH组表达量少且持续时间短（P〈0．05）。③NGF组激光共聚焦显微镜下NSE、GFAP单标阳性细胞数均明显多于ICH组（P〈0，05）。结论 外源性NGF立体定向导入血肿灶周区，早期能够通过保护神经元提高存活率；晚期能够通过促进胶质细胞适度增生、神经纤维生长来促进血肿灶周神经功能的修复。     

外源性神经生长因子在脑血肿灶周围组织中的表达及对神经功能恢复的影响

目的:观察外源性神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)在血肿灶周组织中的表达及其对神经功能恢复的影响,为脑出血基因治疗提供理论依据。方法:健康家犬24只,随机分为3组:NGF组12只:注血后0.5h,将NGF2000AU立体定向导入血肿灶周区;脑出血组8只:只注血,不注药;对照组4只:除麻醉外,不注血和注药。在脑出血后1,3,10,28d四个时间点进行以下检测:①Purdy评分:观察临床神经功能恢复情况。②NGF检测:采用免疫组化SP法。以细胞胞浆呈棕黄色着色为阳性细胞,检测外源性NGF在血肿灶周脑组织中的有效表达。结果:①Purdy评分:NGF组1,3d评分与脑出血组比较差异无显著性意义(P>0.05),但10,28d评分犤(2.84±1.53)分,(2.15±1.13)分犦显著好于脑出血组犤(3.74±1.08)分,(3.32±1.46)分犦(P<0.05)。②NGF在血肿灶周组织中的表达:NGF组血肿灶周免疫阳性细胞3d时大量出现,染色较深。持续10d,而脑出血组表达量少且持续时间短(P<0.05)。结论:外源性NGF立体定向导入血肿灶周区,能够在血肿灶周组织中有效表达,且能明显促进脑出血后神经功能的恢复。     

外源性神经生长因子在脑血肿灶周围组织中的表达及对神经功能恢复的影响

目的：观察外源性神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在血肿灶周组织中的表达及其对神经功能恢复的影响，为脑出血基因治疗提供理论依据。方法：健康家犬24只，随机分为3组：NGF组12只：注血后0．5h，将NGF2000AU立体定向导入血肿灶周区；脑出血组8只：只注血，不注药；对照组4只：除麻醉外，不注血和注药。在脑出血后1．3，10．28d四个时间点进行以下检测：①Purdy评分：观察临床神经功能恢复情况。②NGF检测：采用免疫组化SP法。以细胞胞浆呈棕黄色着色为阳性细胞，检测外源性NGF在血肿灶周脑组织中的有效表达。结果：①Purdy评分：NGF组1，3d评分与脑出血组比较差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，但10，28d评分[(2．84&;#177;1．53)分，(2．15&;#177;1．13)分]显著好于脑出血组[(3．74&;#177;1．08)分，(3．32&;#177;1.46)分](P&;lt;0．05)。②NGF在血肿灶周组织中的表达：NGF组血肿灶周免疫阳性细胞3d时大量出现，染色较深。持续10d，而脑出血组表达量少且持续时间短(P&;lt;0．05)。结论：外源性NGF立体定向导入血肿灶周区，能够在血肿灶周组织中有效表达，且能明显促进脑出血后神经功能的恢复。     

神经生长因子对局灶性脑缺血神经干细胞巢蛋白表达及细胞类型的影响

目的:实验于2006-02/07在锦州医学院科学实验中心完成。将72只健康SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、神经生长因子治疗组,每组24只。采用Logna等改良法复制大脑中动脉血栓模型,动物清醒2h后进行功能评价,动物神经功能达到2级的纳入实验。假手术组除不进行大脑中动脉线栓外,其余同模型组。神经生长因子治疗组于缺血后立即腹腔注射神经生长因子1000μg/kg,1次/d。于缺血后1,3,7,14d处死动物,运用免疫组化和免疫荧光双标的方法观察神经生长因子对脑缺血后神经干细胞巢蛋白的表达及其细胞类型的影响。结果:72只大鼠均进入结果分析。①神经生长因子治疗组和模型组大脑皮质均可见巢蛋白阳性细胞,细胞呈圆形或椭圆形。与模型组相比,除缺血后1d外,神经生长因子治疗组其他时间点的巢蛋白阳性细胞数均明显高于模型组,两组缺血后各时间点的巢蛋白阳性细胞数均高于假手术组[模型组:(3.47±0.51),(5.13±1.14),(13.95±3.56),(8.97±2.08)个;神经生长因子治疗组:(3.81±0.66),(9.88±2.08),(19.87±3.86),(26.17±2.90)个,假手术组:0,P<0.05,P<0.01]。②模型组和神经生长因子治疗组3d时缺血皮质巢蛋白阳性突起主要与胶质纤维酸性蛋白共存,14d时巢蛋白与神经元特异性烯醇化酶共存明显增多。结论:神经生长因子能增加局灶性脑缺血后巢蛋白的阳性细胞的数目,并促进其分化为神经元和神经胶质细胞。     

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的:观察HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的变化。方法:结扎双侧颈总动脉制备慢性前脑缺血大鼠模型,采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞。给予模型大鼠HD02水煎剂灌胃,分别于造模后15,30d观察神经干细胞增殖分化的变化。结果:与正常对照组相比,慢性前脑缺血大鼠大脑皮质、室周区、海马BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数于造模后15d明显增多(P<0.01),但造模后30dBrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数与正常对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);造模后30d,HD02组BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数较慢性前脑缺血组明显增多(P<0.01)。结论:HD02可显著增加慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化能力     

实验性脑出血大鼠皮质钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性的变化

目的: 探讨钙凋磷酸酶和钙蛋白酶对实验性脑出血过程中神经元凋亡的作用.方法: 采用大鼠局灶性脑出血模型,观察脑出血后皮质钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性的变化.结果: 脑出血后血肿周边组织可以检测到大量原位末端标记法(TUNEL)阳性细胞,脑出血后皮质钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性增加.结论: 脑出血血肿周边组织存在神经元凋亡,可能与钙凋磷酸酶和钙蛋白酶的活化有关.     

外源性神经生长因子治疗大鼠脑出血的疗效分析

目的:观察外源性神经生长因子(NGF)治疗大鼠脑出血的疗效。方法:48只SD大鼠随机分成NGF组24只、脑出血组12只和假手术组12只。Ⅶ型胶原酶尾状核注射制备大鼠脑出血模型;NGF组给予NGF血肿内注射,脑出血组注射等量生理盐水,假手术组只进针。分别于术后1、3及7 d对3组大鼠进行神经功能评分,免疫组化法检测血肿灶周Nestin及血管内皮生长因子(VEGF)的阳性细胞数。结果:造模后7 d,NGF组神经功能缺损评分降低,低于NGF组1 d及3 d时的评分(P<0.05),且低于脑出血组7 d时的评分(P<0.05)。各时间点NGF组Nestin及VEGF阳性细胞数均显著高于假手术组(P<0.01),高于脑出血组(P<0.05);NGF组7 d时Nestin及VEGF阳性细胞数高于同组1 d及3 d时(P<0.05)。结论:外源性NGF有助于促进脑出血大鼠的神经功能恢复,其机制可能与激活脑出血大鼠的内源性神经干细胞及促进脑组织分泌VEGF有关。     

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的：观察HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的变化。方法：结扎双侧颈总动脉制备慢性前脑缺血大鼠模型，采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞。给予模型大鼠HD02水煎剂灌胃，分别于造模后15，30d观察神经干细胞增殖分化的变化。结果：与正常对照组相比，慢性前脑缺血大鼠大脑皮质、室周区、海马BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200，BrdU+NeuroD，BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数于造模后15d明显增多(P&;lt;0．01），但造模后30d BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200，BrdU+NeuroD，BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数与正常对照组相比差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；造模后30d，HD02组BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200，BrdU+NeuroD，BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数较慢性前脑缺血组明显增多(P&;lt;0．01)。结论：HD02可显著增加慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化能力。     

银杏内酯B对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞的影响

摘要 目的：观察不同剂量银杏内酯B（GB）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠内源性神经干细胞增殖分化的影响。 方法：清洁级7d龄SD大鼠96只,随机分为假手术组、模型组、低剂量组及高剂量组,后3组采用经典Rice法制作HIBD动物模型,模型制作4h后低剂量组与高剂量组分别按5mg/kg、10mg/kg腹腔注射GB,其他两组分别注射等量生理盐水,每日1次,共5d。每组随机分别在造模后第3,7,14,28天处死,单标、双标免疫组化技术观察4组大鼠海马齿状回颗粒下层区（SGZ）溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU+）及皮质BrdU+/nestin+（聚蛋白）、BrdU+/NSE+（神经元特异性烯醇化酶）、BrdU+/GFAP+（胶质纤维酸性蛋白）阳性细胞的表达,并计数分析。 结果：HIBD后BrdU+、皮质BrdU+/nestin+、BrdU+/NSE+、BrdU+/GFAP+细胞数增加,低剂量组、高剂量组均高于模型组,GB高剂量组的阳性细胞数高于GB低剂量组。 结论：GB能提高HIBD新生鼠内源性神经干细胞增殖、分化的能力,提示其可以促进神经发生。