粉防己碱(Tet)对MDCK细胞钙激活钾通道(KCa)的影响

目的MDCK细胞钙激活钾通道(KCa)的鉴定及探讨Tet对该通道的影响.方法内面向外式(inside-out)膜片钳技术.结果 (1)在对称性高钾溶液([K+].[K+]i=140mmolL1/140mmolL-1)中,主要记录到电导为50.475±0.600pS(n=5)的外向通道电流,随电压增加而增加.(2)浴液中钾离子浓度由140mmolL-1改变为45mmolL-1,在0mV记录到内向电流,从+30mv开始记录到记录到外向电流,电导为50.275±0.294pS(n=5).(3)在对称性高钾溶液、膜电位+60mV时.向浴液中加入不同浓度的Ca2+,从10-7molL-1开始,通道活动浓度依赖性增加.(4)对称性高钾溶液、膜电位为+60mV,向浴液中加入Tet,通道活动在1.5×10-5molL-1时最大,在6.0×10-5molL-1时明显受到抑制,几乎为0,洗脱后,部分恢复.结论(1)在MDCK细胞上记录到中电导钙激活钾通道(IKCa),该通道具有电压依赖性和胞内游离Ca2+浓度依赖性,无整流特性.(2)Tet在7.5×10-6molL-1时对MDCK细胞Ka没有显著影响;在1.5×10-5molL-1促进KCa开放,增加钾离子外流;在6.0×10-5molL-1时抑制MDCK细胞Kca开放,减少钾离子外流.     

顺铂(DDP)对MDCK细胞钙激活钾通道(KCa)的影响

目的探讨顺铂(DDP)对MDCK细胞KCa的影响.方法利用内面向外式(inside-out)膜片钳技术.结果(1)在对称性高钾溶液([K+].[K+]i=140mmolL-1/140mmolL-1)中,主要记录到电导为51.425±0.570pS(n=5)的外向通道电流,随电压增加而增加.(2)浴液中钾离子浓度由140mmolL-1改变为45mmolL-1,在0mV记录到内向电流,从+30mv开始记录到记录到外向电流,电导为50.385±0.307pS(n=5).(3)在对称性高钾溶液、膜电位+60mV时;向浴液中加入不同浓度的Ca2+,从10-7molL-1开始,通道活动浓度依赖性增加.(4)对称性高钾溶液、膜电位为+60mV,向浴液中加入DDP,从1.5×10-5molL-1开始,DDP使通道活性呈现浓度依赖性减少,洗脱后,通道活性部分恢复.结论(1)本实验在MDCK细胞上记录到中电导钙激活钾通道(IKCa),该通道具有电压依赖性和胞内游离Ca2+浓度依赖性,无整流特性.(2)DDP在7.5×10-6molL-1时对KCa没有显著影响;从1.5×10-5molL-1开始使通道活性呈现浓度依赖性减少,减少钾离子外流.     

顺铂(DDP)对MDCK细胞钙激活钾通道(K_(Ca))的影响

目的探讨顺铂(DDP)对MDCK细胞KCa的影响。方法利用内面向外式(inside-out)膜片钳技术。结果(1)在对称性高钾溶液([K ]o:[K ]i=140mmolL-1/140mmolL-1)中,主要记录到电导为51.425±0.570pS(n=5)的外向通道电流,随电压增加而增加。(2)浴液中钾离子浓度由140mmolL-1改变为45mmolL-1,在0mV记录到内向电流,从 30mv开始记录到记录到外向电流,电导为50.385±0.307pS(n=5)。(3)在对称性高钾溶液、膜电位 60mV时;向浴液中加入不同浓度的Ca2 ,从10-7molL-1开始,通道活动浓度依赖性增加。(4)对称性高钾溶液、膜电位为 60mV,向浴液中加入DDP,从1.5×10-5molL-1开始,DDP使通道活性呈现浓度依赖性减少,洗脱后,通道活性部分恢复。结论(1)本实验在MDCK细胞上记录到中电导钙激活钾通道(IKCa),该通道具有电压依赖性和胞内游离Ca2 浓度依赖性,无整流特性。(2)DDP在7.5×10-6molL-1时对KCa没有显著影响;从1.5×10-5molL-1开始使通道活性呈现浓度依赖性减少,减少钾离子外流。     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

双氢麦角毒碱对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca2+]i的影响

血管性痴呆(vascular dementia,VD)出现学习和记忆智能障碍的确切发病机制尚不十分清楚,但由于生理浓度的Ca^2 作为神经细胞内第二信使,参与了学习和记忆过程。本文利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察了该病小鼠海马神经细胞[Ca^2 ]i变化特征,以及双氢麦角毒碱的影响。     

毫米波辐射对白血病细胞亡及胞内游离Ca^2＋和Bcl—2基因表达的影响

毫米波辐射白血病细胞株后,有明显的诱导白血病细胞凋亡的效应,同时也有显著的直接杀灭白血病细胞株的作用,白血病细胞株受毫米波辐射后,胞内游离Ca^3 的浓度显著升高,Bcl-2基因的表达显著下降。     

胰岛素抗性对肝癌HepG2细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响

 目的:研究胰岛素抗性在原发性肝癌细胞中的生物学功能及对顺铂抗癌药物的抗药敏感性的影响。方法: 利用高浓度的胰岛素连续培养HepG2细胞72 h获得抗胰岛素的HepG2细胞（HepG2/IR）,检测HepG2/IR细胞的黏附、迁移和侵袭的能力改变以及对顺铂的敏感性;同时利用流式细胞术测定HepG2和HepG2/IR中胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白2的表达情况。结果: 胰岛素抗性HepG2/IR细胞中葡萄糖消耗量显著降低;胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白2表达下调;而HepG2/IR细胞的黏附、迁移和侵袭能力明显增强;同时HepG2/IR细胞对顺铂的敏感性降低;但用吡格列酮处理HepG2/IR细胞后其黏附、迁移和侵袭能力显著减弱。结论: 胰岛素抗性与HepG2细胞的耐药性、细胞黏附、迁移和侵袭能力密切相关。这有助于解释具有胰岛素抗性的癌症患者对化疗失敏的临床现象。     

粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达及核因子活化的影响

目的探讨粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注过程中大鼠肿瘤坏死因子-α表达及与核因子活化的影响以及相关关系。方法60只SD大鼠随机分为3组:缺血/再灌注损伤组、假手术组、粉防己碱治疗组,缺血/再灌注损伤组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30min后再灌注24h后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同缺血/再灌注损伤组;粉防己碱治疗组在缺血前30min腹腔注射粉防己碱,余步骤同缺血/再灌注损伤组。24h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法检测心肌组织中肿瘤坏死因子-α表达水平,凝胶电泳迁移率变化分析检测核因子的活性。结果粉防己碱组与缺血再灌注组相比肿瘤坏死因子-α表达水平明显减低(208.40±25.12 VS 306.65±17.78,P<0.01)而与假手术组相比表达明显增强(208.40±25.12 VS 61.45±9.20,P<0.01)。粉防己碱组核因子的活性明显低于缺血再灌注组(29.58±1.56 VS 40.33±4.39,P<0.01)而与假手术组无显著性差异(29.58±1.56 VS 30.09±3.46,P>0.05)。结论粉防己碱预处理可以使心肌缺血/再灌注损伤过程中肿瘤坏死因子-α生成明显减少,核因子的活化受到有效抑制,从而起到减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用。     

钩藤碱对人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的:探讨钩藤碱(Rhy)对人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用.方法:切取人体肠系膜动脉并分离细胞,以膜片钳测BKCa活性.结果:(1)高血压病组(EH)与非高血压组(NH)比较,前者BKCaPo较高,Tc较低;加入Ca2 后,与加Ca2 前相比NH组Po的增加幅度高于EH组.(2)加入Rhy后,在细胞贴附式BKCa无反应;在内面向外式EH组BKCa Po增加的幅度高于NH组,同一浓度下,前者Po较高,Tc较低.结论:(1)EH组BKCa活性高于NH组.(2)Rhy可直接激活BKCa,且在EH组更为显著.     

小檗碱对人高转移肺癌系（PG）细胞增殖的影响及机制研究

目的：通过离体实验初探小檗碱对高转移性人肺癌细胞株（PG）增殖能力的影响，并探讨其作用机制。 方法： 用MTT法测定小檗碱对PG细胞增殖能力的影响。用流式细胞术测定小檗碱对PG细胞细胞周期及凋亡的影响。用激光共聚焦显微镜观察小檗碱诱导PG细胞氧自由基的产生。 结果： 小檗碱能够抑制PG细胞增殖，且随药物浓度增加抑制效应增强，呈浓度依赖性(P<0.05，P<0.01)。小檗碱对PG细胞细胞周期具有阻滞作用，40 mg/L的小檗碱能引起PG细胞的凋亡。小檗碱作用6 h、12 h只有在终浓度大于或等于10 mg/L时开始产生氧自由基，低浓度的小檗碱作用24h后就能诱导氧自由基的产生。 结论： 小檗碱对PG细胞增殖具有抑制作用，后者可能与调节细胞内活性氧自由基产生从而影响细胞周期进程有关。     

蛋白酶体抑制剂Marizomib联合顺铂对人子宫颈癌细胞的细胞毒性及凋亡的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂Marizomib(Mzb)联合顺铂对人子宫颈癌细胞的抗肿瘤效应及其机制。方法 应用人子宫颈癌细胞系SiHa、C33A和子宫颈上皮永生化细胞H8,通过CCK-8、克隆形成实验、Western blot法和流式细胞术,分析Mzb联合顺铂对子宫颈癌细胞的细胞毒性和凋亡的影响。结果 CCK-8结果显示,Mzb浓度在0、0.001～0.5μmol/L时,H8细胞的增殖活性分别为100%、101.92%～28.73%,SiHa细胞的增殖活性分别为100%、100.48%～3.54%,C33A细胞增殖活性分别为100%、83.7%～17.08%。顺铂(0、0.3～40μmol/L)与Mzb(0.01μmol/L)联用后,SiHa细胞增殖活性分别为98.41%、88.06%～55.04%,C33A细胞增殖活性分别为65.58%、61.04%～44.49%。克隆形成实验结果显示,Mzb浓度分别为0、0.01、0.025μmol/L时,SiHa细胞克隆数分别为535、391、318,C33A细胞克隆数分别为472、293、172。与子宫颈上皮永生化细胞H8相比,Mzb显著抑制子宫...     

小檗碱对喉癌Hep-2细胞增殖与凋亡的影响及可能机制

目的探讨小檗碱对喉癌Hep-2细胞增殖与凋亡的影响及可能机制。方法免疫组织化学方法与Western blot方法检测喉癌组织及癌旁正常组织中环氧合酶-2(COX-2)与细胞周期调节蛋白CyclinB1的表达。MTT方法检测不同质量浓度小檗碱(0,5,10,20mg/L)对喉癌Hep-2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测小檗碱(0,20 mg/L)对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响。Western blot方法检测小檗碱(0,20 mg/L)作用喉癌Hep-2细胞24h后COX-2与CyclinB1的表达变化。结果 COX-2与CyclinB1在喉癌组织的阳性表达率及平均光密度值显著高于癌旁正常组织(P0.01)。小檗碱抑制喉癌Hep-2细胞增殖,并呈时间浓度依赖性;给予20 mg/L小檗碱作用后,喉癌Hep-2细胞凋亡率明显增加,喉癌Hep-2细胞中的COX-2与CyclinB1表达水平明显低于未加药组(P0.01)。结论小檗碱抑制喉癌Hep-2细胞的增殖并促进凋亡,下调COX-2与CyclinB1的表达可能是其作用机制之一。     

粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达及核因子-κB活化的影响

目的 探讨粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注过程中大鼠肿瘤坏死因子-α表达及与核因子-кB活化的影响以及相关关系.方法 60只SD大鼠随机分为3组缺血/再灌注损伤组、假手术组、粉防己碱治疗组,缺血/再灌注损伤组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30 min后再灌注24 h后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同缺血/再灌注损伤组;粉防己碱治疗组在缺血前30 min腹腔注射粉防己碱,余步骤同缺血/再灌注损伤组.24 h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法检测心肌组织中肿瘤坏死因子-α表达水平,凝胶电泳迁移率变化分析检测核因子-κB的活性.结果 粉防己碱组与缺血再灌注组相比肿瘤坏死因子-α表达水平明显减低(208.40±25.12 VS 306.65±17.78,P＜0.01)而与假手术组相比表达明显增强(208.40±25.12 VS 61.45±9.20,P＜0.01).粉防己碱组核因子-κB的活性明显低于缺血再灌注组(29.58±1.56 VS 40.33±4.39,P＜0.01)而与假手术组无显著性差异(29.58±1.56 VS 30.09±3.46,P＞0.05).结论 粉防己碱预处理可以使心肌缺血/再灌注损伤过程中肿瘤坏死因子-α生成明显减少,核因子-кB的活化受到有效抑制,从而起到减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用.     

孕酮对正常生育男性精子头部胞浆内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响

目的：定量分析生育男性获能后单个精子的[Ca^2 ]i基础水平以及10μM孕酮刺激后的[Ca^2 ]i动态改变。方法：生育健康男子10例，手淫法留取精液。精液液化后，应用上游技术分离活动良好的精子，之后将精子悬液置于3‘70C培养2h使之获能。获能后精子移人Petri培养皿，每皿加入终浓度为8．85μmoL／L的钙荧光探针Fluo-3／AM，370C避光孵育40min。     

高三尖杉酯碱对HL60细胞凋亡的影响及机制的研究

目的:研究高三尖杉酯碱对HL60细胞凋亡的影响及其机制。方法:运用高三尖杉酯碱作用HL60细胞后撤药实验筛选其诱导HL60细胞凋亡启动时相,流式细胞和免疫组化技术检测高三尖杉酯碱诱导HL60细胞凋亡启动时相凋亡信号分子Bcl-2、Bax、Fas/FasL、caspase-3、ERK2和p38的表达状况。结果:在高三尖杉酯碱诱导HL60细胞凋亡启动时相,Bcl-2表达降低,Bax表达增高,Bcl-2/Bax比值降低,ERK2表达减低,p38表达增加,caspase-3表达增加,Fas/FasL分子的表达无显著变化。结论:Bcl-2、Bax、MAPK途径和caspase-3参与高三尖杉酯碱启动HL60细胞凋亡的信号转导。     

槟榔碱对2型糖尿病大鼠胰腺β细胞PDX 1 mRNA表达的影响

目的：探讨槟榔碱对2型糖尿病大鼠β细胞分泌功能及胰腺十二指肠同源盒因子 1（pancreas duodenum homeobox 1,PDX 1）mRNA表达的影响。方法：采用高果糖饲料饲养Wistar大鼠12周制备2型糖尿病大鼠模型,40只实验动物随机分为5组：对照组、模型组、模型+1 mg/kg槟榔碱组、模型+5 mg/kg槟榔碱组、模型+10 mg/kg槟榔碱组。药物注射4周后股动脉取血检测空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血清胰岛素,处死大鼠取胰腺组织,石蜡切片HE染色观察组织形态学变化,RT PCR检测β细胞内PDX 1及胰岛素mRNA的表达水平。 结果：（1）高糖作用引起Wistar大鼠胰腺β细胞PDX 1 及胰岛素mRNA 的表达水平显著下降（P＜0.01）;（2）1 mg/kg和5 mg/kg槟榔碱处理能显著上调高糖喂养Wistar大鼠胰腺β细胞PDX 1与胰岛素mRNA表达水平（P＜0.05,P＜0.01）。结论：槟榔碱可以通过上调PDX 1和胰岛素基因表达,改善高糖环境下的β细胞胰岛素合成和分泌功能的损伤。     

下调YAP1基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞的影响及机制探究

目的 观察下调YAP1基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞的影响。方法 子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP分为Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组（转染siRNA-YAP1的细胞）、阴性对照组（转染siRNA-NC的细胞）和空白对照组（未经转染的细胞）,MTT法及癌细胞单克隆形成数目检测细胞增殖,Transwell小室检测侵袭,划痕检测迁移,AnnexinV-FITC/PI双染法检测凋亡,免疫荧光检测自噬现象,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和自噬相关蛋白LC3β、p62。结果 24 h、48 h、72 h,Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组OD值明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）,细胞克隆数明显少于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）;细胞迁移率明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）;细胞侵袭数明显少于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）;免疫荧光结果显示与阴性对照组和空白对照组比较,Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组绿色、红色以及黄色光点明显减少,即自噬小体堆积明...     

小檗碱对人骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1自噬活性的影响及机制

为探讨小檗碱(Berberine, Ber)对人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome, MDS)细胞MUTZ-1自噬活性的影响及机制,以MTT法检测Ber对MUTZ-1细胞的增殖抑制率、半数抑制浓度(half inhibitory concentration, IC_(50)),并绘制增殖抑制率曲线;免疫荧光法测定细胞中LAMP1表达;Western blotting测定LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p-mTOR、Beclin-1、p-Akt、p-ERK、ATG3、ATG4、ATG5、ATG7蛋白表达。结果显示,Ber作用后MUTZ-1细胞增殖抑制水平随时间而增强,Ber对MUTZ-1细胞24、48 h的IC_(50)分别为265.1μmol/L和143.2μmol/L;LAMP1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间而增加;Beclin-1、ATG3、ATG5表达水平增加,p-mTOR、p-Akt表达水平降低,p-ERK、ATG4、ATG7表达水平无明显变化。由此说明Ber可抑制MUTZ-1细胞增殖并诱导其自噬,自噬的诱导与Beclin-1、ATG3、ATG5表达上调和mTOR活性受抑制有关。     

miR-142-5p对非小细胞肺癌A549顺铂敏感性的影响及机制

目的探讨miR-187对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的U251细胞分为Con组(未处理)、NC组(转染miR-NC)、miR-187组(转染miR-187 mimics)。采用实时定量PCR检测miR-187的表达,MTT法、Transwell小室实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,实时定量PCR和Western blot检测S100A4 mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-187和S100A4的靶向关系。结果上调miR-142-5p表达可以显著阻滞A549细胞周期、抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,激活Akt/mTOR通路活性,抑制LC3B、Beclin-1的表达,造成细胞自噬水平下降。结论 miR-142-5p协同顺铂促进A549细胞凋亡,与细胞自噬有关,miR-142-5p有望成为非小细胞肺癌临床治疗的潜在作用靶点。