L-精氨酸 一氧化氮途径对病理性心肌肥厚形成的抑制作用及相关机制

目的:从在体和离体水平分别探讨L精氨酸对病理性心肌肥厚的影响及相关机制。方法:(1)在体水平:将大鼠分为假手术组、手术组、L精氨酸 (Larginine, LArg) 组和L硝基精氨酸甲酯 (NnitroLarginine methyl ester, LNAME) 组(LArg+LNAME组),利用腹主动脉缩窄制作大鼠模型。检测心肌内蛋白合成总量与心率、血压； 比色法检测心肌内一氧化氮（NO）含量、放射免疫法检测心肌ATⅡ含量，RTPCR检测心肌内血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme, ACE）mRNA的表达水平。(2)离体水平:将原代培养的心肌细胞分为对照组、血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ，ATⅡ) 处理组、LArg处理组(ATⅡ+LArg)及LNAME处理组(ATⅡ+LArg+LNAME)。RTPCR检测原代培养心肌细胞诱导型一氧化氮合酶 (inducible NO synthase, iNOS)、ATⅡ的1型受体(ATⅡ receptor type 1, ATR1)和2型受体(ATⅡ receptor type 2, ATR2)mRNA的表达水平；Western印迹法检测原代培养心肌细胞iNOS蛋白表达水平。结果:(1)LArg提高了腹主动脉缩窄大鼠心肌内NO含量，降低了心肌ATⅡ含量、心肌蛋白合成总量、左心室质量/体质量比值以及ACE mRNA的表达量；LNAME可消除LArg的上述作用；(2)在离体条件下，与ATⅡ组相比，LArg处理组心肌细胞NO含量、iNOS mRNA及蛋白水平的表达量均有提高，ATR1 mRNA表达水平下降； LNAME处理组与ATⅡ处理组就上述指标相比无显著性差异；各组细胞ATR2 mRNA表达水平无明显差异；(3)多元逐步回归分析显示心肌内蛋白合成总量与血压水平、心率之间均不存在回归关系，而心肌NO和ATⅡ含量则可作为心肌内蛋白合成总量的预测因子；(4)心肌内ATⅡ含量、ACE mRNA表达量及心肌细胞ATR1 mRNA表达量均与NO含量之间存在线形负相关关系。 结论:(1)心肌肥厚的形成与心肌内NO、ATⅡ含量密切相关；(2)LArg通过增强心肌iNOS表达，致NO生成增加。NO可减少心肌内ATⅡ生成，并通过调控心肌ACE及ATR1表达来抑制病理性心肌肥厚的形成；(3)ATR2并未参与上述过程。     

L-精氨酸对大鼠心肌肥厚的保护作用

目的 研究L-精氨酸(L-Arg)对异丙肾上腺素(ISO)所致大鼠心肌肥厚的保护作用及机制.方法 ISO皮下注射5 mg/(kg·d),建立大鼠心肌肥厚模型,同时预防性L-Arg给药,观察大鼠心电图变化,测定心脏质量指数、一氧化氦(NO)含量、丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性,并观察心肌间质改变.结果 L-Arg能明显减轻心脏质量,减少间质腔原含量,改善左室肥厚形成的"心肌劳损".降低血清MDA含量和LDH活性,增加NO含量.结论 L-Arg对ISO所致大鼠心肌肥厚具有保护作用.     

L-精氨酸-一氧化氮通路对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥大的影响

目的 探讨L-精氨酸对心肌肥厚的影响及相关机制.方法 皮下注射异丙肾上腺素(ISO)复制大鼠心肌肥厚模型,L-精氨酸作为干预因素,检测心脏重量参数,心肌组织胶原染色,心房利钠肽(ANP)的转录水平,观察L-精氨酸对心肌肥大的影响;不同时间段,应用Westem blot结合图像分析系统,检测各组大鼠心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达水平;检测血清NO含量和NOS活性.结果 皮下注射ISO 7d后,心脏重量参数增加,ANP mRNA表达增加;L-精氨酸抑制心肌肥大,随着L-精氨酸作用时间延长,血清NOS活性增强,NO含量增加.同时,iNOS蛋白表达下调,eNOS蛋白表达上调.结论 L-精氨酸可以抑制病理性心肌肥大,这与其调节iNOS和eNOS表达,增加NO含量有关.     

L-精 氨酸对病理性心肌肥大抑制作用的研 究

目的观察L-精氨酸对心肌肥厚的保护作用及相关机制。方法雄性Wistar大鼠36只,随机分为3组,每组各12只：对照组、模型组（ISO组）、L-精氨酸治疗组。皮下注射异丙肾上腺素（ISO）复制大鼠心肌肥厚模型,检测心脏重量参数（心重／体重,左室重／体重）,心肌组织胶原含量,心房利钠肽（ANP）的转录水平,观察L-精氨酸对心肌肥大的影响;检测各组大鼠血清一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、丙二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果L-精氨酸治疗组心重／体重[（3．52±0．21）mg/g]和左室重／体重[（2．39±0．23）mg／g]均低于ISO组[心重／体重（3．89±0．25）mg／g,左室重／体重（2．67±0．26）mg／g）],差异有统计学意义（P〈0．05）。同时,L-精氨酸治疗组ANPmRNA表达相对值（1．2）低于ISO组（1．5）,差异有统计学意义（P〈0．05）;心肌间质胶原含量,L-精氨酸治疗组[（14．52±3．09）％]低于ISO组[（35．24±4．78）％],差异有高度统计学意义（P〈0．01）;L-精氨酸治疗组NO含量[（34．15±6．12）μmol／L]和NOS活性[（23．9±3．12）U／mL]与ISO组NO含量[（20．96±5．06）μmol／L]和NOS活性[（16．58±3．12）U／mL]比较均增加．差异有高度统计学意义（P〈0．01）;L-精氨酸治疗组MDA水平[（308．73±37．48）nmol／L]和LDH水平[（2065．35±347．46）U／L1与ISO组MDA含量[（389．63±42．85）nmol／L]和LDH水平[（3582．89±364．51）U／L）]比较均降低,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论早期给予L-精氨酸可以通过增加NO含量,减少MDA和LDH水平．减少心肌问质胶原沉积进而抑制病理性心肌肥大。     

微血管病性心绞痛患者血小板L-精氨酸-一氧化氮系统改变及静脉L-精氨酸输入的逆转效应

目的:观察微血管病性心绞痛(MVA)患者血小板左旋精氨酸(L-Arg)转运动力学、一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)产量,探讨血小板L-Arg-NO系统变化在MVA发病中的意义,及静脉输入L-Arg对L-Arg转运的逆转效应。方法:15例MVA患者及15例健康对照者,静脉血制备血小板悬液,用放射性核素标记法测定3H-L-Arg 在血小板的转运动力学特征; 测定血小板NOS活性及NO产物——亚硝酸盐(NO-2)量; 15例MVA患者基础检查后,给予静脉滴入L-Arg 20 g/d,10 d后重复上述检查。结果:MVA患者血小板L-Arg转运功能明显减低,最大转运速率(Vmax)较对照组减低34.4% (P<0.01); L-Arg转运米氏常数(Km)值增加21.4%(P<0.05); NO-2产量较对照组减少47.1%(P<0.05),NOS活性较对照组减低25.4%(P<0.01)。而应用L-Arg可明显逆转上述改变,与MVA组治疗前比较Vmax增加11.9% (P<0.01),Km降低18% (P<0.05),NO-2产量明显增加,是治疗前的1.33倍(P<0.05),NOS活性增加为治疗前的1.2倍(P<0.05)。L-Arg静滴后心绞痛发作及心电图明显改善。结论:MVA患者存在L-Arg-NO系统转运及功能障碍,MVA患者冠脉微血管内皮依赖性舒张功能障碍可能与L-Arg-NO系统障碍有关。L-Arg的补充可逆转L-Arg-NO系统障碍,在MVA治疗上有重要作用。     

L-精氨酸对肾性高血压心肌肥厚大鼠孤束核内NOS及左室、主动脉中钙调素含量的影响

目的：观察Ｌ－Ａｒｇ对肾血管性高血压所致心肌肥厚大鼠孤束核ＮＯＳ及主动脉、左室肌ＣａＭ含量的影响。方法：运用组织化学染色显示孤束核ＮＯＳ阳性神经元,并测定光密度作半定量分析,用生化方法测定主动脉和左室肌ＣａＭ活性。结果：８周后Ｌ－Ａｒｇ治疗组孤束核ＮＯＳ含量增加,主动脉及左室肌ＣａＭ活性较２Ｋ１Ｃ组和Ｌ－ＮＡＭＥ治疗组低。结论：Ｌ－Ａｒｇ治疗能逆转心肌肥厚,促进孤束核ＮＯＳ阳性神经元生成,并对主动脉及左室肌ＣａＭ产生积极影响。     

诱导型一氧化氮合酶在缺血性急性肾衰竭肾小管损伤中的作用及L-精氨酸的疗效观察

目的研究急性肾衰竭(ARF)时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与肾小管损伤的关系及初步探讨L-精氨酸(L-arg)灌注对ARF的治疗作用。方法SD大鼠分为3组:①正常对照组(n=6),假手术;②ARF组(n=18),夹闭双肾动脉50min建立ARF模型;③ARF+L-Arg组(n=18),夹闭双肾动脉50min后,股静脉灌注L-Arg(300mg/kg)。通过内生肌酐清除率(Ccr)测定,肾脏病理学检查i、NOS免疫组化及改良NOS酶组化染色等方法观察iNOS在ARF小管损伤中的作用。结果术后1,3和5d Ccr值自术前(0.9978±0.149)L/d分别下降至(0.194±0.029)L/d、(0.21±0.126)L/d和(0.421±0.31)L/d,治疗组术后1,3和5d Ccr值分别为(0.294±0.056)L/d(、0.923±0.096)L/d和(1.126±0.21)L/d,与未治疗组同期相比有显著性差异(P<0.01)。生理状态下,iNOS在肾内表达较弱,ARF后1,3和5d肾内iNOS表达明显高于正常(P<0.05)。治疗组小管细胞iNOS表达明显减少(P<0.05)。小管细胞的空泡样变性、坏死、管型亦相应减少。结论ARF时局部缺血、低氧可迅速诱导肾小管上皮细胞的iNOS大量表达,这可能是引起小管损伤的重要因素之一。外源性L-Arg能减少小管细胞iNOS的表达,减轻ARF时的肾小管损伤。     

L-精氨酸对肾性高血压大鼠主动脉肥厚的影响

目的 探讨一氧化氮前体L-精氨酸对肾血管性高血压大鼠主动脉肥厚的影响。方法 采用两肾一夹Glodblatt肾血管性高血压大鼠模型。所有大鼠被随机分为4组（每组10只）：假手术对照组，高血压对照组，L-精氨酸治疗组（于术后第5周开始每天给予L-精氨酸200mg／kg），L-NAME处理组（于术后第5周开始每天同时给予L-NAME10mg／kg及L-精氨酸200mg／kg）。采用标准尾套法间接检测清醒大鼠血压。给药8周后，处死大鼠，分离胸主动脉用于检测主动脉重／体重比、胸主动脉中膜厚度及中膜截面积（应用石蜡切片的彩色图像分析技术）。结果 L-精氨酸治疗明显抑制了肾动脉狭窄术后的血压升高，减小了主动脉重／体重比、主动脉中膜厚度及中膜截面积。L-NAME明显抑制了L-精氨酸的上述作用。结论 长疗程L-精氨酸治疗在抗高血压的同时也具有抑制主动脉肥厚的作用。     

牛磺酸对肾性高血压大鼠心肌肥厚及组织局部RAS的影响

目的探讨牛磺酸对肾血管性高血压大鼠心肌肥厚及组织局部肾素-血管紧张素系统(RA S)的影响。方法采用两肾一夹型肾血管性高血压大鼠模型。所有大鼠被随机分为3组(每组20只):假手术对照组,高血压对照组和牛磺酸治疗组,于术后第5周开始给予牛磺酸50m g.kg-1.d-1。采用标准尾套法间接检测清醒大鼠血压。给药8周后,处死大鼠,分离左室心肌,检测左室重/体重比、心肌的血管紧张素Ⅱ含量(放射免疫法检测)和血管紧张素转换酶活性(分光光度计法检测)。结果与假手术组大鼠相比,未给药2K1C高血压大鼠血压明显升高,左室重/体重比增大,心肌的血管紧张素Ⅱ含量增加和血管紧张素转换酶活性均增高。应用牛磺酸治疗则明显抑制了肾动脉狭窄术后大鼠血压的升高,降低了2K1C高血压大鼠左室重/体重比、心肌的血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素转换酶活性。结论长疗程牛磺酸治疗可抑制肾性高血压大鼠心肌肥厚的发生,其机制可能与抑制心肌组织局部血管紧张素Ⅱ生成有关。     

小檗碱对压力负荷所致心肌肥厚大鼠的保护作用

目的:通过动物实验探讨小檗碱(Berberine)对压力负荷所致大鼠心肌肥厚模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法:通过主动脉缩窄术构建大鼠心肌肥厚模型,将造模成功的16只SD大鼠随机分为模型组及模型+小檗碱组,另外将假结扎主动脉的8只大鼠入组假手术组。术后4周,利用心脏超声测定大鼠的心功能指标;HE、Masson及TUNEL染色等分子生物学方法测定心肌细胞大小、心脏纤维化、心肌细胞凋亡等指标;同时使用RT-q PCR法检测左室心肌组织心房利钠因子(ANP)m RNA的表达;采用Western blot的方法检测内质网应激相关指标Bip/GRP78和CHOP的蛋白表达情况。结果 :与模型组相比,小檗碱可明显改善主动脉缩窄所致的心功能紊乱,显著降低心肌细胞大小(P<0.05)、心脏组织的纤维化程度以及心肌细胞凋亡比率(P<0.05);Western blot结果表明,小檗碱治疗可明显降低长期压力超负荷所致的内质网应激相关指标Bip/GRP78和CHOP的表达的增加(P<0.05)。结论 :小檗碱可显著改善压力超负荷所致的心肌肥厚及心功能紊乱,抑制心肌细胞凋亡,对肥厚型心肌起保护作用,且此种心脏保护性作用可能与其抑制压力负荷所致的内质网应激相关。     

运动性心肌肥厚与病理性心肌肥厚大鼠模型中线粒体膜电位的差异

目的比较运动性和病理性心肌肥厚大鼠模型中线粒体膜电位(MMP)的差异及其对心功能的影响。方法36只Spargue-Dawley大鼠随机分为对照组、有氧训练组、腹主动脉缩窄组,每组12只。有氧训练组和腹主动脉缩窄组大鼠分别采用跑台法、腹主动脉缩窄法制备心肌肥厚模型,利用生物机能实验仪检测3组大鼠血流动力学指标,测定全心质量指数(HMI),反转录-聚合酶链反应法测定心房钠尿肽(ANP)mRNA表达;激光共聚焦对MMP进行半定量分析。结果有氧训练组大鼠的心率(HR)显著低于对照组(P<0.05),左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),但左心室舒张末压(LVEDP)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。腹主动脉缩窄组大鼠的HR、LVSP、LVEDP、+dp/dtmax显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),-dp/dtmax显著低于对照组(P<0.05)。腹主动脉缩窄组大鼠的HR显著高于有氧训练组(P<0.01),-dp/dtmax显著低于有氧训练组(P<0.01),LVSP、LVEDP、+dp/dtmax与有氧训练组比较差异无统计学意义(P>0.05)。有氧训练组和腹主动脉缩窄组大鼠HMI均高于对照组(P<0.05),有氧训练组与腹主动脉缩窄组大鼠HMI比较差异无统计学意义(P>0.05)。有氧训练组、腹主动脉缩窄组大鼠ANP mRNA相对表达均高于对照组(P<0.05),有氧训练组与腹主动脉缩窄组大鼠ANP mRNA相对表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。有氧训练组大鼠MMP显著高于对照组和腹主动脉缩窄组(P<0.05),腹主动脉缩窄组大鼠MMP显著低于对照组(P<0.05)。结论在运动性和病理性心肌肥厚模型中,心肌细胞MMP的显著变化可能是影响心功能改变的主要原因之一。     

三七总皂苷对小鼠心肌肥厚的抑制作用及机制

目的 探讨三七总皂苷对心肌肥厚的抑制作用及可能机制.方法 30只健康小鼠随机分为5组:对照组、模型组及3个治疗组(分别为低剂量组、中剂量组和高剂量组),通过各组小鼠心重指数、左心室重量指数(LVI)比较及组织形态学观察,了解三七总皂苷对心肌肥厚的抑制作用;应用碱水解法观察各组左心室胶原含量变化及三七总皂苷对胶原含量的影响;RT-PCR,技术检测各组心肌中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达水平的变化.结果 与对照组相比,模型组心重指数、LVI、羟脯氨酸含量及MMP-2、MMP-9的表达均增高,差别有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中、高剂量组心重指数、LVI、羟脯氨酸含量及MMP-2、MMP-9的表达明显下降,差别有统计学意义(P<0.01).结论 三七总皂苷对改善心肌肥厚有一定作用,其机制可能与其调节MMP-2、MMP-9的表达有关.     

水杉总黄酮抗实验性心肌肥厚及抑制心室c—Fos蛋白表达的作用

目的：观察水杉总黄酮（TFM）对容量超负荷大鼠心肌肥厚的作用及其对心室c-Fos蛋白表达的影响。／方法：采用腹腔动－静脉造瘘建立大鼠容量超负荷模型,ig给予TFM,免疫组化测定心室c-Fos蛋白的相对含量,结果：TEM剂量依赖性地减轻大鼠心脏重量,抑制心室RNA和蛋白质合成,并抑制心室c-Fos蛋白表达,结论：TFM可预防容量超负荷大鼠心肌肥厚的形成,抑制心室c-Fos蛋白表达可能是其分子机制之一。     

木犀草素对胃癌细胞MGC803增殖的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草素对胃癌细胞MGC803的增殖抑制作用及其机制.方法 通过MTT法、克隆形成抑制实验观察木犀草素对胃癌细胞MGC803的增殖抑制作用,碘化丙啶(PI)单染色法检测细胞周期,AnnexinⅤ-PI双染法测定细胞凋亡,蛋白质印迹法检测Bcl-2家族蛋白、Caspase蛋白、周期及自噬相关蛋白的表达情况.结果 MTT法检测发现,木犀草素作用于MGC803细胞24、48和72 h后,IC50分别为127.37、76.12、16.84 μmol/L;木犀草素能抑制胃癌细胞MGC803的克隆形成.PI单染色法发现随着木犀草素浓度的增大,发生G2期阻滞的细胞比例增加.蛋白质印迹法的检测结果表明,随着木犀草素浓度的增加,CDK4、CDK6、CyclinE2表达减少,CyclinD1、CyclinD3和p-Wee1表达基本不变,CyclinA、CyclinB、Myt1、p-cdc2(Tyr15)表达增高.AnnexinⅤ-PI双染法发现随木犀草素浓度增加,细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均增加.蛋白质印迹法的检测结果表明,Mcl-1、Bcl-xL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达随木犀草素浓度增加而减少,Bcl-2蛋白表达量变化不大,Bax蛋白表达量增加,因而引起Bcl-2/Bax、Mcl-1/Bax和Bcl-xL/Bax的比例下降;同时可见到Caspase-3和PARP出现了切割的条带;P62表达下降,Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加.结论 木犀草素使胃癌细胞MGC803发生G2期阻滞,诱导细胞自噬的发生并抑制细胞的生长,还通过线粒体途径诱导胃癌细胞MGC803凋亡.     

ADM对LNNA诱导的高血压心肌肥大的作用及机制探讨

本工作在ＬＮＮＡ经慢性ＮＯ封闭诱导的大鼠高血压心肌肥大模型上研究了ＡＤＭ对其心肌肥大和Ｍ５ＬＶ钠一钙交换功能损伤的作用。结果：一、较之对照组，ＬＮＮＡ组ＭＡＯ和ＬＶＩ分别增加５７．４％和１８。０％（Ｐ＜０．０１）．其ＭＳＬＶ经钠－钙交换蛋白的钙摄取则明显降低（Ｐ＜０．０１或０．０５）：二．ＡＤＭ组的ＭＡＰ和ＬＶＩ则分别较ＬＮＮＡ组降低１９．６％和１１．３％，而其ＭＳＬＶ的钙摄取则高于ＬＮＮＡ组（Ｐ＜０．０５）；三、对照组、ＬＮＮＡ组和ＡＤＭ组钠－钙交换蛋白摄取钙的Ｋｍ值分别为７．５１．７．０４和７．５７ｕＭ，而Ｖｍａｘ则分别为６．３８，４．３２和５．４５ｎｍｏｌ／。ｍｇｐｒ／ｍｉｎ。表明：ＡＤＭ能拮抗ＬＮＮＡ诱导的高血压心肌肥大和减轻其ＭＳｌｌＶ钠－钙交换功能的损伤，并且后者可能是ＡＤＭ拮抗心肌肥大的机制之一。揭示内源性ＡＤＭ的诱导和外源性给予ＡＤＭ可能有预防和／或延缓高血压心肌肥大发生发展的作用。